Name: evaluation of the storage stability of extracellular vesicles
Uploaded: 2019-05-22T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Evaluation of the Storage Stability of Extracellular Vesicles at JoVE.com

NanoMatFutur Junior Research program fra Forbundsministeriet for uddannelse og forskning, Tyskland (Grant nummer 13XP5029A) støttede dette arbejde. Maximilian Richter blev støttet af Studienstiftung des deutschen Volkes (German Academic Scholarship Foundation) gennem et Ph.D. stipendium.

1. cellekultur og produktion af celle konditioneret medium
<ol><li>Generelt dyrke celler under de individuelle betingelser, der kræves for den pågældende cellelinje.</li>
	<li>Der dyrkes celler til 24-72 h i serum frie tilstande eller i medium indeholdende EV-depleteret føtal kvægserum (FBS). Bemærk: Hvis der anvendes EV-depleteret FBS, skal man anvende en metode, der er dokumenteret til effektivt at tømme serum, for at undgå kontaminering med serum afledt EVs26.</li>
	<li>Indsaml med...

<ol>
	<li>Stremersch, S., De Smedt, S. C., Raemdonck, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+and+diagnostic+applications+of+extracellular+vesicles.">Therapeutic and diagnostic applications of extracellular vesicles.</a> Journal of Controlled Release. 244, 167-183 (2016).</li><li>Fuhrmann, G., Herrmann, I. K., Stevens, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-derived+vesicles+for+drug+therapy+and+diagnostics:+Opportunities+and+challenges.">Cell-derived vesicles for drug therapy and diagnostics: Opportunities and challenges.</a> Nano Today. 10 (3), 397-409 (2015).</li><li>Goes, A., Fuhrmann, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biogenic+and+Biomimetic+Carriers+as+Versatile+Transporters+To+Treat+Infections.">Biogenic and Biomimetic Carriers as Versatile Transporters To Treat Infections.</a> ACS Infectious Diseases. 4 (6), 881-892 (2018).</li><li>Gy&#246;rgy, B., Hung, M. E., Breakefield, X. O., Leonard, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+Applications+of+Extracellular+Vesicles:+Clinical+Promise+and+Open+Questions.">Therapeutic Applications of Extracellular Vesicles: Clinical Promise and Open Questions.</a> Annual Review of Pharmacology and Toxicology. 55, 439-464 (2015).</li><li>Schulz, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biocompatible+bacteria-derived+vesicles+show+inherent+antimicrobial+activity.">Biocompatible bacteria-derived vesicles show inherent antimicrobial activity.</a> Journal of Controlled Release. 290, 46-55 (2018).</li><li>Feng, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+class+of+extracellular+vesicles+from+breast+cancer+cells+activates+VEGF+receptors+and+tumour+angiogenesis.">A class of extracellular vesicles from breast cancer cells activates VEGF receptors and tumour angiogenesis.</a> Nature Communications. 8, 14450 (2017).</li><li>Bewicke-Copley, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicles+released+following+heat+stress+induce+bystander+effect+in+unstressed+populations.">Extracellular vesicles released following heat stress induce bystander effect in unstressed populations.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 6, 1340746 (2017).</li><li>Xu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+transfer+antigens+to+dendritic+cells+by+releasing+exosomes+containing+dead-cell-associated+antigens+partially+through+a+ceramide-dependent+pathway+to+enhance+CD4(+)+T-cell+responses.">Macrophages transfer antigens to dendritic cells by releasing exosomes containing dead-cell-associated antigens partially through a ceramide-dependent pathway to enhance CD4(+) T-cell responses.</a> Immunology. 149 (2), 157-171 (2016).</li><li>Buzas, E. I., Gy&#246;rgy, B., Nagy, G., Falus, A., Gay, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+role+of+extracellular+vesicles+in+inflammatory+diseases.">Emerging role of extracellular vesicles in inflammatory diseases.</a> Nature Reviews Rheumatology. 10, 356 (2014).</li><li>Rajappa, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malignant+Astrocytic+Tumor+Progression+Potentiated+by+JAK-mediated+Recruitment+of+Myeloid+Cells.">Malignant Astrocytic Tumor Progression Potentiated by JAK-mediated Recruitment of Myeloid Cells.</a> Clinical Cancer Research: An Official Journal of the American Association for Cancer Research. 23 (12), 3109-3119 (2017).</li><li>Umezu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomal+miR-135b+shed+from+hypoxic+multiple+myeloma+cells+enhances+angiogenesis+by+targeting+factor-inhibiting+HIF-1.">Exosomal miR-135b shed from hypoxic multiple myeloma cells enhances angiogenesis by targeting factor-inhibiting HIF-1.</a> Blood. 124 (25), 3748-3757 (2014).</li><li>Costa-Silva, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreatic+cancer+exosomes+initiate+pre-metastatic+niche+formation+in+the+liver.">Pancreatic cancer exosomes initiate pre-metastatic niche formation in the liver.</a> Nature Cell Biology. 17 (6), 816-826 (2015).</li><li>Boulanger, C. M., Loyer, X., Rautou, P. -. E., Amabile, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicles+in+coronary+artery+disease.">Extracellular vesicles in coronary artery disease.</a> Nature Reviews Cardiology. 14, 259 (2017).</li><li>Zhu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+toxicity+and+immunogenicity+studies+reveal+minimal+effects+in+mice+following+sustained+dosing+of+extracellular+vesicles+derived+from+HEK293T+cells.">Comprehensive toxicity and immunogenicity studies reveal minimal effects in mice following sustained dosing of extracellular vesicles derived from HEK293T cells.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 6 (1), 1324730 (2017).</li><li>Vader, P., Mol, E. A., Pasterkamp, G., Schiffelers, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicles+for+drug+delivery.">Extracellular vesicles for drug delivery.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 106, 148-156 (2016).</li><li>Ingato, D., Lee, J. U., Sim, S. J., Kwon, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Good+things+come+in+small+packages:+Overcoming+challenges+to+harness+extracellular+vesicles+for+therapeutic+delivery.">Good things come in small packages: Overcoming challenges to harness extracellular vesicles for therapeutic delivery.</a> Journal of Controlled Release. 241, 174-185 (2016).</li><li>Gimona, M., Pachler, K., Laner-Plamberger, S., Schallmoser, K., Rohde, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manufacturing+of+Human+Extracellular+Vesicle-Based+Therapeutics+for+Clinical+Use.">Manufacturing of Human Extracellular Vesicle-Based Therapeutics for Clinical Use.</a> International Journal of Molecular Sciences. 18 (6), 1190 (2017).</li><li>Jeyaram, A., Jay, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preservation+and+Storage+Stability+of+Extracellular+Vesicles+for+Therapeutic+Applications.">Preservation and Storage Stability of Extracellular Vesicles for Therapeutic Applications.</a> The AAPS Journal. 20 (1), 1 (2017).</li><li>L&#337;rincz, &. #. 1. 9. 3. ;. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+storage+on+physical+and+functional+properties+of+extracellular+vesicles+derived+from+neutrophilic+granulocytes.">Effect of storage on physical and functional properties of extracellular vesicles derived from neutrophilic granulocytes.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 3, 25465 (2014).</li><li>Kreke, M., Smith, R., Hanscome, P., Peck, K., Ibrahim, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Processes+for+producing+stable+exosome+formulations.">Processes for producing stable exosome formulations.</a> US patent. , (2016).</li><li>Frank, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicles+protect+glucuronidase+model+enzymes+during+freeze-drying.">Extracellular vesicles protect glucuronidase model enzymes during freeze-drying.</a> Scientific Reports. 8 (1), 12377 (2018).</li><li>Charoenviriyakul, C., Takahashi, Y., Nishikawa, M., Takakura, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preservation+of+exosomes+at+room+temperature+using+lyophilization.">Preservation of exosomes at room temperature using lyophilization.</a> International Journal of Pharmaceutics. 553 (1), 1-7 (2018).</li><li>Kusuma, G. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=To+Protect+and+to+Preserve:+Novel+Preservation+Strategies+for+Extracellular+Vesicles.">To Protect and to Preserve: Novel Preservation Strategies for Extracellular Vesicles.</a> Frontiers in Pharmacology. 9 (1199), (2018).</li><li>Haney, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes+as+drug+delivery+vehicles+for+Parkinson's+disease+therapy.">Exosomes as drug delivery vehicles for Parkinson's disease therapy.</a> Journal of Controlled Release. 207, 18-30 (2015).</li><li>Fuhrmann, G., Serio, A., Mazo, M., Nair, R., Stevens, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Active+loading+into+extracellular+vesicles+significantly+improves+the+cellular+uptake+and+photodynamic+effect+of+porphyrins.">Active loading into extracellular vesicles significantly improves the cellular uptake and photodynamic effect of porphyrins.</a> Journal of Controlled Release. 205, 35-44 (2015).</li><li>Th&#233;ry, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimal+information+for+studies+of+extracellular+vesicles+2018+(MISEV2018):+a+position+statement+of+the+International+Society+for+Extracellular+Vesicles+and+update+of+the+MISEV2014+guidelines.">Minimal information for studies of extracellular vesicles 2018 (MISEV2018): a position statement of the International Society for Extracellular Vesicles and update of the MISEV2014 guidelines.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 7 (1), 1535750 (2018).</li><li>Gardiner, C., Ferreira, Y. J., Dragovic, R. A., Redman, C. W. G., Sargent, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicle+sizing+and+enumeration+by+nanoparticle+tracking+analysis.">Extracellular vesicle sizing and enumeration by nanoparticle tracking analysis.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 2 (1), 19671 (2013).</li><li>Vestad, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size+and+concentration+analyses+of+extracellular+vesicles+by+nanoparticle+tracking+analysis:+a+variation+study.">Size and concentration analyses of extracellular vesicles by nanoparticle tracking analysis: a variation study.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 6 (1), 1344087 (2017).</li><li>Bosch, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trehalose+prevents+aggregation+of+exosomes+and+cryodamage.">Trehalose prevents aggregation of exosomes and cryodamage.</a> Scientific Reports. 6, 36162 (2016).</li><li>Bhattacharjee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DLS+and+zeta+potential+-+What+they+are+and+what+they+are+not.">DLS and zeta potential - What they are and what they are not.</a> Journal of Controlled Release. 235, 337-351 (2016).</li><li>Van Deun, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+disparate+isolation+methods+for+extracellular+vesicles+on+downstream+RNA+profiling.">The impact of disparate isolation methods for extracellular vesicles on downstream RNA profiling.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 3 (1), 24858 (2014).</li><li>Taylor, D. D., Shah, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+of+isolating+extracellular+vesicles+impact+down-stream+analyses+of+their+cargoes.">Methods of isolating extracellular vesicles impact down-stream analyses of their cargoes.</a> Methods. 87, 3-10 (2015).</li><li>Patel, D. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+cell+culture+parameters+on+production+and+vascularization+bioactivity+of+mesenchymal+stem+cell-derived+extracellular+vesicles.">Impact of cell culture parameters on production and vascularization bioactivity of mesenchymal stem cell-derived extracellular vesicles.</a> Bioengineering &amp; Translational Medicine. 2 (2), 170-179 (2017).</li><li>Gardiner, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+used+for+the+isolation+and+characterization+of+extracellular+vesicles:+results+of+a+worldwide+survey.">Techniques used for the isolation and characterization of extracellular vesicles: results of a worldwide survey.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 5 (1), 32945 (2016).</li><li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+distinct+nanoparticles+and+subsets+of+extracellular+vesicles+by+asymmetric+flow+field-flow+fractionation.">Identification of distinct nanoparticles and subsets of extracellular vesicles by asymmetric flow field-flow fractionation.</a> Nature Cell Biology. 20 (3), 332-343 (2018).</li><li>Linares, R., Tan, S., Gounou, C., Arraud, N., Brisson, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-speed+centrifugation+induces+aggregation+of+extracellular+vesicles.">High-speed centrifugation induces aggregation of extracellular vesicles.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 4 (1), 29509 (2015).</li><li>Lobb, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+exosome+isolation+protocol+for+cell+culture+supernatant+and+human+plasma.">Optimized exosome isolation protocol for cell culture supernatant and human plasma.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 4, 27031 (2015).</li></ol>

I dette manuskript præsenterer vi en omfattende protokol til undersøgelse af elevs stabilitet under forskellige opbevaringsforhold. Med kombinationen af indkapslet glucuronidasesystemer som en funktionel udlæser og evaluering af de fysisk-kemiske parametre for EVs, giver protokollen mulighed for en enkel opbevaring stabilitet vurdering af EVs og sammenligningen af EVs fra forskellige celle Linjer. SEM og TEM som komplementære metoder giver indsigt i ændringer af EVs på enkelt partikel niveau. De her fremlagte resul...

EVs er membran bundne nanopartikler fremstillet af næsten alle celletyper. For pattedyrsceller kan EVS opdeles i to hovedgrupper med særskilte produktionsveje1,2. Membran vesikler, med et størrelsesinterval fra ca. 100-1.000 Nm, fremstilles ved direkte spir fra cellemembranen. Exosomer, størrelse 30-200 Nm, er afledt af multi vesikulære organer dannet af indadgående spirende til endosomer, der efterfølgende fusionerer med cellemembranen til at frigive flere exosomer på én gang. Den vigtigste funktion af disse vesikler er transport af oplysninger mellem cellerne3. Til dette formål sorteres Cargos som RNA, DNA og proteiner aktivt i dem. Evt kan formidle en række forskellige effekter på deres mål, med konsekvenser for både sundhed og sygdom tilstand. På den ene side, de mægle positive virkninger såsom vævsregeneration, antigen præsentation, eller antibiotika virkninger, som gør dem lovende mål for deres udvikling som terapeutisk, 4,5. På den anden side, kan EVS fremme tumor vaskularitet6, inducere tilskuer effekter i stress svar7, og kan spille en rolle i autoimmune sygdomme8 og inflammatoriske sygdomme9. Således kan de være en nøglekomponent til en bedre forståelse af mange patologiske virkninger. Men tilstedeværelsen af ændrede EVS i mangfoldige sygdomme, såsom kræft10,11,12 og hjerte-kar-sygdomme13, og deres nemme tilgængelighed i blod og urin gør dem ideelle Biomarkører. Endelig, deres gode biokompatibilitet14 og deres iboende målretning evne gør EVS også interessant for narkotika levering15. I dette manuskript beskriver vi en protokol til vurdering af opbevarings stabiliteten for EVs, der er afledt af pattedyrsceller, en vigtig egenskab, der stadig ikke er særlig undersøgt.
Til den kliniske udvikling af EVs er der stadig mange forhindringer for at overvinde16, herunder evaluering af deres terapeutiske virkninger, produktion, rensning og opbevaring17. Mens-80 °C er almindeligt set som guld standard for EV opbevaring18, de nødvendige frysere er dyre, og opretholdelse af den nødvendige kølekæde fra produktionen til patienten kan være udfordrende. Desuden viser nogle rapporter, at opbevaring ved-80 °c stadig ikke optimalt bevarer evt og inducerer et tab i EV-funktionaliteten19,20. Andre metoder, såsom frysetørring21,22 eller spraytørring23, er blevet foreslået som mulige alternativer til frosset opbevaring af elbiler.
Den optimale måde at vurdere opbevarings stabiliteten på ville være at afprøve EVs i funktionelle analyser eller ved at evaluere en bestemt markør, for eksempel deres antibakterielle aktivitet19. Dette er muligt, når den ønskede virkning af vesikler er kendt, og når en særskilt gruppe af evt skal undersøgt. Hvis EVs fra forskellige celle kilder skal sammenlignes (f. eks. for stof indkapsling), eller hvis der ikke er nogen kendt funktionel aflæsning, er det ikke længere muligt at vurdere ændringer som følge af oplagring på en direkte måde.
På den anden side, blot at evaluere ændringer i deres fysisk-kemiske parametre, såsom størrelse, partikel genvinding, og proteinkoncentration, ikke altid forudsige ændringer i EV aktivitet, som det er blevet påvist i en nylig patent20.
Her giver vi en let anvendelig protokol til måling af elevs opbevarings stabilitet ved at vurdere deres fysisk-kemiske parametre kombineret med aktiviteten af et indkapslet beta-glucuronidaseenzym som et surrogat for lasten af EVs. Indlæsningen af enzymet sker ved saponin-inkubation, en mild metode, der er etableret med EVS fra forskellige kilder21,24,25. Saponin danner forbigående porer i EV-membranen, som giver mulighed for enzym optagelse i vesikel. Da enzymer er tilbøjelige til at miste deres aktivitet, hvis de udsættes for ugunstige opbevaringsforhold, er de en ideel surrogat for evalueringen af bevarelsen af funktionelle laster af EVs.
Vi har påvist, at anvendelsen af denne protokol på EVS fra humane mesenchymale stamceller (MSCS), humant navlestrengen vene-endotelceller (huvecer) og humant adenokarcinom alveolære epitelial celler (A549) faktisk resulterer i store forskelle i opbevarings stabilitet mellem forskellige cellelinjer, som bør tages i betragtning ved valg af EV-kilde21.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:933px;" width="933">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:333px;">1,2 dimyristoyl-sn glycero-3-phospho-choline (DMPC)</td>
			<td style="width:315px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P2663-25MG</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:333px;">1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phospho-choline (DPPC)</td>
			<td style="width:315px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4329-25MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">225 cm&#178; cell culture flasks</td>
			<td style="width:315px;">Corning</td>
			<td>431082</td>
			<td>Used with 25 ml of medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">30 kDa regenerated cellulose membrane</td>
			<td style="width:315px;">Wyatt Technology Europe</td>
			<td>1854</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">350 &#181;m spacer</td>
			<td style="width:315px;">Wyatt Technology Europe</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Automated fraction collector</td>
			<td style="width:315px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Beta-glucuronidase</td>
			<td style="width:315px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">G7646-100KU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Chloroform</td>
			<td style="width:315px;">Fisher scientific</td>
			<td>C/4966/17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Column oven</td>
			<td style="width:315px;">Hitachi High-Technologies Europe</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">D-(+)-Trehalose dihydrate</td>
			<td style="width:315px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>T9531-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:333px;">DAWN HELEOS II, Multi-angle light scattering detector</td>
			<td style="width:315px;">&#160;Wyatt Technology Europe</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Durapore Membrane filter, PVDF,&#160; 0,1&#160;&#181;m, 47&#160;mm</td>
			<td style="width:315px;">Merck</td>
			<td>VVLP04700</td>
			<td>Used for the preparation of buffers for AF4</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">EBM-2</td>
			<td style="width:315px;">Lonza Verviers, S.p.r.</td>
			<td>CC-3156</td>
			<td>Endothelial Cell Growth basal medium, used for the serum free culture of HUVEC cells</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Eclipse dualtec</td>
			<td style="width:315px;">Wyatt Technology Europe</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">EGM-2</td>
			<td style="width:315px;">Lonza Verviers, S.p.r.</td>
			<td>CC-3162</td>
			<td>Endothelial Cell Growth medium, used for the normal culture of HUVEC cells</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ELISA Plate Sealers</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>DY992</td>
			<td>used for sealing of 96-well plates for the glucuronidase assay</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Ethanol</td>
			<td style="width:315px;">Fisher scientific</td>
			<td>E/0665DF/17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Extruder Set With Holder/Heating Block</td>
			<td style="width:315px;">Avanti Polar Lipids</td>
			<td>610000-1EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Filter support</td>
			<td style="width:315px;">Avanti Polar Lipids</td>
			<td>610014-1EA</td>
			<td>used for liposome preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Fluorescein di-&#946;-D-glucoronide</td>
			<td style="width:315px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>F2915</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Gibco PBS-tablets+CA10:F36</td>
			<td style="width:315px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>18912014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Hettich Universal 320 R</td>
			<td>Andreas Hettich GmbH &#38; Co.KG</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for pelleting cells at 300 g</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Hettich Rotina 420 R</td>
			<td style="width:315px;">Andreas Hettich GmbH &#38; Co.KG</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for pelleting larger debris at 3000 g</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">HUVEC cells</td>
			<td style="width:315px;">Lonza Verviers, S.p.r.</td>
			<td style="width:119px;">C2517A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Kimble&#160; FlexColumn 1X30CM</td>
			<td style="width:315px;">Kimble</td>
			<td>420401-1030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Lyophilizer ALPHA 2-4 LSC</td>
			<td style="width:315px;">Christ</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microcentrifuge Tubes, Polypropylene</td>
			<td>VWR international</td>
			<td style="width:119px;">525-0255</td>
			<td>the tubes used for all EV-handling, found to be more favorable than comparable products from other suppliers regarding particle recovery</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Nanosight LM14 equipped with a green laser</td>
			<td style="width:315px;">Malvern Pananalytical</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Nanosight-software version 3.1</td>
			<td style="width:315px;">Malvern Pananalytical</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:333px;">Nucleopore 200 nm track-etch polycarbonate membranes</td>
			<td>Whatman/GE Healthcare</td>
			<td align="right">110406</td>
			<td>used for liposome preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">PEEK Inline filter holder</td>
			<td style="width:315px;">Wyatt Technology Europe</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphotungstic acid hydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>79690-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Polycarbonate bottles for ultracentrifugation</td>
			<td style="width:315px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:119px;">355622</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">QuantiPro BCA Assay Kit</td>
			<td style="width:315px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>QPBCA-1KT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Saponin</td>
			<td style="width:315px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>47036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Scanning electron microscopy Zeiss EVO HD 15</td>
			<td style="width:315px;">Carl Zeiss AG</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Sepharose Cl-2b</td>
			<td style="width:315px;">GE Healthcare</td>
			<td>17014001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">SEM copper grids with carbon film</td>
			<td style="width:315px;">Plano</td>
			<td>S160-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Small AF4 channel</td>
			<td style="width:315px;">Wyatt Technology Europe</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Sputter-coater Q150R ES</td>
			<td style="width:315px;">Quorum Technologies</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:333px;">Transmission electron microscopy JEOL JEM 2011</td>
			<td style="width:315px;">Oxford Instruments</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Type 45 Ti ultracentrifugation rotor</td>
			<td style="width:315px;">Beckman Coulter</td>
			<td>339160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Ultimate 3000 Dionex autosampler</td>
			<td style="width:315px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Ultimate 3000 Dionex isocratic pump</td>
			<td style="width:315px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Ultimate 3000 Dionex online vacuum degasser</td>
			<td style="width:315px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Ultracentrifuge OptimaTM L-90 K</td>
			<td style="width:315px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">UV detector</td>
			<td style="width:315px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Whatman 0.2 &#181;m pore size mixed cellulose filter</td>
			<td>Whatman/GE Healthcare</td>
			<td style="width:119px;">10401712</td>
			<td>Used for the filtration of all buffers used with the EVs and in SEC</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

evaluation of the storage stability of extracellular vesicles

Ekstracellulære vesikler (EVs) er lovende mål i den nuværende forskning, der skal anvendes som narkotika, narkotika-bærere, og biomarkører. For deres kliniske udvikling, ikke kun deres farmaceutiske aktivitet er vigtig, men også deres produktion skal evalueres. I denne forbindelse fokuserer forskningen på isolation af EVs, deres karakterisering og oplagring. Det nuværende manuskript har til formål at tilvejebringe en letkøbt procedure for vurdering af virkningen af forskellige opbevaringsforhold på evt, uden genmanipulation eller specifikke funktionelle analyser. Dette gør det muligt hurtigt at få et første indtryk af stabiliteten af EVs under en given opbevaringstilstand, og EVs, der er afledt af forskellige celle kilder, kan let sammenlignes. Stabilitets målingen er baseret på EVs ' fysisk-kemiske parametre (størrelse, partikelkoncentration og morfologi) og bevarelsen af deres gods aktivitet. Sidstnævnte vurderes af saponin-medieret indkapsling af enzymet beta-glucuronidase i evt. Glucuronidase fungerer som et surrogat og giver mulighed for en let kvantificering via spaltning af et fluorescerende reporter molekyle. Denne protokol kan være et værktøj for forskere i jagten på opbevaringsforhold, der optimalt bevarer EV-egenskaber for at fremme EV-forskning mod klinisk anvendelse.

Figur 1 viser opbevarings egenskaberne for EVS, der er isoleret fra HUVECs. EVs blev isoleret af UC, glucuronidasesystemer blev indkapslet, og efter SEC blev de rensede EVs evalueret for deres fysisk-kemiske egenskaber af NTA. En prøve af vesikler blev efterfølgende udsat for AF4 rensning, og glucuronidaseaktiviteten blev målt.
Vesikler blev derefter opbevaret i 7 d ved 4 °C eller-80 °C og ved 4 °C i lyofiliseret form, i sidstnævnte tilfælde med tilsætning af 4% treha...

Watch this Scientific Journal Video about Evaluation of the Storage Stability of Extracellular Vesicles at JoVE.com

Evaluation of the Storage Stability of Extracellular Vesicles

Vurdering af opbevarings stabiliteten af ekstracellulære vesikler

Her præsenterer vi en let anvendelig protokol til at vurdere opbevarings stabiliteten af ekstracellulære vesikler, en gruppe af naturligt forekommende nanopartikler produceret af celler. Vesikler er lastet med glucuronidasesystemer som model enzym og opbevaret under forskellige forhold. Efter opbevaring evalueres deres fysisk-kemiske parametre og aktiviteten af det indkapslet enzym.

Extracellular vesicles (EVs) are promising targets in current research, to be used as drugs, drug-carriers, and biomarkers. For their clinical ...

Opbevaring stabilitet ekstra cellulære vesikler er en vigtig parameter for deres fremtidige terapeutiske anvendelse. Vores protokol giver et let anvendeligt værktøj til at evaluere, hvordan opbevaring påvirker vesiklerne. Den største fordel ved vores teknik er, at ved at indføre glucuronidase som en udefrakommende markør, ekstracellulære vesikler stammer fra forskellige forældreceller en let sammenlignes med hensyn til deres storabilitet.Asymmetrisk flow felt flow fraktionering, eller AF4, er et mildt alternativ til størrelse udelukkelse kromatografi rensning for meget følsomme forbindelser. Fordi forbindelserne støder på mindre ren og skær stress i kanalen. Da glucuronidase er et følsomt enzym, nyder kvaliteten af de opholdsståelse godt ved grundig planlægning og udførelse af trin til rensning og analyse ryg mod ryg.Efter dyrkning af cellelinje af interesse i henhold til standardbetingelser for disse celler, erstatte supernatant med serum fri eller ekstra cellulære vesicle forarmet medium og returnere cellerne til cellekultur inkubatoren i yderligere 24 til 72 timer. Ved inkubationens afslutning opsamles supernatanten fra hver kolbe, og prøverne centrifugeres for at sedimentere cellerne. Opsam omhyggeligt cellebetingede medium uden at forstyrre pellet.Og centrifuge mediet igen for at fjerne cellerester og store aggregater. Derefter forsigtigt overføre supernatanter i ultracentrifuge rør. Hvis du bruger en fast vinkelrotor, skal du markere retningen af rørene i centrifugen for at lette udtagningen af den ekstracellulære vesicle pellet efter centrifugering.I slutningen af ultracentrifugering, bruge en serologisk pipette til omhyggeligt at kassere supernatant uden at forstyrre den ekstracellulære vesikel pellet. Ved 200 mikroliter af 0,2 mikrometer pore filtreret PBS til den resterende supernatant af det første ultracentrifugerør. Efter opspnøring af pelletsen overføres den deraf følgende ekstracellulære vesicleaffjedring til det næste rør til resuspension af den efterfølgende pellet, indtil alle de ekstracellulære vesiclepeller er blevet opslænset.Der tilsættes beta glucuronidase til den endelige resuspenderede pelletopløsning til en endelig koncentration på 1,5 mg pr. milliliter. Og saponin til en endelig koncentration på 0,1 milligram per milliliter. Derefter blandes godt ved vortexing i tre sekunder og placere reaktionen ved stuetemperatur i 10 minutter med intermitterende blid svirp.Når glucuronidase er blevet indkapslet, skal du sørge for at udføre alle de efterfølgende rensning vesicle evalueringstrin på samme dag for at opnå upartiske opbevaring stabilitet resultater. Har en størrelse udelukkelse kromatografi kolonne ligevægt med mindst to kolonne mængder af PBS klar til at rense pellet umiddelbart efter saponin inkubation. For at rense, tilføje op til 400 mikroliter af ekstracellulære vesicle suspension til kolonnen.Derefter indsamles en milliliter brøkdele af eluatet. For at tilpasse adskillelsen af de ekstracellulære vesikler fra de forurenende proteiner og fri glucuronidase måles proteinkoncentrationen med bicindonsyreanalyse i henhold til producentens instruktioner. Ved hjælp af parametre, der er optimeret til den respektive instrument- og vesicletype, skal du bruge et nanopartikelsporingsanalyseinstrument til at måle den ekstracellulære vesiclestørrelse og koncentration.For at måle glucuronidase aktivitet, tilsæt 25 mikroliter af frisklavet fluorescin di-beta-D-glucuronid til 125 mikroliter af de rensede ekstracellulære vesikler og tilsæt prøven til en brønd af en sort 96-brønd plade. Tids nul fluorescinproduktion på en pladelæser ved en 480 nanometer excitation og 516 nanometer emission. Dæk pladen tæt med gennemsigtig plastfolie for at reducere fordampning.Derefter inkubere pladen beskyttet mod lys i 18 timer ved 37 grader Celsius. Mål 18 timers fluorescinproduktion på pladelæseren som netop påvist. For ekstracellulær vesicle lyophilization, tilsæt fire milligram per milliliter trehalose til de rensede vesicles.Og fryse vesiklerne ved minus 80 grader Celsius i mindst en time. For at lyophilize prøverne, indstille hylden temperaturen af en lyophilizer til 15 grader Celsius og trykket til 0,180 millibars. Tør vesiklerne under disse forhold i 46 timer.Ved afslutningen af hovedtørringstrinnet indstilles hyldetemperaturen til 25 grader Celsius og trykket til 0035 millibar, og prøverne tørres i to timer under disse forhold. Derefter opbevares de frysetørrede prøver ved fire grader Celsius. For at rehydrere prøverne efter opbevaring tilsættes en mængde vand svarende til mængden af den ekstracellulære vesicleaffjedring før lyophilization.For at vurdere enzymaktiviteten efter opbevaring skal et AF4-instrument med frisklavet 0,1 mikrometerfiltreret PBS til den mobile fase og indsætte en 0,1 mikrometerfiltermembran i topindløbsfilteret efter pumpen for at reducere partikelstøj fra opløsningsmidlet. Efter demontering rengøres den lille kanal til AF4 med millEq vand. Fugt en ny regenereret cellulosemembran med en molekylvægt afskåret på 30 kilodaltons og placer membranen oven på ærgren med den skinnende side op.Placer en bred 350 mikrometer afstandsfra under den øverste halvdel af kanalen og samle kanalen dele. Ved hjælp af et drejningsmoment skruetrækker, stramme skruerne først til et drejningsmoment på fem Newton meter, derefter til et drejningsmoment på syv Newton meter. Stram skruerne rundt om blokken i et krydsmønster.Tilslut kanalerne indløb, udløb, og cross flow port til formørkelsen. Derefter fra mindst tre gamle prøver til at ligevægte membranen. Program en fraktionering køre med detektor flow og fokus flow indstillet til en milliliter per minut og en injicering flow på 0,2 milliliter per minut.Efter et minuts forfokustrin injiceres prøven over en periode på 10 minutter i fokus og indsprøjte trin, før krydsstrømmen reduceres fra to milliliter i minuttet til 0,1 milliliter pr. minut i løbet af otte minutter. Afslut fraktioneringskørslen med et elutiontrin uden tværgående flow i 10 minutter, og tilføj et vasketrin af elution og injektion efterfulgt af en elution. Derefter jævnbyrde kanalen for det næste løb med en indledende cross flow på to milliliter i minuttet og sæt UV-detektoren til 280 nanometer.Når alle programmerne er indstillet, injiceres 300 mikroliter af prøven, og UV- og lyssprændesignalerne registreres i ASTRA-softwaren. Efter 12 og et halvt minut, begynde at indsamle en milliliter fraktioner indtil 27 minutter efter injektion. Derefter udføre en glucuronidase analyse og en nano partikel tracking analyse som påvist.Her vises partikelgenvindingen og størrelsen af de ekstracellulære vesikler, der er isoleret fra humane vaskulære endotelceller efter syv dages opbevaring under forskellige forhold, i sammenligning med en frisk prøve. Vesikler blev efterfølgende udsat for AF4-rensning, og glucuronidaseaktiviteten pr. partikel blev målt. Både størrelse udelukkelse kromatografi og AF4 har succes med at adskille ekstracellulære vesicle fra fri glucuronidase.På grund af den højere grad af adskillelse for AF4 mellem partikler og frie enzym er kontaminering af de fraktioner, der indeholder vesikler, mindre sandsynlig. AF4 rensning efter opbevaring fjerner gratis enzym fra prøverne og sænker dermed mængden af genvundet enzymaktivitet pr. partikel. Denne effekt er mest fremtrædende efter opbevaring ved fire grader Celsius, for hvilken en 2/3 reduktion er observeret.Udeladelse af denne yderligere rensning trin kan føre til forkert antagelse om enzym stabilitet. Transmission elektron mikroskopi afslører ikke store forskelle i form for ekstracellulære vesikler lyophilized uden en kryobeskyttelsesmiddel. Scanning elektron mikroskopi imaging, dog afslører tilstedeværelsen af aggregater i de frysetørrede prøver, der ikke findes i minus 80 grader lagrede prøver.Det er afgørende, at gratis enzym fjernes fra vesiklerne før glucuronidase-analysen. Således, den teknik, der anvendes til vesicle rensning skal evalueres grundigt. De rensede partikler kunne også ses i form af deres overflade ladning for at finde ud af, om opbevaring ændret den naturlige sammensætning af membran proteiner eller sukker.Med vores teknik er det muligt at få en første indikation om ekstracellulær vesicle opbevaring stabilitet, selv når der ikke er nogen kendte specifikke markører eller analyser for aktiviteten til rådighed.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Magnetic Resonance Elastography Methodology for the Evaluation of Tissue Engineered Construct Growth

Magnetic Resonance elastografi metode til evaluering af manipuleret væv Construct Vækst

Traditional mechanical testing often results in the destruction of the sample, and in the case of long term tissue engineered construct studies, the use ...

Constant Pressure-controlled Extrusion Method for the Preparation of Nano-sized Lipid Vesicles

Konstant tryk-styret Ekstrudering fremgangsmåde til fremstilling af nano-størrelse lipidvesikler

Liposomes are artificially prepared vesicles consisting of natural and synthetic phospholipids that are widely used as a cell membrane mimicking platform ...

The Encapsulation of Cell-free Transcription and Translation Machinery in Vesicles for the Construction of Cellular Mimics

Indkapslingen af ​​Cell-fri Transskription og oversættelse Maskiner Blærer til opførelse af Cellular Efterligner

As interest shifts from individual molecules to systems of molecules, an increasing number of laboratories have sought to build from the bottom up ...

Quantification and Size-profiling of Extracellular Vesicles Using Tunable Resistive Pulse Sensing

Kvantificering og Størrelse-profilering af ekstracellulær blærer Brug Tunable Resistiv Pulse Sensing

Extracellular vesicles (EVs), including &#8216;microvesicles&#8217; and &#8216;exosomes&#8217;, are highly abundant in bodily fluids. Recent years have ...

3D Orbital Tracking in a Modified Two-photon Microscope: An Application to the Tracking of Intracellular Vesicles

3D Orbital Tracking i en modificeret to-foton mikroskop: en ansøgning til sporing af intracellulære vesikler

The objective of this video protocol is to discuss how to perform and analyze a three-dimensional fluorescent orbital particle tracking experiment using a ...

Paper-based Devices for Isolation and Characterization of Extracellular Vesicles

Papir-baserede enheder til isolering og karakterisering af ekstracellulær Vesikler

Extracellular vesicles (EVs), membranous particles released from various types of cells, hold a great potential for clinical applications. They contain ...

Fabrication of Extracellular Matrix-derived Foams and Microcarriers as Tissue-specific Cell Culture and Delivery Platforms

Fabrikation af ekstracellulære matrix-afledte Skum og Mikrobærere som Tissue-specifikke cellekultur og Delivery Platforms

Cell function is mediated by interactions with the extracellular matrix (ECM), which has complex tissue-specific composition and architecture. The focus ...

Primary Clarification of CHO Harvested Cell Culture Fluid using an Acoustic Separator

Primær afklaring af CHO Harvested Cell Culture Fluid ved hjælp af en akustisk separator

Primary clarification is an essential step in a biomanufacturing process for the initial removal of cells from therapeutic products within the harvested ...

Labeling of Extracellular Vesicles for Monitoring Migration and Uptake in Cartilage Explants

Mærkning af ekstracellulære vesikler til overvågning af migration og optagelse i brusk explants

Extracellular vesicles (EVs) are used in different studies to prove their potential as a cell-free treatment due to their cargo derived from their ...

Platelet-Derived Extracellular Vesicle Functionalization of Ti Implants

Blodplade-afledt ekstracellulær vesikel funktionalisering af Ti implantater

Extracellular Vesicles (EVs) are biological nanovesicles that play a key role in cell communication. Their content includes active biomolecules such as ...