Name: murine myocardial infarction model using permanent ligation of left anterior descending coronary artery
Uploaded: 2019-08-16T13:00:00
Duration: 8 min 38 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Myocardial Infarction Model using Permanent Ligation of Left Anterior Descending Coronary Artery at JoVE.com

מודל זה פותחה בתמיכת הקרן הלאומית למדע של שוויץ (מענקים 310030_162629 LL) וכספים מחלקתיים מהשירותים של כירורגיה בית החזה ורפואה אינטנסיבית של אוניברסיטת לוזאן. JL הוא המקבל של מענק מקרן אמה מוסמפ. אנו מכירים בתמיכה הקריטית של וטרינרים ואנשי מתקן בעלי חיים בפקולטה לביולוגיה ורפואה של אוניברסיטת לוזאן. אנו מודים ד ר Giuseppina מילאנו מן השירות לכירורגיה קרדיולוגית של אוניברסיטת לוזאן ו ד ר אלכסנדר Sarre מן האבחון וכלי דם הערכה של אוניברסיטת לוזאן עבור רמזים טכניים שלהם.

ניסויים בבעלי חיים המתוארים בפרוטוקול זה נבדקו ואושרו על-ידי ועדת האתיקה של בעלי החיים של קנטון.
הערה: עבור ניסויים אלה, השתמשנו גברים C57Bl/6J עכברים במשקל בין 25 גרם ו 30 גרם ועידן של 8-12 שבועות. לעכברים האכילו את האוכל והמים החלו בתנאים קונבנציונליים. ציוד כירורגי היה מעוקר בעבר. הניסויים צריכים לחבוש כפפות כירורגיות סטריליות ומסכה כירורגית כדי להגביל את הזיהום והדלקות שלאחר הניתוח.
1. צינורית הרדמה והקנה.
<ol><li>שוקלים את העכבר כדי לקבוע את המינון של תרופות הרדמה, לאחר ניתוח תרופה להרגעה ונפח הגאות של מאוורר. חמם את משטח החימום מראש ב-37 ° c. הכיוונון הכירורגי מתואר באיור 1.</li>
	<li>להזריק intraperitoneally העכבר עם שילוב של קטמין ו xylazine במינון של 80 מ"ג/ק"ג ו 10 מ"ג/ק"ג בהתאמה.</li>
	<li>לגלח במהירות את פרוות העכבר על הגרון ואת הצד השמאלי של כלוב הצלעות באמצעות תער חשמלי.</li>
	<li>בדוק עומק של הרדמה על ידי זנב צובט ו/או רגליים אחוריות וליישב את החיה במצב פרקדן על משטח החימום. הניחו גזה קטנה לדחוס מתחת לראשו של בעל החיים כדי למנוע התחממות יתר של העיניים. להחיל ג'ל עינית כדי למנוע יובש בעין.</li>
	<li>אבטחו את ארבעת הגפיים עם דבק על פני כרית החימום. לעבור לולאה של 5-0 תפר משי מתחת חותכות העליון ולתקוע את הגפיים של הלולאה עם דבק על כרית החימום. זה ישמור על הפה של בעל החיים פתוח ויקל על הצינורית.</li>
	<li>להחיל קרם הסרת שיער על האזורים מראש מגולח ועיסוי בעדינות עם משטח כותנה עבור 1 דקות. לנגב את עודף הפרווה והקרם עם גזה. השימוש טיפות של 0.9% תמיסת מלח גזה לנקות את אזורי החתך. החלת פיסות גזה סטרילי על הגרון מגולח והחזה ולהשרות אותם בתוך שפתי-התחת. הערה: אנו ממליצים על יישום של סם הרדמה מקומי (לידוקאין או bupivacain) לאתרי חתכים.</li>
	<li>הגדר את המאוורר בנפח הגאות של 7 מ ל/ק"ג ושיעור האוורור של 140 משיכות/דקות. הערה: מעתה והלאה בעבודה תחת stereomicroscope מיקרוכירורגית.</li>
	<li>החזיקו את העור על מרכז הגרון ובצעו חתך של 0.5 ס מ בעקבות קו קאודל/ספלי באמצעות מספריים קטנים. הפרד את האונות של בלוטת הרוק, ואז להפריד בעדינות fascia של שריר הלשון עם מלקחיים מעוקל לאחר הגרון ואת קנה הנשימה גלויים. שוליים מאובטחים של הפתיחה בעזרת הטרקטורים המחוברים לרצועות אלסטיים. הערה: לעשות את הצעד הזה בלי לחתוך את השרירים. מפעיל מיומן יוכלו לצנרור את בעל החיים דרך חלל אוראלי ללא ויזואליזציה של קנה הנשימה עושה צעד זה אופציונלי.</li>
	<li>החזיקו בעדינות את הלשון לצדדים. עם מלקחיים, הכנס את המחט הפנימית. של 16 גרם בצינורית הקנה המחש נכון את הכניסה לקנה. הנשימה דרך חתך הגרון</li>
	<li>חבר את הצינורית למכונת ההנשמה ולהבטיח אוורור נכון על ידי הצבת צינורות פליטה לתוך המים. נוכחות של בועות מעיד על צנרור נכון. הערה: כדי לשמור על הרקמות רטוב במהלך המבצע גזה סטרילית ספוג עם 0.9% תמיסת מלח ושפתי-שיני על חתך הגרון. שליטה בלחות במהלך ההליך.</li>
</ol>2. הארכה של עורק כלילי של LAD
<ol><li>שחרר כפה שמאלית קדמית מסרט דביק ובזהירות להזיז את העכבר לתנוחת הלחץ בצד ימין. לאבטח את האיבר הקדמי השמאלי פעם חיה היא במצב הנכון.</li>
	<li>לזהות את הקו בין מינורי שמאל השרירים העיקריים ולעשות חתך העור האלכסוני על 1 ס מ עם מספריים בעקבות הקו. עם מבתר מספריים בוטה, הפרד fascia של שרירי החזה ללא חתך. לשמור על שרירי החזה מופרדים עם טרקטורים מחוברים לרצועות אלסטיים.</li>
	<li>הגדר את המאוורר באמצעות לחץ הקצה החיובי (ציוץ) של 3 ס"מ H2O.</li>
	<li>פתח את חלל החזה באמצעות מלקחיים קהה בחללהאינטרקוסטל השלישי ביןהצלעות 3 ו 4 . להימנע מנגיעה בעורק הפנים הפנימי כפי שיש סכנה של דימום. . אל תגעו בלב או בריאות החלת שני הטרקטורים לתוך החזה, אחד על כל צלע (איור 2A).</li>
	<li>עם מלקחיים עדינים מעוקלים, הסירו בזהירות את קרום הלב ומשכו אותו לגזרים מבלי לפגוע בליבו ובריאות.</li>
	<li>אתר עורק כלילי (LAD) השמאלי הקדמי. עורק LAD מופיע כקו אדום בהיר ושטחי הפועל מקצה האוריקל השמאלי כלפי קודקוד.</li>
	<li>השתמש מחזיק מחט לעבור תפר משי 7-0 מתחת LAD 2 כדי 3 מ"מ מתחת לשמאל atria. משוך את המשי לאט כדי למנוע קריעה של רקמת לב. . תקשור את הקשירה עם שלושה קשרים החלק השמאלי התחתון של החדר השמאלי יהיה באופן מיידי חיוור עם הארכה (איור 2B-E). הערה: חשוב לא ללכת עמוק מדי לתוך החלל החדרית או להישאר שטחי מדי. עבור בעלי חיים המופעלים באופן מזויף, משוך את המשי תפר תחת הנער ולהסיר לאט הימנעות רקמות קורע.</li>
	<li>שחרר את הצלעות מחדש, להחזיק את הצלע3 עם מלקחיים ולעשות שני מעברים עם תפר 6-0 משי מתחתלצלעות 3 ו 4 . התראה: אין לנקב את הלב או את הריאה. . אל תהדק את הקשרים עדיין</li>
	<li>שים שלוש טיפות של 37 ° c 0.9% תמיסת מלח על הפתיחה ולסגור את צינור הפליטה תפוגה עבור 2 או 3 מחזורי הנשימה כדי לנפח את הריאות כראוי. הדק את התפר ובטוח בשתי זריקות.</li>
	<li>משחררים טרקטורים מחזיקים שרירים ולעזור להם לאחזר את המקום הנכון שלהם.</li>
	<li>סגור עור בחזה עם שני תפרים של 5-0 משי תפר ומאובטח עם שתי זריקות. סגור עור גרון עם תפר אחד של 5-0 תפר משי ומאובטח עם שתי זריקות.</li>
</ol>3. הליכים שלאחר הניתוח ומעקב.
<ol><li>הסירו רצועות דבק מגפיים. שים קומפרסים על משטח החימום בצד הימני של החיה. הערה: ההליך הכולל מהרדמה עד לנקודה זו לא צריך להימשך יותר מ 40-45 דקות. באופן אופציונלי להזריק IP 0.2 mL של atipamezole בריכוז של 0.1 mg/mL כדי להאיץ את תהליך ההתעוררות.</li>
	<li>Intraperitoneally להזריק 0.3 mL של 5% גלוקוז הפתרון מראש מחומם ב 37 ° c.</li>
	<li>הפוך בזהירות את בעל החיים. על מיכל הדחיסה</li>
	<li>הפסק מאוורר; אם העכבר נושם באופן ספונטני, הסר בזהירות צינורית.</li>
	<li>הכנס תת עורית (SC) 0.1 mg/ק"ג בופרנורפין ולשים עכברים בכלוב מחומם מראש מחומם ב 30 ° צ' ומאוורר עם 100% O2 עבור מינימום של 1 h. לעקוב אחר עכברים לכל מצב סכנת חיים כגון קוצר נשימה מופרז או דימום.</li>
	<li>במהלך שני הימים הראשונים לאחר הניתוח, הצג את העכבר פעמיים ביום. הכנס את SC 0.1 מ"ג/ק"ג בופרנורפין פעמיים ביום. Intraperitoneally להזריק 0.3 mL 0 של 5% גלוקוז הפתרון פעמיים ביום. לספק עכברים עם דיאטה רכה ומים libitum המודעה. לחמם את החיה אם יש צורך בכך. הערה: בנוסף opioids, בעלי חיים צריך להיות מסופק עם תרופות אנטי דלקתיות נגד דלקת מעורבב בתזונה או מדולל במי שתייה.</li>
	<li>החל מהיום השלישי, הכנס את SC 0.1 mg/ק"ג בופרינורטין פעמיים ביום אם בעל החיים מציג סימנים יוצאי דופן הנוגעים למראה כללי, נשימה או התנהגות. Intraperitoneally להזריק 0.3 mL של 5% גלוקוז הפתרון פעמיים ביום אם בעל החיים הוא עדיין מאבד משקל. חמם את החיה במידת הצורך. הערה: החלת רק קריטריוני הפרעה מוגדרים מראש בעת הצורך כדי למנוע סבל מופרז. בדרך כלל עכברים לרזות עד היום 3 ו 4 ולאחר מכן לעלות במשקל. לאחר שבעה ימים, עכברים בדרך כלל לאחזר משקל טרום פעולה.</li>
</ol>

<ol>
	<li>GBD 2016 Causes of Death Collaborators. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=regional,+and+national+age-sex+specific+mortality+for+264+causes+of+death,+1980-2016:+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study.">regional, and national age-sex specific mortality for 264 causes of death, 1980-2016: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study.</a> Lancet. 390 (10100), 1151-1210 (2017).</li><li>Reed, G. W., Rossi, J. E., Cannon, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+myocardial+infarction.">Acute myocardial infarction.</a> Lancet. 389 (10065), 197-210 (2017).</li><li>Frangogiannis, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+inflammatory+response+in+myocardial+injury,+repair,+and+remodelling.">The inflammatory response in myocardial injury, repair, and remodelling.</a> Nature Reviews Cardiology. 11 (5), 255-265 (2014).</li><li>Lugrin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutting+edge:+IL-1alpha+is+a+crucial+danger+signal+triggering+acute+myocardial+inflammation+during+myocardial+infarction.">Cutting edge: IL-1alpha is a crucial danger signal triggering acute myocardial inflammation during myocardial infarction.</a> Journal of Immunology. 194 (2), 499-503 (2015).</li><li>Hashmi, S., Al-Salam, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+myocardial+infarction+and+myocardial+ischemia-reperfusion+injury:+a+comparison.">Acute myocardial infarction and myocardial ischemia-reperfusion injury: a comparison.</a> International Journal of Clinical and Experimental Pathology. 8 (8), 8786-8796 (2015).</li><li>van Zuylen, V. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+infarction+models+in+NOD/Scid+mice+for+cell+therapy+research:+permanent+ischemia+vs+ischemia-reperfusion.">Myocardial infarction models in NOD/Scid mice for cell therapy research: permanent ischemia vs ischemia-reperfusion.</a> Springerplus. 4, 336 (2015).</li><li>Yan, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+dynamics+of+cardiac+immune+cell+accumulation+following+acute+myocardial+infarction.">Temporal dynamics of cardiac immune cell accumulation following acute myocardial infarction.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 62, 24-35 (2013).</li><li>Xu, Z., Alloush, J., Beck, E., Weisleder, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+myocardial+ischemia-reperfusion+injury+through+ligation+of+the+left+anterior+descending+artery.">A murine model of myocardial ischemia-reperfusion injury through ligation of the left anterior descending artery.</a> Journal of Visualized Experiments. (86), (2014).</li><li>Reichert, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+Left+Anterior+Descending+(LAD)+Coronary+Artery+Ligation:+An+Improved+and+Simplified+Model+for+Myocardial+Infarction.">Murine Left Anterior Descending (LAD) Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction.</a> Journal of Visualized Experiments. (122), (2017).</li><li>Kolk, M. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LAD-ligation:+a+murine+model+of+myocardial+infarction.">LAD-ligation: a murine model of myocardial infarction.</a> Journal of Visualized Experiments. (32), (2009).</li><li>Fernandez, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+coronary+arteries+of+the+C57BL/6+mouse+strains:+implications+for+comparison+with+mutant+models.">The coronary arteries of the C57BL/6 mouse strains: implications for comparison with mutant models.</a> Journal of Anatomy. 212 (1), 12-18 (2008).</li><li>Muthuramu, I., Lox, M., Jacobs, F., De Geest, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Permanent+ligation+of+the+left+anterior+descending+coronary+artery+in+mice:+a+model+of+post-myocardial+infarction+remodelling+and+heart+failure.">Permanent ligation of the left anterior descending coronary artery in mice: a model of post-myocardial infarction remodelling and heart failure.</a> Journal of Visualized Experiments. (94), (2014).</li><li>Xu, Z., McElhanon, K. E., Beck, E. X., Weisleder, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Murine+Model+of+Myocardial+Ischemia-Reperfusion+Injury.">A Murine Model of Myocardial Ischemia-Reperfusion Injury.</a> Methods in Molecular Biology. 1717, 145-153 (2018).</li><li>Parapanov, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+receptor+5+deficiency+exacerbates+cardiac+injury+and+inflammation+induced+by+myocardial+ischaemia-reperfusion+in+the+mouse.">Toll-like receptor 5 deficiency exacerbates cardiac injury and inflammation induced by myocardial ischaemia-reperfusion in the mouse.</a> Clinical Science. 129 (2), 187-198 (2015).</li><li>Curaj, A., Simsekyilmaz, S., Staudt, M., Liehn, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimal+invasive+surgical+procedure+of+inducing+myocardial+infarction+in+mice.">Minimal invasive surgical procedure of inducing myocardial infarction in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (99), e52197 (2015).</li><li>van den Bos, E. J., Mees, B. M., de Waard, M. C., de Crom, R., Duncker, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+model+of+cryoinjury-induced+myocardial+infarction+in+the+mouse:+a+comparison+with+coronary+artery+ligation.">A novel model of cryoinjury-induced myocardial infarction in the mouse: a comparison with coronary artery ligation.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 289 (3), H1291-H1300 (2005).</li><li>Duerr, G. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+myocardial+remodeling+between+cryoinfarction+and+reperfused+infarction+in+mice.">Comparison of myocardial remodeling between cryoinfarction and reperfused infarction in mice.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2011, 961298 (2011).</li></ol>

. למחברים אין מה לגלות

הצעד הקריטי הראשון של הליך זה הוא בהחלט צנרור. אנחנו משתמשים במחט הפנימית הקהה. של צנתר של 16 גרם כצינור הקנה אנחנו לא ממליצים להשתמש בהתקנה זו עם עכברים במשקל פחות מ -22 g. עם התקנה זו, ייתכן שיהיה קשה לצנרור עכברים כראוי עם משקל גוף קטן יותר מבלי לפגוע בקנה הנשימה. נקודה קריטית נוספת היא להגביל את החתכים שבוצעו בשריר תוך חשיפת קנה הנשימה והצלעות. הפחתת נזק לרקמות היא בעלת חשיבות רבה, במיוחד בעת לימוד תהליכים דלקתיים הבאים MI. זו הסיבה מדוע אנו מעדיפים התפשטות עדינה של שרירים וצלעות עם מלקחיים ו רטרקטורים8,9. אנחנו לא משתמשים בצרוב. חשמלי כדי לשלוט בדימום10 זה עלול לגרום לכוויות. ולדלקות טובות טראומה וזיהומים עלולים להיות הטיה לקריאה דלקתית. יישום של ציוץ חיצוני של 3 ס מ H2O על ידי נפילה פליטה אוורור לתוך צינור מים מגביל בסופו של דבר התמוטטות מכתשי במהלך כריתת האונה. לוקליזציה של LAD הוא צעד קריטי אחר ואחד צריך לזכור כי האנטומיה של העורקים הכליליים עשוי להשתנות בהתאם למתח ואת גנוטיפ של העכבר11. זה דורש קצת ניסיון כדי להמחיש את הנער, אולם הצבת התפר ישירות 2-3 מ"מ מתחת השמאלית שמאל כפי שמתואר בהליך יאפשר מיקום נכון של הארכה. שינוי צבע מיידי של חלקים גדולים של החדר השמאלי מתחת לתפר לאשר את הדיוק. בסופו של דבר, באופן מלאכותי החלת הצצה אוטומטית על ידי חסימת פליטה אוורור עבור 2-3 מחזורי הנשימה במהלך הסגר בחזה מאפשר היפראינפלציה ארעית של הריאה אשר יסייעו לרדוף את האוויר מחלל הבית החזה12. אנחנו בכוונה לא לבצע נוזלי כפי שמוצג 9,10. בדרך זו, אנו להגביל את הסיכון של פציעות ריאה ושלב ולהימנע נזק רקמות מוגזם או ניקוב.
אוטם שריר הלב-reperfusion (I/R) הוא מודל כירורגי הקשורים המחקה את השיקום של זרימת דם כלילית, כי הוא עשה לחולים MI במרפאות. במהלך מודל I/R חסימה ארעית של העורק הכלילי נעשית על ידי הידוק פיסת אבובים על הנער למשך של 20 עד 45 min8,13. לאחר מכן הסגר שוחרר כדי לאפשר reperfusion של שריר הלב למשך הזמן המבוקש. שינוי פשוט זה הוחל על הפרוטוקול שלנו יכול בקלות להפוך אותו לדגם I/R4,8,14,15. אוטם הלב יכול להיות מאושר על ידי בדיקת דם עבור הטרופונב T8,10 או על ידי אקו-קרדיוגרפיה15.
MI שונה ממודל I/R משום שreperfusion לעצמה גורמת לפציעה. MI גורם נמק יותר רקמות ו אפופטוזיס מבוטא יותר בשריר הלב5. קינטיקה של הסתננות תאים דלקתיים הוא גם שונה בין MI ו-IR עם חדירת שריר הלב התעכבה של תאים חיסוניים ב-MI7. הגודל והמיקום של האזור הinfarcted יהיו גם שונים בין דגמי התקשורת הקבועה ומודלים של I/R15. לזכור זאת, צריך להיות זהיר כדי לבחור מודל רלוונטי מאז I/R ומודלים הקבוע של MI לא שווה ערך. מודל נוסף של אוטם שריר הלב. הוא מודל הקריואוטם יישום של בדיקה קריוגניים על הקיר הקדמי LV מעורר את הקיפאון של רקמות חדרית ומעצר זרימת הדם בעורק LAD. טכניקה זו עם זאת שונה מטכניקות MI ו-i/R בנוגע לעיתוי ומשרעת של שיפוץ ותגובות דלקתיות16,17.
השונות היא מגבלה כמו עבור כל הליך כירורגי. השונות הזאת מסתמכת על הבדלים ביולוגיים. דוגמה טובה היא הווריאציה בהסדר עורק כלילי בעכברים11. הוא מסתמך גם על כישורי ניסויים. ראוי לציין כי הכשרה נאותה של הניסויים הוא חובה על מנת להגיע לתוצאות יציבות עם המודל הזה. ניסויים מאומנים היטב יכולים לייצר בקלות סיכונים גדלים הניתנים לייצוא (איור 3A-B). התמותה של המודל תלוי במיקום של הנער, משך הניסויים (ימים, שבועות), מאמץ העכבר והגנוטיפים. סוגי תרופות הרדמה וכאבים עשויים גם להשפיע על תוצאות הניסויים עם השפעות הקרדיושליליות או הקרדיופרדיט. בידינו, למודל זה יש שיעור תמותה גלובלי של 25-30%. שיעור התמותה הזה כולל מקרי מוות ספונטניים וקורבנות לפני סוף הניסוי, ללא קשר זנים ומשך הניסוי. רוב ההרוגים או ההקרבה הם בין הימים השני והרביעי שלאחר הניתוח. החלת טיפול קפדני בכאב ומעקב אחר בעלי החיים יכולים להפחית את התמותה.
כאן אנו מציגים את התוצאות הייצוגיות של סיכונים size ניתח באמצעות כתמי TTC וביטוי של חלבונים וגנים מעורבים תהליכים דלקתיים או פיברוטיק ב LV על ידי כתם מערבי PCR בזמן אמת בהתאמה (איור 3C-G). ניתן גם למדוד רבים מהפרמטרים הללו על ידי שיטת החיסוני הקשורה לאנזימים (אליסה) או האנזים האנזימטי. כמובן, בהתאם להשערה כי צריך להיבדק, שיטה זו יכולה להיות לאחר כל ניתוח פונקציונלי על ידי אולטרסאונד, MRI או מדידת קטטר מדידה של לחץ ונפח. ניתן גם לחלץ את הלב ולחקור עוד ביולוגיה של תאי הלב על תאים מבודדים. בסך הכל, מודל MI עם הארכה קבועה של עורק LAD בחור שימושי במיוחד כדי להעריך תהליכים דלקתיים ופיברוטיק, הפצע ריפוי ושינויים בתפקוד הלב בעקבות אוטם שריר הלב.

אוטם שריר הלב חריפה (MI) הוא הביטוי החמור ביותר של מחלות לב איסכמי (IHD). IHD הם הגורם המוביל של morbidities ומוות ברחבי העולם, במיוחד במדינות המערב1. כתוצאה מכך, יש לה השפעה כלכלית עצומה על מערכות בריאות2. MI מאופיין בחסימה של עורק כלילי על ידי טרשת עורקים פלאק ומעצר בעקבות זרימת הדם בחלקים גדולים של שריר הלב. חוסר אספקת חמצן בשריר הלב מוביל למוות של הקרדיוציטים. זה מחלה פתולוגית מפעילה את התגובות רקמת חדרית כי בסופו של דבר מוביל ליקויים פונקציות חדרית, שיפוץ וכישלון הלב3. MI הוא מצב פתופסולוגי מורכב הכרוך תהליכים ביולוגיים מרובים מורכבים הכוללת מוות תאים מוסדר, תגובה ללחץ חמצוני, דלקת, ריפוי הפצע, פיברוזיס ושיפוץ חדרית. כמה תגובות ביולוגיות אלה מעוצב כמו תהליכים בודדים בתוך מבחנה כמו שחרור נמק המושרה של מבוססי נזק דפוסים מולקולריים הקשורים תגובות דלקתיות4. מודלים פשוטים אלה חיוניים להבנת MI. עם זאת רק במודל vivo יכול לספק תמונה ריאליסטית של המורכבות תהליכים ביולוגיים העוסקים בתגובה MI.
למרות מודלים של MI בעלי חיים גדולים כמו חזיר יכול להתייחס יותר קרוב הפתופסיולוגיה האדם של MI, הכוח של מודלים murine שוכנת האפשרויות המוצעות על ידי הנדסה גנטית כי הוא מתקדם יותר מאשר בכל מיני יונקים אחרים. היבטים אחרים שאינם זניחים הם העלות הנמוכה יחסית והפשטות של הכיוונון הכירורגי.
כדאי להזכיר כי מודלים של איסכמיה-reperfusion של שריר הלב יכול להפגין תוצאות שונות מאשר מודלים הקבע MI. תהליכים ביולוגיים כמו סוג של מוות תאים העוסקים, איכות/משרעת או קינטיקה של תגובות דלקתיות הפצע ריפוי ברקמת שריר הלב עשוי להשתנות בהתאם לדגם5,6,7. עם זאת, פרוטוקול זה של הסגר כלילית קבע יכול בקלות להיות מותאם כדי לקבל מודל איסכמיה-reperfusion.
שיטה זו רלוונטית למחקרים הקשורים לphysiopathology של MI ללא reperfusion ומאפשרת ניטור של תהליכים פתולוגיים המתרחשים מפני סגר כלילי (דקות) ועד אי ספיקת לב בשלב מאוחר (שבועות) ברקמת הלב המקומית והסיסטמית רמות.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:588px;" width="589">
	<tbody>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:221px;">1 CC Syringe, Omnifix-F</td>
			<td style="width:73px;">B. Braun</td>
			<td style="width:123px;">9161406V</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;width:221px;">30G- Needle</td>
			<td style="width:73px;">BD Microlance 3</td>
			<td style="width:123px;">304000</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:221px;">70% Ethanol</td>
			<td style="width:73px;"></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:221px;">Betadine 60 ml</td>
			<td style="width:73px;">MundiPharma</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;width:221px;">Blunt Retractors</td>
			<td style="width:73px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:123px;">18200-09</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:221px;">Castroviejo Needle Holder Straight with Lock</td>
			<td style="width:73px;">Roboz</td>
			<td style="width:123px;">RS-6416</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:221px;">Cotton Swabs</td>
			<td style="width:73px;">Applimed SA</td>
			<td style="width:123px;">6001109</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:221px;">Dissecting Scissors, Curved</td>
			<td style="width:73px;">Aesculap</td>
			<td style="width:123px;">BC603R</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:221px;">Electrical Razor</td>
			<td style="width:73px;">Remington</td>
			<td style="width:123px;">HC720</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:221px;">Glucose 5% B.Braun</td>
			<td style="width:73px;">B. Braun</td>
			<td style="width:123px;">531032</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;width:221px;">Hair Removal Cream, Veet</td>
			<td style="width:73px;">Silk &#38; Fresh Tech.</td>
			<td style="width:123px;">8218535</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:221px;">Iris Dissecting Forceps Full Curved</td>
			<td style="width:73px;">Aesculap</td>
			<td style="width:123px;">&#160;OC022R</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:221px;">Ketasol 100 (100 mg/ml)</td>
			<td style="width:73px;">Dr. E. Graeub AG</td>
			<td>QN01AX03</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:221px;">Micro Scissors, Curved Blunt/Blunt</td>
			<td style="width:73px;">Aesculap&#160;</td>
			<td style="width:123px;">FM013R</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:221px;">NaCl 0.9% B. Braun</td>
			<td style="width:73px;">B. Braun</td>
			<td style="width:123px;">534534</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;width:221px;">Short Fixator</td>
			<td style="width:73px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:123px;">18200-01</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:221px;">Silk Suture 5-0, BB</td>
			<td style="width:73px;">Ethicon</td>
			<td style="width:123px;">K880H</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:221px;">Silk Suture 6-0, P-1</td>
			<td style="width:73px;">Ethicon</td>
			<td style="width:123px;">639H</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:221px;">Silk Suture 7-0,BV-1</td>
			<td style="width:73px;">Ethicon</td>
			<td style="width:123px;">K804</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;width:221px;">Student Dumont #7 Forceps</td>
			<td style="width:73px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:123px;">91197-00</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;width:221px;">Student Fine Forceps-Angled</td>
			<td style="width:73px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:123px;">91110-10</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:221px;">Surgical Gloves</td>
			<td style="width:73px;">Weitacare</td>
			<td style="width:123px;">834301</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:221px;">Surgical heating pad</td>
			<td style="width:73px;">Personalized setting</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;width:221px;">Temgesic&#160; sol 0.3 mg/ml&#160; Buprenorphine</td>
			<td style="width:73px;">Indivior Schweiz AG</td>
			<td style="width:123px;">N02AE01</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:221px;">Tracheal tube inner needle of an 16G i.v. cat</td>
			<td style="width:73px;">Abbocath-T</td>
			<td style="width:123px;">G714-A01</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:221px;">Universal S3 Microscope, OMPIMD</td>
			<td style="width:73px;">Zeizz</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:221px;">Ventilator, MiniVent Model 845</td>
			<td style="width:73px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:123px;">73-0043</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:221px;">Viscotears</td>
			<td style="width:73px;">Alcon</td>
			<td style="width:123px;">1551535</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:221px;">Xylasol (1mg/ml)</td>
			<td style="width:73px;">Dr. E. Graeub AG</td>
			<td>QN05CM92</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine myocardial infarction model using permanent ligation of left anterior descending coronary artery

אוטם שריר הלב (MI) ומחלות כלילית חריפה הן בין הסיבות הבולטות ביותר למוות באוכלוסיה עם אורח חיים מערבי. מודלים murine של MI עם הארכה קבועה של שמאל-קדמי בירידה (LAD) עורק כלילי קרוב מחקה MI בבני אדם. מודלים murine ליהנות הנדסה גנטית נרחבת זמין כיום. כאן אנו מציעים מודל כירורגי מוראי של אוטם שריר הלב על ידי הארכה כלילית בחור קבוע. הטכניקה שלנו כוללת הרדמה עם קטמין/xylazine כי ניתן להפוך במהירות על ידי הממשל של היריב, צנרור ללא הפיכה בקנה הנשימה עבור אוורור בסיוע מכני, אוורור עם יישום של מהפך חיובי לחץ בסופו של דבר (ציוץ) כדי למנוע התמוטטות מכתשי, שיטת כריתת האונה הגבלת לנגעים כירורגיים מינימלי שנעשו שרירי השלד, ואת האינפלציה בריאות ללא נוזלי. שיטה זו היא פולשנית בדלילות, מקטינה ומפחית תמותה לאחר ניתוח וסיבוכים.

העכברים מורדמים שבעה ימים לאחר הניתוח. בעלי חיים היו מורדם עם 80 מ"ג/ק ג קטמין ו 10 מ"ג/ק"ג xylazine. בהרדמה, הדם נלקח. מהאובלה-קאווה והלב שנדגם הוסרו, שריר הלב. נשטפו בערוץ הקרח הקר עבור מדידות של אזורים איסכמי, הלבבות היו קפואים ב-20 ° c עבור 40 דקות, ולאחר מכן פרוסות ומוכתמות עבור 20 דקות ב 37 ° צ' ב PBS המכיל 2% triphenyltetrazolium כלוריד (TTC). פרוסות הלב תוקנו לילה ב -4% מתוך התמיסה הפאראפורמלדהיד הנאגרת בטמפרטורת החדר. אזורי האיסכמי נותרו בלתי מוכתמים בעוד שרקמה חיה היתה מוכתמת באדום בשל נוכחותם של דגנטיות. אזורים האיסכמי חושבו כאחוז של האזור הלבן של החדר השמאלי (LV) עם תוכנת דימות (איור 3A, B). לבדיקות הביולוגיה הביוכימית והמולקולרית, הלבבות קפאו בחנקן נוזלי. לאחר שחיקה לבבות על חנקן נוזלי השתמשו באבקת האיברים להפקת חלבון ו-mRNA. היקף פיברוזיס ברקמת שריר הלב של לבבות infarcted הוערך על ידי ניתוח כתמי המערבי של אלפא שריר חלק שרירים אקטין (αSMA) ו-SMAD2 זרחון, אשר הם בהתאמה לקריאה מרכזיים של מיופיברוטים והפעלה TGFβ איתות ( איור 3C). mRNA ביטוי של Tgfb, ו מטרות במורד הזרם ctgf, postn ו Il11 הם כל מחוונים של פיברוזיס שריר הלב. זה הוכח על ידי תגובת שרשרת פולימראז (PCR) בזמן אמת (איור 3D).
Pro-דלקתיות מסלולים איתות ביטוי של גנים פרו דלקתיים היו בדרך כלל הופעל בתוך השבוע הראשון לאחר אוטם שריר הלב. זירחון של מקדם התמלול של NF-κB p65 הוא סימן ההיכר של דלקת ונצפתה שריר הלב שלמות תמציות של עכברים MI (איור 3E). mRNA הביטוי של הגנים הפרו דלקתיים Il1b, Il6 ו Cxcl10 (איור 3f) ו מונוציטים/סמנים מקרופאגים Cd14 ו Mertk נותחו על ידי PCR בזמן אמת (איור 3f). שים לב כי היו שינויים במידה של NF-κB p65 ו SMAD2 זרחון (איור 3C,E, נתיבים 4-7). השונות הזאת תלויה במידה רבה בגודל הסיכונים.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59591/59591fig1.jpg"> איור 1 : תיאור של הכיוונון הכירורגי. (א) התקנה כירורגית כוללת כרית חימום שונה, מאוורר ומחדש המצורפת לרצועות אלסטיים. (ב) סדרה של מספריים, מלקחיים ומחזיק מחט המשמשים במהלך הניתוח. (ג) תקריב של המיני-בריטרקטורים. לא מוצג: מיקרוסקופ סטריאו כירורגי. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59591/59591fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59591/59591fig2.jpg"> איור 2 : תמונות מייצגות של הניתוח והארכה לנער. (א) פתח את החזה עם ריטרקטורים. החדר השמאלי היה ברור. למעלה, שמאלה ולמטה התחתון החזיק את הצלעות ואת המפסק הימני החזיק את השריר הפקאליס. (ב) המחט הועברה תחת הנער. (ג) תפר משי הועבר תחת הנער, אל החדר השמאלי. (ד) תפר יחיד על הנער. (ה) סוף הליך הקשר, התפר היה מאובטח עם שלושה קשרים. (ו) ייצוג של מבט קדמי של הלב. המיקום של הארכה LAD היה 2-3 מ"מ מתחת לשמאל שמאלה ומעל הענף באלכסון של LAD. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59591/59591fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59591/59591fig3.jpg"> איור 3 : פיברוזיס ודלקת בשריר הלב שלמות תמציות שבעה ימים לאחר הניתוח. (א) דמויות מייצגות של כתמים ttc של לב infarcted שבעה ימים לאחר הניתוח. אזורים איסכמי חיוור נותרו בלתי מוכתמים ולבנים בעוד רקמה חיה היה מוכתם באדום. הארכה הייתה גלויה על הפרוסה השלישית משמאל. (ב) הגודל של אזורי האיסכמי של חמישה לבבות infarcted נמדדו באמצעות שיטת הצביעת ttc. תוצאות היו האחוזים של האזור הלבן של החדר השמאלי (LV). (ג) ניתוח כתמי מערבי של SMAD2 זרחון ו אלפא SMA ביטוי בשריר הלב כולו כאינדיקטורים של פיברוזיס. (ד) mrna ביטוי של tgfb, ctgf, postn ו Il11 ב שריר הלב שלמות תמצית. (ה) כתם מערבי של NF-κB p65 זרחון בתוך שריר הלב תמציות. (ו) mrna ביטוי של הגנים הפרו דלקתיים Il1b, Il6 ו Cxcl10 בתוך שריר הלב שלמות תמציות. (ז) mrna ביטוי של Cd14 ו mertk כמו אינדיקטורים של נוכחות בשריר הלב של מונוציטים/מקרופאגים ומקרופאגים phagocytic בהתאמה. N = 3 בתוך התחזות ו-N = 4 בקבוצת MI. עבור ניתוח ביטוי mRNA, הביטוי היה ביחס לשליטה אנדודוגני Rps18 והשוואות הקבוצה היו בלתי משויכים של סטודנט T-בדיקות, * p ≤ 0.05, * * p ≤ 0.01, * * * p ≤ 0.001. בחלוניות B, D, F ו-G קווי שגיאה מייצגים סטיות סטנדרטיות.  <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59591/59591fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Murine Myocardial Infarction Model using Permanent Ligation of Left Anterior Descending Coronary Artery at JoVE.com

Murine Myocardial Infarction Model using Permanent Ligation of Left Anterior Descending Coronary Artery

כאן אנו מתארים הליך כירורגי המראה כיצד להשיג הארכה קבועה של עורק שמאלי הקדמי כלילית בעכברים. מודל זה הוא בעל רלוונטיות גבוהה לחקור את הפתופסולוגיה של אוטם שריר הלב ואת התהליכים הביולוגיים המקביל.

מודל אוטם שריר הלב באמצעות הארכה קבועה של עורק שמאלי קדמי כלילי יורד

Myocardial infarction (MI) and acute coronary diseases are among the most prominent causes of death in population with western lifestyle. The murine ...

מודל מורין זה של עבירה שריר הלב מאפשר ניטור של תהליכים פתולוגיים המתרחשים מ occlusion כלילי לאי ספיקת לב בשלב מאוחר ברקמת הלב המקומית ורמות מערכתיות. שיטה זו תואמת לכל קריאה המשמשת כיום בביולוגיה של הלב ובפיזיולוגיה. בנוסף, הוא נהנה מהמגוון העצום של מודלים גנטיים מורין.רכישת מיומנויות כירורגיות נאותה יכול לקחת זמן לשלוט. הליך זה נלמד בצורה הטובה ביותר צעד אחר צעד עם חוקר מנוסה. הדגמה חזותית של מודל מורין זה מאפשרת שיתוף של רמזים שיכולים לעזור עם ההליך הכירורגי ולהאיץ את תהליך הלמידה.השתמש בתער חשמלי כדי לגלח במהירות הרדמה, 25 עד 30 גרם, זכר, עכבר C57-Black/6 על הגרון ואת הצד השמאלי של כלוב הצלעות. אשר חוסר תגובה לצביטת בוהן. יש למרוח משחה על עיני החיה.מניחים את העכבר במצב supine על כרית חימום, וממקמים גזה קטנה לדחוס מתחת לראש, כדי למנוע התחממות יתר של העיניים. אבטחו את הגפיים עם סרט הדבקה. מעבירים לולאה של תפר משי 5-0 מתחת לחתכים העליונים, ומאבטחים את גפיים של הלולאה על משטח החימום כדי להשאיר את הפה פתוח במהלך הקנון.יש למרוח קרם גנאי על האזורים המגולחים מראש, ולעיסוי עדין עם ספוגית כותנה למשך דקה אחת. מוציאים את הפרווה העודפת ו השמנת עם גזה, ומנקים את העור החשוף בטיפות של 0.9% תמיסת מלח וגזה. החל חתיכות של גזה סטרילית על הגרון מגולח ובית החזה, ולהשרות את גזה עם iodopovidone.הגדר את מכונת ההנשמה בנפח גאות ושפל של שבעה מיליליטר לקילוגרם וקצב אוורור של 140 משיכות לדקה. הזז את העכבר תחת מיקרוסקופ סטריאו מיקרוכירורגי. מחזיק את העור על מרכז הגרון, לעשות חתך 0.5 ס"מ לאורך הקו caudal / cephalic, ולהפריד את האונות של בלוטת הרוק.השתמש מדחיסות מעוגלים כדי להפריד בעדינות את fascia של שריר sternohyoid עד הגרון ואת קנה הנשימה גלויים. לאחר מכן אבטחו את קצות הפתח עם מפשקים המחוברים לרצועות אלסטיות. לאחר מכן, למשוך בעדינות את הלשון הצידה, ולהשתמש מדחוסים כדי להכניס את המחט הפנימית קהה של 16 מד cannula לתוך קנה הנשימה.דמיינו הכנסה נכונה לקנה הנשימה דרך חתך הגרון, וחברו את הקנולה למכונת ההנשמה. מניחים 0.9% מלוחים סטריליים בתוספת גזה ספוגה iodopovidone על החתך כדי לשמור על הרקמות רטובות במהלך הניתוח. ואז למקם את צינורות הפליטה לתוך המים.נוכחות הבועות מצביעה על צנרור מוצלח. עבור קשירה של העורק הכלילי היורד הקדמי השמאלי, או LAD, בזהירות להזיז את העכבר לתוך מיקום דטוביטוס בצד ימין, ולרסן מחדש את האיבר הקדמי השמאלי בתנוחה החדשה. זהה את הקו בין החזה השמאלי שרירים קטנים העיקריים, ולעשות חתך עור סנטימטר אחד לאורך הקו.באמצעות מיקרו מספריים ניתוח קהה, להפריד את fascia של שרירי החזה מבלי להסית את הרקמות, ולהשתמש מפשקים המחוברים להקות אלסטיות כדי לשמור על ההפרדה. הגדר את מכונת ההנשמה עם לחץ חיובי תפוגת סוף של שלושה סנטימטרים של מים. השתמש במטליות קהות כדי לפתוח את חלל החזה בחלל הבין-קומתי השלישי בין הצלעות השלישית והרביעית.מניחים שני מפשקים לתוך כלוב הצלעות, אחד על כל צלע, ולהשתמש מדפים דק מעוקל להסיר בזהירות את pericardium מבלי לפגוע בלב ובריאות. אתר את LAD כקו אדום בהיר ושטחי הפועל מקצה האוריאל השמאלי לכיוון השיא. השתמש במחזיק מחט כדי להעביר תפר משי 7-0 מתחת LAD שניים עד שלושה מילימטרים מתחת לאטריה השמאלית.משיכת המשי לאט כדי למנוע קריעת רקמת לב, לקשור את הקשירה עם שלושה קשרים. החלק השמאלי התחתון של החדר השמאלי יהפוך מיד חיוור על קשירה. עכשיו לשחרר את מפשקי הצלעות, והחזקת הצלע השלישית עם מלקעות, לעשות שני מעברים עם תפר משי 6-0 מתחת לצלעות השלישית והרביעית.מניחים שלוש טיפות של 37 מעלות צלזיוס 0.9% תמיסת מלח על הפתח, ולסגור את צינור פליטת תפוגה במשך שניים או שלושה מחזורי נשימה כדי לנפח כראוי את הריאות. הדקו ואבטחו את התפר בשתי זריקות, ושחררו את המפשקים המחזיקים את השרירים, ועזרו לשרירים לחזור למיקום האנטומי הנכון שלהם. לאחר מכן סגור את עור בית החזה עם שני תפרים ושתי זריקות של משי תפר 5-0.סגור את עור הגרון עם תפר אחד של משי תפר 5-0 ושתי זריקות. בסוף ההליך, להסיר את רצועות הסרט מן הגפיים, בזהירות להפוך את החיה כדי דטוביטוס הגחוני על כרית הדחיסה, ולהציב דחיסה על כרית החימום בצד ימין של החיה. להזריק תוך-אפית 0.3 מיליליטר של 37 מעלות צלזיוס מחומם 5% פתרון גלוקוז.עצור את מכונת ההנשמה. אם העכבר נושם באופן ספונטני, הסר בזהירות את ה Cannula. להזריק תת עורית 0.1 מיליגרם לקילוגרם של buprenorphine.מניחים את העכבר בכלוב 30 מעלות צלזיוס מאוורר עם 100% חמצן לפחות שעה אחת עם ניטור. במהלך שני הימים הראשונים לאחר הניתוח, לספק לעכבר עם דיאטה רכה ומים עד ליביום, חימום החיה לפי הצורך. שבעה ימים לאחר הניתוח, האזורים האיסכמיים נשארים נגועים על ידי טריפנילטרזוליום כלוריד, ואילו הרקמה החיה מכתימה אדום בשל נוכחותם של דהידרוגנאזים.לאחר מכן ניתן לחשב את האזורים האיסכמיים כאחוז השטח הלבן של החדר השמאלי בתוכנת דימות. ניתוח כתם מערבי עבור actin שריר אלפא חלקה וזרחון SMAD2, אשר בהתאמה הקריאות העיקריות של myofibroblasts והפיכת הפעלה איתות גורם גדילה בטא, ניתן להשתמש כדי לקבוע את היקף הפיברוזיס בתוך הרקמה שריר הלב של הלבבות אוטם. ניתוח תגובת שרשרת פולימראז בזמן אמת של שינוי בטא גורם גדילה וביטוי mRNA היעד במורד הזרם שלה יכול להתבצע גם כדי להעריך את נוכחותו של פיברוזיס שריר הלב.מסלולי איתות פרו דלקתיים והביטוי של גנים פרו דלקתיים נמצא בדרך כלל להיות מופעל בתוך השבוע הראשון לאחר אוטם שריר הלב. ביטוי mRNA של גנים פרו דלקתיים סמני מונוציטים / מקרופאג נצפתה גם. גובה הרצועה ישפיע באופן קריטי על ההישרדות ויש להתאים אותו לכל זן או גנוטיפ, גם אם הסתעפות LAD עשויה להשתנות.קבועים קשירה הוא המפתח כדי להשיג תוצאות לשחזור. הליך זה עשוי להיות יחד עם כל שיטה אנליטית והוא יכול להיות ואחריו ניתוח פונקציונלי, קיבוע רקמות, תרבות התא, או כל טכניקה מעניינת.

Research

JoVE Journal

Medicine

Coronary Artery Ligation and Intramyocardial Injection in a Murine Model of Infarction

קשירת עורקים כלילית לבין הזרקת Intramyocardial ב מודל Murine של אוטם

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo.  With the advent of genetic modifications to ...

The Application Of Permanent Middle Cerebral Artery Ligation in the Mouse

היישום של קשירת העורקים התיכון הקבע מוחין העכבר

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to ...

Modified Technique for Coronary Artery Ligation in Mice

טכניקה שונה לקשירת עורקים הכליליים בעכברים

Myocardial infarction (MI) is one of the most important causes of mortality in humans1-3. In order to improve morbidity and mortality in patients with MI ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

דגם של שריר הלב איסכמיה reperfusion הפגיעה Murine באמצעות קשירת של העורק השמאלי קדמי יורד

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Permanent Ligation of the Left Anterior Descending Coronary Artery in Mice: A Model of Post-myocardial Infarction Remodelling and Heart Failure

קשירת קבע של העורק השמאלי קדמי יורד כלילית בעכברים: דגם של Remodelling אוטם שריר לב ופוסט-אי ספיקת לב

Heart failure is a syndrome in which the heart fails to pump blood at a rate commensurate with cellular oxygen requirements at rest or during stress. It ...

Murine Echocardiography of Left Atrium, Aorta, and Pulmonary Artery

אקו Murine של השמאל אטריום, אבי העורקים, ו עורק הריאה

The present methodology teaches the investigator how to measure and use the LAV as a surrogate of chronic elevations in Left Ventricular diastolic ...

Murine Left Anterior Descending (LAD) Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction

Murine Left Anterior Descending LAD Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction

Murine שמאל Anterior יורד (LAD) קשירת עורקים הכליליים: דגם משופר או פשוט עבור אוטם שריר לב

Ischemic heart disease (IHD), or acute coronary syndrome (ACS), is one of the leading causes of death in the United States. IHD is characterized by ...

Direct Re-implantation of Left Coronary Artery into the Aorta in Adults with Anomalous Origin of Left Coronary Artery from the Pulmonary Artery (ALCAPA)

Direct Re-implantation of Left Coronary Artery into the Aorta in Adults with Anomalous Origin of Left Coronary Artery from the Pulmonary Artery ALCAPA

Re-ההשתלה ישיר של העורקים הכליליים שמאל לתוך אבי העורקים של מבוגרים עם אנומליים מוצא העורקים הכליליים שמאל מן העורק הריאתי (ALCAPA)

Anomalous origin of the left coronary artery from the pulmonary artery (ALCAPA) is a rare congenital anomaly which is one of leading causes of myocardial ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Contractility איזומטרי מדידה של עורק מצע המעי העליון העכבר באמצעות חוט Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Intramyocardial Transplantation of MSC-Loading Injectable Hydrogels after Myocardial Infarction in a Murine Model

השתלה תוך-שרירית של הידרוג'ל להזרקה בטעינת MSC לאחר אוטם שריר הלב במודל מורין

One of the major issues facing current cardiac stem cell therapies for preventing postinfarct heart failure is the low retention and survival rates of ...