Name: rabies necropsy techniques in large and small animals
Uploaded: 2019-07-30T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Rabies Necropsy Techniques in Large and Small Animals at JoVE.com

Vi är tacksamma för New York State Department of Health Wadsworth Center för att stödja detta projekt. Vi skulle också vilja erkänna stöd från Amy Willsey och Frank Blaisdell av Department of Health Wadsworth Center, och LL Ranch, Altamont, NY.

Alla metoder som beskrivs godkändes av Wadsworth Center institutionella djuromsorg och användning kommittén (IACUC).
1. förberedelser
<ol><li>Don PPE, vid minsta öga skydd (glasögon eller ansikte sköld), kirurgisk eller N-95 mask, och icke-latex handskar.</li>
	<li>Förbered arbetsområdet, helst ett biologiskt säkerhetsskåp (BSC), med en disponibel arbetsyta beläggning (t. ex. kraftpapper eller absorberande kuddar) och rena obduktion instrument (figur 1</stron...

<ol>
	<li>Centers for Disease Control and Prevention (CDC). <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=West+Nile+virus+activity+-+United+States,+2009.">West Nile virus activity - United States, 2009.</a> MMWR Morbidity and Mortality Weekly Report. 59 (25), 769-772 (2010).</li><li>McDaniel, C. J., Cardwell, D. M., Moeller, R. B., Gray, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humans+and+cattle:+A+review+of+bovine+zoonoses.">Humans and cattle: A review of bovine zoonoses.</a> Vector Borne and Zoonotic Diseases. 14 (1), 1-19 (2014).</li><li>Zoonotic diseases. Merck Veterinary Manual Available from: <a target="_blank" href="https://www.merckvetmanual.com/public-health/zoonoses/zoonotic-diseases">https://www.merckvetmanual.com/public-health/zoonoses/zoonotic-diseases</a> (2019)</li><li>Wenner, L., Pauli, U., Summermatter, K., Gantenbein, H., Vidondo, B., Posthaus, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aerosol+generation+during+bone-sawing+procedures+in+veterinary+autopsies.">Aerosol generation during bone-sawing procedures in veterinary autopsies.</a> Veterinary Pathology. 54 (3), 425-436 (2017).</li><li>Green, F. H. Y., Yoshida, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+aerosols+generated+during+autopsy+procedures+and+their+potential+role+as+carriers+of+infectious+agents.">Characteristics of aerosols generated during autopsy procedures and their potential role as carriers of infectious agents.</a> Applied Occupational and Environmental Hygiene. 5 (12), 853-858 (1990).</li><li>Barrat, J., Meslin, F. X., Kaplan, M. M., Koprowski, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+technique+for+the+collection+and+shipment+of+brain+specimens+for+rabies+diagnosis.">Simple technique for the collection and shipment of brain specimens for rabies diagnosis.</a> Laboratory techniques in Rabies 4th Edition. , 425-427 (1996).</li><li>Ness, S. L., Bain, F. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+to+perform+an+equine+field+necropsy.">How to perform an equine field necropsy.</a> American Association of Equine Practitioners. 55, 313-316 (2009).</li><li>. Sample requirements for TSE testing and confirmation &#8211; EURL guidance Available from: <a target="_blank" href="https://science.vla.gov.uk/tse-lab-net/documents/tse-oie-rl-samp.pdf">https://science.vla.gov.uk/tse-lab-net/documents/tse-oie-rl-samp.pdf</a> (2019)</li><li>. Rabies reports Available from: <a target="_blank" href="https://www.wadsworth.org/programs/id/rabies/reports">https://www.wadsworth.org/programs/id/rabies/reports</a> (2019)</li><li>. Protocol for postmortem diagnosis of rabies in animals by direct fluorescent antibody testing: A minimum standard for rabies diagnosis in the United States Available from: <a target="_blank" href="https://www.cdc.gov/rabies/pdf/rabiesdfaspv2.pdf">https://www.cdc.gov/rabies/pdf/rabiesdfaspv2.pdf</a> (2019)</li><li>Miller, L. D., Davis, A. J., Jenny, A. L., Fekadu, M., Whitfield, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surveillance+for+lesions+of+bovine+spongiform+encephalopathy+in+U.S.+cattle.">Surveillance for lesions of bovine spongiform encephalopathy in U.S. cattle.</a> Developments in Biological Standardizations. 80, 119-121 (1993).</li><li>Andrews, C., Gerdin, J., Patterson, J., Buckles, E. L., Fitzgerald, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eastern+equine+encephalitis+in+puppies+in+Michigan+and+New+York+states.">Eastern equine encephalitis in puppies in Michigan and New York states.</a> Journal of Veterinary Diagnostic Investigation. 30 (4), 633-636 (2018).</li><li>Appler, K., Brunt, S., Jarvis, J. A., Davis, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clarifying+indeterminate+results+on+the+rabies+direct+fluorescent+antibody+test+using+real-time+reverse+transcriptase+polymerase+chain+reaction.">Clarifying indeterminate results on the rabies direct fluorescent antibody test using real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction.</a> Public Health Reports. 134 (1), 57-62 (2019).</li><li>Rupprecht, C. E., Fooks, A. R., Abela-Ridder, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+7.+Brain+removal.">Chapter 7. Brain removal.</a> Laboratory techniques in Rabies 5th Edition. , 67-72 (2018).</li></ol>

Prover som lämnats för rabies nekropsy har ofta en historia av kliniska tecken som är förenliga med en neurologisk sjukdom. Förekomst av klinisk sjukdom kan vara förknippad med en mängd olika sjukdomar, inklusive zoonotiska sjukdomar, vilket ökar risken för personal vid ett laboratorium som smittats. För att minska dessa risker har tekniker implementerats som minskar hanteringen och manipuleringen av proverna.
De metoder som demonstreras representerar en nekropsy händelse att ta bor...

Att arbeta på obduktion golvet i en rabies laboratorium är till sin natur farlig. Ibland, prover anländer med inbäddade Porcupine Quills, främmande föremål inklusive pilar/kulor/pellets eller exponerade ben Shards som kan penetrera skyddande frakt wrap. Felaktig paketering kan resultera i läckage, utsätta individer som packar upp prover. Förutom fysisk skada, nekropsy tekniker riskexponering för okända zoonotiska smittämnen från CNS och kroppsvätskor av proverna. Dessutom kan ektoparasiter som transporteras av preparatet överföra andra zoonotiska sjukdomar, eftersom loppor och fästingar ofta ses på inlämnade djur. Beroende på geografisk plats och art inblandade de sjukdomar som exponeras varierar. Arbovirus såsom Eastern Equine encefalit virus (eeev) eller West Nile virus (wNv), fästingburna sjukdomar inklusive Borrelia eller tularemia, bakterier som orsakar Q feber eller tuberkulos, och infektiösa prioner namnge ett litet antal av de möjliga farorna1 , 2 , 3.
Syftet med dessa metoder är att demonstrera säkra och effektiva nekropsy tekniker med hjälp av instrument som minimerar potentialen för aerosolisering till skillnad från elverktyg eller sågar4,5. Vanligen, nekropsy av små djur i rabies laboratoriet kräver skära bort kranial muskler och med hjälp av en hammare och mejsel att öppna kaudala rygg del av calvarium6. Ta bort detta område av calvarium exponerar Hind hjärnan, inklusive hela lillhjärnan och kranial hjärnstammen. Modifierade nekropsy tekniker kan utföras på den ventrala delen av skallen, undvika de stora kranialmuskler och tjockare områden i skallen. Emellertid, dessa modifierade nekropsy tekniker är endast möjligt när preparatet är utan livmoderhalscancer Kotor.
Likaså kan hjärnvävnad hos stora djur avlägsnas genom att separera kranialmusklerna och öppna den kaudala ryggdelen av skallen7. Stora ansträngningar krävs för att exponera lillhjärnan och hjärnstammen som skallar av större djur är i allmänhet tjockare. För att undvika att tränga igenom skallen, är huvudet av ett stort djur placerad så Ventro-kaudala delen av skallen står inför teknikern. Med hjälp av modifierade instrument, lillhjärnan och hjärnstammen avlägsnas genom foramen magnum. Detta liknar den urvalsmetod som rekommenderas av TSE-Europeiska unionens referenslaboratorium för undersökningar av transmissibel spongiform encefalopati (TSE)8. Kraniala Kotor bör avlägsnas i förväg för att ge tillgång till foramen magnum.
Tillämpning av dessa tekniker är fördelaktigt för lämpligt utbildade tekniker i rabies laboratorier. Som rabies laboratoriet mottar proverna av olika storleken, från ung fladdermöss till vuxen förslagen häst9, teknikern har flera metoderna till välja från baserat på den individuell omständighet. Metoden som demonstreras för ett stort djur är också lämplig för veterinärer som utför obduktioner på området, eftersom sjöfarten ett helt stort djur huvud för rabies testning är besvärligt och kostsamt. Att implementera någon av dessa tekniker kommer att förbättra säkerheten genom att minska potentialen för aerosol produktion, reducera hanteringen av preparatet och spara handläggningstiden. Eftersom området inte har samma fördelar som ett laboratorium som inrättats specifikt för rabiestestning, är det dock viktigt att alla ändringar som görs i dessa förfaranden inriktas på säkerhet, särskilt användningen av personlig skyddsutrustning (PPE).

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Chemistry spoon</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved, sharp-blunt mayo scissors</td>
			<td>Sklar</td>
			<td>14-2055</td>
			<td>Sklar Operating Scissors 5-1/2 Inch Premium OR Grade Stainless Steel Finger Ring Handle Curved Sharp/Blunt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large sharp restaurant-quality carving knife</td>
			<td>Dexter</td>
			<td>P94848</td>
			<td>8&#34; Scalloped Utility Knife, white handle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Locking tumor-tenacula</td>
			<td>Diamond Scientific and Surgicals</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Czerny Tenaculum Forcep</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified stiletto knife (6.5 inch long blade carving knife ground to 0.5 inch wide)</td>
			<td>Dexter</td>
			<td>P94848</td>
			<td>Modified 8&#34; Scalloped Utility Knife, white handle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orthopedic mallet-hammer</td>
			<td>Mortech</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Postmortem hammer with hook</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharp councilman orthopedic bone chisel</td>
			<td>Shandon</td>
			<td>60-5</td>
			<td>Councilman&#39;s Chisel Blade: 2 in x 2.25 in standard 7 in</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sharpened tablespoon or other long handled spoon</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Smooth-tipped tissue dressing forceps without teeth</td>
			<td>Shandon</td>
			<td>63-03</td>
			<td>Shandon Broad Point Dressing Thumb Forceps</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Powder-free non-latex gloves</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safety glasses, goggles, or faceshield</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgery or N-95 mask</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kraft paper, butcher paper, absorbent pad, etc</td>
			<td>Any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rabies necropsy techniques in large and small animals

New York State Department of Health (NYSDOH) rabies laboratorium får mellan 6 000 till 9 000 exemplar årligen och utför rabies testning för hela staten, med undantag för New York City. Den rabies laboratorium obduktion en omväxling av djuren strövande i storlek från fladdermöss till bovids. De flesta av dessa prover är djur uppvisar neurologiska tecken, dock mindre än 10% faktiskt test positivt för rabies; innebär trauma, lesioner eller andra smittämnen som orsaken till dessa symtom. På grund av risken för aerosolizing odiagnostiserade smittämnen, använder rabies laboratoriet inte elverktyg eller sågar. Tre obduktion tekniker kommer att presenteras för djur vars skallar är ogenomträngliga med sax. Laboratoriet har genomfört dessa tekniker för att minska potentiell exponering för smittämnen, eliminera onödig manipulation av preparatet och minska handläggningstiden. Fördelarna med en föredragen teknik som motsätter sig en annan är föremål för den utbildade individen som bearbetar preparatet.

Alla markbundna prover som lämnats in med dödskallar mellan 31 januari 2019 och 28 februari, 2019 hade information om närvaron av en hals och metoden för nekropsy samlas in. Under den tiden var 170 huvuden obduceras med 18 arter representerade. 52% (89/170) var ordentligt halshugga. De resterande hade åtminstone en kotan fäst inklusive tre hela kropps prov. Den ventrala metoden användes 75% (128/170) av tiden, av dessa, halsar var närvarande på 49. Prover som lämnats in med en h...

Watch this Scientific Journal Video about Rabies Necropsy Techniques in Large and Small Animals at JoVE.com

Rabies Necropsy Techniques in Large and Small Animals

Målet med detta protokoll är att demonstrera säkra obduktions tekniker i små och stora djur för att erhålla tillfredsställande vävnadsprover för rabiestest.

Rabiesnekropsy tekniker i stora och små djur

The New York State Department of Health (NYSDOH) Rabies Laboratory receives between 6,000 to 9,000 specimens annually and performs rabies testing for the ...

Vävnadsinsamling för rabiestest har både uppenbara och outnyttjade faror. Teknikern måste använda de säkraste metoder som finns och bära korrekt personlig skyddsutrustning. Dessa protokoll ger säkra obduktionstekniker utan att använda elverktyg eller sågar, vilket minimerar produktionen av aerosoler.Det stora djurprotokollet kan också utföras i fält. Genom att använda metoden med stora djurprovshämtningar på fältet elimineras utmaningen att transportera ett djurhuvud som väger uppemot 45 kg till laboratoriet. Den stora djurmetoden liknar det europeiska protokollet för transmissibel spongiform encefalopati prov hämtning och kan användas för alla undersökningar med hjälp av hjärnstammen och lillhjärnan.För att hämta lillhjärnan och hjärnstammen genom den ventrala metoden, placera preparatet ventrala sidan uppåt med näsan riktad distalt mot baksidan av biosäkerhetsskåpet. Hålla en ortopedisk klubba i den dominerande handen och en fullmäktigeman mejsel i andra handen, placera mejseln i en 45 graders vinkel med hörnpunkten till mejseln i V formade öppningen mellan den högra sidan av den tidsmässiga och occipital ben. Slå toppen av mejseln med klubban tills de två benen separeras.Och gör ett snitt intill basisphenoid ben. Separera de tidsmässiga och occipital ben på vänster sida av exemplaret som just visat. Och använd mejseln för att böja V-regionen i skallen nedåt för att exponera hela rhombencephalon-området i hjärnan.Använd sedan sax och kraftbitar för att ösa ut hjärnstammen och lillhjärnan, ta bort eventuella kvarvarande vävnadsbitar från skallen vid behov. Om provexemplaret inte tillåter ventral hämtningsposition provet dorsal, med näsan riktad distalt mot baksidan av biosäkerhetsskåpet. Och använd en tumör tenacula för att förstå den vänstra temporalmuskeln med tenaculas tänder.Pressa handtaget för att låsa tänderna runt vävnaden och använd en vass snidningskniv för att skära ned temporalmuskeln till benet. Rotera exemplaret 180 grader med tenacula och kniven och upprepa snittet på motsatt temporalmuskel för att exponera skallen. Återgå huvudet till sin ursprungliga orientering och placera mejseln i en 45 graders vinkel med hörnpunkten till mejseln på mitten av skallen vid tidpunkten för parietal och intraparietal ben.Och slå toppen av mejseln med klubban tills en horisontell öppning görs på den övre halvan av skallen vid parietalbenet. Rotera preparatet 180 grader och gör en öppning på motsatt sida av skallen som just visat. Placera huvudet efter behov för att föra in den punkt av mejseln i slutet av den första snittet i en 90 graders vinkel mot den horisontella öppningen och slå mejseln tills öppningen når occipital ben.Rulla exemplaret för att göra en öppning på motsatt occipital ben på samma sätt. Öppningarna i skallen bör likna en upp och ner U.Sätt tänderna på tenacula i skallen längst ner på dig och dra benet bakåt för att exponera caudal slutet av storhjärnan och lillhjärnan. Använd sedan sax som en skopa för att bända ut hela lillhjärnan inifrån hålrummet.Och använd vävnadstövlar för att reta ut hjärnstammen från foramen. För stor djur lillhjärnan och hjärnstammen hämtning, placera exemplaret så att dorsala delen av skallen är i kontakt med obduktionsytan. Med kaudala delen av skallen och foramen magnum vänd framsidan av biosäkerhet skåpet.Ta tag i hjärnstammen med tensor. Sätt in en modifierad stilettkniv i foramen magnum mellan ryggmärgen och spinal hjärnhinnorna så långt som möjligt och skura runt ryggmärgen för att separera lillhjärnan och hjärnstammen från spinal hjärnhinnorna. Dra sedan stammen ut ur foramen med täppor.När kniven har förts in genom foramen magnum, försiktigt vinkel bladet att följa längs skallen så mycket som möjligt och infoga en metall spatel eller kniv med en tillräckligt lång handtag för att nå under hjärnan i utrymmet mellan nervvävnaden och spinal hjärnhinnorna. Sond runt lillhjärnan för att säkerställa att anslutningar till spinal hjärnhinnor har avskurna. När hjärnhinnorna har helt avhuggna förväg spateln rostrally och dorsally att skopa upp lillhjärnan.Skopa sedan ut lillhjärnan med spateln. Alla markbundna prover som lämnats in med skallar mellan 31 januari 2019 och 28 februari 2019 hade information om förekomsten av en hals och den metod för obduktion som samlats in. Under den tiden var 170 huvuden obduktion med 18 arter representerade.52% var ordentligt halshuggen. De återstående hade minst en kotor fäst inklusive tre hela kroppen exemplar. Den ventrala metoden användes en 75%av tiden.Av dessa var halsar närvarande på 49. Tre stora djur lämnades in och i två fall användes det stora djurprotokollet. En ekorre lämnades in med en krossad skalle och helt enkelt skära bort huden exponerade hjärnvävnaden så ingen av de påvisade metoder användes.De vävnader som används för att göra mikroskopi diabilder och eller utvinns ur molekylära metoder vid bearbetning av flera djur undvika korskontaminering genom att använda nya handskar instrument och ett rent arbetsområde. Var försiktig när du utför dessa protokoll som exemplaren kan vara smittade med rabies virus eller andra zoonotiska sjukdomar. Observera att vassa föremål också kan finnas inom exemplaren.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Electrode Fabrication and Implantation in Aplysia californica for Multi-channel Neural and Muscular Recordings in Intact, Freely Behaving Animals

Electrode Fabrication and Implantation in Aplysia californica for Multi-channel Neural and Muscular Recordings in Intact, Freely Behaving Animals

Elektrod Fabrication och implantation i Aplysia californica För flera kanaler Neural och muskulös Inspelningar i intakt, fritt bete Djur

Recording from key nerves and muscles of Aplysia during feeding behavior allows us to study the patterns of neural control in an intact animal.  ...

Efficient Derivation of Human Neuronal Progenitors and Neurons from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

Effektiv Derivering av mänskliga neurala stamceller och nervceller från Pluripotenta mänskliga embryonala stamcellslinjer med liten molekyl Induktion

There is a large unfulfilled need for a clinically-suitable human neuronal cell source for repair or regeneration of the damaged central nervous system ...

Large-scale Recording of Neurons by Movable Silicon Probes in Behaving Rodents

Storskalig inspelning av nervceller av lös Silicon sönder i Agera Gnagare

A major challenge in neuroscience is linking behavior to the collective activity of neural assemblies. Understanding of input-output relationships of ...

Design and Assembly of an Ultra-light Motorized Microdrive for Chronic Neural Recordings in Small Animals

Konstruktion och montering av en Motoriserad Ultralätt Microdrive för kronisk neurala inspelningar i små djur

The ability to chronically record from populations of neurons in freely behaving animals has proven an invaluable tool for dissecting the function of ...

Assessing Spatial Learning and Memory in Small Squamate Reptiles

Bedöma spatial inlärning och minne i små Squamate Reptiler

Clinical research has leveraged a variety of paradigms to assess cognitive decline, commonly targeting spatial learning and memory abilities. However, ...

High-Resolution 3D Imaging of Rabies Virus Infection in Solvent-Cleared Brain Tissue

Högupplöst 3D-avbildning av rabies virus infektion i Lösningsmedelsrensade hjärnvävnad

The visualization of infection processes in tissues and organs by immunolabeling is a key method in modern infection biology. The ability to observe and ...

Multi-Fiber Photometry to Record Neural Activity in Freely-Moving Animals

Multifiberfotometri för att registrera neurala aktiviteter i fritt rörliga djur

Recording the activity of a group of neurons in a freely-moving animal is a challenging undertaking. Moreover, as the brain is dissected into smaller and ...

Generation of Oligodendrocytes and Oligodendrocyte-Conditioned Medium for Co-Culture Experiments

Generation oligodendrocyter och Oligodendrocyte-Konditionerat medium för samkulturexperiment

In the central nervous system, oligodendrocytes are well-known for their role in axon myelination, that accelerates the propagation of action potentials ...

Real-Time fMRI Brain Mapping in Animals

Realtids fMRI-hjärnkartläggning hos djur

Dynamic fMRI responses vary largely according to the physiological conditions of animals either under anesthesia or in awake states. We developed a ...

Subretinal Transplantation of Human Embryonic Stem Cell-Derived Retinal Tissue in a Feline Large Animal Model

Subretinal transplantation av mänsklig embryonal stamcellsderiverad näthinnevävnad i en kattmodell för stora djur

Retinal degenerative (RD) conditions associated with photoreceptor loss such as age-related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa (RP) and ...