Name: assessing therapeutic angiogenesis in a murine model of hindlimb ischemia
Uploaded: 2019-06-08T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia at JoVE.com

Vi takker José Rino og Tânia Carvalho, lederne af bioimaging Facility og histologi og komparativ patologisk laboratorium for henholdsvis Instituto de Medicina Molecular João Lobo Antunes. Vi takker også Vyacheslav Sushchyk fra Institut for anatomi af Nova Medical School/Faculdade de Ciências Médicas, Universidade Nova de Lisboa.
Finansierings reference: projekt finansieret af UID/IC/0306/2016 Fundação para a Ciência e a tecnologia. Paula de Oliveira støttes af et stipendium (SFRH/BD/80483/2011) fra Fundação para a Ciência e tecnologia.

Alle dyreforsøg er i overensstemmelse med direktiv 2010/63/EU og er godkendt af det institutionelle Dyrevelfærdsorgan og licenseret af DGAV, den portugisiske kompetente myndighed for dyrebeskyttelse (licensnummer 023861/2013)
Forsigtig: flere af de kemikalier, der anvendes i protokollerne er giftige og skadelige. Brug venligst alle relevante sikkerhedspraksisser og personlige værnemidler (handsker, lab coat, fuld længde bukser, og lukkede tå sko)
1. murine model ...

<ol>
	<li>Becker, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+I:+Definitions,+epidemiology,+clinical+presentation+and+prognosis.">Chapter I: Definitions, epidemiology, clinical presentation and prognosis.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 42 Suppl 2, S4-S12 (2011).</li><li>Fowkes, F. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+artery+disease:+epidemiology+and+global+perspectives.">Peripheral artery disease: epidemiology and global perspectives.</a> Nature Reviews Cardiology. 14 (3), 156-170 (2017).</li><li>Abu Dabrh, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+natural+history+of+untreated+severe+or+critical+limb+ischemia.">The natural history of untreated severe or critical limb ischemia.</a> Journal of Vascular Surgery. 62 (6), 1642-1651 (2015).</li><li>Lejay, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+murine+model+of+sustainable+and+durable+chronic+critical+limb+ischemia+fairly+mimicking+human+pathology.">A new murine model of sustainable and durable chronic critical limb ischemia fairly mimicking human pathology.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 49 (2), 205-212 (2015).</li><li>Sprengers, R. W., Lips, D. J., Moll, F. L., Verhaar, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progenitor+cell+therapy+in+patients+with+critical+limb+ischemia+without+surgical+options.">Progenitor cell therapy in patients with critical limb ischemia without surgical options.</a> Annals of Surgery. 247 (3), 411-420 (2008).</li><li>Lotfi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+a+more+relevant+hind+limb+model+of+muscle+ischaemia.">Towards a more relevant hind limb model of muscle ischaemia.</a> Atherosclerosis. 227 (1), 1-8 (2013).</li><li>Masaki, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenic+gene+therapy+for+experimental+critical+limb+ischemia:+acceleration+of+limb+loss+by+overexpression+of+vascular+endothelial+growth+factor+165+but+not+of+fibroblast+growth+factor-2.">Angiogenic gene therapy for experimental critical limb ischemia: acceleration of limb loss by overexpression of vascular endothelial growth factor 165 but not of fibroblast growth factor-2.</a> Circulation Research. 90 (9), 966-973 (2002).</li><li>Limbourg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+postnatal+arteriogenesis+and+angiogenesis+in+a+mouse+model+of+hind-limb+ischemia.">Evaluation of postnatal arteriogenesis and angiogenesis in a mouse model of hind-limb ischemia.</a> Nature Protocols. 4 (12), 1737-1746 (2009).</li><li>Hellingman, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variations+in+surgical+procedures+for+hind+limb+ischaemia+mouse+models+result+in+differences+in+collateral+formation.">Variations in surgical procedures for hind limb ischaemia mouse models result in differences in collateral formation.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 40 (6), 796-803 (2010).</li><li>Brevetti, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exercise-induced+hyperemia+unmasks+regional+blood+flow+deficit+in+experimental+hindlimb+ischemia.">Exercise-induced hyperemia unmasks regional blood flow deficit in experimental hindlimb ischemia.</a> Journal of Surgical Research. 98 (1), 21-26 (2001).</li><li>Ministro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-dose+ionizing+radiation+induces+therapeutic+neovascularization+in+a+pre-clinical+model+of+hindlimb+ischemia.">Low-dose ionizing radiation induces therapeutic neovascularization in a pre-clinical model of hindlimb ischemia.</a> Cardiovascular Research. 113 (7), 783-794 (2017).</li><li>Pereira, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+angiogenesis+induced+by+human+umbilical+cord+tissue-derived+mesenchymal+stromal+cells+in+a+murine+model+of+hindlimb+ischemia.">Therapeutic angiogenesis induced by human umbilical cord tissue-derived mesenchymal stromal cells in a murine model of hindlimb ischemia.</a> Stem Cell Research Therapy. 7 (1), 145 (2016).</li><li>Azaripour, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+survey+of+clearing+techniques+for+3D+imaging+of+tissues+with+special+reference+to+connective+tissue.">A survey of clearing techniques for 3D imaging of tissues with special reference to connective tissue.</a> Progress in Histochemistry and Cytochemistry. 51 (2), 9-23 (2016).</li></ol>

Murine modeller af CLI har for det meste bestået i ligering af femoral arterien bare distale til oprindelsen af den profunda rectus 4,5,6,7,8,9. Dette har vist sig at lade det meste af sikkerhedsstillelse cirkulation intakt, som genskaber blodtilførslen til lemmer inden 7 dag 9. Fjernelse af sikkerhe...

Perifer arteriel sygdom (PAD) påvirker overvejende de nedre lemmer. PAD er forårsaget af åreforkalkning, en arterie obstruktion, der kan forårsage alvorlig begrænsning af blodgennemstrømningen i underekstremiteterne1. Intermitterende intermittens er den første manifestation af pad og refererer til muskelsmerter, når du går. CLI er den mest alvorlige fase af PAD, der diagnosticeres hos patienter, der viser iskæmisk hvile smerter, sår eller koldbrand2. Patienter med CLI har en høj risiko for amputation, især hvis ubehandlet3. Lavere lemmer revaskularisering (enten ved åben kirurgi eller en endovaskulær procedure) er i øjeblikket den eneste måde at opnå ekstremiteter bjærgning. Men, omkring 30% af CLI patienter er ikke egnet til disse procedurer, af årsager, der omfatter placeringen af læsioner, mønsteret af arteriel okklusion og omfattende comorbiditet4,5. Derfor er der behov for nye terapier for disse ellers uhelbredelig patienter, med fremme af angiogenese er strategien under mere intens undersøgelse.
Inden testning hos mennesker skal effektiviteten og sikkerheden af nye terapier in vivo overvejes i dyremodeller. Flere modeller er blevet udviklet til studiet af CLI, for det meste ved inducerende hindlem iskæmi (HLI) i mus6,7,8,9,10. Men disse modeller adskiller sig i flere aspekter, herunder arten af arterierne, der er ligerede og/eller exciseret, og om vener og nerver omgivende er dissekeret samt6,7,8, 9,10. Tilsammen vil disse aspekter påvirke sværhedsgraden af skade på iskæmi-reperfusion i hvert enkelt dyr, hvilket gør resultaterne vanskelige at sammenlignes. Derfor er det afgørende at udvikle en effektiv protokol, hvor proceduren for at inducere iskæmi og evaluering af forskellige mål bør være standardiseret til at vurdere, om en given angiogen behandling vil være effektiv. En forsøgsprotokol, der skal dække alle disse aspekter, vil give en omfattende forståelse af de mekanismer, hvormed angiogene terapier udøver deres virkninger, og et mål for deres effektivitet ved hvert af deres resultater. To særskilte værker for nylig offentliggjort af vores team er et godt eksempel11,12, hvor forskellige tilgange til at inducere terapeutisk angiogenese blev vurderet ved hjælp af den samme protokol, der vil blive beskrevet med flere detaljer i denne Protokollen.
Det overordnede mål med denne protokol er at beskrive en reproducerbar eksperimentel model, der kan efterligne virkningerne af CLI og lægge det eksperimentelle fundament for en omfattende vurdering af de funktionelle, histologiske og molekylære virkninger af formodede angiogene Agenter.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:840px;" width="839">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:251px;">7500 Fast Real-Time PCR</td>
			<td style="width:235px;">Applied Biosystems</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:223px;">Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Acetone</td>
			<td>Merk</td>
			<td>1000141000</td>
			<td>Reagent; Caution - highly flammable</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Adenosine</td>
			<td>Valdepharm</td>
			<td></td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Atipamezole</td>
			<td>OrionPharma</td>
			<td></td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Barium sulphate (Micropaque)</td>
			<td>Guebert</td>
			<td>8671404 (ref. Infarmed)</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Buprenorphine</td>
			<td>RichterPharma</td>
			<td></td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Carl Zeiss Opmi-1 FC Surgical Microscope</td>
			<td>Carl Zeiss Microscopy, Germany</td>
			<td></td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">cDNA RT2 PreAMP cDNA Synthesis kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td style="width:132px;">7335730</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Cryostat Leica CM</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>3050S</td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">DAB peroxidase substrate kit</td>
			<td>DAKO;Vector Laboratories</td>
			<td>K3468</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">hydrogen peroxidase</td>
			<td>Merk</td>
			<td>1072090250</td>
			<td>Reagent; Caution - nocif</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">hydrophobic pen</td>
			<td>Dako</td>
			<td>411121</td>
			<td>Reagent; Caution - toxic</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Ketamidor</td>
			<td style="width:235px;">Richterpharma</td>
			<td>CN:580393,7 630/01/12 Dfvf</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Laser Doppler perfusion imager moorLDI2-HIR</td>
			<td style="width:235px;">MoorLDI-V6.0, Moor Instruments Ltd, Axminster, UK</td>
			<td>5710</td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Leica DM2500 upright brightfield microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td></td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Medetor</td>
			<td>Virbac</td>
			<td>037/01/07RFVPT</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">methanol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>UN1230</td>
			<td>Reagent; Caution - toxic and highly flammable</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Papaverine</td>
			<td>Labesfal</td>
			<td></td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Pentano Isso</td>
			<td>Merk</td>
			<td>1060561000</td>
			<td>Reagent; Caution - highly flammable</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Power SYBR&#174; Green</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td style="width:132px;">4309155</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Purified rat anti-mouse CD31</td>
			<td>Pharmingen</td>
			<td>550274</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">RNeasy Micro kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74004</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Surgic-Pro 6.0</td>
			<td>Medtronic (Coviden)</td>
			<td>VP733X</td>
			<td>Suture</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:251px;">VECTASTAIN ABC HRP Kit (Peroxidase, Rat IgG)</td>
			<td>Vectastain ABC kit; Vector Laboratories</td>
			<td>PK-4004</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Vicryl5.0/ Vicryl 6.0</td>
			<td>Medtronic (Covidien)</td>
			<td>UL202/ UL101</td>
			<td>Suture</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Zeiss PALM MicroBeam Laser Microdissection System</td>
			<td>Carl Zeiss Microscopy, Germany</td>
			<td>1023290916</td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Stereotaxic microscope</td>
			<td>Carl Zeiss Microscopy, Germany</td>
			<td></td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Digital camera</td>
			<td>Linux</td>
			<td></td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing therapeutic angiogenesis in a murine model of hindlimb ischemia

Kritisk ekstremitet iskæmi (CLI) er en alvorlig tilstand, der indebærer en høj risiko for lavere lemmer amputation. Trods revaskularisering er den guld-standard terapi, et betydeligt antal CLI patienter er ikke egnet til enten kirurgisk eller endovaskulær revaskularisering. Angiogene terapier er ved at dukke op som en mulighed for disse patienter, men er i øjeblikket stadig under efterforskning. Før påføring hos mennesker skal disse terapier testes i dyremodeller, og dets mekanismer skal være klart forstået. En dyremodel af baglemmer iskæmi (HLI) er blevet udviklet ved ligering og excision af den distale eksterne bækkenbens og femorale arterier og vener i mus. Et omfattende panel af tests blev samlet for at vurdere virkningerne af iskæmi og formodede angiogene behandlinger på funktionelle, histologiske og molekylære niveauer. Laser Doppler blev brugt til flowmåling og funktionel vurdering af perfusion. Vævs respons blev evalueret ved en analyse af kapillær densitet efter farvning med anti-CD31 antistof på histologiske sektioner af gastrocnemius-musklen og ved måling af sikkerhed fartøjs tæthed efter diaphonization. Udtryk for angiogene gener blev kvantificeret ved RT-PCR rettet mod udvalgte angiogene faktorer udelukkende i endotelceller (ECs) efter laser opsamling microdissection fra mus gastrocnemius muskler. Disse metoder var følsomme med at identificere forskelle mellem iskæmiske og ikke-iskæmiske lemmer og mellem behandlede og ikke-behandlede lemmer. Denne protokol giver en reproducerbar model af CLI og en ramme for afprøvning af angiogene terapier.

Ved hjælp af den beskrevne protokol blev navlestrengen mesenchymal stamceller og lavdosis ioniserende stråling (LDIR) testet som formodede angiogene terapier 11,12. Laser Doppler perfusion målinger blev opnået før iskæmi induktion og på præ-specificerede tidspunkter, der spænder fra umiddelbart efter iskæmi induktion til 45 dage post-iskæmi. Vævs perfusion aflæsninger af Laser Doppler blev indspillet som farvekodede billeder, uden perfusion vist som ...

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia at JoVE.com

Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia

Her præsenteres en kritisk baglemmer iskæmi eksperimentel model efterfulgt af et batteri af funktionelle, histologiske og molekylære tests for at vurdere effektiviteten af angiogene terapier.

Vurdering af terapeutisk angiogenese i en murine model af baglemmer iskæmi

Critical limb ischemia (CLI) is a serious condition that entails a high risk of lower limb amputation. Despite revascularization being the gold-standard ...

Det overordnede mål med dette eksperiment, vores hindlimb iskæmi model er at tænde eksperimentet et fundament for en omfattende vurdering af de funktionelle, histologiske og molekylære virkninger af formodede angiogene midler. Denne protokol markerer en standard for afprøvning af mulige angiogene behandlinger i en lille dyremodel med potentiale for fremtidige anvendelser i den kliniske sammenhæng. Som revaskularisering er ikke egnet i tyve til tredive procent af kritiske iskæmi patienter Terapeutisk angiogenese er opstået som en ny strategi for at forbedre blodspfusion på iskæmisk stedet.Denne eksperimentelle protokol kunne give en omfattende forståelse af de mekanismer, hvorigennem angiogene behandlinger udøver deres virkninger i måling af deres effektivitet på hvert af deres resultater. Efter at have bekræftet en manglende reaktion på tå knivspids i en 22 uger gammel C57 sort seks kvindelige mus, barbere håret fra højre hindlimb og sikre dyret i dorsal til alen position på en opvarmet pad. Placer dyret under et dissekerende mikroskop.Og bruge en række elleve kirurgisk skalpel klinge til at gøre en en centimeter hud snit over låret af højre hindlimb. Blunt dissekere det subkutane fedt til at udsætte neurovaskulære bundt. Og brug spidse hændebånd, forårssaks og en øjenfinneholder til at åbne den membranagtige ileofemoralske kappe for at afsløre de distale eksterne iliaca- og femorale kar.Efter dissekere og adskille arterie og vene fra nerven, bruge syv O nonabsorbable polypropylen suturer til at ligte den distale femorale arterie og vene og distale eksterne iliaca arterie og vene. Identifikationen af den distale eksterne iliaca arterie og ligation og excision af den distale eksterne iliaca og lårpulsåren og vener er afgørende for en vellykket procedure. Brug foråret saks til at transect segmentet af iliofemoral arterie og vener mellem de distale og proksimale knuder.Og luk snittet med en absorberbar sutur. Derefter, inter-peritoneally levere antisedative opløsning i dyret og returnere musen til sit hjem bur med overvågning, indtil fuld helbredelse. At høste gastrocnemius muskler, fjerne huden fra begge bagben.Og brug vatpinden til at adskille huden fra musklerne. Hold akillessenen, bruge foråret saks til at adskille musklen fra skinnebenet og fibula op til knæleddet. Og adskille biceps femoris fra gastrocnemius musklen.Brug foråret saks til at skære indsættelser af gastrocnemius musklen på knæleddet niveau. Og brug 10% trigasanth at placere de høstede muskler i en tværgående orientering på en lille kork disk. Derefter fastgør snap prøverne i flydende nitrogenkølet isopentan i minus 80 grader Celsius opbevaring.For kapillær mikrodissektion laser fange, efter at have fået 12 mikrometer dele af muskelprøver, fastgør væv til dias i 50 milliliter afkølet ren acetone i fem minutter ved minus tyve grader Celsius. Efter lufttørring og cirkel hver prøve med en hydrofob pen. Og rehydrere prøverne med to molar natriumchlorid i PBS ved fire grader Celsius.Ved afslutningen af rehydreringen mærkes prøverne med det relevante primære antistof af interesse ved fire grader Celsius natten over. Efterfulgt af to tre minutters vask i frisk to molar natriumchlorid i PBS per vask. Efter den anden vask mærkes sektionerne med et passende sekundært antistof i 30 minutter ved fire grader celsius efterfulgt af to vaske i natriumchlorid i PBS som påvist.Dernæst mærke prøverne med avidin konjugeret peroxidase kompleks i tredive minutter ved fire grader celsius. Efterfulgt af en vask og fem minutters mærkning med DAB peroxidase substrat. Ved slutningen af inkubationen dehydreres vævene i sekventiel iskold 90% ethanol og 100% ethanol emersions.Brug derefter et senere mikrodissektionssystem, der er udstyret med en puls til solid state 355 nanometerlaser for at dissekere 10.000 kapillærer pr. mus og katapult dissekere kapillærerne i en mikrofuge tube klæbehætte. Som illustreret, et fuldstændigt tab af hindlimb perfusion observeres umiddelbart efter hindlimb iskæmi induktion. Kvantitativ vurdering af blodgennemstrømningen, udtrykt som et forhold mellem ISC og NISC lemmer, viste signifikant forbedret lemmer blod perfusion i mus udsat for pro-angiogen stimulus på dag 15 og 45 post-HLI.Kvantificeringen af CD31 positive kapillærer i histologiske afsnit af gastrocnemius muskelvæv sektioner viser, at kapillær tæthed er større i iskæmisk versus ikke-iskæmisk lemmer. Som forventet. Men denne effekt forstærkes yderligere efter behandling med det pro-angiogene middel.Sikkerhedsstillelsen fartøj tæthed også konsekvent stigninger i iskæmisk lemmer og denne stigning er betydeligt højere efter eksponering med pro-angiogenic stimulus. Omvendt transkritype polymerase kædereaktion analyse af pro-angiogenic genekspression i CD31 positive endotelceller viser en klar variation i genekspression mellem mus eksponeret eller ikke til pro-angiogenic agent. Det er vigtigt at bruge en oftalmisk nål ældre for at åbne den membranagtige iliofemoralske kappe for at undgå at rive arterien og venen under kardissektionen.Fartøjet reagerer på hindlimb iskæmi i let evalueret ved laser doppler baseret perfusion målinger og histologisk kvantificering af kapillær fartøj tæthed giver os mulighed for at vurdere angiogenese.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Mouse Model of the Cornea Pocket Assay for Angiogenesis Study

A normal cornea is clear of vascular tissues. However, blood vessels can be induced to grow and survive in the cornea when potent angiogenic factors are ...

Assessing Teratogenic Changes in a Zebrafish Model of Fetal Alcohol Exposure

Evaluering Teratogene Ændringer i en Zebrafisk Model af Føtalt Alkohol Eksponering

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, ...

A Murine Closed-chest Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion

Et murint lukket bryst Model for myocardial iskæmi og reperfusion

Surgical trauma by thoracotomy in open-chest models of coronary ligation induces an immune response which modifies different mechanisms involved in ...

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Nethindeløsning Model i Gnavere ved subretinal Injektion af Natriumhyaluronats

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

Reproducable Paraplegia by Thoracic Aortic Occlusion in a Murine Model of Spinal Cord Ischemia-reperfusion

Reproducerbar Paraplegi af thorax aortaokklusion i en musemodel for Rygmarvsskader iskæmireperfusion

Background
Lower extremity paralysis continues to complicate aortic interventions. The lack of understanding of the underlying pathology has hindered ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

En murin model af myokardieiskæmi-reperfusionsskade gennem æggelederne for Venstre Anterior Faldende Artery

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Murin model af intestinal iskæmi-reperfusionsskade

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

Methods for Acute and Subacute Murine Hindlimb Ischemia

Metoder til akut og subakut Murine bagben Iskæmi

Peripheral artery disease (PAD) is a leading cause of cardiovascular morbidity and mortality in developed countries, and animal models that reliably ...

A Chronic Cardiac Ischemia Model in Swine Using an Ameroid Constrictor

En kronisk hjerte iskæmi Model i svin ved hjælp af en Ameroid kvælerslange

Cardiovascular disease remains the number one cause of mortality in the United States. There are numerous approaches to treating these diseases, but ...