Name: evaluation of the storage stability of extracellular vesicles
Uploaded: 2019-05-22T14:30:00
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독일 교육 연구 부 (보조금 번호 13XP5029A)의 나노 Matfutur 주니어 연구 프로그램은이 작업을 지원 했다. 막시밀리안 리히터는 박사 펠로 우 십을 통해 유스호스텔 Volkes (독일 학술 장학 재단)의 지원을 받았습니다.

1. 세포 배양 및 세포 컨디셔닝 배지 생산
<ol><li>일반적으로, 각 세포 줄에 필요한 개별적인 조건 하에서 세포를 육성 한다.</li>
	<li>무 혈 청 조건에서 또는 EV-고갈 된 태아 소 혈 청 (FBS)을 포함 하는 매체에서 24-72 h를 위한 세포를 경작 하십시오. 참고: EV-고갈 된 FBS 사용 되는 경우, 혈 청을 효율적으로 고갈 시키기 위해 입증 된 방법을 채택 하 여 소 세럼 파생 EVs26으로 오염을...

<ol>
	<li>Stremersch, S., De Smedt, S. C., Raemdonck, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+and+diagnostic+applications+of+extracellular+vesicles.">Therapeutic and diagnostic applications of extracellular vesicles.</a> Journal of Controlled Release. 244, 167-183 (2016).</li><li>Fuhrmann, G., Herrmann, I. K., Stevens, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-derived+vesicles+for+drug+therapy+and+diagnostics:+Opportunities+and+challenges.">Cell-derived vesicles for drug therapy and diagnostics: Opportunities and challenges.</a> Nano Today. 10 (3), 397-409 (2015).</li><li>Goes, A., Fuhrmann, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biogenic+and+Biomimetic+Carriers+as+Versatile+Transporters+To+Treat+Infections.">Biogenic and Biomimetic Carriers as Versatile Transporters To Treat Infections.</a> ACS Infectious Diseases. 4 (6), 881-892 (2018).</li><li>Gy&#246;rgy, B., Hung, M. E., Breakefield, X. O., Leonard, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+Applications+of+Extracellular+Vesicles:+Clinical+Promise+and+Open+Questions.">Therapeutic Applications of Extracellular Vesicles: Clinical Promise and Open Questions.</a> Annual Review of Pharmacology and Toxicology. 55, 439-464 (2015).</li><li>Schulz, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biocompatible+bacteria-derived+vesicles+show+inherent+antimicrobial+activity.">Biocompatible bacteria-derived vesicles show inherent antimicrobial activity.</a> Journal of Controlled Release. 290, 46-55 (2018).</li><li>Feng, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+class+of+extracellular+vesicles+from+breast+cancer+cells+activates+VEGF+receptors+and+tumour+angiogenesis.">A class of extracellular vesicles from breast cancer cells activates VEGF receptors and tumour angiogenesis.</a> Nature Communications. 8, 14450 (2017).</li><li>Bewicke-Copley, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicles+released+following+heat+stress+induce+bystander+effect+in+unstressed+populations.">Extracellular vesicles released following heat stress induce bystander effect in unstressed populations.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 6, 1340746 (2017).</li><li>Xu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+transfer+antigens+to+dendritic+cells+by+releasing+exosomes+containing+dead-cell-associated+antigens+partially+through+a+ceramide-dependent+pathway+to+enhance+CD4(+)+T-cell+responses.">Macrophages transfer antigens to dendritic cells by releasing exosomes containing dead-cell-associated antigens partially through a ceramide-dependent pathway to enhance CD4(+) T-cell responses.</a> Immunology. 149 (2), 157-171 (2016).</li><li>Buzas, E. I., Gy&#246;rgy, B., Nagy, G., Falus, A., Gay, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+role+of+extracellular+vesicles+in+inflammatory+diseases.">Emerging role of extracellular vesicles in inflammatory diseases.</a> Nature Reviews Rheumatology. 10, 356 (2014).</li><li>Rajappa, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malignant+Astrocytic+Tumor+Progression+Potentiated+by+JAK-mediated+Recruitment+of+Myeloid+Cells.">Malignant Astrocytic Tumor Progression Potentiated by JAK-mediated Recruitment of Myeloid Cells.</a> Clinical Cancer Research: An Official Journal of the American Association for Cancer Research. 23 (12), 3109-3119 (2017).</li><li>Umezu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomal+miR-135b+shed+from+hypoxic+multiple+myeloma+cells+enhances+angiogenesis+by+targeting+factor-inhibiting+HIF-1.">Exosomal miR-135b shed from hypoxic multiple myeloma cells enhances angiogenesis by targeting factor-inhibiting HIF-1.</a> Blood. 124 (25), 3748-3757 (2014).</li><li>Costa-Silva, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pancreatic+cancer+exosomes+initiate+pre-metastatic+niche+formation+in+the+liver.">Pancreatic cancer exosomes initiate pre-metastatic niche formation in the liver.</a> Nature Cell Biology. 17 (6), 816-826 (2015).</li><li>Boulanger, C. M., Loyer, X., Rautou, P. -. E., Amabile, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicles+in+coronary+artery+disease.">Extracellular vesicles in coronary artery disease.</a> Nature Reviews Cardiology. 14, 259 (2017).</li><li>Zhu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+toxicity+and+immunogenicity+studies+reveal+minimal+effects+in+mice+following+sustained+dosing+of+extracellular+vesicles+derived+from+HEK293T+cells.">Comprehensive toxicity and immunogenicity studies reveal minimal effects in mice following sustained dosing of extracellular vesicles derived from HEK293T cells.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 6 (1), 1324730 (2017).</li><li>Vader, P., Mol, E. A., Pasterkamp, G., Schiffelers, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicles+for+drug+delivery.">Extracellular vesicles for drug delivery.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 106, 148-156 (2016).</li><li>Ingato, D., Lee, J. U., Sim, S. J., Kwon, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Good+things+come+in+small+packages:+Overcoming+challenges+to+harness+extracellular+vesicles+for+therapeutic+delivery.">Good things come in small packages: Overcoming challenges to harness extracellular vesicles for therapeutic delivery.</a> Journal of Controlled Release. 241, 174-185 (2016).</li><li>Gimona, M., Pachler, K., Laner-Plamberger, S., Schallmoser, K., Rohde, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manufacturing+of+Human+Extracellular+Vesicle-Based+Therapeutics+for+Clinical+Use.">Manufacturing of Human Extracellular Vesicle-Based Therapeutics for Clinical Use.</a> International Journal of Molecular Sciences. 18 (6), 1190 (2017).</li><li>Jeyaram, A., Jay, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preservation+and+Storage+Stability+of+Extracellular+Vesicles+for+Therapeutic+Applications.">Preservation and Storage Stability of Extracellular Vesicles for Therapeutic Applications.</a> The AAPS Journal. 20 (1), 1 (2017).</li><li>L&#337;rincz, &. #. 1. 9. 3. ;. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+storage+on+physical+and+functional+properties+of+extracellular+vesicles+derived+from+neutrophilic+granulocytes.">Effect of storage on physical and functional properties of extracellular vesicles derived from neutrophilic granulocytes.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 3, 25465 (2014).</li><li>Kreke, M., Smith, R., Hanscome, P., Peck, K., Ibrahim, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Processes+for+producing+stable+exosome+formulations.">Processes for producing stable exosome formulations.</a> US patent. , (2016).</li><li>Frank, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicles+protect+glucuronidase+model+enzymes+during+freeze-drying.">Extracellular vesicles protect glucuronidase model enzymes during freeze-drying.</a> Scientific Reports. 8 (1), 12377 (2018).</li><li>Charoenviriyakul, C., Takahashi, Y., Nishikawa, M., Takakura, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preservation+of+exosomes+at+room+temperature+using+lyophilization.">Preservation of exosomes at room temperature using lyophilization.</a> International Journal of Pharmaceutics. 553 (1), 1-7 (2018).</li><li>Kusuma, G. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=To+Protect+and+to+Preserve:+Novel+Preservation+Strategies+for+Extracellular+Vesicles.">To Protect and to Preserve: Novel Preservation Strategies for Extracellular Vesicles.</a> Frontiers in Pharmacology. 9 (1199), (2018).</li><li>Haney, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exosomes+as+drug+delivery+vehicles+for+Parkinson's+disease+therapy.">Exosomes as drug delivery vehicles for Parkinson's disease therapy.</a> Journal of Controlled Release. 207, 18-30 (2015).</li><li>Fuhrmann, G., Serio, A., Mazo, M., Nair, R., Stevens, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Active+loading+into+extracellular+vesicles+significantly+improves+the+cellular+uptake+and+photodynamic+effect+of+porphyrins.">Active loading into extracellular vesicles significantly improves the cellular uptake and photodynamic effect of porphyrins.</a> Journal of Controlled Release. 205, 35-44 (2015).</li><li>Th&#233;ry, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimal+information+for+studies+of+extracellular+vesicles+2018+(MISEV2018):+a+position+statement+of+the+International+Society+for+Extracellular+Vesicles+and+update+of+the+MISEV2014+guidelines.">Minimal information for studies of extracellular vesicles 2018 (MISEV2018): a position statement of the International Society for Extracellular Vesicles and update of the MISEV2014 guidelines.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 7 (1), 1535750 (2018).</li><li>Gardiner, C., Ferreira, Y. J., Dragovic, R. A., Redman, C. W. G., Sargent, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+vesicle+sizing+and+enumeration+by+nanoparticle+tracking+analysis.">Extracellular vesicle sizing and enumeration by nanoparticle tracking analysis.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 2 (1), 19671 (2013).</li><li>Vestad, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size+and+concentration+analyses+of+extracellular+vesicles+by+nanoparticle+tracking+analysis:+a+variation+study.">Size and concentration analyses of extracellular vesicles by nanoparticle tracking analysis: a variation study.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 6 (1), 1344087 (2017).</li><li>Bosch, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trehalose+prevents+aggregation+of+exosomes+and+cryodamage.">Trehalose prevents aggregation of exosomes and cryodamage.</a> Scientific Reports. 6, 36162 (2016).</li><li>Bhattacharjee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DLS+and+zeta+potential+-+What+they+are+and+what+they+are+not.">DLS and zeta potential - What they are and what they are not.</a> Journal of Controlled Release. 235, 337-351 (2016).</li><li>Van Deun, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+disparate+isolation+methods+for+extracellular+vesicles+on+downstream+RNA+profiling.">The impact of disparate isolation methods for extracellular vesicles on downstream RNA profiling.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 3 (1), 24858 (2014).</li><li>Taylor, D. D., Shah, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+of+isolating+extracellular+vesicles+impact+down-stream+analyses+of+their+cargoes.">Methods of isolating extracellular vesicles impact down-stream analyses of their cargoes.</a> Methods. 87, 3-10 (2015).</li><li>Patel, D. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+cell+culture+parameters+on+production+and+vascularization+bioactivity+of+mesenchymal+stem+cell-derived+extracellular+vesicles.">Impact of cell culture parameters on production and vascularization bioactivity of mesenchymal stem cell-derived extracellular vesicles.</a> Bioengineering &amp; Translational Medicine. 2 (2), 170-179 (2017).</li><li>Gardiner, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+used+for+the+isolation+and+characterization+of+extracellular+vesicles:+results+of+a+worldwide+survey.">Techniques used for the isolation and characterization of extracellular vesicles: results of a worldwide survey.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 5 (1), 32945 (2016).</li><li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+distinct+nanoparticles+and+subsets+of+extracellular+vesicles+by+asymmetric+flow+field-flow+fractionation.">Identification of distinct nanoparticles and subsets of extracellular vesicles by asymmetric flow field-flow fractionation.</a> Nature Cell Biology. 20 (3), 332-343 (2018).</li><li>Linares, R., Tan, S., Gounou, C., Arraud, N., Brisson, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-speed+centrifugation+induces+aggregation+of+extracellular+vesicles.">High-speed centrifugation induces aggregation of extracellular vesicles.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 4 (1), 29509 (2015).</li><li>Lobb, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+exosome+isolation+protocol+for+cell+culture+supernatant+and+human+plasma.">Optimized exosome isolation protocol for cell culture supernatant and human plasma.</a> Journal of Extracellular Vesicles. 4, 27031 (2015).</li></ol>

이 원고에서는 다양 한 보관 조건에서 EVs의 안정성을 연구 하기 위한 종합적인 프로토콜을 제시 합니다. 캡슐화 된 니드을 기능적 판독 및 EVs의 물리 화학적 파라미터의 평가와 결합 하 여,이 프로토콜은 EVs의 간단한 저장 안정성 평가와 다른 셀의 EVs 비교를 허용 합니다. 라인. SEM 및 TEM을 보완 방법으로 사용 하면 단일 입자 수준에서 EVs의 변화에 대 한 통찰력을 얻을 수 있습니다. 여기에 제시 된...

EVs는 거의 모든 세포 유형에 의해 생성 된 멤브레인 결합 나노 입자입니다. 포유류 세포의 경우, EVs는 별개의 생산 경로1,2로 두 개의 주요 그룹으로 세분 될 수 있습니다. 대략 100-1000 nm에서 크기 범위를 가진 막 소포는, 세포 막에서 직접 신진에 의해 생성 됩니다. 크기 30-200 nm의 엑 소 솜은 내 면으로 형성 되 고, 이어서 세포 막과 융합 하 여 여러 개의 엑 소 좀을 한 번에 방출 하는 다발 골 조직 으로부터 유래한 다. 이 소포의 주요 기능은 세포3사이의 정보 전송입니다. 이 목적을 위해, RNA, DNA 및 단백질과 같은 화물는 활발히 그들로 분류 됩니다. EVs는 건강과 질병 상태 모두에 영향을 미치는 다양 한 효과를 대상에 게 전달할 수 있습니다. 한쪽에는 조직 재생, 항 원 제시 또는 항생제 효과와 같은 긍정적 인 효과를 매개 하 여 치료제4,5로 서의 발달에 대 한 길 조 표적을 만듭니다. 다른 측면에서, Ev는 종양 혈관 신생을 촉진할 수있고, 스트레스 반응7에서 바이 스탠 스 효과를 유도 하 고, 자가 면역 질환8 및 염증 성 질환9에서 역할을 할 수도 있다. 따라서, 그들은 많은 병리학 적 효과의 더 나은 이해에 핵심 구성 요소가 될 수 있습니다. 그러나 암10,11,12 및 심혈 관 질환과 같은 매니 폴드 질환에서 변경 된 EVs가 존재하 고 혈액과 소변에서의 손쉬운 접근이 이상적입니다. 바이오 마커. 마지막으로, 그들의 좋은 생체 적합성14 그리고 그들의 내재 된 표적 능력은 ev도 마약 배달에 대 한 흥미로운 만들기15. 이 원고에서, 우리는 포유류 세포 로부터 유래 된 EVs의 저장 안정성을 평가 하기 위한 프로토콜을 설명 하며, 여전히 거의 조사 되지 않는 중요 한 성질 이다.
EVs의 임상 발달을 위해, 그들의 치료 효과, 생산, 정제 및 저장17의 평가를 포함 하 여 극복16에 많은 장애물이 아직도 있습니다. -80 ° c는 EV 저장 장치 (18)의 표준으로 널리 볼 수 있는 반면, 필요한 냉동 고는 비용이 많이 들며, 생산에서 요구 되는 콜드 체인을 환자에 게 유지 하는 것은 쉽지 않은 일입니다. 또한 일부 보고서는-80 ° c에서 스토리지가 EVs를 최적으로 유지 하지 못하고 ev 기능19,20에서 손실을 유발 한다고 표시 합니다. 동결 건조 (21),22 또는 분무 건조 (23)와 같은 다른 방법은 EVs의 냉동 저장에 대 한 잠재적인 대체물로 제안 되었다.
저장 안정성을 평가 하는 최적의 방법은 기능적 분석에서 EVs를 테스트 하거나 특정 마커의 평가 (예를 들어, 항균 활성19)를 검사 하는 것입니다. 이것은 소포에 대 한 원하는 효과가 알려져 있을 때 그리고 하나의 별개의 EVs 그룹이 연구 될 때 가능 합니다. 상이한 세포 공급원 으로부터의 EVs가 비교 될 경우 (예를 들어, 약물 캡슐화) 또는 알려진 기능적 판독 기능이 없는 경우, 저장에의 한 변화를 직접적으로 평가할 수 없게 된다.
한편, 최근 특허20에 나타난 바와 같이, 크기, 입자 회수 및 단백질 농도와 같은 물리 화학적 파라미터의 변화를 평가 하는 것 만으로도 EV 활성의 변화를 항상 예측 하는 것은 아니다.
여기에서, 우리는 EVs의 화물을 위한 대리로 캡슐화 된 베타-니드 효소의 활동과 결합 된 물리 화학적 매개 변수를 평가 함으로써 EVs의 저장 안정성을 측정 하는 즉시 적용 가능한 프로토콜을 제공 합니다. 효소의 로딩은 상이한 공급원21,24,25로부터의 EVs와 함께 확립 된 온화한 방법으로 사포닌 배양에 의해 이루어진다. 사포닌은 EV 막에 과도 기공을 형성 하 여 소포에 효소 흡수를 허용 합니다. 효소는 불리 한 저장 조건을 복종 하는 경우에 그들의 활동을 분실 하는 경향이 있기 때문에, 그들은 EVs의 기능적인 화물의 보전의 평가를 위한 이상적인 대리입니다.
우리는 인간 간 엽 줄기 세포 (MSCs), 인간 탯 줄 정 맥 내 피 세포 (HUVECs) 및 인간 선 암 폐 포 상피 세포 (A549) 로부터 유도 된 EVs에이 프로토콜을 적용 하는 것이 실제로 큰 차이를 초래 한다는 것을 입증 했습니다 EV 소스 (21)를 선택할 때 고려해 야 할 다른 셀 라인 사이의 저장 안정성.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:933px;" width="933">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:333px;">1,2 dimyristoyl-sn glycero-3-phospho-choline (DMPC)</td>
			<td style="width:315px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">P2663-25MG</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:333px;">1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phospho-choline (DPPC)</td>
			<td style="width:315px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4329-25MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">225 cm&#178; cell culture flasks</td>
			<td style="width:315px;">Corning</td>
			<td>431082</td>
			<td>Used with 25 ml of medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">30 kDa regenerated cellulose membrane</td>
			<td style="width:315px;">Wyatt Technology Europe</td>
			<td>1854</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">350 &#181;m spacer</td>
			<td style="width:315px;">Wyatt Technology Europe</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Automated fraction collector</td>
			<td style="width:315px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Beta-glucuronidase</td>
			<td style="width:315px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">G7646-100KU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Chloroform</td>
			<td style="width:315px;">Fisher scientific</td>
			<td>C/4966/17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Column oven</td>
			<td style="width:315px;">Hitachi High-Technologies Europe</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">D-(+)-Trehalose dihydrate</td>
			<td style="width:315px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>T9531-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:333px;">DAWN HELEOS II, Multi-angle light scattering detector</td>
			<td style="width:315px;">&#160;Wyatt Technology Europe</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Durapore Membrane filter, PVDF,&#160; 0,1&#160;&#181;m, 47&#160;mm</td>
			<td style="width:315px;">Merck</td>
			<td>VVLP04700</td>
			<td>Used for the preparation of buffers for AF4</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">EBM-2</td>
			<td style="width:315px;">Lonza Verviers, S.p.r.</td>
			<td>CC-3156</td>
			<td>Endothelial Cell Growth basal medium, used for the serum free culture of HUVEC cells</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Eclipse dualtec</td>
			<td style="width:315px;">Wyatt Technology Europe</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">EGM-2</td>
			<td style="width:315px;">Lonza Verviers, S.p.r.</td>
			<td>CC-3162</td>
			<td>Endothelial Cell Growth medium, used for the normal culture of HUVEC cells</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ELISA Plate Sealers</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>DY992</td>
			<td>used for sealing of 96-well plates for the glucuronidase assay</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Ethanol</td>
			<td style="width:315px;">Fisher scientific</td>
			<td>E/0665DF/17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Extruder Set With Holder/Heating Block</td>
			<td style="width:315px;">Avanti Polar Lipids</td>
			<td>610000-1EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Filter support</td>
			<td style="width:315px;">Avanti Polar Lipids</td>
			<td>610014-1EA</td>
			<td>used for liposome preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Fluorescein di-&#946;-D-glucoronide</td>
			<td style="width:315px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>F2915</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Gibco PBS-tablets+CA10:F36</td>
			<td style="width:315px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>18912014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Hettich Universal 320 R</td>
			<td>Andreas Hettich GmbH &#38; Co.KG</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for pelleting cells at 300 g</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Hettich Rotina 420 R</td>
			<td style="width:315px;">Andreas Hettich GmbH &#38; Co.KG</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Used for pelleting larger debris at 3000 g</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">HUVEC cells</td>
			<td style="width:315px;">Lonza Verviers, S.p.r.</td>
			<td style="width:119px;">C2517A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Kimble&#160; FlexColumn 1X30CM</td>
			<td style="width:315px;">Kimble</td>
			<td>420401-1030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Lyophilizer ALPHA 2-4 LSC</td>
			<td style="width:315px;">Christ</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Microcentrifuge Tubes, Polypropylene</td>
			<td>VWR international</td>
			<td style="width:119px;">525-0255</td>
			<td>the tubes used for all EV-handling, found to be more favorable than comparable products from other suppliers regarding particle recovery</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Nanosight LM14 equipped with a green laser</td>
			<td style="width:315px;">Malvern Pananalytical</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Nanosight-software version 3.1</td>
			<td style="width:315px;">Malvern Pananalytical</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:333px;">Nucleopore 200 nm track-etch polycarbonate membranes</td>
			<td>Whatman/GE Healthcare</td>
			<td align="right">110406</td>
			<td>used for liposome preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">PEEK Inline filter holder</td>
			<td style="width:315px;">Wyatt Technology Europe</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphotungstic acid hydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>79690-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Polycarbonate bottles for ultracentrifugation</td>
			<td style="width:315px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:119px;">355622</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">QuantiPro BCA Assay Kit</td>
			<td style="width:315px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>QPBCA-1KT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Saponin</td>
			<td style="width:315px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td>47036</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Scanning electron microscopy Zeiss EVO HD 15</td>
			<td style="width:315px;">Carl Zeiss AG</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Sepharose Cl-2b</td>
			<td style="width:315px;">GE Healthcare</td>
			<td>17014001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">SEM copper grids with carbon film</td>
			<td style="width:315px;">Plano</td>
			<td>S160-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Small AF4 channel</td>
			<td style="width:315px;">Wyatt Technology Europe</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Sputter-coater Q150R ES</td>
			<td style="width:315px;">Quorum Technologies</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:333px;">Transmission electron microscopy JEOL JEM 2011</td>
			<td style="width:315px;">Oxford Instruments</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Type 45 Ti ultracentrifugation rotor</td>
			<td style="width:315px;">Beckman Coulter</td>
			<td>339160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Ultimate 3000 Dionex autosampler</td>
			<td style="width:315px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Ultimate 3000 Dionex isocratic pump</td>
			<td style="width:315px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Ultimate 3000 Dionex online vacuum degasser</td>
			<td style="width:315px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Ultracentrifuge OptimaTM L-90 K</td>
			<td style="width:315px;">Beckman Coulter</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">UV detector</td>
			<td style="width:315px;">Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:333px;">Whatman 0.2 &#181;m pore size mixed cellulose filter</td>
			<td>Whatman/GE Healthcare</td>
			<td style="width:119px;">10401712</td>
			<td>Used for the filtration of all buffers used with the EVs and in SEC</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

evaluation of the storage stability of extracellular vesicles

세포 밖 소포 (EVs)는 약물, 약물 운반체 및 바이오 마커로 서 사용 되는 현재 연구에서 유망한 표적 이다. 그들의 임상 발달을 위해, 그들의 약 제 활동은 중요 합니다 뿐만 아니라 그들의 생산은 평가 될 필요가 있습니다. 이 맥락에서 연구는 EVs, 특성 및 저장소의 격리에 중점을 둡니다. 본 원고는 유전 조작 또는 특정 기능 분석 없이 EVs에 대 한 다양 한 저장 조건의 효과를 평가 하기 위한 간편한 절차를 제공 하는 것을 목표로 합니다. 이를 통해 주어진 보관 조건 하에서 EVs의 안정성에 대 한 첫 인상을 신속 하 게 얻을 수 있으며, 다른 셀 소스에서 추출한 EVs는 쉽게 비교 가능 합니다. 안정성 측정은 EVs의 물리 화학적 매개 변수 (크기, 입자 농도 및 형태) 및 화물의 활동 보존에 기반 합니다. 후자는 베타-니드 효소의 사포닌 매개 캡슐화에 의해 Ev로 평가 된다. 니드는 대리로 서 작용 하 고 형광 성 리포터 분자의 절단을 통해 쉬운 정량화를 허용 합니다. 본 프로토콜은 임상 적용에 대 한 EV 연구를 진행 하기 위해 EV 특성을 최적으로 유지 하는 저장 조건 검색에서 연구자를 위한 도구가 될 수 있습니다.

그림 1 은 HUVECs에서 격리 된 EVs의 저장소 특성을 표시 합니다. EVs는 UC에 의해 분리 되었고, 니드 캡슐화 되었고, SEC 후에, 정제 된 EVs는 NTA에 의해 그들의 물리 화학적 성질을 평가 하였다. 샘플을 이어서 AF4 정제를 실시 하 고 니드 활성을 측정 하였다.
소포는 4°c 또는-80 ° c에서 7 d, 그리고 4°c에서 동결 건조 된 형태로 저장 하였으며, 후자의 경우 4% trehalose를 첨가...

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Evaluation of the Storage Stability of Extracellular Vesicles

세포 밖 소포체의 저장 안정성 평가

여기서 우리는 세포 밖 소포체의 저장 안정성을 평가 하기 위해 즉시 적용 가능한 프로토콜을 제시 하 고, 세포내에서 생성 되는 자연적으로 발생 하는 나노 입자의 그룹 이다. 소포는 모형 효소로 니드로 적재 되 고 다른 조건 하에서 저장 됩니다. 저장 후,이의 물리 화학적 매개 변수와 캡슐화 된 효소의 활성이 평가 됩니다.

Extracellular vesicles (EVs) are promising targets in current research, to be used as drugs, drug-carriers, and biomarkers. For their clinical ...

여분의 세포 소포의 저장 안정성은 그들의 미래 치료 사용에 대 한 중요 한 매개 변수. 당사의 프로토콜은 스토리지가 소포에 미치는 영향을 평가하기 위한 쉽게 적용할 수 있는 도구를 제공합니다. 우리의 기술의 주요 장점은 외인성 마커로 글루쿠로니다아제를 도입함으로써, 다른 부모 세포에서 파생된 세포외 소포는 그들의 질성에 관하여 쉽게 비교될 수 있다는 것입니다.비대칭 유동장 유량 분획 또는 AF4는 매우 민감한 화합물에 대한 크기 배제 크로마토그래피 정제에 대한 가벼운 대안입니다. 화합물채널에서 덜 순수한 스트레스를 발생하기 때문입니다. 글루쿠로니다제는 민감한 효소이기 때문에, 상주하는 것의 질은 철저한 계획과 다시 다시 정제 및 분석을 위한 단계를 수행하여 유익합니다.그 세포에 대한 표준 조건에 따라 관심의 세포주를 배양 한 후, 혈청 무료 또는 여분의 세포 소포 고갈 매체로 상체를 교체하고 추가 24 ~ 72 시간 동안 세포 배양 인큐베이터로 세포를 반환합니다. 인큐베이션의 끝에서, 각 플라스크에서 슈퍼 나탄을 수집하고 세포를 퇴적시시 샘플을 원심 분리. 조심스럽게 펠릿을 방해하지 않고 세포 조절 배지를 수집합니다.그리고 매체를 원심분리하여 세포 이물질과 큰 골재를 제거합니다. 그런 다음 슈퍼네티를 조심스럽게 초원심분리기 튜브로 옮기습니다. 고정 각도 로터를 사용하는 경우 원심분리기의 튜브 방향을 표시하여 원심분리 후 세포외 소포 펠릿의 검색을 용이하게 합니다.초원심분리가 끝나면 세포외 소포 펠릿을 방해하지 않고 상체 피펫을 조심스럽게 폐기하십시오. 0.2 마이크로미터 의 200 마이크로리터에서 PBS를 최초의 초원심분리기 튜브의 잔류 상류체로 여과하였다. 펠릿을 다시 중단한 후, 세포외 소포 펠릿의 모든 재중단될 때까지 후속 펠릿의 재서스펜션을 위해 결과 세포외 소포 현탁액을 다음 튜브로 옮기다.최종 재중단 펠릿 용액에 베타 글루쿠로니다아제를 첨가하여 밀리리터당 1.5밀리그램의 최종 농도를 제공합니다. 그리고 수타포닌의 최종 농도0.1 밀리 리터 당 밀리 그램. 그런 다음 3 초 동안 소용돌이에 의해 잘 섞고 간헐적으로 부드러운 플릭으로 10 분 동안 실온에서 반응을 놓습니다.글루쿠로니다아제가 캡슐화되면, 편견없는 저장 안정성 결과를 얻기 위해 같은 날 에 모든 후속 정화 소포 평가 단계를 수행해야합니다. 사포닌 인큐베이션 직후 펠릿을 정화할 준비가 된 PBS의 적어도 두 개의 컬럼 볼륨으로 평형된 크기 배제 크로마토그래피 컬럼을 갖습니다. 정화하려면 최대 400마이크로리터의 세포외 소포 현탁액을 컬럼에 추가합니다.그런 다음 용액의 밀리리터 분획 1개를 수집합니다. 오염 단백질과 무료 글루쿠로니다제로부터 세포외 소포의 분리를 준수하기 위해 제조업체지침에 따라 bicinchoninicacid 산 분석에 의한 단백질 농도를 측정합니다. 각 계측기 및 소포 유형에 최적화된 파라미터를 사용하여 나노 입자 추적 분석 기기를 사용하여 세포외 소포 크기와 농도를 측정합니다.글루쿠로니다제 활성을 측정하려면, 정제된 세포외 소포의 125 마이크로리터에 갓 준비된 형광제 디베타-D-글루쿠로니드 25마이크로리터를 추가하고 검정96웰 플레이트의 한 웰에 샘플을 추가한다. 480 나노미터 발산 및 516 나노미터 방출에서 플레이트 판독기에서 시간 제로 형광 생산을 측정합니다. 증발을 줄이기 위해 투명 플라스틱 호일로 접시를 단단히 덮습니다.그런 다음 37섭씨에서 18시간 동안 빛으로부터 보호된 판을 배양합니다. 방금 입증된 것처럼 플레이트 판독기에서 18시간 형광 생산을 측정합니다. 세포 외 소포 리오필화를 위해, 정제 된 소포에 트레할로스의 밀리리터 당 4 밀리그램을 추가하십시오.그리고 소포를 영하 80도에서 적어도 한 시간 동안 얼어 붙입니다. 샘플을 lyophilize하려면, 15 섭씨와 0.180 밀리바에 압력으로 lyophilizer의 선반 온도를 설정합니다. 46 시간 동안 이러한 조건에서 소포를 건조.주요 건조 단계의 끝에서 선반 온도를 섭씨 25도로 설정하고 압력은 0035 밀리바로 설정하고 이러한 조건에서 2 시간 동안 샘플을 건조시. 그런 다음 lyophilized 샘플을 섭씨 4도에 저장합니다. 저장 후 시료를 재수화하려면, lyophilization 전에 세포외 소포 현탁액의 부피와 동일한 양의 물을 추가한다.저장 후 효소 활성을 평가하기 위해, 모바일 상에 대해 0.1 마이크로미터 필터링 된 PBS를 새로 준비한 AF4 계측기를 적재하고 펌프 후 피크 입구 필터에 0.1 마이크로미터 필터 멤브레인을 삽입하여 용매에서 입자 소음을 줄입니다. 분해 후, 밀에크 물로 AF4의 작은 채널을 청소하십시오. 30킬로달톤의 분자량이 잘린 새로운 재생셀룰로오스 멤브레인을 수분화하고 반짝이는 면을 가진 프렛 위에 멤브레인을 놓습니다.폭 350 마이크로미터 스페이서를 채널의 상단 절반 아래에 놓고 채널 부품을 조립합니다. 토크 드라이버를 사용하여 먼저 나사를 5 뉴턴 미터의 토크로 조인 다음 7 뉴턴 미터의 토크로 조입니다. 십자적 패턴으로 블록 주위의 나사를 조입니다.채널 입구, 콘센트 및 교차 흐름 포트를 일식에 연결합니다. 그런 다음 적어도 세 개의 오래된 샘플에서 멤브레인을 평형화합니다. 분당 1밀리리터로 설정된 검출기 흐름 및 초점 흐름과 분당 0.2 밀리리터의 주입 흐름으로 분획을 프로그래밍합니다.1분 전 초점 단계 후, 10분 동안 샘플을 주입하고 스텝을 주입한 후, 8분 동안 분당 2밀리리터에서 분당 0.1 밀리리터로 크로스 흐름을 감소시다. 10분 동안 교차 흐름 없이 용출 단계로 분획 을 완료하고 용출 및 주입의 세척 단계를 추가한 다음 용출을 합니다. 그런 다음 분당 2 밀리리터의 초기 교차 흐름으로 다음 실행을 위한 채널을 상화하고 UV 검출기를 280 나노미터로 설정합니다.모든 프로그램이 설정된 경우 300마이크로리터의 샘플을 주입하고 ASTRA 소프트웨어에서 UV 및 광 산란 신호를 기록합니다. 후 12 그리고 반 분, 때까지 1 밀리 리터 분획 수집 시작 27 분 사후 주입. 그런 다음 입증된 바와 같이 글루큐로니다제 분석 및 나노 입자 추적 분석을 수행한다.여기서, 상이한 조건하에서 7일간의 저장 후 인간 혈관 내피 세포로부터 분리된 세포 외 소포의 입자 회수 및 크기는 신선한 샘플과 비교하여 도시된다. 소포는 이후에 AF4 정제를 실시하였고 입자당 글루쿠로니다제 활성을 측정하였다. 두 크기 제외 크로마토그래피와 AF4모두 세포외 소포를 무료 글루쿠로니다제에서 분리하는 데 성공합니다.입자와 자유 효소 사이의 AF4에 대한 분리의 높은 정도로 인해, 소포를 포함하는 분수의 오염은 덜 가능성이 있다. 저장 후 AF4 정제는 샘플에서 무료 효소를 제거하고 따라서 입자 당 회수 효소 활성의 양을 낮춥다. 이 효과는 섭씨 4도에서 보관 한 후 가장 두드러지며 2/3 감소가 관찰됩니다.이 추가 정화 단계를 생략하면 효소 안정성에 대한 잘못된 가정으로 이어질 수 있습니다. 전염 전자 현미경 검사는 극저온 보호제없이 lyophilized 세포 외 소포에 대한 모양의 큰 차이를 공개하지 않습니다. 그러나 전자 현미경 이미징을 스캔하면 영하 80도 저장된 샘플에서 발견되지 않는 lyophilized 샘플 내에서 골재의 존재를 알 수 있습니다.글루쿠로니다제 분석 전에 무료 효소를 소포에서 제거하는 것이 중요합니다. 따라서, 소포 정제에 사용되는 기술은 철저히 평가될 필요가 있다. 정제된 입자는 또한 저장이 막 단백질 또는 설탕의 자연적인 조성을 바꾸었는지 알아내기 위하여 그들의 표면 전하의 관점에서 볼 수 있었습니다.우리의 기술을 사용하면 사용 가능한 활동에 대한 알려진 특정 마커 또는 삽이 없는 경우에도 세포 외 소포 저장 안정성에 대한 첫 번째 표시를 얻을 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Magnetic Resonance Elastography Methodology for the Evaluation of Tissue Engineered Construct Growth

조직 평가에 대한 자기 공명 Elastography 방법론은 구조 성장하는 기술

Traditional mechanical testing often results in the destruction of the sample, and in the case of long term tissue engineered construct studies, the use ...

연구

생체공학

Constant Pressure-controlled Extrusion Method for the Preparation of Nano-sized Lipid Vesicles

나노 크기의 지질 Vesicles의 준비를 위해 지속적인 압력 제어 압출 방법

Liposomes are artificially prepared vesicles consisting of natural and synthetic phospholipids that are widely used as a cell membrane mimicking platform ...

The Encapsulation of Cell-free Transcription and Translation Machinery in Vesicles for the Construction of Cellular Mimics

휴대 모방 자의 건설을위한 소포는의 셀이없는 전사 및 번역 기계의 캡슐화

As interest shifts from individual molecules to systems of molecules, an increasing number of laboratories have sought to build from the bottom up ...

Quantification and Size-profiling of Extracellular Vesicles Using Tunable Resistive Pulse Sensing

정량화 및 조정 가능한 저항 펄스 감지 기능을 사용하여 세포 외 소포의 크기 프로파일 링

Extracellular vesicles (EVs), including &#8216;microvesicles&#8217; and &#8216;exosomes&#8217;, are highly abundant in bodily fluids. Recent years have ...

3D Orbital Tracking in a Modified Two-photon Microscope: An Application to the Tracking of Intracellular Vesicles

수정 된 두 개의 광자 현미경에서 3D 궤도 추적 : 세포 내 소포의 추적에 응용

The objective of this video protocol is to discuss how to perform and analyze a three-dimensional fluorescent orbital particle tracking experiment using a ...

Paper-based Devices for Isolation and Characterization of Extracellular Vesicles

세포 외 소포의 분리 및 특성에 대한 종이 기반의 장치

Extracellular vesicles (EVs), membranous particles released from various types of cells, hold a great potential for clinical applications. They contain ...

Fabrication of Extracellular Matrix-derived Foams and Microcarriers as Tissue-specific Cell Culture and Delivery Platforms

조직 특이 적 세포 배양 및 전달 플랫폼과 같은 세포 외 기질 유래 거품과 마이크로 담체의 제조

Cell function is mediated by interactions with the extracellular matrix (ECM), which has complex tissue-specific composition and architecture. The focus ...

Primary Clarification of CHO Harvested Cell Culture Fluid using an Acoustic Separator

음향 분리기사용 CHO 수확세포 배양액의 1차 해명

Primary clarification is an essential step in a biomanufacturing process for the initial removal of cells from therapeutic products within the harvested ...

Labeling of Extracellular Vesicles for Monitoring Migration and Uptake in Cartilage Explants

연골 내의 마이그레이션 및 섭취 모니터링을 위한 세포외 소포 라벨링

Extracellular vesicles (EVs) are used in different studies to prove their potential as a cell-free treatment due to their cargo derived from their ...

Platelet-Derived Extracellular Vesicle Functionalization of Ti Implants

티 임플란트의 혈소판 유래 세포 외 소포 기능화

Extracellular Vesicles (EVs) are biological nanovesicles that play a key role in cell communication. Their content includes active biomolecules such as ...