Name: assessing therapeutic angiogenesis in a murine model of hindlimb ischemia
Uploaded: 2019-06-08T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia at JoVE.com

Biz, sırasıyla Instituto de Medicina moleküler João Lobo Antunes Bioımaging tesis ve Histoloji ve karşılaştırmalı patoloji laboratuvarı başkanları José Rino ve Tânia Carvalho teşekkür ederiz. Ayrıca Nova Tıp Fakültesi/Faculdade de Ciências médicas, Universidade Nova de Lisboa anatomisi bölümünden Vyacheslav Sushchyk teşekkür ederiz.
Finansman referansı: UID/ıC/0306/2016 Fundação para a Ciência e a Tecnologia tarafından finanse edilen proje. Paula de Oliveira, Fundação para a Ciência e Tecnologia 'dan bir burs (SFRH/BD/80483/2011) tarafından desteklenmektedir.

Tüm hayvan prosedürleri Direktifi 2010/63/EU uyarınca ve kurumsal hayvan refah organı tarafından onaylanmış ve DGAV tarafından lisanslı, hayvan koruma için Portekiz yetkili kurumu (lisans numarası 023861/2013)
DIKKAT: protokollerde kullanılan kimyasalların birkaç tanesi toksik ve zararlıdır. Lütfen tüm uygun güvenlik uygulamalarını ve kişisel koruyucu ekipmanları (eldiven, laboratuar ceket, tam boy pantolon ve kapalı ayak ayakkabıları) kullanın
<p class="jove_tit...

<ol>
	<li>Becker, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+I:+Definitions,+epidemiology,+clinical+presentation+and+prognosis.">Chapter I: Definitions, epidemiology, clinical presentation and prognosis.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 42 Suppl 2, S4-S12 (2011).</li><li>Fowkes, F. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+artery+disease:+epidemiology+and+global+perspectives.">Peripheral artery disease: epidemiology and global perspectives.</a> Nature Reviews Cardiology. 14 (3), 156-170 (2017).</li><li>Abu Dabrh, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+natural+history+of+untreated+severe+or+critical+limb+ischemia.">The natural history of untreated severe or critical limb ischemia.</a> Journal of Vascular Surgery. 62 (6), 1642-1651 (2015).</li><li>Lejay, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+murine+model+of+sustainable+and+durable+chronic+critical+limb+ischemia+fairly+mimicking+human+pathology.">A new murine model of sustainable and durable chronic critical limb ischemia fairly mimicking human pathology.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 49 (2), 205-212 (2015).</li><li>Sprengers, R. W., Lips, D. J., Moll, F. L., Verhaar, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progenitor+cell+therapy+in+patients+with+critical+limb+ischemia+without+surgical+options.">Progenitor cell therapy in patients with critical limb ischemia without surgical options.</a> Annals of Surgery. 247 (3), 411-420 (2008).</li><li>Lotfi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Towards+a+more+relevant+hind+limb+model+of+muscle+ischaemia.">Towards a more relevant hind limb model of muscle ischaemia.</a> Atherosclerosis. 227 (1), 1-8 (2013).</li><li>Masaki, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenic+gene+therapy+for+experimental+critical+limb+ischemia:+acceleration+of+limb+loss+by+overexpression+of+vascular+endothelial+growth+factor+165+but+not+of+fibroblast+growth+factor-2.">Angiogenic gene therapy for experimental critical limb ischemia: acceleration of limb loss by overexpression of vascular endothelial growth factor 165 but not of fibroblast growth factor-2.</a> Circulation Research. 90 (9), 966-973 (2002).</li><li>Limbourg, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+postnatal+arteriogenesis+and+angiogenesis+in+a+mouse+model+of+hind-limb+ischemia.">Evaluation of postnatal arteriogenesis and angiogenesis in a mouse model of hind-limb ischemia.</a> Nature Protocols. 4 (12), 1737-1746 (2009).</li><li>Hellingman, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variations+in+surgical+procedures+for+hind+limb+ischaemia+mouse+models+result+in+differences+in+collateral+formation.">Variations in surgical procedures for hind limb ischaemia mouse models result in differences in collateral formation.</a> European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 40 (6), 796-803 (2010).</li><li>Brevetti, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exercise-induced+hyperemia+unmasks+regional+blood+flow+deficit+in+experimental+hindlimb+ischemia.">Exercise-induced hyperemia unmasks regional blood flow deficit in experimental hindlimb ischemia.</a> Journal of Surgical Research. 98 (1), 21-26 (2001).</li><li>Ministro, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-dose+ionizing+radiation+induces+therapeutic+neovascularization+in+a+pre-clinical+model+of+hindlimb+ischemia.">Low-dose ionizing radiation induces therapeutic neovascularization in a pre-clinical model of hindlimb ischemia.</a> Cardiovascular Research. 113 (7), 783-794 (2017).</li><li>Pereira, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+angiogenesis+induced+by+human+umbilical+cord+tissue-derived+mesenchymal+stromal+cells+in+a+murine+model+of+hindlimb+ischemia.">Therapeutic angiogenesis induced by human umbilical cord tissue-derived mesenchymal stromal cells in a murine model of hindlimb ischemia.</a> Stem Cell Research Therapy. 7 (1), 145 (2016).</li><li>Azaripour, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+survey+of+clearing+techniques+for+3D+imaging+of+tissues+with+special+reference+to+connective+tissue.">A survey of clearing techniques for 3D imaging of tissues with special reference to connective tissue.</a> Progress in Histochemistry and Cytochemistry. 51 (2), 9-23 (2016).</li></ol>

CLI murine modelleri çoğunlukla femoral arter ligasyon sadece Profunda femoris orijini distal oluşmuştur 4,5,6,7,8,9. Bu, 7 gün içinde ekstremite kan akışını geri yükler, korunmaz sirkülasyon çoğunu terk göstermiştir 9. Teminat yatağı kaldırılması femoral arter eksizyonu ile elde e...

Periferik arter hastalığı (PAD) ağırlıklı olarak alt ekstremite etkiler. PAD ateroskleroz neden olur, alt ekstremite kan akışına ciddi kısıtlama neden olabilir bir arter tıkanıklığı1. Aralıklı klodicasyon PAD ilk tezahürü ve yürüyüş kas ağrısı anlamına gelir. CLı, iskemik dinlenme ağrısı, ülser veya kangren2gösteren hastalarda teşhis EDILIYOR, Pad en şiddetli aşamasıdır. CLı olan hastalarda özellikle tedavi edilmemiş3amputasyon riski yüksektir. Alt ekstremite revaskülarizasyon (ya açık cerrahi veya endovasküler prosedür) Şu anda ekstremite kurtarma elde etmek için tek yoldur. Ancak, bu prosedürler için, lezyonların yerini, arter tıkanıklığı ve geniş komorbiditesi4,5' i içeren nedenlerle, CLI hastalarının yaklaşık% 30 ' unda bu yordamlar için uygun değildir. Bu nedenle, bu başka tedavi edilemez hastalar için yeni tedaviler gereklidir, anjiyogenez tanıtımı ile daha yoğun soruşturma altında strateji olmak.
İnsanlarda test yapmadan önce, yeni terapilerin etkinliği ve güvenliği hayvan modellerinde değerlendirilmelidir. Birkaç model, genellikle fareler6,7,8,9,10içinde hindekstremite iskemi (HLI) inducing tarafından, CLI çalışması için geliştirilmiştir. Ancak, bu modeller ve/veya ekisize ve damarları ve sinirler çevreleyen da6,7,8disseke olup olmadığını arterlerin doğası da dahil olmak üzere çeşitli yönleri farklıdır 9,10. Birlikte alındığında, bu yönleri her hayvanın iskemi-reperfüzyon yaralanması şiddeti etkileyecektir, sonuçları karşılaştırmak zor hale. Bu nedenle, belirli bir anjiyojenik tedavinin etkili olup olmadığını değerlendirmek için iskemi ve farklı hedeflerin değerlendirilmesine neden olan prosedürün standartlaştırılmalıdır etkili bir protokol geliştirmek önemlidir. Tüm bu yönleri kapsayacak şekilde tasarlanan deneysel bir protokol, anjiyojenik tedavilerin etkilerini ve bunların her bir sonuçlarının her birinde etkinliğini ölçen mekanizmalar tarafından kapsamlı bir anlayış sağlayacaktır. Son zamanlarda ekibimiz tarafından yayınlanan iki farklı eserler iyi bir örnek olan11,12, hangi farklı yaklaşımlar terapötik anjiyojenezi neden bu daha fazla ayrıntı ile tarif edilecektir aynı protokol kullanılarak değerlendirildi Protokolü.
Bu protokolün genel amacı, CLı 'nin etkilerini taklit edebilir ve deneysel anjiogenik fonksiyonel, histolojik ve moleküler etkilerinin kapsamlı bir şekilde değerlendirilmesi için deney temelini koyabilen yeniden üretilebilen bir deneysel modeli açıklamak. Ajan.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:840px;" width="839">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:251px;">7500 Fast Real-Time PCR</td>
			<td style="width:235px;">Applied Biosystems</td>
			<td style="width:132px;"></td>
			<td style="width:223px;">Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Acetone</td>
			<td>Merk</td>
			<td>1000141000</td>
			<td>Reagent; Caution - highly flammable</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Adenosine</td>
			<td>Valdepharm</td>
			<td></td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Atipamezole</td>
			<td>OrionPharma</td>
			<td></td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Barium sulphate (Micropaque)</td>
			<td>Guebert</td>
			<td>8671404 (ref. Infarmed)</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Buprenorphine</td>
			<td>RichterPharma</td>
			<td></td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Carl Zeiss Opmi-1 FC Surgical Microscope</td>
			<td>Carl Zeiss Microscopy, Germany</td>
			<td></td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">cDNA RT2 PreAMP cDNA Synthesis kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td style="width:132px;">7335730</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Cryostat Leica CM</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>3050S</td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">DAB peroxidase substrate kit</td>
			<td>DAKO;Vector Laboratories</td>
			<td>K3468</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">hydrogen peroxidase</td>
			<td>Merk</td>
			<td>1072090250</td>
			<td>Reagent; Caution - nocif</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">hydrophobic pen</td>
			<td>Dako</td>
			<td>411121</td>
			<td>Reagent; Caution - toxic</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Ketamidor</td>
			<td style="width:235px;">Richterpharma</td>
			<td>CN:580393,7 630/01/12 Dfvf</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Laser Doppler perfusion imager moorLDI2-HIR</td>
			<td style="width:235px;">MoorLDI-V6.0, Moor Instruments Ltd, Axminster, UK</td>
			<td>5710</td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Leica DM2500 upright brightfield microscope</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td></td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Medetor</td>
			<td>Virbac</td>
			<td>037/01/07RFVPT</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">methanol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>UN1230</td>
			<td>Reagent; Caution - toxic and highly flammable</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Papaverine</td>
			<td>Labesfal</td>
			<td></td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Pentano Isso</td>
			<td>Merk</td>
			<td>1060561000</td>
			<td>Reagent; Caution - highly flammable</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Power SYBR&#174; Green</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td style="width:132px;">4309155</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Purified rat anti-mouse CD31</td>
			<td>Pharmingen</td>
			<td>550274</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">RNeasy Micro kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74004</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Surgic-Pro 6.0</td>
			<td>Medtronic (Coviden)</td>
			<td>VP733X</td>
			<td>Suture</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:251px;">VECTASTAIN ABC HRP Kit (Peroxidase, Rat IgG)</td>
			<td>Vectastain ABC kit; Vector Laboratories</td>
			<td>PK-4004</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Vicryl5.0/ Vicryl 6.0</td>
			<td>Medtronic (Covidien)</td>
			<td>UL202/ UL101</td>
			<td>Suture</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Zeiss PALM MicroBeam Laser Microdissection System</td>
			<td>Carl Zeiss Microscopy, Germany</td>
			<td>1023290916</td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Stereotaxic microscope</td>
			<td>Carl Zeiss Microscopy, Germany</td>
			<td></td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;">Digital camera</td>
			<td>Linux</td>
			<td></td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing therapeutic angiogenesis in a murine model of hindlimb ischemia

Kritik ekstremite iskemi (CLı), alt ekstremite amputasyonu riski yüksek olan ciddi bir durumdur. Revaskülarizasyon altın standardı tedavi olmasına rağmen, önemli sayıda CLI hasta ya cerrahi veya endovasküler revaskülarizasyon için uygun değildir. Anjiyojenik tedaviler bu hastalar için bir seçenek olarak ortaya çıkmaktadır ancak halen soruşturma altındadır. İnsanlarda uygulamadan önce, bu tedaviler hayvan modellerinde test edilmelidir ve mekanizmaları açıkça anlaşılmalıdır. Hindekstremite iskemi (HLı) bir hayvan modeli, farelerde distal dış iliak ve femoral arterlerin ve damarların ligasyon ve eksizyonu ile geliştirilmiştir. İskemi ve Putatif anjiyojenik tedavilerin fonksiyonel, histolojik ve moleküler seviyelerde etkilerini değerlendirmek için kapsamlı bir test panosu toplandı. Lazer Doppler, perfüzyonun akış ölçümü ve fonksiyonel değerlendirilmesi için kullanılmıştır. Doku tepkisi, gasronemius kasının histolojik bölümlerinde Anti-CD31 antikor ile boyama sonrası kapiller yoğunluğunun analizi ile ve terleme sonrası damar yoğunluğunun ölçülmesi ile değerlendirildi. Anjiyojenik genlerin ifadesi, fare gastroknemius kaslarından lazer yakalama mikrodiseksiyondan sonra yalnızca endotel hücrelerinde (ECS) seçilen anjiyojenik faktörleri hedefleyen RT-PCR tarafından ölçülebilir. Bu yöntemler, iskemik ve iskemik olmayan ekstremite arasında ve tedavi edilen ve tedavi edilmeyen ekstremite arasındaki farklılıkları tanımlamada hassastır. Bu protokol, tekrarlanabilir bir CLı modeli ve anjiyojenik tedaviler test etmek için bir çerçeve sağlar.

Tanımlanan protokolün kullanılması, göbek kordon mezenkimal kök hücreleri ve düşük doz iyonlaştırıcı radyasyon (ldır) Putatif anjiyojenik tedaviler olarak test edildi 11,12. Lazer Doppler perfüzyon ölçümleri, iskemi İndüksiyon öncesi ve iskemi indüksiyon hemen sonra 45 gün sonrası iskemi arasında değişen önceden belirlenmiş timepoints elde edildi. Lazer Doppler ile doku perfüzyon ölçümleri, koyu mavi olarak görüntülenen perfü...

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia at JoVE.com

Assessing Therapeutic Angiogenesis in a Murine Model of Hindlimb Ischemia

Burada, anjiogenik tedavilerin etkinliğini değerlendirmek için fonksiyonel, histolojik ve moleküler testlerin bir pil tarafından izlenen kritik bir hindekstremite iskemi deneysel modeli sunulmuştur.

Hindekstremite Iskemi bir Murine modelinde terapötik anjiyogenezi değerlendirilmesi

Critical limb ischemia (CLI) is a serious condition that entails a high risk of lower limb amputation. Despite revascularization being the gold-standard ...

Bu deneyin genel amacı, bizim hindlimb iskemi modeli deney putatif anjiyojenik ajanların fonksiyonel, histolojik ve moleküler etkileri kapsamlı bir değerlendirme için bir temel ışık etmektir. Bu protokol, klinik bağlamda gelecekteki uygulamalar için potansiyel ile küçük bir hayvan modeli olası anjiyojenik tedavilerin test için bir standart alanları. Kritik iskemi hastalarının %20-30'unda revaskülarizasyon uygun olmadığı için terapötik anjiyogenez iskemik bölgede kan profüzyonunu iyileştirmek için yeni bir strateji olarak ortaya çıkmıştır.Bu deneysel protokol, anjiyojenik tedavilerin her bir sonuçlarındaki etkinliğini ölçmede etkilerini uyguladıkları mekanizmaların kapsamlı bir şekilde anlaşılmasını sağlayabilir. 22 haftalık C57 siyah altı dişi farede ayak parmak kıskacına yanıt eksikliğini doğruladıktan sonra, sağ arka bacaktan saçı tıraş edin ve hayvanı ısıtılmış bir ped üzerinde kübitpozisyona kadar sırtta sabitler. Hayvanı bir kesme mikroskobu altına yerleştirin.Ve sağ arka bacak uyluk üzerinde bir santimetre deri kesi yapmak için bir numara on bir cerrahi neşter bıçak kullanın. Künt nörovasküler demet ortaya çıkarmak için deri altı yağ incelemek. Ve distal dış iliak ve femoral damarları ortaya çıkarmak için membranöz ileofemoral kılıf açmak için sivri forceps, bahar makas ve oftalmik iğne tutucu kullanın.Diseksiyon ve sinir arter ve ven ayıran sonra, distal femoral arter ve ven ve distal dış iliak arter ve ven ligate için yedi O emilir polipropilen sütür kullanın. Distal eksternal iliak arterin tanımlanması, distal eksternal iliak ile femoral arter ve damarların ligasyonu ve eksizyonu işlemin başarısı için kritik öneme yöneliktir. Distal ve proksimal düğümler arasındaki iliofemoral arter ve damarlar segmentini transect için bahar makası kullanın.Ve kesiği emilebilir bir dikişle kapatın. Daha sonra, peritoneally hayvan içine antisitif çözüm teslim ve tam iyileşme kadar izleme ile ev kafesi için fare dönmek. Gastroknemius kasları hasat etmek için, her iki arka bacaklardan deri kaldırın.Ve kasları deri ayırmak için pamuklu bez kullanın. Aşil tendonu tutarak, diz eklemine kadar tibia ve fibula kas ayırmak için bahar makası kullanın. Ve pazı femorisi gastroknemius kaslarından ayırın.Diz eklem düzeyinde gastroknemius kas eklemeleri kesmek için bahar makası kullanın. Ve küçük bir mantar disk üzerinde enine yönde hasat kasları konumlandırmak için% 10 trigasanth kullanın. Daha sonra, sıvı nitrojen soğutulmuş isopentane eksi 80 santigrat depolama için numuneleri ani dondurma.Kapiller mikrodiseksiyon lazer yakalama için, kas örneklerinin 12 mikrometre bölümleri elde ettikten sonra, eksi yirmi derece santigrat beş dakika boyunca soğutulmuş saf aseton 50 mililitre slaytlar dokuları düzeltmek. Hava kurutuldıktan sonra her numuneyi hidrofobik bir kalemle daire içine alın. Ve numuneleri PBS'de dört santigrat derecede iki azı kaşığı sodyum klorürle yeniden sulendirin.Yeniden hidrasyon sonunda, bir gecede dört derece santigrat ilgi uygun birincil antikor ile örnekleri etiketleyin. Ardından, yıkama başına PBS'de taze iki azı kaşığı sodyum klorür iki üç dakikalık yıkar. İkinci yıkamadan sonra, dört santigrat derece de otuz dakika için uygun bir ikincil antikor ile uygun bir ikincil antikor ile etiket pbs sodyum klorür iki yıkar gösterildiği gibi.Daha sonra, avidin konjuge peroksidaz kompleksi ile etiket otuz dakika dört santigrat derece. Bir yıkama ve DAB peroksidaz substrat ile etiketleme beş dakika izledi. Kuluçka sonunda, sıralı buz soğuk dokuları dehydrate 90%etanol ve% 100 etanol emersions.Daha sonra, fare başına 10,000 kılcal damarı incelemek ve inceltme kılcal damarlarını mikrofuge tüpü yapışkan kapağına mancınık lamak için 355 nanometre lazere darbe ile donatılmış daha sonraki bir mikrodisese sistemi kullanın. Görüldüğü gibi hindlimb iskemi indüksiyonundan hemen sonra hindlimb perfüzyonunun tam bir kaybı gözlenir. ISC'nin NISC ekstremitesine oranı olarak ifade edilen kan akımının kan akımının kan titreşmesinde, 15 ve 45 hli sonrası pro-anjiyojenik uyarana maruz kalan farelerde önemli ölçüde gelişmiş ekstremite kan perfüzyonu gösterilmiştir.Gastroknemius kas dokusu bölümlerinin histolojik bölümlerinde CD31 pozitif kılcal damarların nicelliği, iskemik olmayan ekstremitelere karşı kapiller yoğunluğun daha fazla olduğunu göstermektedir. Beklendiği gibi. Ama bu etki pro-anjiyojenik ajan ile tedaviden sonra daha da artar.Kollateral damar yoğunluğu da iskemik ekstremitede sürekli olarak artar ve pro-anjiyojenik uyaranile maruz kaldıktan sonra bu artış önemli ölçüde daha yüksektir. CD31 pozitif endotel hücrelerinde pro-anjiyojenik gen ekspresyonunun ters transkripsiyonaz polimeraz zincir reaksiyonanalizi, pro-anjiyojenik ajana maruz kalan veya olmayan fareler arasında gen ekspresyonunda açık bir varyasyon olduğunu göstermektedir. Bu damar diseksiyon sırasında arter ve ven yırtılma önlemek için membranöz iliofemoral kılıf açmak için eski bir oftalmik iğne kullanmak önemlidir.Lazer doppler bazlı perfüzyon ölçümleri ile kolayca değerlendirilen arka ekstremite iskemisine yanıt verir ve kapiller damar yoğunluğunun histolojik niceliği anjiyogenezi değerlendirmemizi sağlar.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Mouse Model of the Cornea Pocket Assay for Angiogenesis Study

Anjiyogenez Çalışması Kornea Cep Testi Fare Modeli

A normal cornea is clear of vascular tissues. However, blood vessels can be induced to grow and survive in the cornea when potent angiogenic factors are ...

Assessing Teratogenic Changes in a Zebrafish Model of Fetal Alcohol Exposure

Fetal Alkol Pozlama bir Zebra balığı Modelinde teratojenik değişiklikler değerlendirilmesi

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, ...

A Murine Closed-chest Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion

Miyokard İskemi ve Reperfüzyon bir Mürin Kapalı göğüs Modeli

Surgical trauma by thoracotomy in open-chest models of coronary ligation induces an immune response which modifies different mechanisms involved in ...

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Sodyum Hyaluronat subretinal Enjeksiyon Kemirgenler Retina Dekolmanı Modeli

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

Reproducable Paraplegia by Thoracic Aortic Occlusion in a Murine Model of Spinal Cord Ischemia-reperfusion

Spinal Kord İskemi-reperfüzyon bir Mürin Modelinde Torasik Aort Tıkanıklığı tarafından tekrarlanabilir Parapleji

Background
Lower extremity paralysis continues to complicate aortic interventions. The lack of understanding of the underlying pathology has hindered ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

Sol ön inen arter ligasyonu ile Miyokard İskemi-reperfüzyon Hasarı bir fare modeli

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Bağırsak İskemi-reperfüzyon Hasarı Murin Modeli

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

Methods for Acute and Subacute Murine Hindlimb Ischemia

Akut ve Subakut Fare Arka ayağın İskemi Yöntemleri

Peripheral artery disease (PAD) is a leading cause of cardiovascular morbidity and mortality in developed countries, and animal models that reliably ...

A Chronic Cardiac Ischemia Model in Swine Using an Ameroid Constrictor

Bir Ameroid yılanı kullanarak domuz kronik kalp iskemi modelinde

Cardiovascular disease remains the number one cause of mortality in the United States. There are numerous approaches to treating these diseases, but ...