Name: assessing therapeutic angiogenesis in a murine model of hindlimb ischemia
Uploaded: 2019-06-08T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia at JoVE.com

Vi takker José Rino og Tânia Carvalho, lederne for Bioimaging Facility og histologi og sammenlignende patologi laboratorium for Instituto de Medicina Molecular João Lobo Antunes, henholdsvis. Vi takker også Vjatsjeslav Sushchyk fra Institutt for anatomi av Nova Medical School/Faculdade de Ciências Médicas, Universidade Nova de Lisboa.
Finansierings referanse: prosjekt finansiert av UID/IC/0306/2016 Fundação para a Ciência e a Tecnologia. Paula de Oliveira er støttet av et fellesskap (SFRH/BD/80483/2011) fra Fundação para a Ciência e Tecnologia.

Alle dyr prosedyrer er i samsvar med direktiv 2010/63/EU og har blitt godkjent av den institusjonelle dyrevelferd Body og lisensiert av DGAV, den portugisiske kompetente myndighet for dyr beskyttelse (lisensnummer 023861/2013)
FORSIKTIG: flere av kjemikaliene som brukes i protokollene, er giftige og skadelige. Bruk all hensiktsmessig sikkerhetspraksis og personlig verneutstyr (hansker, laboratoriefrakk, full lengde bukser, og lukkede-toe sko)
1. den murine modell av h...

<ol>
	<li>Becker, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+I:+Definitions,+epidemiology,+clinical+presentation+and+prognosis.">Chapter I: Definitions, epidemiology, clinical presentation and prognosis.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 42 Suppl 2, S4-S12 (2011).</li><li>Fowkes, F. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+artery+disease:+epidemiology+and+global+perspectives.">Peripheral artery disease: epidemiology and global perspectives.</a> Nature Reviews Cardiology. 14 (3), 156-170 (2017).</li><li>Abu Dabrh, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+natural+history+of+untreated+severe+or+critical+limb+ischemia.">The natural history of untreated severe or critical limb ischemia.</a> Journal of Vascular Surgery. 62 (6), 1642-1651 (2015).</li><li>Lejay, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+murine+model+of+sustainable+and+durable+chronic+critical+limb+ischemia+fairly+mimicking+human+pathology.">A new murine model of sustainable and durable chronic critical limb ischemia fairly mimicking human pathology.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 49 (2), 205-212 (2015).</li><li>Sprengers, R. W., Lips, D. J., Moll, F. L., Verhaar, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progenitor+cell+therapy+in+patients+with+critical+limb+ischemia+without+surgical+options.">Progenitor cell therapy in patients with critical limb ischemia without surgical options.</a> Annals of Surgery. 247 (3), 411-420 (2008).</li><li>Lotfi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+a+more+relevant+hind+limb+model+of+muscle+ischaemia.">Towards a more relevant hind limb model of muscle ischaemia.</a> Atherosclerosis. 227 (1), 1-8 (2013).</li><li>Masaki, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenic+gene+therapy+for+experimental+critical+limb+ischemia:+acceleration+of+limb+loss+by+overexpression+of+vascular+endothelial+growth+factor+165+but+not+of+fibroblast+growth+factor-2.">Angiogenic gene therapy for experimental critical limb ischemia: acceleration of limb loss by overexpression of vascular endothelial growth factor 165 but not of fibroblast growth factor-2.</a> Circulation Research. 90 (9), 966-973 (2002).</li><li>Limbourg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+postnatal+arteriogenesis+and+angiogenesis+in+a+mouse+model+of+hind-limb+ischemia.">Evaluation of postnatal arteriogenesis and angiogenesis in a mouse model of hind-limb ischemia.</a> Nature Protocols. 4 (12), 1737-1746 (2009).</li><li>Hellingman, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variations+in+surgical+procedures+for+hind+limb+ischaemia+mouse+models+result+in+differences+in+collateral+formation.">Variations in surgical procedures for hind limb ischaemia mouse models result in differences in collateral formation.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 40 (6), 796-803 (2010).</li><li>Brevetti, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exercise-induced+hyperemia+unmasks+regional+blood+flow+deficit+in+experimental+hindlimb+ischemia.">Exercise-induced hyperemia unmasks regional blood flow deficit in experimental hindlimb ischemia.</a> Journal of Surgical Research. 98 (1), 21-26 (2001).</li><li>Ministro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-dose+ionizing+radiation+induces+therapeutic+neovascularization+in+a+pre-clinical+model+of+hindlimb+ischemia.">Low-dose ionizing radiation induces therapeutic neovascularization in a pre-clinical model of hindlimb ischemia.</a> Cardiovascular Research. 113 (7), 783-794 (2017).</li><li>Pereira, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+angiogenesis+induced+by+human+umbilical+cord+tissue-derived+mesenchymal+stromal+cells+in+a+murine+model+of+hindlimb+ischemia.">Therapeutic angiogenesis induced by human umbilical cord tissue-derived mesenchymal stromal cells in a murine model of hindlimb ischemia.</a> Stem Cell Research Therapy. 7 (1), 145 (2016).</li><li>Azaripour, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+survey+of+clearing+techniques+for+3D+imaging+of+tissues+with+special+reference+to+connective+tissue.">A survey of clearing techniques for 3D imaging of tissues with special reference to connective tissue.</a> Progress in Histochemistry and Cytochemistry. 51 (2), 9-23 (2016).</li></ol>

Murine modeller av CLI har for det meste bestått i ligation av lårarterien like til opprinnelsen til profunda femoris 4,5,6, 7,8,9. Dette har vist å forlate det meste av sikkerhet sirkulasjon intakt, som gjenoppretter blodtilførselen til lem innen 7 dager 9. Fjerning av sikkerhet seng kan oppnås v...

Perifer arteriell sykdom (PAD) påvirker hovedsakelig de nedre lemmer. PAD er forårsaket av aterosklerose, en arterie obstruksjon som kan forårsake alvorlig begrensning i blodstrømmen i de nedre lemmer1. Intermitterende claudicatio er den første manifestasjon av PAD og refererer til muskel smerter når du går. CLI er den mest alvorlige fasen av PAD, blir diagnostisert hos pasienter som viser iskemiske hvile smerte, magesår eller koldbrann2. Pasienter med CLI har høy risiko for amputasjon, spesielt hvis ubehandlet3. Nedre lem revaskularisering (enten ved åpen kirurgi eller en endovaskulær prosedyre) er for tiden den eneste måten å oppnå lem berging. Men rundt 30% av CLI pasienter er ikke egnet for disse prosedyrene, av grunner som inkluderer plasseringen av lesjoner, mønsteret av arteriell okklusjon og omfattende komorbiditet. Derfor, nye terapier er nødvendig for disse ellers botemiddel pasienter, med fremming av angiogenese være strategien under mer intens etterforskning.
Før testing hos mennesker, må effektiviteten og sikkerheten til nye terapier in vivo vurderes i dyremodeller. Flere modeller har blitt utviklet for studiet av CLI, for det meste ved å indusere hindlimb bentap ischemia (HLI) i mus6,7,8,9,10. Men disse modellene varierer i flere aspekter, inkludert arten av arteriene som er ligaturer og/eller excised og om årer og nerver rundt er dissekert også6,7,8, 9,10. Til sammen vil disse aspektene påvirke alvorlighetsgraden av ischemia-reperfusion skade i hvert dyr, noe som gjør resultatene vanskelig å bli sammenlignet. Derfor er det avgjørende å utvikle en effektiv protokoll der prosedyren for å indusere iskemi og evaluering av ulike mål bør være standardisert for å vurdere om en gitt angiogenic behandling vil være effektiv. En eksperimentell protokoll designet for å dekke alle disse aspektene vil gi en helhetlig forståelse av de mekanismer som angiogenic terapier utøve sine effekter og et mål på deres effekt på hver av sine utfall. To distinkte arbeider nylig publisert av vårt team er et godt eksempel11,12, der ulike tilnærminger for å indusere terapeutisk angiogenese ble vurdert ved hjelp av samme protokoll som vil bli beskrevet med flere detaljer i denne Protokollen.
Det overordnede målet med denne protokollen er å beskrive en reproduserbar eksperimentell modell som kan etterligne virkningene av CLI og legge det eksperimentelle fundamentet for en helhetlig vurdering av de funksjonelle, histologic og molekylære virkningene av antatte angiogenic Agenter.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:840px;" width="839">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:251px;">7500 Fast Real-Time PCR</td>
			<td style="width:235px;">Applied Biosystems</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:223px;">Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Acetone</td>
			<td>Merk</td>
			<td>1000141000</td>
			<td>Reagent; Caution - highly flammable</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Adenosine</td>
			<td>Valdepharm</td>
			<td></td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Atipamezole</td>
			<td>OrionPharma</td>
			<td></td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Barium sulphate (Micropaque)</td>
			<td>Guebert</td>
			<td>8671404 (ref. Infarmed)</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Buprenorphine</td>
			<td>RichterPharma</td>
			<td></td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Carl Zeiss Opmi-1 FC Surgical Microscope</td>
			<td>Carl Zeiss Microscopy, Germany</td>
			<td></td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">cDNA RT2 PreAMP cDNA Synthesis kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td style="width:132px;">7335730</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Cryostat Leica CM</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>3050S</td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">DAB peroxidase substrate kit</td>
			<td>DAKO;Vector Laboratories</td>
			<td>K3468</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">hydrogen peroxidase</td>
			<td>Merk</td>
			<td>1072090250</td>
			<td>Reagent; Caution - nocif</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">hydrophobic pen</td>
			<td>Dako</td>
			<td>411121</td>
			<td>Reagent; Caution - toxic</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Ketamidor</td>
			<td style="width:235px;">Richterpharma</td>
			<td>CN:580393,7 630/01/12 Dfvf</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Laser Doppler perfusion imager moorLDI2-HIR</td>
			<td style="width:235px;">MoorLDI-V6.0, Moor Instruments Ltd, Axminster, UK</td>
			<td>5710</td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Leica DM2500 upright brightfield microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td></td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Medetor</td>
			<td>Virbac</td>
			<td>037/01/07RFVPT</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">methanol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>UN1230</td>
			<td>Reagent; Caution - toxic and highly flammable</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Papaverine</td>
			<td>Labesfal</td>
			<td></td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Pentano Isso</td>
			<td>Merk</td>
			<td>1060561000</td>
			<td>Reagent; Caution - highly flammable</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Power SYBR&#174; Green</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td style="width:132px;">4309155</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Purified rat anti-mouse CD31</td>
			<td>Pharmingen</td>
			<td>550274</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">RNeasy Micro kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74004</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Surgic-Pro 6.0</td>
			<td>Medtronic (Coviden)</td>
			<td>VP733X</td>
			<td>Suture</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:251px;">VECTASTAIN ABC HRP Kit (Peroxidase, Rat IgG)</td>
			<td>Vectastain ABC kit; Vector Laboratories</td>
			<td>PK-4004</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Vicryl5.0/ Vicryl 6.0</td>
			<td>Medtronic (Covidien)</td>
			<td>UL202/ UL101</td>
			<td>Suture</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Zeiss PALM MicroBeam Laser Microdissection System</td>
			<td>Carl Zeiss Microscopy, Germany</td>
			<td>1023290916</td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Stereotaxic microscope</td>
			<td>Carl Zeiss Microscopy, Germany</td>
			<td></td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Digital camera</td>
			<td>Linux</td>
			<td></td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing therapeutic angiogenesis in a murine model of hindlimb ischemia

Kritisk lem iskemi (CLI) er en alvorlig tilstand som medfører en høy risiko for lavere lem amputasjon. Til tross for revaskularisering er gull-standard terapi, et betydelig antall CLI pasienter er ikke egnet for enten kirurgisk eller endovaskulær revaskularisering. Angiogenic terapier fremstår som et alternativ for disse pasientene, men er for tiden fortsatt under etterforskning. Før påføring hos mennesker, må disse behandlingene testes i dyremodeller og dens mekanismer må være klart forstått. En dyr modell av hindlimb bentap iskemi (HLI) har blitt utviklet av ligation og fjerning av den eksterne ytre iliaca og lår arterier og årer i mus. En omfattende panel av tester ble montert for å vurdere virkningene av iskemi og antatte angiogenic terapier på funksjonelle, histologic og molekylære nivåer. Laser Doppler ble brukt til strømnings måling og funksjonell vurdering av Vevs responsen ble evaluert av analyse av kapillær tetthet etter farging med anti-CD31 antistoff på histologiske deler av gastrocnemius muskel og ved måling av pant fartøy tetthet etter diaphonization. Uttrykk for angiogenic gener ble kvantifisert av RT-PCR rettet mot utvalgte angiogenic faktorer utelukkende i endothelial celler (ECs) etter laser fangst microdissection fra mus gastrocnemius muskler. Disse metodene var følsomme i å identifisere forskjeller mellom iskemiske og ikke-iskemiske lemmer og mellom behandlet og ikke-behandlet lemmer. Denne protokollen gir en reproduserbar modell av CLI og et rammeverk for testing angiogenic terapier.

Ved hjelp av den beskrevne protokollen, navlestreng Mesenchymal stamceller og lav dose ioniserende stråling (LDIR) ble testet som antatte angiogenic behandling 11,12. Laser Doppler-måling ble innhentet før iskemi induksjon og på pre-spesifiserte tidspunkter alt fra umiddelbart etter iskemi induksjon til 45 dager post-iskemi. Målinger av vevs-og laser-Doppler ble registrert som fargekodede bilder, uten at det ble vist en rød farge som mørk blå og det høye...

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia at JoVE.com

Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia

Her presenteres en kritisk hindlimb bentap iskemi eksperimentell modell etterfulgt av et batteri av funksjonelle, histologic og molekylære tester for å vurdere effektiviteten av angiogenic terapier.

Vurdering av terapeutiske angiogenese i en murine modell av Hindlimb bentap ischemia

Critical limb ischemia (CLI) is a serious condition that entails a high risk of lower limb amputation. Despite revascularization being the gold-standard ...

Det overordnede målet med dette eksperimentet, vår hindlimb iskemi modell er å tenne eksperimentet et grunnlag for en omfattende vurdering av funksjonelle, histologiske og molekylære effekter av putative angiogene midler. Denne protokollen felt en standard for testing av mulige angiogene terapier i en liten dyremodell med potensial for fremtidige applikasjoner i klinisk sammenheng. Som revaskularisering er ikke egnet i tjue til tretti prosent av kritiske iskemi pasienter Terapeutisk angiogenese har dukket opp som en ny strategi for å forbedre blod overflod på iskemisk sted.Denne eksperimentelle protokollen kan gi en omfattende forståelse av mekanismene der angiogene terapier utøver sine effekter i mål av deres effekt ved hvert av resultatene. Etter å ha bekreftet mangel på respons på tåklemme i en 22 uker gammel C57 svart seks kvinnelig mus, barber håret fra høyre bakkulb og fest dyret i dorsal til cubitus posisjon på en oppvarmet pute. Plasser dyret under et dissekerende mikroskop.Og bruk et nummer elleve kirurgisk skalpellblad for å gjøre en centimeter hud snitt over låret på høyre baklimb. Sløv dissekere subkutant fett for å avsløre den nevrovaskulære bunten. Og bruk spisse tang, vårsaks og en oftalmisk nålholder for å åpne den membranøse ileofemoralhylsen for å avsløre de distale eksterne iliac- og lårbenskarene.Etter dissekering og separering av arterien og venen fra nerven, bruk syv O ikke-absorberbare polypropylensuturer for å ligate den distale lårarterien og venen og distal ekstern iliac arterie og vene. Identifisering av distale ytre iliac arterie og ligation og utskjæring av distale ekstern iliac og lårarterie og årer er avgjørende for suksessen til prosedyren. Bruk vårsaksen til å transect segmentet av iliofemoral arterie og vener mellom distale og proksimale knuter.Og lukk snittet med en absorberbar sutur. Deretter leverer inter-peritoneally antisedativ løsning inn i dyret og returnerer musen til sitt hjem bur med overvåking til full gjenoppretting. For å høste gastrocnemiusmuskulaturen, fjern huden fra begge bakmropsene.Og bruk bomullspinnen til å skille huden fra musklene. Holder akillessenen, bruk vårsaksen til å skille muskelen fra tibia og fibula opp til kneleddet. Og skille biceps femoris fra gastrocnemius muskelen.Bruk vårsaksen til å kutte innsettingene av gastrocnemiusmuskelen på kneleddnivå. Og bruk 10% trigasanth for å plassere de høstede musklene i en tverrgående orientering på en liten korkdisk. Deretter klikker du på prøvene i flytende nitrogenkjølt isopentane for minus 80 grader Celsius lagring.For kapillær mikrodisseksjon laserfangst, etter å ha fått 12 mikrometer deler av muskelprøvene, fikse vevet til lysbildene i 50 milliliter avkjølt ren aceton i fem minutter ved minus tjue grader Celsius. Etter lufttørking og sirkel hver prøve med en hydrofob penn. Og rehydrere prøvene med to molar natriumklorid i PBS ved fire grader Celsius.På slutten av rehydreringen, merk prøvene med riktig primært antistoff av interesse ved fire grader Celsius over natten. Etterfulgt av to tre minutters vasker i friske to molarnatriumklorid i PBS per vask. Etter den andre vasken, merk seksjonene med et passende sekundært antistoff i tretti minutter ved fire grader celsius etterfulgt av to vasker i natriumklorid i PBS som vist.Deretter merker du prøvene med ivrig konjugert peroksidasekompleks i tretti minutter ved fire grader celsius. Etterfulgt av en vask og fem minutter med merking med DAB peroksidase substrat. På slutten av inkubasjonen dehydrerer vevet i sekvensiell iskald 90% etanol og 100% etanolesjoner.Deretter bruker du et senere mikrodisseksjonssystem, utstyrt med en puls til solid state 355 nanometer laser for å dissekere 10.000 kapillærer per mus og katapult dissekere kapillærer i en mikrofuge rørlimhette. Som illustrert observeres et fullstendig tap av bakrelimb perfusjon umiddelbart etter hindlimb iskemi induksjon. Kvantitativ evaluering av blodstrømmen, uttrykt som et forhold mellom ISC og NISC lem, viste betydelig forbedret lem blodperfusjon hos mus utsatt for pro-angiogen stimulans på dag 15 og 45 post-HLI.Kvantifiseringen av CD31 positive kapillærer i histologiske deler av gastrocnemius muskelvev seksjoner viser at kapillær tetthet er større i iskemisk versus ikke-iskemisk lem. Som forventet. Men denne effekten forsterkes ytterligere etter behandling med det pro-angiogene middelet.Sikkerhet fartøyet tetthet også konsekvent øker i iskemisk lem og denne økningen er betydelig høyere etter eksponering med pro-angiogen stimulans. Omvendt transkripsjon polymerase kjedereaksjonsanalyse av pro-angiogent genuttrykk i CD31 positive endotelceller viser en klar variasjon i genuttrykk mellom mus eksponert eller ikke for det pro-angiogene middelet. Det er viktig å bruke en oftalmisk nål eldre for å åpne den membranøse iliofemoralhylsen for å unngå rive av arterien og venen under kardisseksjonen.Fartøyet reagerer på hindlimb iskemi i lett evaluert av laser doppler basert perfusjonsmålinger og histologisk kvantifisering av kapillærkartettheten tillater oss å evaluere angiogenesen.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Mouse Model of the Cornea Pocket Assay for Angiogenesis Study

A normal cornea is clear of vascular tissues. However, blood vessels can be induced to grow and survive in the cornea when potent angiogenic factors are ...

Assessing Teratogenic Changes in a Zebrafish Model of Fetal Alcohol Exposure

Vurdere Teratogene Endringer i en sebrafisk Model of Fetal Alcohol Exposure

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, ...

A Murine Closed-chest Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion

En murint Lukket kiste Modell av myokardiskemi og reperfusjon

Surgical trauma by thoracotomy in open-chest models of coronary ligation induces an immune response which modifies different mechanisms involved in ...

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Netthinneavløsning Model i Gnagere etter subretinal Injeksjon av Natriumhyaluronat

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

Reproducable Paraplegia by Thoracic Aortic Occlusion in a Murine Model of Spinal Cord Ischemia-reperfusion

Reproduserbar Paraplegi av Thoracic Aorta Okklusjon i en Muse Model of Spinal Cord iskemi-reperfusjon

Background
Lower extremity paralysis continues to complicate aortic interventions. The lack of understanding of the underlying pathology has hindered ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

En murine modell av myokardiskemi-reperfusjon Injury gjennom Ligation av Left Anterior Synkende Artery

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Murine modell av intestinal iskemi-reperfusjon Injury

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

Methods for Acute and Subacute Murine Hindlimb Ischemia

Metoder for Akutt og subakutt Murine bakben iskemi

Peripheral artery disease (PAD) is a leading cause of cardiovascular morbidity and mortality in developed countries, and animal models that reliably ...

A Chronic Cardiac Ischemia Model in Swine Using an Ameroid Constrictor

En kronisk hjertesvikt Ischemia modell i svin bruker en Ameroid Constrictor

Cardiovascular disease remains the number one cause of mortality in the United States. There are numerous approaches to treating these diseases, but ...