Name: assessing therapeutic angiogenesis in a murine model of hindlimb ischemia
Uploaded: 2019-06-08T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia at JoVE.com

We bedanken José Rino en Tânia Carvalho, de hoofden van de Bioimaging Facility en het laboratorium voor histologie en vergelijkende pathologie van het Instituto de Medicina moleculaire João Lobo Antunes. We danken ook Vyacheslav Sushchyk van het departement anatomie van Nova Medical School/Faculdade de Ciências Médicas, Universidade Nova de Lisboa.
Financierings Referentie: project gefinancierd door UID/IC/0306/2016 Fundação para a Ciência e a tecnologia. Paula de Oliveira wordt ondersteund door een Fellowship (SFRH/BD/80483/2011) van Fundação para a Ciência e Tecnologia.

Alle dier procedures zijn in overeenstemming met richtlijn 2010/63/EU en zijn goedgekeurd door het institutioneel dierenwelzijns orgaan en gelicentieerd door DGAV, de Portugese bevoegde autoriteit voor dierenbescherming (licentienummer 023861/2013)
Let op: verschillende chemicaliën die in de protocollen worden gebruikt, zijn giftig en schadelijk. Gebruik alstublieft alle geschikte veiligheidspraktijken en persoonlijke beschermingsmiddelen (handschoenen, laboratoriumjas, lange broek en schoene...

<ol>
	<li>Becker, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+I:+Definitions,+epidemiology,+clinical+presentation+and+prognosis.">Chapter I: Definitions, epidemiology, clinical presentation and prognosis.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 42 Suppl 2, S4-S12 (2011).</li><li>Fowkes, F. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+artery+disease:+epidemiology+and+global+perspectives.">Peripheral artery disease: epidemiology and global perspectives.</a> Nature Reviews Cardiology. 14 (3), 156-170 (2017).</li><li>Abu Dabrh, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+natural+history+of+untreated+severe+or+critical+limb+ischemia.">The natural history of untreated severe or critical limb ischemia.</a> Journal of Vascular Surgery. 62 (6), 1642-1651 (2015).</li><li>Lejay, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+murine+model+of+sustainable+and+durable+chronic+critical+limb+ischemia+fairly+mimicking+human+pathology.">A new murine model of sustainable and durable chronic critical limb ischemia fairly mimicking human pathology.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 49 (2), 205-212 (2015).</li><li>Sprengers, R. W., Lips, D. J., Moll, F. L., Verhaar, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progenitor+cell+therapy+in+patients+with+critical+limb+ischemia+without+surgical+options.">Progenitor cell therapy in patients with critical limb ischemia without surgical options.</a> Annals of Surgery. 247 (3), 411-420 (2008).</li><li>Lotfi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+a+more+relevant+hind+limb+model+of+muscle+ischaemia.">Towards a more relevant hind limb model of muscle ischaemia.</a> Atherosclerosis. 227 (1), 1-8 (2013).</li><li>Masaki, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenic+gene+therapy+for+experimental+critical+limb+ischemia:+acceleration+of+limb+loss+by+overexpression+of+vascular+endothelial+growth+factor+165+but+not+of+fibroblast+growth+factor-2.">Angiogenic gene therapy for experimental critical limb ischemia: acceleration of limb loss by overexpression of vascular endothelial growth factor 165 but not of fibroblast growth factor-2.</a> Circulation Research. 90 (9), 966-973 (2002).</li><li>Limbourg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+postnatal+arteriogenesis+and+angiogenesis+in+a+mouse+model+of+hind-limb+ischemia.">Evaluation of postnatal arteriogenesis and angiogenesis in a mouse model of hind-limb ischemia.</a> Nature Protocols. 4 (12), 1737-1746 (2009).</li><li>Hellingman, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variations+in+surgical+procedures+for+hind+limb+ischaemia+mouse+models+result+in+differences+in+collateral+formation.">Variations in surgical procedures for hind limb ischaemia mouse models result in differences in collateral formation.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 40 (6), 796-803 (2010).</li><li>Brevetti, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exercise-induced+hyperemia+unmasks+regional+blood+flow+deficit+in+experimental+hindlimb+ischemia.">Exercise-induced hyperemia unmasks regional blood flow deficit in experimental hindlimb ischemia.</a> Journal of Surgical Research. 98 (1), 21-26 (2001).</li><li>Ministro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-dose+ionizing+radiation+induces+therapeutic+neovascularization+in+a+pre-clinical+model+of+hindlimb+ischemia.">Low-dose ionizing radiation induces therapeutic neovascularization in a pre-clinical model of hindlimb ischemia.</a> Cardiovascular Research. 113 (7), 783-794 (2017).</li><li>Pereira, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+angiogenesis+induced+by+human+umbilical+cord+tissue-derived+mesenchymal+stromal+cells+in+a+murine+model+of+hindlimb+ischemia.">Therapeutic angiogenesis induced by human umbilical cord tissue-derived mesenchymal stromal cells in a murine model of hindlimb ischemia.</a> Stem Cell Research Therapy. 7 (1), 145 (2016).</li><li>Azaripour, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+survey+of+clearing+techniques+for+3D+imaging+of+tissues+with+special+reference+to+connective+tissue.">A survey of clearing techniques for 3D imaging of tissues with special reference to connective tissue.</a> Progress in Histochemistry and Cytochemistry. 51 (2), 9-23 (2016).</li></ol>

Murine-modellen van CLI bestonden voornamelijk uit ligatie van de femorale slagader die net de oorzaak was van de profunda musculus femoris 4,5,6,7,8,9. Dit heeft aangetoond dat het grootste deel van de onderpand circulatie intact blijft, wat de bloedtoevoer naar de ledemaat herstelt binnen 7 dagen 9. ...

Perifere arteriële ziekte (PAD) beïnvloedt voornamelijk de onderste ledematen. PAD wordt veroorzaakt door atherosclerose, een slagader obstructie die kan leiden tot ernstige beperking van de bloedtoevoer in de onderste ledematen1. Intermitterende intermittens is de eerste manifestatie van PAD en verwijst naar spierpijn tijdens het lopen. CLI is de meest ernstige fase van PAD, wordt gediagnosticeerd bij patiënten die ischemische rust pijn vertonen, zweren of gangreen2. Patiënten met CLI hebben een hoog risico op amputatie, vooral als onbehandeld3. De revascularisatie van de onderste ledematen (ofwel door een open operatie of een endovasculaire procedure) is momenteel de enige manier om ledematen te redden. Echter, ongeveer 30% van de CLI-patiënten zijn niet geschikt voor deze procedures, om redenen die de locatie van de laesies omvatten, het patroon van arteriële occlusie en uitgebreide comorbiditeit4,5. Daarom zijn er nieuwe therapieën nodig voor deze anders onbehandelbare patiënten, waarbij de bevordering van angiogenese de strategie is onder intenser onderzoek.
Voor het testen bij de mens moet de effectiviteit en veiligheid van nieuwe therapieën in vivo in diermodellen worden overwogen. Er zijn verschillende modellen ontwikkeld voor de studie van CLI, voornamelijk door het induceren van hindledemaat ischemie (HLI) bij muizen6,7,8,9,10. Echter, deze modellen verschillen in verschillende aspecten, met inbegrip van de aard van de slagaders die zijn geligeerd en/of uitgesneden en of de aderen en zenuwen rond worden ontleed als goed6,7,8, 9,10. Tezamen zullen deze aspecten van invloed zijn op de ernst van het ischemie-reperfusie letsel in elk dier, waardoor de resultaten moeilijk te vergelijken zijn. Daarom is het van cruciaal belang om een effectief protocol te ontwikkelen waarin de procedure voor het opwekken van ischemie en de evaluatie van verschillende doelstellingen moet worden gestandaardiseerd om te beoordelen of een bepaalde angiogene therapie effectief zal zijn. Een experimenteel protocol dat is ontworpen om al deze aspecten te dekken, zou een uitgebreid inzicht geven in de mechanismen waarmee angiogene therapieën hun effecten en een maatstaf van hun werkzaamheid bij elk van hun uitkomsten kunnen uitoefenen. Twee verschillende werken die onlangs door ons team zijn gepubliceerd, zijn een goed voorbeeld11,12, waarin verschillende benaderingen voor het opwekken van therapeutische angiogenese werden beoordeeld aan de hand van hetzelfde protocol dat met meer detail wordt beschreven in deze Protocol.
Het algemene doel van dit protocol is het beschrijven van een reproduceerbaar experimenteel model dat de effecten van CLI kan nabootsen en de experimentele basis legt voor een uitgebreide beoordeling van de functionele, histologische en moleculaire effecten van vermoedelijke angiogene Agenten.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:840px;" width="839">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:251px;">7500 Fast Real-Time PCR</td>
			<td style="width:235px;">Applied Biosystems</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:223px;">Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Acetone</td>
			<td>Merk</td>
			<td>1000141000</td>
			<td>Reagent; Caution - highly flammable</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Adenosine</td>
			<td>Valdepharm</td>
			<td></td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Atipamezole</td>
			<td>OrionPharma</td>
			<td></td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Barium sulphate (Micropaque)</td>
			<td>Guebert</td>
			<td>8671404 (ref. Infarmed)</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Buprenorphine</td>
			<td>RichterPharma</td>
			<td></td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Carl Zeiss Opmi-1 FC Surgical Microscope</td>
			<td>Carl Zeiss Microscopy, Germany</td>
			<td></td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">cDNA RT2 PreAMP cDNA Synthesis kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td style="width:132px;">7335730</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Cryostat Leica CM</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>3050S</td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">DAB peroxidase substrate kit</td>
			<td>DAKO;Vector Laboratories</td>
			<td>K3468</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">hydrogen peroxidase</td>
			<td>Merk</td>
			<td>1072090250</td>
			<td>Reagent; Caution - nocif</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">hydrophobic pen</td>
			<td>Dako</td>
			<td>411121</td>
			<td>Reagent; Caution - toxic</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Ketamidor</td>
			<td style="width:235px;">Richterpharma</td>
			<td>CN:580393,7 630/01/12 Dfvf</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Laser Doppler perfusion imager moorLDI2-HIR</td>
			<td style="width:235px;">MoorLDI-V6.0, Moor Instruments Ltd, Axminster, UK</td>
			<td>5710</td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Leica DM2500 upright brightfield microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td></td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Medetor</td>
			<td>Virbac</td>
			<td>037/01/07RFVPT</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">methanol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>UN1230</td>
			<td>Reagent; Caution - toxic and highly flammable</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Papaverine</td>
			<td>Labesfal</td>
			<td></td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Pentano Isso</td>
			<td>Merk</td>
			<td>1060561000</td>
			<td>Reagent; Caution - highly flammable</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Power SYBR&#174; Green</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td style="width:132px;">4309155</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Purified rat anti-mouse CD31</td>
			<td>Pharmingen</td>
			<td>550274</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">RNeasy Micro kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74004</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Surgic-Pro 6.0</td>
			<td>Medtronic (Coviden)</td>
			<td>VP733X</td>
			<td>Suture</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:251px;">VECTASTAIN ABC HRP Kit (Peroxidase, Rat IgG)</td>
			<td>Vectastain ABC kit; Vector Laboratories</td>
			<td>PK-4004</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Vicryl5.0/ Vicryl 6.0</td>
			<td>Medtronic (Covidien)</td>
			<td>UL202/ UL101</td>
			<td>Suture</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Zeiss PALM MicroBeam Laser Microdissection System</td>
			<td>Carl Zeiss Microscopy, Germany</td>
			<td>1023290916</td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Stereotaxic microscope</td>
			<td>Carl Zeiss Microscopy, Germany</td>
			<td></td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Digital camera</td>
			<td>Linux</td>
			<td></td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing therapeutic angiogenesis in a murine model of hindlimb ischemia

Kritische ledemaat ischemie (CLI) is een ernstige aandoening die een hoog risico op amputatie van de onderste ledematen met zich meebrengt. Ondanks dat revascularisatie de Gold-standaard therapie is, zijn een aanzienlijk aantal CLI-patiënten niet geschikt voor chirurgische of endovasculaire revascularisatie. Angiogene therapieën verschijnen als een optie voor deze patiënten, maar zijn momenteel nog in onderzoek. Vóór toepassing bij de mens moeten deze therapieën in diermodellen worden getest en moeten de mechanismen ervan duidelijk worden begrepen. Een diermodel van hindledemaat ischemie (HLI) is ontwikkeld door de ligatie en excisie van de distale externe iliacale en femorale slagaders en aders in muizen. Een uitgebreid panel van tests werd samengesteld om te beoordelen van de effecten van ischemie en putatieve angiogene therapieën op functionele, histologische en moleculaire niveaus. Laser Doppler werd gebruikt voor de stromingsmeting en functionele beoordeling van perfusie. Weefsel respons werd geëvalueerd door de analyse van capillaire dichtheid na kleuring met het anti-CD31 antilichaam op histologische secties van gastrocnemius-spier en door meting van de dichtheid van het onderpand vaartuig na diaphonisatie. Expressie van angiogene genen werd gekwantificeerd door RT-PCR gericht op geselecteerde angiogene factoren uitsluitend in endotheel cellen (ECs) na laser Capture micro dissectie van muizen gastrocnemius spieren. Deze methoden waren gevoelig voor het identificeren van verschillen tussen ischemische en niet-ischemische ledematen en tussen behandelde en niet-behandelde ledematen. Dit protocol biedt een reproduceerbaar model van CLI en een kader voor het testen van angiogene therapieën.

Met behulp van de beschreven protocol, navelstreng mesenchymale stamcellen en lage dosis ioniserende straling (ldir) werden getest als vermoedelijke angiogene therapieën 11,12. Laser Doppler perfusie lezingen werden verkregen vóór ischemie inductie en op vooraf gespecificeerde tijdspunten variërend van onmiddellijk na ischemie inductie tot 45 dagen post-ischemie. Weefsel perfusie lezingen door laser Doppler werden opgenomen als kleurgecodeerde beelden, zonder...

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia at JoVE.com

Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia

Hier wordt een kritisch hindledemaat ischemie-experimentele model gepresenteerd, gevolgd door een batterij met functionele, histologische en moleculaire tests om de effectiviteit van angiogene therapieën te beoordelen.

Beoordeling van therapeutische angiogenese in een Muriene model van Hindledemaat ischemie

Critical limb ischemia (CLI) is a serious condition that entails a high risk of lower limb amputation. Despite revascularization being the gold-standard ...

Het algemene doel van dit experiment, ons achterpoot ischemiemodel is om het experiment een basis te geven voor een uitgebreide beoordeling van de functionele, histologische en moleculaire effecten van vermeende angiogene stoffen. Dit protocol bevat een standaard voor het testen van mogelijke angiogene therapieën in een klein diermodel met het potentieel voor toekomstige toepassingen in de klinische context. Aangezien revascularisatie niet geschikt is bij twintig tot dertig procent van de kritische ischemiepatiënten Therapeutische angiogenese is naar voren gekomen als een nieuwe strategie voor het verbeteren van de bloedefusie op de ischemische locatie.Dit experimentele protocol zou een uitgebreid inzicht kunnen verschaffen in de mechanismen waarmee angiogene therapieën hun effecten uitoefenen in de mate van hun werkzaamheid bij elk van hun resultaten. Na bevestiging van een gebrek aan reactie op teen knijpen in een 22 weken oude C57 zwarte zes vrouwelijke muis, scheer het haar van de rechter achterpot en zet het dier in de rug naar cubitus positie op een verwarmde pad. Plaats het dier onder een ontledenmicroscoop.En gebruik een nummer elf chirurgische scalpel mes om een een centimeter huid incisie te maken over de dij van de rechter achterpoot. Stomp ontleed het onderhuidse vet om de neurovasculaire bundel bloot te leggen. En gebruik puntige tangen, veerschaar en een oogheelkundige naaldhouder om de membraanige ileofemorale schede te openen om de distale externe iliacale en dijbeenvaten bloot te stellen.Na het ontleden en scheiden van de slagader en ader van de zenuw, gebruik maken van zeven O niet-apober polypropyleen hechtingen aan de distale dijbeen slagader en ader en distale externe iliacale slagader en ader ligate. De identificatie van de distale externe iliacale slagader en de ligatie en excisie van de distale externe iliacale en femorale slagader en aderen zijn van cruciaal belang voor het succes van de procedure. Gebruik de veerschaar om het segment van de iliofemorale slagader en aders tussen de distale en proximale knopen te transecteren.En sluit de incisie af met een opneembare hechting. Vervolgens, inter-peritoneally leveren antisedatieve oplossing in het dier en de muis terug te keren naar zijn huis kooi met controle tot volledig herstel. Om de gastrocnemiusspieren te oogsten, verwijdert u de huid van beide achterpoten.En gebruik het wattenstaafje om de huid te scheiden van de spieren. Houd de achillespees, gebruik de veerschaar om de spier te scheiden van het scheenbeen en kuitbeen tot aan het kniegewricht. En scheid de biceps femoris van de gastrocnemiusspier.Gebruik de veerschaar om de invoegingen van de gastrocnemiusspier op het kniegewrichtsniveau te snijden. En gebruik 10% trigasanth om de geoogste spieren in een dwarse oriëntatie op een kleine kurkschijf te positioneren. Vervolgens, snap bevriezen van de monsters in vloeibare stikstof gekoelde isopentane voor min 80 graden Celsius opslag.Voor capillaire microdissection laser capture, na het verkrijgen van 12 micrometer secties van de spiermonsters, bevestig de weefsels aan de dia's in 50 milliliter gekoelde zuivere aceton gedurende vijf minuten bij min twintig graden Celsius. Na het drogen van de lucht en cirkel elk exemplaar met een hydrofobe pen. En hydrateer de monsters met twee molaire natriumchloride in PBS op vier graden Celsius.Aan het einde van de re-hydratatie, etiketteren van de monsters met de juiste primaire antilichaam van belang op vier graden Celsius 's nachts. Gevolgd door twee drie minuten wasbeurten in verse twee molaire natriumchloride in PBS per wasbeurt. Na de tweede was, etiketteren de secties met een geschikte secundaire antilichaam gedurende dertig minuten op vier graden Celsius, gevolgd door twee wasbeurten in natriumchloride in PBS zoals aangetoond.Label vervolgens de monsters met avidin geconjugeerd peroxidasecomplex gedurende dertig minuten bij vier graden Celsius. Gevolgd door een wasbeurt en vijf minuten etikettering met DAB peroxidase substraat. Aan het einde van de incubatie, dehydrateren de weefsels in sequentiële ijskoud 90%ethanol en 100% ethanol emersions.Gebruik vervolgens een later microdisseissysteem, uitgerust met een puls om 355 nanometer laser te laten effenen om 10.000 haarvaten per muis te ontleden en de ontleden haarvaten te katapulteren tot een lijmdop voor microfugebuis. Zoals geïllustreerd, wordt een volledig verlies van hindlimb perfusie waargenomen onmiddellijk na hindlimb ischemie inductie. Kwantitatieve evaluatie van de bloedstroom, uitgedrukt als een verhouding van ISC tot NISC ledemaat, toonde aanzienlijk verbeterde bloedperfusie van ledematen bij muizen blootgesteld aan de pro-angiogene stimulus op dagen 15 en 45 post-HLI.De kwantificering van CD31 positieve haarvaten in histologische secties van gastrocnemius spierweefselsecties toont aan dat de capillaire dichtheid groter is in de ischemische versus de niet-ischemische ledemaat. Zoals verwacht. Maar dit effect wordt verder versterkt na behandeling met het pro-angiogene middel.De dichtheid van het bijkomende vat neemt ook consequent toe in de ischemische ledemaat en deze toename is aanzienlijk hoger na blootstelling met de pro-angiogene stimulus. Omgekeerde transcriptase polymerase kettingreactie analyse van pro-angiogene genexpressie in CD31 positieve endotheelcellen toont een duidelijke variatie in genexpressie tussen muizen blootgesteld of niet aan de pro-angiogene agent. Het is belangrijk om een oogheelkundige naald ouder te gebruiken om de membraan iliofemorale schede te openen om scheuren van de slagader en ader tijdens de ontleding van het vat te voorkomen.Het vat reageert op achterpoot ischemie in de gemakkelijk geëvalueerd door laser doppler gebaseerde perfusie metingen en de histologische kwantificering van de capillaire dichtheid van het vat stelt ons in staat om de angiogenese te evalueren.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Mouse Model of the Cornea Pocket Assay for Angiogenesis Study

Een muis model van het hoornvlies Pocket Assay voor Angiogenese Study

A normal cornea is clear of vascular tissues. However, blood vessels can be induced to grow and survive in the cornea when potent angiogenic factors are ...

Assessing Teratogenic Changes in a Zebrafish Model of Fetal Alcohol Exposure

Het beoordelen van Teratogene Veranderingen in een zebravis model van foetale blootstelling aan alcohol

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, ...

A Murine Closed-chest Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion

Een murine Closed-borst Model van myocardiale ischemie en reperfusie

Surgical trauma by thoracotomy in open-chest models of coronary ligation induces an immune response which modifies different mechanisms involved in ...

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Netvliesloslating Model in Knaagdieren door Subretinal Injectie van natriumhyaluronaat

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

Reproducable Paraplegia by Thoracic Aortic Occlusion in a Murine Model of Spinal Cord Ischemia-reperfusion

Reproduceerbaar Paraplegie door thoracale aorta-occlusie in een muizenmodel van Spinal Cord ischemie-reperfusie

Background
Lower extremity paralysis continues to complicate aortic interventions. The lack of understanding of the underlying pathology has hindered ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

Een muizenmodel van myocard ischemie-reperfusie schade door de eileiders van de LAD

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Muizenmodel van Intestinale ischemie-reperfusie schade

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

Methods for Acute and Subacute Murine Hindlimb Ischemia

Methoden voor acute en subacute muizen achterbeen ischemie

Peripheral artery disease (PAD) is a leading cause of cardiovascular morbidity and mortality in developed countries, and animal models that reliably ...

A Chronic Cardiac Ischemia Model in Swine Using an Ameroid Constrictor

Een Model van de chronische cardiale ischemie in varkens met behulp van een Ameroid-Constrictor

Cardiovascular disease remains the number one cause of mortality in the United States. There are numerous approaches to treating these diseases, but ...