Name: murine myocardial infarction model using permanent ligation of left anterior descending coronary artery
Uploaded: 2019-08-16T13:00:00
Duration: 8 min 38 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Myocardial Infarction Model using Permanent Ligation of Left Anterior Descending Coronary Artery at JoVE.com

Bu model İsviçre Ulusal Bilim Vakfı 'nın (Grants 310030_162629 to LL) ve Lozan Üniversitesi Hastanesi Göğüs Cerrahisi ve Yoğun Bakım Tıbbı Hizmetleri'nden bölüm fonlarının desteğiyle geliştirilmiştir. JL, Emma Muschamp Vakfı'ndan bir bağış aldı. Lozan Üniversitesi Biyoloji ve Tıp Fakültesi veteriner hekimlerinin ve hayvan tesisi personelinin önemli desteğini kabul ediyoruz. Lozan Üniversitesi Hastanesi Kalp Cerrahisi Servisi'nden Dr. Giuseppina Milano'ya ve Lozan Üniversitesi Kardiyovasküler Değerlendirme Facilty'den Dr. Alexandre Sarre'ye teknik ipuçları için teşekkür ederiz.

Bu protokolde tanımlanan hayvan deneyleri Vaud Kantonu Hayvan Etik Komitesi tarafından gözden geçirildi ve onaylandı.
NOT: Bu deneylerde 25 g ile 30 g arasında ve 8-12 haftalık erkek C57Bl/6J fareler kullandık. Fareler chow pelet ve su reklamı libitum beslenen ve geleneksel koşullar altında yetiştirilen edildi. Cerrahi ekipmanlar daha önce sterilize edildi. Deneyci kontaminasyon ve postoperatif enfeksiyonları sınırlamak için steril cerrahi eldiven ve cerrahi maske takmalıdır.
1. Anestezi ve trakeal kanülasyon.
<ol><li>Anestezik ilaçların dozajını belirlemek için fareyi tartın, postoperatif analjezik ilaç ve ventilatörün gelgit hacmini belirleyin. Isıtma yastığını 37 °C'de önceden ısıtın. Cerrahi kurulum Şekil1'de gösterilmiştir.</li>
	<li>Fareye ketamin ve ksilazin karışımı ile sırasıyla 80 mg/kg ve 10 mg/kg enjekte edin.</li>
	<li>Fare kürkü, elektrikli bir jilet kullanarak fare kürkünün boğazını ve göğüs kafesinin sol tarafını hızlı bir şekilde tıraş edin.</li>
	<li>Kuyruk ve/veya arka ayakları çimdikleyerek anestezinin derinliğini kontrol edin ve hayvanı ısıtma yastığında supine pozisyonunda yerleştirin. Gözlerin aşırı ısınmasını önlemek için hayvanın başının altına küçük bir gazlı bez kompres yerleştirin. Göz kuruluğu önlemek için oküler jel uygulayın.</li>
	<li>Isıtma yastığının yüzeyinde ki yapışkan bantla dört uzvunu sabitleyin. Üst kesici dişlerin altında 5-0 ipek sütür bir döngü geçirin ve ısıtma yastığı üzerine yapışkan bant ile döngü ekstremite sopa. Bu hayvanın ağzını açık tutacak ve kanülasyonu kolaylaştıracaktır.</li>
	<li>Önceden tıraş edilen alanlara epilasyon kremi uygulayın ve 1 dk. Kesi bölgelerini temizlemek için %0,9 tuzlu çözelti ve gazlı bez kullanın. Tıraş boğaz ve toraks steril gazlı bez parçaları uygulayın ve iodopovidon onları ıslatın. NOT: Kesi bölgelerine lokal anestezik ilaç (lidokain veya bupivacain) uygulanmasını öneriyoruz.</li>
	<li>Ventilatörü 7 mL/kg'lık bir gelgit hacmine ve 140 vuruş/dak havalandırma hızına ayarlayın. NOT: Şu andan itibaren mikrocerrahi stereomikroskop altında çalışmaya devam edin.</li>
	<li>Boğazın ortasında deri tutun ve küçük makas kullanarak bir kaudal / sefalik çizgi aşağıdaki 0,5 cm bir kesi gerçekleştirin. Tükürük bezinin loblarını ayırın, daha sonra gırtlak ve trakea görünene kadar kıvrımlı diseksiyon forceps ile sternohyoid kas hafifçe ayrı fasya. Elastik bantlara bağlı retraktörlerle açıklığın güvenli kenarları. NOT: Bu adımı kasların kesilmesi olmadan yapın. Eğitimli bir operatör bu adımı isteğe bağlı hale trakea görselleştirme olmadan oral kavite yoluyla hayvan entübe etmek mümkün olacak.</li>
	<li>Dili yavaşça yana tutun. Forceps ile, trakea içine bir 16 G kanül körkulaklı iç iğne takın. Boğaz kesisi ile trakea içine doğru ekleme görselleştirin.</li>
	<li>Kanülleri ventilatöre bağlayın ve egzoz borularını suya yerleştirerek doğru havalandırmayı sağlayın. Kabarcıkların varlığı doğru entübasyon gösterir. NOT: Ameliyat sırasında dokuları ıslak tutmak için steril gazlı bez %0.9 tuzlu çözelti ve boğaz kesisinde iyodopovion ile ıslatılır. İşlem sırasında nemi kontrol edin.</li>
</ol>2. LAD koroner arter ligasyonu
<ol><li>Sol ön pençeyi koli bandından serbest bırakın ve fareyi dikkatlice sağ taraftaki dekübititus pozisyonuna taşıyın. Hayvan doğru pozisyonda olduğunda sol ön ekstremiteyi sabitle.</li>
	<li>Sol pektoralis minör ve majör kaslar arasındaki çizgiyi belirleyin ve çizgiyi takip eden makasla 1 cm'lik eğik bir deri kesisi yapın. Künt mikro makas diseksiyon ile, kesit olmadan pektoralis kaslarının ayrı fasya. Elastik bantlara bağlı retraktörlerle ayrılmış pektoralis kaslarını koruyun.</li>
	<li>Ventilatöre 3 cm H2O pozitif son ekspiratuar basınç (PEEP) ayarlayın.</li>
	<li>3ve 4 kaburga arasında 3 interkostal boşlukta künt forceps kullanarak göğüs boşluğu açın. Kanama tehlikesi olduğu için iç torasik artere dokunmaktan kaçının. Kalp veya akciğer dokunmayın. Göğüs kafesine iki retraktör uygulayın, her kaburgaya bir tane (Şekil2A).</li>
	<li>Kavisli ince forceps ile, dikkatle perikard kaldırmak ve kalp ve akciğerlere zarar vermeden ayrı çekin.</li>
	<li>Sol anterior inen bulun (LAD) koroner arter. LAD arter apeks doğru sol auricle kenarından çalışan yüzeysel parlak kırmızı bir çizgi olarak görünür.</li>
	<li>Sol atriin in altında LAD 2-3 mm altında 7-0 ipek dikiş geçmek için bir iğne tutucu kullanın. Kalp dokusunun yırtılmasını önlemek için yavaşça ipek çekin. Bağları üç düğümle bağlayın. Sol ventrikülalt sol kısmı hemen ligasyon üzerine soluk dönecek (Şekil 2B-E). NOT: Ventriküler kavitenin çok derinlerine inmemek veya çok yüzeysel kalmak önemlidir. Sham-işletilen hayvanlar için, LAD altında dikiş ipek çekin ve yavaş yavaş doku yırtılma kaçınarak kaldırın.</li>
	<li>Kaburga retraktörlerini serbest bırakın, 3 kaburgayı forceps ile tutun ve3 ve4 kaburganın altında 6-0 ipek sütürle iki geçiş yapın. DİkKAT: Delikli kalp veya akciğer etmeyin. Henüz düğümleri sıkmayın.</li>
	<li>37 °C tuzlu çözeltinin üç damlasını açıklığın üzerine koyun ve akciğerleri düzgün bir şekilde şişirmek için 2 veya 3 solunum döngüsü için son kullanma egzoz tüpünü kapatın. Dikiş sıkın ve iki atar ile güvenli.</li>
	<li>Kasları tutan retractors bırakın ve onları doğru yer almak yardımcı olur.</li>
	<li>5-0 dikiş ipek iki dikiş ile göğüs derisi kapatın ve iki atar ile güvenli. 5-0 dikiş ipek bir dikiş ile yakın boğaz cilt ve iki atar ile güvenli.</li>
</ol>3. Ameliyat sonrası prosedürler ve takip.
<ol><li>Uzuvlardan yapışkan bant bantlarını çıkarın. Hayvanın sağ tarafında ısıtma yastığı bir kompres koyun. NOT: Anesteziden bu noktaya kadar olan genel işlem 40-45 dk'dan uzun sürmemelidir.</li>
	<li>Intraperitoneally enjekte 0.3 mL 5% glikoz çözeltisi önceden 37 °C'de ısıtılır.</li>
	<li>Dikkatle kompres ped üzerine ventral dekübit us üzerinde hayvan açın.</li>
	<li>Ventilatör durdurun; fare kendiliğinden nefes alırsa, kanülleri dikkatlice çıkarın.</li>
	<li>Deri altı (SC) 0,1 mg/kg buprenorfin enjekte edin ve fareleri 30 °C'de ısıtılan ve %100 O2 ile havalandırılan önceden ısıtılmış bir kafese koyun.</li>
	<li>Ameliyatı takip eden iki ilk gün boyunca, fareyi günde iki kez izleyin. Enjekte SC 0.1 mg/kg buprenorfin günde iki kez. İntraperitoneally günde iki kez % 5 glikoz çözeltisi 0.3 mL 0 enjekte. Yumuşak diyet ve su reklam libitum ile fareler sağlayın. Gerekirse hayvanı ısıtın. NOT: Opioidlere ek olarak, hayvanlara diyette karıştırılan veya içme suyunda seyreltilmiş steroid olmayan anti-inflamatuar ilaçlar sağlanmalıdır.</li>
	<li>Üçüncü günden itibaren, hayvan genel görünüm, solunum veya davranış la ilgili olağandışı belirtiler gösteriyorsa, günde iki kez SC 0.1 mg/kg buprenorfin enjekte edin. Hayvan hala kilo kaybediyorsa, intraperitoneally günde iki kez % 5 glikoz çözeltisi 0.3 mL enjekte. Gerekirse hayvanı ısıtın. NOT: Aşırı acı çekmemek için gerektiğinde önceden tanımlanmış kesinti kriterlerini kesinlikle uygulayın. Genellikle fareler gün 3 ve 4 kadar kilo ve daha sonra kilo. Yedi gün sonra, fareler genellikle ameliyat öncesi ağırlık almak.</li>
</ol>

<ol>
	<li>GBD 2016 Causes of Death Collaborators. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=regional,+and+national+age-sex+specific+mortality+for+264+causes+of+death,+1980-2016:+a+systematic+analysis+for+the+Global+Burden+of+Disease+Study.">regional, and national age-sex specific mortality for 264 causes of death, 1980-2016: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study.</a> Lancet. 390 (10100), 1151-1210 (2017).</li><li>Reed, G. W., Rossi, J. E., Cannon, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+myocardial+infarction.">Acute myocardial infarction.</a> Lancet. 389 (10065), 197-210 (2017).</li><li>Frangogiannis, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+inflammatory+response+in+myocardial+injury,+repair,+and+remodelling.">The inflammatory response in myocardial injury, repair, and remodelling.</a> Nature Reviews Cardiology. 11 (5), 255-265 (2014).</li><li>Lugrin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutting+edge:+IL-1alpha+is+a+crucial+danger+signal+triggering+acute+myocardial+inflammation+during+myocardial+infarction.">Cutting edge: IL-1alpha is a crucial danger signal triggering acute myocardial inflammation during myocardial infarction.</a> Journal of Immunology. 194 (2), 499-503 (2015).</li><li>Hashmi, S., Al-Salam, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+myocardial+infarction+and+myocardial+ischemia-reperfusion+injury:+a+comparison.">Acute myocardial infarction and myocardial ischemia-reperfusion injury: a comparison.</a> International Journal of Clinical and Experimental Pathology. 8 (8), 8786-8796 (2015).</li><li>van Zuylen, V. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+infarction+models+in+NOD/Scid+mice+for+cell+therapy+research:+permanent+ischemia+vs+ischemia-reperfusion.">Myocardial infarction models in NOD/Scid mice for cell therapy research: permanent ischemia vs ischemia-reperfusion.</a> Springerplus. 4, 336 (2015).</li><li>Yan, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal+dynamics+of+cardiac+immune+cell+accumulation+following+acute+myocardial+infarction.">Temporal dynamics of cardiac immune cell accumulation following acute myocardial infarction.</a> Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 62, 24-35 (2013).</li><li>Xu, Z., Alloush, J., Beck, E., Weisleder, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+myocardial+ischemia-reperfusion+injury+through+ligation+of+the+left+anterior+descending+artery.">A murine model of myocardial ischemia-reperfusion injury through ligation of the left anterior descending artery.</a> Journal of Visualized Experiments. (86), (2014).</li><li>Reichert, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+Left+Anterior+Descending+(LAD)+Coronary+Artery+Ligation:+An+Improved+and+Simplified+Model+for+Myocardial+Infarction.">Murine Left Anterior Descending (LAD) Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction.</a> Journal of Visualized Experiments. (122), (2017).</li><li>Kolk, M. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LAD-ligation:+a+murine+model+of+myocardial+infarction.">LAD-ligation: a murine model of myocardial infarction.</a> Journal of Visualized Experiments. (32), (2009).</li><li>Fernandez, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+coronary+arteries+of+the+C57BL/6+mouse+strains:+implications+for+comparison+with+mutant+models.">The coronary arteries of the C57BL/6 mouse strains: implications for comparison with mutant models.</a> Journal of Anatomy. 212 (1), 12-18 (2008).</li><li>Muthuramu, I., Lox, M., Jacobs, F., De Geest, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Permanent+ligation+of+the+left+anterior+descending+coronary+artery+in+mice:+a+model+of+post-myocardial+infarction+remodelling+and+heart+failure.">Permanent ligation of the left anterior descending coronary artery in mice: a model of post-myocardial infarction remodelling and heart failure.</a> Journal of Visualized Experiments. (94), (2014).</li><li>Xu, Z., McElhanon, K. E., Beck, E. X., Weisleder, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Murine+Model+of+Myocardial+Ischemia-Reperfusion+Injury.">A Murine Model of Myocardial Ischemia-Reperfusion Injury.</a> Methods in Molecular Biology. 1717, 145-153 (2018).</li><li>Parapanov, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+receptor+5+deficiency+exacerbates+cardiac+injury+and+inflammation+induced+by+myocardial+ischaemia-reperfusion+in+the+mouse.">Toll-like receptor 5 deficiency exacerbates cardiac injury and inflammation induced by myocardial ischaemia-reperfusion in the mouse.</a> Clinical Science. 129 (2), 187-198 (2015).</li><li>Curaj, A., Simsekyilmaz, S., Staudt, M., Liehn, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimal+invasive+surgical+procedure+of+inducing+myocardial+infarction+in+mice.">Minimal invasive surgical procedure of inducing myocardial infarction in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (99), e52197 (2015).</li><li>van den Bos, E. J., Mees, B. M., de Waard, M. C., de Crom, R., Duncker, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+model+of+cryoinjury-induced+myocardial+infarction+in+the+mouse:+a+comparison+with+coronary+artery+ligation.">A novel model of cryoinjury-induced myocardial infarction in the mouse: a comparison with coronary artery ligation.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 289 (3), H1291-H1300 (2005).</li><li>Duerr, G. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+myocardial+remodeling+between+cryoinfarction+and+reperfused+infarction+in+mice.">Comparison of myocardial remodeling between cryoinfarction and reperfused infarction in mice.</a> Journal of Biomedicine and Biotechnology. 2011, 961298 (2011).</li></ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Bu işlemin ilk kritik adımı kesinlikle entübasyondur. 16 G kateterin körelmiş iç iğnesini trakeal tüp olarak kullanıyoruz. Bu kurulumu 22 g'dan daha hafif farelerle kullanmanızı önermiyoruz. Bu kurulum ile, trakea zarar vermeden daha küçük vücut ağırlığı ile düzgün fareler entübe etmek zor olabilir. Bir diğer kritik nokta da trakea ve göğüs kafesini ortaya çıkarırken kaslara yapılan kesileri sınırlamaktır. Doku hasarının azaltılması, özellikle MI'den sonraki inflamatuar süreçleri incelerken büyük önem taşımaktadır. Bu yüzden forseps ve retractors8,9ile kas ve kaburga nazik yayılması tercih olmasıdır. Biz kanama10kontrol etmek için elektrikli karaçer kullanmayın. Bu iyatrojenik yanıklarneden olabilir ve enfeksiyonları lehine. Hem travma hem de enfeksiyonlar inflamatuar okumalara neden olabilir. Ventilasyon egzozunun torakotomi sırasında son ekspiratuar alveoler çökmesine daldırılarak 3 cm H2O'luk dışsal peep uygulaması. LAD lokalizasyonu başka bir kritik adımdır ve koroner arterlerin anatomisi zorlanma ve fare11genotip bağlı olarak değişebilir akılda tutmak gerekir. Lad'i görselleştirmek için biraz deneyim gerektirir, ancak dikişin prosedürde açıklandığı gibi sol atriya 2-3 mm doğrudan yerleştirilmesi ligasyonun doğru konumlandırılmasına olanak sağlar. Dikiş altında sol ventrikül büyük porsiyonanında renk değişikliği doğruluğu teyit. Son olarak, yapay göğüs kapanması sırasında 2-3 solunum döngüleri için ventilasyon egzoz engelleyerek otomatik PEEP uygulayarak torasik kavite hava kovalamak yardımcı olacak akciğer geçici bir hiperenflasyon sağlar12. Biz bilerek 9,10gösterildiği gibi bir torasentez yapmazlar. Bu şekilde, akciğer ve kalp yaralanmaları riskini sınırlamak ve aşırı doku hasarı veya perforasyon önlemek.
Miyokardiyal iskemi-reperfüzyon (I/R) kliniklerde MI hastalarına yapılan koroner kan akımının restorasyonu taklit ilgili bir cerrahi modeldir. G / R modeli sırasında koroner arter geçici bir tıkanıklık 20 ila 45 dk8,13bir süre için LAD üzerine tüp bir parça sıkma tarafından yapılır. Daha sonra oklüzyon istenilen süre boyunca miyokardrerere izin serbest bırakılır. Protokolümüze uygulanan bu basit değişiklik kolayca bir G / R modeli4,8,14,15dönüştürebilirsiniz. Enfarktüs kardiyak troponin T8,10 veya ekokardiyografi15için bir kan testi ile teyit edilebilir.
MI, reperfüzyonun tek başına yaralanmaya neden olduğu için I/R modelinden farklıdır. MI daha fazla doku nekrozu neden olur ve apoptoz daha reperfüzyon miyokardiyum belirgindir5. İnflamatuar hücrelerin infiltrasyonukinetiği de MI ve IR arasında MI7bağışıklık hücrelerinin gecikmiş miyokardiyal infiltrasyonu ile farklıdır. Enfarkt alanın büyüklüğü ve konumu da kalıcı ligasyon ve G/R modelleri arasında farklılık gösterir15. Bunu göz önünde bulundurarak, G/Y ve kalıcı MI modelleri eşdeğer olmadığından, ilgili bir model seçmek için dikkatli olmak gerekir. Miyokard enfarktüsünün bir diğer murine modeli de kriyoinfarktüs modelidir. LV ön duvarına kriyojenik bir sonda uygulanması LAD arterventriküler doku ve kan akımı arrest donma neden olur. Ancak bu teknik, remodeling ve inflamatuar yanıtların zamanlaması ve genliği ile ilgili MI ve I/R tekniklerinden farklıdır16,17.
Değişkenlik herhangi bir cerrahi işlem için bir sınırlamadır. Bu değişkenlik biyolojik farklılıklara dayanır. İyi bir örnek farelerde koroner arteriyel düzenleme varyasyonu11. Aynı zamanda deney becerilerine de dayanır. Bu modelle istikrarlı sonuçlara ulaşmak için deneycilerin yeterli eğitiminin zorunlu olduğunu belirtmekte faydalıdır. İyi eğitilmiş bir deneyci kolayca tekrarlanabilir enfarktüs boyutları üretebilir (Şekil3A-B). Modelin mortalitesi LAD'nin konumuna, deneylerin süresine (günler, haftalar), fare zorlanmasına ve genotiplere bağlıdır. Anestezik ve analjezik ilaçların türleri de putatif kardiyoprotektif veya kardiyodepresan etkileri ile deneylerin sonucunu etkileyebilir. Bizim elimizde bu modelin küresel ölüm oranı %25-30'dur. Bu ölüm oranı, suşlar ve deney süresi ne olursa olsun, deney bitmeden önce spontan ölüm ve fedakarlıkları kapsar. Ölümlerin ya da fedakarlığın çoğu ameliyat sonrası ikinci ve dördüncü günler arasında. Sıkı bir ağrı yönetimi uygulamak ve hayvanların takibi mortaliteyi azaltabilir.
Burada ttc boyama ve protein ve genlerin ekspresyonu kullanılarak analiz edilen enfarktüs boyutunun temsili sonuçlarını sırasıyla batı lekeve gerçek zamanlı PCR ile LV'de inflamatuar veya fibrotik süreçlerde yer alan genler satmaktadır (Şekil 3C-G). Bu parametrelerin çoğunu enzime bağlı immünosorbent tahlil (ELISA) veya enzimosit testleri ile ölçmek de mümkündür. Tabii ki, test edilmesi gereken hipoteze uygun olarak, bu yöntem ultrason, MRG veya intraventriküler kateter basınç ve hacim ölçümü ile herhangi bir fonksiyonel analiz ile takip edilebilir. Ayrıca kalp ayıklamak ve izole hücreler üzerinde kardiyak hücre biyolojisi daha fazla araştırmak mümkündür. Genel olarak, LAD koroner arter kalıcı ligasyon ile MI modeli özellikle inflamatuar ve fibrotik süreçleri değerlendirmek için yararlıdır, yara iyileşmesi ve miyokard infarktüsü sonrasında kardiyak fonksiyon değişiklikleri.

Akut miyokard enfarktüsü (MI) iskemik kalp hastalıklarının (İhD) en şiddetli ifadesidir. İhD, özellikle batı ülkelerinde, dünya çapında morbidite ve ölüm lerin önde gelen nedenidir1. Sonuç olarak, sağlık sistemleri üzerinde büyükbir ekonomik etkisi vardır 2. MI aterosklerotik plak ile bir koroner arter tıkanıklığı ve miyokardyumun büyük bölgelerinde kan akımının sonraki tutuklanması ile karakterizedir. Miyokardlarda oksijen yetersizliği kardiyomiyositlerin iskemik ölümüne yol açar. Bu patolojik durum ventriküler dokuda yanıtları tetikler sonuçta ventriküler fonksiyonlarda eksikliklere yol açar, remodeling ve kalp yetmezliği3. MI düzenlenmiş hücre ölümü, oksidatif strese yanıt, inflamasyon, yara iyileşmesi, fibrozis ve ventrikül remodeling oluşan birden fazla ve karmaşık biyolojik süreçler içeren karmaşık bir patofizyolojik durumdur. Bu biyolojik yanıtların bazıları hasara bağlı moleküler desenlerin nekrozkaynaklı salınımı ve ilişkili inflamatuar yanıtlar gibi in vitro bireysel süreçler olarak modellenmiştir4. Bu basitleştirilmiş modeller MI anlamak için gereklidir. Ancak sadece bir in vivo modeli MI yanıt yapan biyolojik süreçler karmaşıklığı gerçekçi bir görüntü sağlayabilir.
Domuz gibi büyük hayvanlarda MI modelleri daha yakından MI insan patofizyolojisi ile ilgili olsa da, murine modellerinin gücü diğer memeli türlerine göre daha gelişmiş genetik mühendisliği tarafından sunulan olanaklar da bulunur. Diğer ihmal edilemez yönleri göreceli düşük maliyet ve cerrahi kurulum basitliği vardır.
Miyokardinisin iskemi-reperfüzyonu modellerinin kalıcı MI modellerinden farklı sonuçlar sergilenebildiği nden bahsetmek tefaydalıdır. Miyokard dokusunda inflamatuar ve yara iyileşmesi yanıtlarının hücre ölümü tipi, kalite/genlik veya kinetik gibi biyolojik süreçler modele göre değişebilir5,6,7. Ancak, kalıcı koroner oklüzyon bu protokol kolayca bir iskemi-reperfüzyon modeli elde etmek için adapte edilebilir.
Bu yöntem reperfüzyon olmadan MI fizyopatolojisi ile ilgili çalışmalar için önemlidir ve lokal kalp dokusunda ve sistemik kalp dokusunda koroner oklüzyondan (dakika) geç evre kalp yetmezliğine (hafta) kadar patolojik süreçlerin izlenmesine olanak sağlar. Düzey.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:588px;" width="589">
	<tbody>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:221px;">1 CC Syringe, Omnifix-F</td>
			<td style="width:73px;">B. Braun</td>
			<td style="width:123px;">9161406V</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;width:221px;">30G- Needle</td>
			<td style="width:73px;">BD Microlance 3</td>
			<td style="width:123px;">304000</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:221px;">70% Ethanol</td>
			<td style="width:73px;"></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:221px;">Betadine 60 ml</td>
			<td style="width:73px;">MundiPharma</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;width:221px;">Blunt Retractors</td>
			<td style="width:73px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:123px;">18200-09</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:221px;">Castroviejo Needle Holder Straight with Lock</td>
			<td style="width:73px;">Roboz</td>
			<td style="width:123px;">RS-6416</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:221px;">Cotton Swabs</td>
			<td style="width:73px;">Applimed SA</td>
			<td style="width:123px;">6001109</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:221px;">Dissecting Scissors, Curved</td>
			<td style="width:73px;">Aesculap</td>
			<td style="width:123px;">BC603R</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:221px;">Electrical Razor</td>
			<td style="width:73px;">Remington</td>
			<td style="width:123px;">HC720</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:221px;">Glucose 5% B.Braun</td>
			<td style="width:73px;">B. Braun</td>
			<td style="width:123px;">531032</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;width:221px;">Hair Removal Cream, Veet</td>
			<td style="width:73px;">Silk &#38; Fresh Tech.</td>
			<td style="width:123px;">8218535</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:221px;">Iris Dissecting Forceps Full Curved</td>
			<td style="width:73px;">Aesculap</td>
			<td style="width:123px;">&#160;OC022R</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:221px;">Ketasol 100 (100 mg/ml)</td>
			<td style="width:73px;">Dr. E. Graeub AG</td>
			<td>QN01AX03</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:221px;">Micro Scissors, Curved Blunt/Blunt</td>
			<td style="width:73px;">Aesculap&#160;</td>
			<td style="width:123px;">FM013R</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:221px;">NaCl 0.9% B. Braun</td>
			<td style="width:73px;">B. Braun</td>
			<td style="width:123px;">534534</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;width:221px;">Short Fixator</td>
			<td style="width:73px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:123px;">18200-01</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:221px;">Silk Suture 5-0, BB</td>
			<td style="width:73px;">Ethicon</td>
			<td style="width:123px;">K880H</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:221px;">Silk Suture 6-0, P-1</td>
			<td style="width:73px;">Ethicon</td>
			<td style="width:123px;">639H</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:221px;">Silk Suture 7-0,BV-1</td>
			<td style="width:73px;">Ethicon</td>
			<td style="width:123px;">K804</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;width:221px;">Student Dumont #7 Forceps</td>
			<td style="width:73px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:123px;">91197-00</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;width:221px;">Student Fine Forceps-Angled</td>
			<td style="width:73px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:123px;">91110-10</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:221px;">Surgical Gloves</td>
			<td style="width:73px;">Weitacare</td>
			<td style="width:123px;">834301</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:221px;">Surgical heating pad</td>
			<td style="width:73px;">Personalized setting</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="53">
			<td height="53" style="height:53px;width:221px;">Temgesic&#160; sol 0.3 mg/ml&#160; Buprenorphine</td>
			<td style="width:73px;">Indivior Schweiz AG</td>
			<td style="width:123px;">N02AE01</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:221px;">Tracheal tube inner needle of an 16G i.v. cat</td>
			<td style="width:73px;">Abbocath-T</td>
			<td style="width:123px;">G714-A01</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:221px;">Universal S3 Microscope, OMPIMD</td>
			<td style="width:73px;">Zeizz</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:221px;">Ventilator, MiniVent Model 845</td>
			<td style="width:73px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:123px;">73-0043</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:221px;">Viscotears</td>
			<td style="width:73px;">Alcon</td>
			<td style="width:123px;">1551535</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="35">
			<td height="35" style="height:35px;width:221px;">Xylasol (1mg/ml)</td>
			<td style="width:73px;">Dr. E. Graeub AG</td>
			<td>QN05CM92</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine myocardial infarction model using permanent ligation of left anterior descending coronary artery

Miyokard enfarktüsü (MI) ve akut koroner hastalıklar batı yaşam tarzına sahip popülasyonda en belirgin ölüm nedenleri arasındadır. Sol-anterior inen kalıcı ligasyon ile MI murine modelleri (LAD) koroner arter yakından insanlarda MI taklit. Murine modelleri günümüzde mevcut olan kapsamlı genetik mühendislikten yararlanmaktadır. Burada kalıcı LAD koroner ligasyonu ile miyokard enfarktüsünün tekrarlanabilir bir murine cerrahi modelini öneriyoruz. Tekniğimiz ketamin/ksilazin ile anesteziden oluşur, antagonist intübasyon, mekanik destekli ventilasyon için trakeotomi olmadan entübasyon, ekstrensek pozitif uygulama ile ventilasyon alveoler çöküşü önlemek için son ekspiratuar basınç (PEEP), iskelet kaslarına yapılan minimum cerrahi lezyonları sınırlayan bir torakotomi yöntemi, ve torasentez olmadan akciğer enflasyonu. Bu yöntem seyrek invaziv, tekrarlanabilir ve ameliyat sonrası mortalite ve komplikasyonları azaltır.

Fareler ameliyattan yedi gün sonra ötenaziye alındı. Hayvanlar 80 mg/kg ketamin ve 10 mg/kg ksilazin ile anestezi edildi. Anestezi altında vena kavadan kan alındı ve kalp örneği alındı. Atria çıkarıldı, miyokardiyum buz gibi PBS ile yıkandı. İskemik alanların ölçümleri için kalpler -20 °C'de 40 dakika donduruldu, daha sonra %2 triphenyltetrazolium klorür (TTC) içeren PBS'de 37 °C'de 20 dakika dilimlendi ve boyandı. Kalp dilimleri oda sıcaklığında %4 tamponlu paraformaldehit çözeltisinde bir gecede sabitlendi. İskemik alanlar lekesiz kalırken, canlı doku dehidrogenaz varlığı nedeniyle kırmızı ile boyanmıştır. İskemik alanlar sol ventrikülün (LV) beyaz alanının yüzdesi olarak bir görüntüleme yazılımı ile hesaplandı (Şekil3A, B). Biyokimyasal ve moleküler biyoloji analizleri için kalpler sıvı nitrojenle donduruldu. Sıvı azot üzerinde kalpleri taşlama sonra organ tozu protein ve mRNA ekstraksiyon için kullanılmıştır. Enfarktüs kalplerin miyokardiyal dokusundaki fibrozisin kapsamı, sırasıyla miyofibroblastların ve TGFβ sinyal aktivasyonunun başlıca okumaları olan alfa düz kas aktininin (αSMA) ve SMAD2 fosforilasyonunun batı leke analizi ile değerlendirildi ( Şekil 3C). TgfbmRNA ekspresyonu , ve downstream hedefleri Ctgf, Postn ve Il11 miyokardfibrozis tüm göstergeleri vardır. Bu gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) analizi (Şekil3D)ile gösterilmiştir.
Pro-inflamatuar sinyal yolları ve pro-inflamatuar genlerin ekspresyonu tipik olarak miyokard infarktüsü sonrası ilk hafta içinde aktive bulundu. NF-κB p65 transkripsiyon faktörünün fosforilasyon iltihabının bir özelliğidir ve MI mice'nin tüm miyokard özlerinde gözlenmiştir (Şekil3E). pro-inflamatuar genlerin mRNA ekspresyonu Il1b, Il6 ve Cxcl10 (Şekil 3F) ve monosit/makrofaj belirteçleri Cd14 ve Mertk gerçek zamanlı PCR (Şekil 3G) ile analiz edildi. NF-κB p65 ve SMAD2 fosforilasyon ölçüde bir değişkenlik olduğunu unutmayın (Şekil3C,E, şerit 4-7). Bu değişkenlik büyük ölçüde enfarktın boyutuna bağlıdır.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59591/59591fig1.jpg"> Şekil 1 : Cerrahi kurulumun tanımı. (A) Cerrahi kurulum modifiye ısıtma yastığı, bir vantilatör ve elastik bantlar bağlı retraktörler oluşur. (B) Ameliyat sırasında kullanılan makas, forceps ve iğne tutucu seti. (C) Mini retraktörlerin yakın çekim. Gösterilmez: cerrahi stereo mikroskop. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59591/59591fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59591/59591fig2.jpg"> Şekil 2 : Cerrahi ve LAD ligasyonu temsili görüntüler. (A) Retraktörler ile açık göğüs. Sol ventrikül belliydi. Üst, sol ve alt retraktörler göğüs kafesi düzenlenen ve sağ retraktör pektoralis kas düzenledi. (B) İğne LAD altında geçti. (C) Dikiş ipek LAD altında, sol ventrikül içine geçti. (D) LAD tek dikiş. (E) Ligasyon işleminin sonunda, dikiş üç düğüm ile güvence altına alındı. (F) Kalbin ön görünümünün temsili. LAD ligasyonunun pozisyonu 2-3 mm aşağıda sol atria ve LAD'nin diyagonal dalı üzerindeydi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59591/59591fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59591/59591fig3.jpg"> Şekil 3 : Fibrozis ve tüm miyokard özleri iltihap ameliyat sonrası yedi gün. (A) Ameliyat sonrası yedi gün içinde dilimlenmiş enfarktlı bir kalbin TTC lekelerinin temsili görüntüleri. Soluk iskemik alanlar lekesiz ve beyaz kalırken, canlı doku kırmızı lekeliydi. Ligasyon soldan üçüncü dilimde görülüyordu. (B) Beş infarktlı kalbin iskemik alanlarının büyüklüğü TTC boyama tekniği ile ölçüldü. Sonuçlar sol ventrikül (LV) beyaz alan yüzdesi idi. (C) Fibrozisin göstergesi olarak tüm miyokardiyumda SMAD2 fosforilasyonve alfa-SMA ekspresyonunun batı leke analizi. (D) tüm miyokard özlerinde Tgfb, Ctgf, Postn ve Il11 mRNA ekspresyonu. (E) Tüm miyokard özlerinde NF-κB p65 fosforilasyonun batı lekesi. (F) pro-inflamatuar genlerin mRNA ekspresyonu Il1b, Il6 ve Cxcl10 tüm miyokard özleri. (G) Cd14 ve Mertk'in mRNA ekspresyonu sırasıyla monosit/makrofajlar ve fagositik makrofajların miyokardiyumundaki varlığın göstergesidir. Sham'da N = 3 ve MI grubunda N = 4. mRNA ekspresyon analizi için ifade endojen kontrol Rps18'e göreidi ve grup karşılaştırmaları öğrencinin T-testleri, *p ≤ 0,05, **p ≤ 0.01, *** p ≤ 0.001 olarak eşleşti. B, D, F ve G panellerinde hata çubukları standart sapmaları temsil eder.  <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59591/59591fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Murine Myocardial Infarction Model using Permanent Ligation of Left Anterior Descending Coronary Artery at JoVE.com

Murine Myocardial Infarction Model using Permanent Ligation of Left Anterior Descending Coronary Artery

Burada farelerde sol anterior inen koroner arterin kalıcı ligasyonunun nasıl elde edilebildiğini gösteren bir cerrahi prosedürü açıklıyoruz. Bu model miyokard enfarktüsü ve eşlik eden biyolojik süreçlerin patofizyolojisini araştırmak için yüksek öneme hemşilir.

Sol Anterior İnen Koroner Arterin Kalıcı Ligasyonu ile Murine Miyokard Enfarktüsü Modeli

Myocardial infarction (MI) and acute coronary diseases are among the most prominent causes of death in population with western lifestyle. The murine ...

Miyokardiyal infraksiyonun bu minvazi modeli, koroner oklüzyondan lokal kalp dokusunda ve sistemik düzeylerde geç evre kalp yetmezliğine kadar meydana gelen patolojik süreçlerin izlenmesini sağlar. Bu yöntem şu anda kardiyak biyoloji ve fizyolojide kullanılan herhangi bir okuma ile uyumludur. Buna ek olarak, bu murine genetik modellerin büyük çeşitlilik yararlanır.Yeterli cerrahi becerilerin edinimi ustalaşmak için zaman alabilir. Bu işlem en iyi deneyimli bir araştırmacı ile adım adım öğrenilir. Bu rüren modelinin görsel gösterimi, cerrahi prosedüre yardımcı olabilecek ve öğrenme sürecini hızlandırabilecek ipuçlarının paylaşılmasını sağlar.Hızlı bir şekilde anestezi, 25-30 gram, erkek, C57-Siyah / 6 fare boğaz ve göğüs kafesi sol tarafında tıraş için bir elektrikli jilet kullanın. Parmak kıskacına yanıt eksikliğini doğrulayın. Merhemi hayvanın gözlerine uygulayın.Fareyi bir ısıtma yastığının üzerine supine pozisyonunda yerleştirin ve gözlerin aşırı ısınmasını önlemek için başın altına küçük bir gazlı bez kompres yerleştirin. Uzuvları yapışkan bantla sabitleyin. Üst kesici dişlerin altında 5-0 ipek sütür bir döngü geçirin ve kanülasyon sırasında ağız açık tutmak için ısıtma yastığı üzerine döngü ekstremite güvenli.Önceden tıraş edilmiş alanlara tüy dökücü krem uygulayın ve bir dakika pamuklu bezle hafifçe masaj yapın. Fazla kürk ve kremi gazlı bezle çıkarın ve maruz kalan cildi %0,9 tuzlu çözelti ve gazlı bez damlalarıyla temizleyin. Tıraş boğaz ve toraks steril gazlı bez parçaları uygulayın ve iodopovion ile gazlı bez ıslatın.Ventilatörü kilogram başına yedi mililitrelik bir gelgit hacmine ve dakikada 140 vuruşluk bir havalandırma hızına ayarlayın. Fareyi mikrocerrahi stereo mikroskobun altında hareket ettirin. Boğazın merkezinde cilt tutulması, kaudal / sefalik hattı boyunca 0.5 santimetrelik bir kesi yapmak, ve tükürük bezinin lobları ayırın.Gırtlak ve trakea görünene kadar sternohyoid kasının fasyasını nazikçe ayırmak için kavisli büşreler kullanın. Daha sonra elastik bantlara bağlı retraktörlerle açıklığın kenarlarını sabitlayın. Daha sonra, dili yavaşça yana doğru çekin ve 16 kalibrelik bir kanülün körelmiş iç iğnesini nefes borusuna yerleştirmek için forceps kullanın.Boğaz kesisi yoluyla trakeaiçine doğru bir ekleme görselleştirin ve canülatörü ventilatöre bağlayın. Ameliyat sırasında dokuları ıslak tutmak için kesi üzerine iyodopovidone ile ıslatılmış gazlı bez ile takviye steril% 0.9 tuzlu yerleştirin. Sonra su içine egzoz tüpü yerleştirin.Kabarcıkların varlığı başarılı bir entübasyon gösterir. Sol anterior inen koroner arter inen ligasyon için, veya LAD, dikkatle sağ tarafında dekübitus pozisyonuna fare hareket, ve yeni pozisyonda sol ön ekstremite yeniden güvenli. Sol pektoralis minör ve majör kaslar arasındaki çizgiyi belirleyin ve çizgi boyunca eğik bir santimetre lik deri kesisi yapın.Künt diseksiyon mikro makas kullanarak, dokuları kesici olmadan pektoralis kaslarının fasya ayırmak, ve ayırma korumak için elastik bantlar bağlı retractors kullanın. Ventilatöre üç santimetre su pozitif bir son ekspiratör basıncı ayarlayın. Üçüncü ve dördüncü kaburga arasındaki üçüncü interkostal boşlukta göğüs boşluğu açmak için künt forceps kullanın.Göğüs kafesi içine iki retractors yerleştirin, her kaburga bir, ve dikkatle kalp ve akciğerlere zarar vermeden perikard kaldırmak için kavisli ince forceps kullanın. LAD'yi, sol auricle'ın kenarından tepeye doğru uzanan yüzeysel parlak kırmızı bir çizgi olarak bulun. Sol atriin 2-3 milimetre altında LAD altında 7-0 ipek dikiş geçmek için bir iğne tutucu kullanın.Kalp dokusunu yırtmamak için yavaşça ipek çekerek, üç düğüm ile ligatür kravat. Sol ventrikül alt sol kısmı hemen ligasyon üzerine soluk dönecek. Şimdi kaburga retractors bırakın, ve forceps ile üçüncü kaburga tutarak, üçüncü ve dördüncü kaburga altında 6-0 ipek dikiş ile iki geçiş yapmak.Açılış üzerine 37 derece santigrat% 0.9 tuzlu çözelti üç damla yerleştirin ve düzgün akciğerleri şişirmek için iki veya üç solunum döngüleri için son kullanma egzoz tüpü kapatın. Sıkın ve iki atar ile dikiş güvenli, ve kasları tutan retractors serbest, kasların doğru anatomik konuma dönmek yardımcı. Sonra iki dikiş ve 5-0 dikiş ipek iki atar ile göğüs derisi kapatın.5-0 dikiş ipek ve iki atar bir dikiş ile boğaz deri kapatın. İşlemin sonunda, bant bantlarını uzuvlardan çıkarın, hayvanı dikkatlice dekübiti kompres pedinin üzerine boşaltın ve hayvanın sağ tarafındaki ısıtma yastığına sıkıştırın. Intraperitoneally enjekte 0.3 mililitre 37 derece-Celsius% 5 glikoz çözeltisi ısıtılır.Solunum cihazını durdurun. Fare kendiliğinden nefes alırsa, kanülleri dikkatlice çıkarın. Subkutan olarak buprenorfin kilogram başına 0.1 miligram enjekte.Fareyi izleme ile en az bir saat boyunca %100 oksijenle havalandırılan 30 derecelik bir kafese yerleştirin. Ameliyatı takip eden iki ilk gün boyunca fareye yumuşak bir diyet ve su reklamı libitum verin, gerektiğinde hayvanı ısıtın. Ameliyattan yedi gün sonra iskemik alanlar trihenyltetrazolium klorür ile lekelenmemiş olarak kalırken, canlı doku dehidrogenaz varlığından dolayı kırmızı lekeler ekleri ile lekelenmez.Iskemik alanlar daha sonra bir görüntüleme yazılımı programında sol ventrikül beyaz alan yüzdesi olarak hesaplanabilir. Miyofibroblastların sırasıyla önemli okumaları olan alfa-düz kas aktinve SMAD2 fosforilasyon ve büyüme faktörü beta sinyal aktivasyonu nun dönüştürülmesi için batı leke analizi, enfarktüs kalplerin miyokard dokusundaki fibrozisin derecesini belirlemek için kullanılabilir. Dönüşüm büyüme faktörü beta ve downstream hedef mRNA ekspresyonu gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyon analizi de miyokardfibrozvarlığını değerlendirmek için yapılabilir.Pro-inflamatuar sinyal yolları ve pro-inflamatuar genlerin ekspresyonu genellikle miyokard infarktüsü takip eden ilk hafta içinde aktive olduğu bulunmuştur. pro-inflamatuar genlerin mRNA ekspresyonu ve monosit/makrofaj belirteçleri de gözlenmiştir. Ligasyon yüksekliği sağkalımı kritik ölçüde etkileyecektir ve LAD dallanma değişebilir gibi, her gerginlik veya genotip adapte edilmelidir.Ligasyondaki sabitler tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek için anahtardır. Bu prosedür herhangi bir analitik yöntem ile birleştiğinde olabilir ve fonksiyonel analiz, doku fiksasyonu, hücre kültürü, ya da ilgi herhangi bir teknik takip edilebilir.

Research

JoVE Journal

Medicine

Coronary Artery Ligation and Intramyocardial Injection in a Murine Model of Infarction

Enfarktüsü bir murin Model Koroner Arter ligasyon ve intramiyokardiyal Enjeksiyon

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo.  With the advent of genetic modifications to ...

The Application Of Permanent Middle Cerebral Artery Ligation in the Mouse

Fare Daimi Orta Serebral Arter ligasyon Of Uygulama

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to ...

Modified Technique for Coronary Artery Ligation in Mice

Fare Koroner Arter Ligasyonu için Modifiye Tekniği

Myocardial infarction (MI) is one of the most important causes of mortality in humans1-3. In order to improve morbidity and mortality in patients with MI ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

Sol ön inen arter ligasyonu ile Miyokard İskemi-reperfüzyon Hasarı bir fare modeli

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Permanent Ligation of the Left Anterior Descending Coronary Artery in Mice: A Model of Post-myocardial Infarction Remodelling and Heart Failure

Farelerde Sol Ön İnen Koroner Arter Daimi ligasyonu: Post-miyokard Enfarktüs Remodelling ve Kalp Yetmezliği Bir Model

Heart failure is a syndrome in which the heart fails to pump blood at a rate commensurate with cellular oxygen requirements at rest or during stress. It ...

Murine Echocardiography of Left Atrium, Aorta, and Pulmonary Artery

Sol Atrium, Aort ve Pulmoner Arter Murin Ekokardiyografi

The present methodology teaches the investigator how to measure and use the LAV as a surrogate of chronic elevations in Left Ventricular diastolic ...

Murine Left Anterior Descending (LAD) Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction

Murine Left Anterior Descending LAD Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction

Kemirgen Sol Ön İnen (LAD) koroner arter ligasyonu: Miyokard İnfarktüsü Yönelik Gelişmiş ve Basitleştirilmiş Modeli

Ischemic heart disease (IHD), or acute coronary syndrome (ACS), is one of the leading causes of death in the United States. IHD is characterized by ...

Direct Re-implantation of Left Coronary Artery into the Aorta in Adults with Anomalous Origin of Left Coronary Artery from the Pulmonary Artery (ALCAPA)

Direct Re-implantation of Left Coronary Artery into the Aorta in Adults with Anomalous Origin of Left Coronary Artery from the Pulmonary Artery ALCAPA

Pulmoner Arter Left Koroner arter çıkış anomalileri Erişkin Aort içine Sol Koroner Arter Doğrudan Yeniden implantasyon (ALCAPA)

Anomalous origin of the left coronary artery from the pulmonary artery (ALCAPA) is a rare congenital anomaly which is one of leading causes of myocardial ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

İzometrik Contractility ölçüm tel Myography kullanarak fare mezenterik arter

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Intramyocardial Transplantation of MSC-Loading Injectable Hydrogels after Myocardial Infarction in a Murine Model

Murine Modelinde Miyokard İnfarktüsünden Sonra MSC Yüklemeli Enjekte Edilebilir Hidrojellerin intramiyokardiyal Transplantasyonu

One of the major issues facing current cardiac stem cell therapies for preventing postinfarct heart failure is the low retention and survival rates of ...