Name: assessing therapeutic angiogenesis in a murine model of hindlimb ischemia
Uploaded: 2019-06-08T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia at JoVE.com

Vi tackar José Rino och Tânia Carvalho, chefer för bioimaging anläggningen och histologi och jämförande patologi laboratorium Instituto de Medicina Molecular João Lobo Antunes, respektive. Vi tackar också Vyacheslav Sushchyk från Institutionen för anatomi Nova Medical School/Faculdade de Ciências Médicas, Universidade Nova de Lisboa.
Finansierings referens: projekt finansierat av UID/IC/0306/2016 Fundação para a Ciência e a Tecnologia. Paula de Oliveira stöds av en gemenskap (SFRH/BD/80483/2011) från Fundação para a Ciência e Tecnologia.

Alla djurförsök är förenliga med direktiv 2010/63/EU och har godkänts av det institutionella djurskyddsorganet och licensierats av DGAV, den portugisiska behöriga myndigheten för djurskydd (licensnummer 023861/2013).
FÖRSIKTIGHET: flera av de kemikalier som används i protokollen är giftiga och skadliga. Använd alla lämpliga säkerhetsrutiner och personlig skyddsutrustning (handskar, labbrock, fullängds byxor och skor med sluten tå)
1. den murina modellen...

<ol>
	<li>Becker, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+I:+Definitions,+epidemiology,+clinical+presentation+and+prognosis.">Chapter I: Definitions, epidemiology, clinical presentation and prognosis.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 42 Suppl 2, S4-S12 (2011).</li><li>Fowkes, F. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+artery+disease:+epidemiology+and+global+perspectives.">Peripheral artery disease: epidemiology and global perspectives.</a> Nature Reviews Cardiology. 14 (3), 156-170 (2017).</li><li>Abu Dabrh, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+natural+history+of+untreated+severe+or+critical+limb+ischemia.">The natural history of untreated severe or critical limb ischemia.</a> Journal of Vascular Surgery. 62 (6), 1642-1651 (2015).</li><li>Lejay, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+murine+model+of+sustainable+and+durable+chronic+critical+limb+ischemia+fairly+mimicking+human+pathology.">A new murine model of sustainable and durable chronic critical limb ischemia fairly mimicking human pathology.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 49 (2), 205-212 (2015).</li><li>Sprengers, R. W., Lips, D. J., Moll, F. L., Verhaar, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progenitor+cell+therapy+in+patients+with+critical+limb+ischemia+without+surgical+options.">Progenitor cell therapy in patients with critical limb ischemia without surgical options.</a> Annals of Surgery. 247 (3), 411-420 (2008).</li><li>Lotfi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+a+more+relevant+hind+limb+model+of+muscle+ischaemia.">Towards a more relevant hind limb model of muscle ischaemia.</a> Atherosclerosis. 227 (1), 1-8 (2013).</li><li>Masaki, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenic+gene+therapy+for+experimental+critical+limb+ischemia:+acceleration+of+limb+loss+by+overexpression+of+vascular+endothelial+growth+factor+165+but+not+of+fibroblast+growth+factor-2.">Angiogenic gene therapy for experimental critical limb ischemia: acceleration of limb loss by overexpression of vascular endothelial growth factor 165 but not of fibroblast growth factor-2.</a> Circulation Research. 90 (9), 966-973 (2002).</li><li>Limbourg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+postnatal+arteriogenesis+and+angiogenesis+in+a+mouse+model+of+hind-limb+ischemia.">Evaluation of postnatal arteriogenesis and angiogenesis in a mouse model of hind-limb ischemia.</a> Nature Protocols. 4 (12), 1737-1746 (2009).</li><li>Hellingman, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variations+in+surgical+procedures+for+hind+limb+ischaemia+mouse+models+result+in+differences+in+collateral+formation.">Variations in surgical procedures for hind limb ischaemia mouse models result in differences in collateral formation.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 40 (6), 796-803 (2010).</li><li>Brevetti, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exercise-induced+hyperemia+unmasks+regional+blood+flow+deficit+in+experimental+hindlimb+ischemia.">Exercise-induced hyperemia unmasks regional blood flow deficit in experimental hindlimb ischemia.</a> Journal of Surgical Research. 98 (1), 21-26 (2001).</li><li>Ministro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-dose+ionizing+radiation+induces+therapeutic+neovascularization+in+a+pre-clinical+model+of+hindlimb+ischemia.">Low-dose ionizing radiation induces therapeutic neovascularization in a pre-clinical model of hindlimb ischemia.</a> Cardiovascular Research. 113 (7), 783-794 (2017).</li><li>Pereira, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+angiogenesis+induced+by+human+umbilical+cord+tissue-derived+mesenchymal+stromal+cells+in+a+murine+model+of+hindlimb+ischemia.">Therapeutic angiogenesis induced by human umbilical cord tissue-derived mesenchymal stromal cells in a murine model of hindlimb ischemia.</a> Stem Cell Research Therapy. 7 (1), 145 (2016).</li><li>Azaripour, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+survey+of+clearing+techniques+for+3D+imaging+of+tissues+with+special+reference+to+connective+tissue.">A survey of clearing techniques for 3D imaging of tissues with special reference to connective tissue.</a> Progress in Histochemistry and Cytochemistry. 51 (2), 9-23 (2016).</li></ol>

Murina modeller av CLI har mestadels bestod i ligering av femorala artären bara distalt till ursprunget för den profunda femoris 4,5,6,7,8,9. Detta har visat sig lämna de flesta av säkerheten cirkulationen intakt, vilket återställer blodflödet till extremiteten inom 7 dagar 9. Avlägsnande av s?...

Perifer arteriell sjukdom (PAD) drabbar främst de nedre extremiteterna. PAD orsakas av åderförkalkning, en artär obstruktion som kan orsaka allvarliga restriktioner för blodflödet i de nedre extremiteterna1. Claudicatio intermittens är den första manifestationen av PAD och hänvisar till muskelsmärta när man går. CLI är den allvarligaste etappen av PAD, diagnostiseras hos patienter som visar ischemisk vila smärta, sår eller kallbrand2. Patienter med CLI har en hög risk för amputation, särskilt om obehandlad3. Nedre extremiteterna revaskularisering (antingen genom öppen kirurgi eller en endovaskulär procedur) är för närvarande det enda sättet att uppnå lem bärgning. Emellertid, cirka 30% av CLI-patienter är inte lämpade för dessa förfaranden, av skäl som inkluderar placeringen av lesioner, mönstret av arteriell ocklusion och omfattande comorbiditet4,5. Därför, nya terapier behövs för dessa annars icke behandlingsbara patienter, med främjandet av angiogenes är strategin under intensivare utredning.
Före testning hos människor måste effektiviteten och säkerheten hos nya terapier in vivo övervägas i djurmodeller. Flera modeller har utvecklats för studiet av CLI, främst genom att framkalla bakbenet ischemi (HLI) hos möss6,7,8,9,10. Emellertid, dessa modeller skiljer sig i flera aspekter, inklusive arten av artärerna som är och ligaturer och/eller censurerade och om vener och nerver som omger dissekeras samt6,7,8, 9,10. Sammantaget kommer dessa aspekter att påverka svårighetsgraden av ischemia-reperfusion skada i varje djur, vilket gör resultaten svårt att jämföras. Därför är det viktigt att utveckla ett effektivt protokoll där förfarandet för att inducera ischemi och utvärderingen av olika mål bör standardiseras för att bedöma om en given angiogen terapi kommer att vara effektiv. Ett experimentellt protokoll som utformats för att täcka alla dessa aspekter skulle ge en omfattande förståelse av de mekanismer genom vilka angiogena terapier utövar sina effekter och ett mått på deras effektivitet vid varje resultat. Två distinkta verk som nyligen publicerats av vårt team är ett bra exempel11,12, där olika metoder för att inducera terapeutisk angiogenes bedömdes med hjälp av samma protokoll som kommer att beskrivas med mer i detalj i denna Protokollet.
Det övergripande målet med detta protokoll är att beskriva en reproducerbar experimentell modell som kan efterlikna effekterna av CLI och lägga den experimentella grunden för en heltäckande bedömning av de funktionella, histologiska och molekylära effekterna av Agenter.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:840px;" width="839">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:251px;">7500 Fast Real-Time PCR</td>
			<td style="width:235px;">Applied Biosystems</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:223px;">Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Acetone</td>
			<td>Merk</td>
			<td>1000141000</td>
			<td>Reagent; Caution - highly flammable</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Adenosine</td>
			<td>Valdepharm</td>
			<td></td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Atipamezole</td>
			<td>OrionPharma</td>
			<td></td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Barium sulphate (Micropaque)</td>
			<td>Guebert</td>
			<td>8671404 (ref. Infarmed)</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Buprenorphine</td>
			<td>RichterPharma</td>
			<td></td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Carl Zeiss Opmi-1 FC Surgical Microscope</td>
			<td>Carl Zeiss Microscopy, Germany</td>
			<td></td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">cDNA RT2 PreAMP cDNA Synthesis kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td style="width:132px;">7335730</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Cryostat Leica CM</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>3050S</td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">DAB peroxidase substrate kit</td>
			<td>DAKO;Vector Laboratories</td>
			<td>K3468</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">hydrogen peroxidase</td>
			<td>Merk</td>
			<td>1072090250</td>
			<td>Reagent; Caution - nocif</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">hydrophobic pen</td>
			<td>Dako</td>
			<td>411121</td>
			<td>Reagent; Caution - toxic</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Ketamidor</td>
			<td style="width:235px;">Richterpharma</td>
			<td>CN:580393,7 630/01/12 Dfvf</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Laser Doppler perfusion imager moorLDI2-HIR</td>
			<td style="width:235px;">MoorLDI-V6.0, Moor Instruments Ltd, Axminster, UK</td>
			<td>5710</td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Leica DM2500 upright brightfield microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td></td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Medetor</td>
			<td>Virbac</td>
			<td>037/01/07RFVPT</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">methanol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>UN1230</td>
			<td>Reagent; Caution - toxic and highly flammable</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Papaverine</td>
			<td>Labesfal</td>
			<td></td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Pentano Isso</td>
			<td>Merk</td>
			<td>1060561000</td>
			<td>Reagent; Caution - highly flammable</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Power SYBR&#174; Green</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td style="width:132px;">4309155</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Purified rat anti-mouse CD31</td>
			<td>Pharmingen</td>
			<td>550274</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">RNeasy Micro kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74004</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Surgic-Pro 6.0</td>
			<td>Medtronic (Coviden)</td>
			<td>VP733X</td>
			<td>Suture</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:251px;">VECTASTAIN ABC HRP Kit (Peroxidase, Rat IgG)</td>
			<td>Vectastain ABC kit; Vector Laboratories</td>
			<td>PK-4004</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Vicryl5.0/ Vicryl 6.0</td>
			<td>Medtronic (Covidien)</td>
			<td>UL202/ UL101</td>
			<td>Suture</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Zeiss PALM MicroBeam Laser Microdissection System</td>
			<td>Carl Zeiss Microscopy, Germany</td>
			<td>1023290916</td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Stereotaxic microscope</td>
			<td>Carl Zeiss Microscopy, Germany</td>
			<td></td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Digital camera</td>
			<td>Linux</td>
			<td></td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing therapeutic angiogenesis in a murine model of hindlimb ischemia

Kritisk lem ischemi (CLI) är ett allvarligt tillstånd som innebär en hög risk för nedre extremiteten amputation. Trots revaskularisering är den guld-standard terapi, ett stort antal CLI-patienter är inte lämpade för antingen kirurgisk eller endovaskulär revaskularisering. Angiogena terapier växer fram som ett alternativ för dessa patienter men är för närvarande fortfarande under utredning. Före applicering på människor måste dessa terapier testas i djurmodeller och dess mekanismer måste förstås tydligt. En djurmodell av bakbenet ischemi (HLI) har utvecklats av ligering och excision av distala externa iliaca och femorala artärer och vener i möss. En omfattande panel av tester samlades för att bedöma effekterna av ischemi och förmodade angiogena terapier på funktionella, histologiska och molekylära nivåer. Laserdoppler användes för flödesmätning och funktionell bedömning av perfusion. Vävnads svar utvärderades genom analys av kapillärdensitet efter färgning med anti-CD31 antikropp på histologiska avsnitt av gastrocnemius muskler och genom mätning av säkerheter fartygets densitet efter diaphonization. Uttrycket av angiogena gener kvantifierades genom att RT-PCR inriktade sig på utvalda angiogena faktorer enbart i endotelceller (ECs) efter laserinfångning mikrodissektion från möss gastrocnemius muskler. Dessa metoder var känsliga för att identifiera skillnader mellan ischemiska och icke-ischemiska lemmar och mellan behandlade och icke-behandlade armar och ben. Detta protokoll ger en reproducerbar modell av CLI och ett ramverk för att testa angiogena terapier.

Med hjälp av det beskrivna protokollet, navel Strängs mesenkymala stamceller och lågdos joniseringsstrålning (LdiR) testades som förmodade angiogena terapier 11,12. Laser Doppler perfusion avläsningar erhölls innan ischemi induktion och vid förutbestämda tidpunkter alltifrån omedelbart efter ischemi induktion till 45 dagar efter ischemi. Avläsningar av vävnadsperfusion med Laser Doppler spelades in som färgkodade bilder, utan perfusion visas som mör...

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia at JoVE.com

Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia

Här, en kritisk bakben ischemi experimentell modell presenteras följt av ett batteri av funktionella, histologiska och molekylära tester för att bedöma effektiviteten av angiogena terapier.

Bedömning av terapeutisk angiogenes i en murin modell av Hindlimb ischemia

Critical limb ischemia (CLI) is a serious condition that entails a high risk of lower limb amputation. Despite revascularization being the gold-standard ...

Det övergripande målet med detta experiment, vår hindlimb ischemi modell är att tända experimentet en grund för en omfattande bedömning av funktionella, histologic och molekylära effekter av förmodade angiogenic agenter. Detta protokoll sätter in en standard för testning av möjliga angiogena terapier i en liten djurmodell med potential för framtida tillämpningar i kliniska sammanhang. Som revascularization är inte lämplig i tjugo till trettio procent av kritiska ischemi patienter Terapeutisk angiogenes har uppstått som en ny strategi för att förbättra blod profusion på ischemisk webbplats.Detta experimentella protokoll skulle kunna ge en omfattande förståelse av de mekanismer genom vilka angiogena terapier utövar sina effekter i måttet på deras effekt vid vart och ett av deras resultat. Efter att ha bekräftat en brist på svar på tå nypa i en 22 veckor gammal C57 svart sex kvinnliga mus, raka håret från höger bakben och säkra djuret i dorsala till cubitus position på en uppvärmd pad. Placera djuret under ett dissekerande mikroskop.Och använda ett antal elva kirurgiska skalpell blad för att göra en en centimeter hud snitt över låret av den högra hindlimb. Blunt dissekera det subkutana fettet för att exponera den neurovaskulära bunten. Och använd spetsiga tövåd, vårsax och en oftalmisk nålhållare för att öppna den membraniska ileofemorala manteln för att exponera de distala yttre höftbens- och femorala kärlen.Efter dissekera och separera artären och ven från nerven, använd sju O nonabsorbable polypropylen suturer till ligate den distala lårbensartären och ven och distala externa höftbensartären och ven. Identifieringen av den distala externa iliaca gatan och ligering och excision av den distala externa iliaca och lårbensartär och vener är kritiska för framgången av förfarandet. Använd vårsaxen för att transect segmentet av iliofemoral artär och vener mellan de distala och proximala knutar.Och stäng snittet med en absorberbar sutur. Sedan, inter-peritoneally leverera antisedative lösning i djuret och returnera musen till sitt hem bur med övervakning tills full återhämtning. För att skörda gastrocnemiusmusklerna, ta bort huden från båda bakbenen.Och använd bomullspinne för att separera huden från musklerna. Hålla hälsenan, använd våren sax för att skilja muskeln från skenbenet och vadbenet upp till knäleden. Och separera biceps femoris från gastrocnemius muskeln.Använd vårsaxen för att skära inläggen av gastrocnemiusmuskeln vid knäledsnivå. Och använd 10%trigasanth för att placera de skördade musklerna i en tvärgående orientering på en liten korkskiva. Sedan, snap frysa exemplaren i flytande kvävekyld isopentane för minus 80 grader Celsius lagring.För kapillär mikrodissektion laser fånga, efter att ha erhållit 12 mikrometer delar av muskelproverna, fixera vävnaderna till bilderna i 50 milliliter av kylda rena aceton i fem minuter vid minus tjugo grader Celsius. Efter lufttorkning och cirkel varje exemplar med en hydrofoba penna. Och rehydrera proverna med två molarnatriumklorid i PBS vid fyra grader Celsius.Vid slutet av återhydratiseringen, märka proverna med lämplig primär antikropp av intresse vid fyra grader Celsius över natten. Följt av två tre minuters tvättar i färska två molar natriumklorid i PBS per tvätt. Efter den andra tvätten, märka sektionerna med en lämplig sekundär antikropp i trettio minuter vid fyra grader celsius följt av två tvättar i natriumklorid i PBS som visas.Därefter märka proverna med avidin konjugerat peroxidaskomplex i trettio minuter vid fyra grader celsius. Följt av en tvätt och fem minuters märkning med DAB peroxidas substrat. I slutet av inkubationen, torka vävnaderna i sekventiell iskall 90%etanol och 100%etanol-meersions.Använd sedan ett senare mikrodissektionssystem, utrustat med en puls till solid state 355 nanometerlaser för att dissekera 10, 000 kapillärer per mus och katapult dissekera kapillärerna till ett microfuge rör självhäftande lock. Som illustreras, en fullständig förlust av hindlimb perfusion observeras omedelbart efter hindlimb ischemi induktion. Kvantitativ utvärdering av blodflödet, uttryckt som ett förhållande mellan ISC till NISC lem, visat signifikant förbättrad extremitet blod perfusion i möss som utsätts för pro-angiogenic stimulans vid dag 15 och 45 post-HLI.Kvantifieringen av CD31 positiva kapillärer i histologiska avsnitt av gastrocnemius muskel vävnad sektioner visar att kapillär densitet är större i den skandinaviska kontra den icke-ischemisk lem. Som väntat. Men denna effekt förstärks ytterligare efter behandling med det pro-angiogena medlet.Säkerheten fartygstätheten ökar också konsekvent i ischemisk lem och denna ökning är betydligt högre efter exponering med den pro-angiogenic stimulans. Omvänd transkriptas polymeras kedjereaktion analys av pro-angiogenic genuttryck i CD31 positiva endotelceller visar en tydlig variation i genuttryck mellan möss exponeras eller inte till pro-angiogenic agent. Det är viktigt att använda en oftalmisk nål äldre för att öppna den membraniga iliofemoralskinn för att undvika att artären och venen slits sönder under kärlsdesektionen.Kärlet svarar på hindlimb ischemi i lätt utvärderas av laser doppler baserade perfusion mätningar och histologiska kvantifiering av kapillären fartyget densitet tillåter oss att utvärdera angiogenes.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Mouse Model of the Cornea Pocket Assay for Angiogenesis Study

En musmodell av hornhinnan Pocket-analys för Angiogenes Study

A normal cornea is clear of vascular tissues. However, blood vessels can be induced to grow and survive in the cornea when potent angiogenic factors are ...

Assessing Teratogenic Changes in a Zebrafish Model of Fetal Alcohol Exposure

Bedömning Teratogena Förändringar i ett Zebrafish modell av Fetal Alcohol Exponering

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, ...

A Murine Closed-chest Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion

En murin Sluten kista modell av ischemi och reperfusion

Surgical trauma by thoracotomy in open-chest models of coronary ligation induces an immune response which modifies different mechanisms involved in ...

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Näthinneavlossning modell i gnagare genom subretinal Injektion av natriumhyaluronat

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

Reproducable Paraplegia by Thoracic Aortic Occlusion in a Murine Model of Spinal Cord Ischemia-reperfusion

Reproducerbar Paraplegia från Thoracic Aorta ocklusion i en musmodell av ryggmärgs ischemi-reperfusion

Background
Lower extremity paralysis continues to complicate aortic interventions. The lack of understanding of the underlying pathology has hindered ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

En mus modell av ischemi-reperfusion skada genom Ligation i vänstra främre nedåt Artery

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Murina Modell av Intestinal ischemi-reperfusionsskada

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

Methods for Acute and Subacute Murine Hindlimb Ischemia

Metoder för akut och subakut Murin bakdelen ischemi

Peripheral artery disease (PAD) is a leading cause of cardiovascular morbidity and mortality in developed countries, and animal models that reliably ...

A Chronic Cardiac Ischemia Model in Swine Using an Ameroid Constrictor

En kronisk kardiell ischemi modell hos svin med en Ameroid Constrictor

Cardiovascular disease remains the number one cause of mortality in the United States. There are numerous approaches to treating these diseases, but ...