Name: functionalization of atomic force microscope cantilevers with single-t cells or single-particle for immunological single-cell force spectroscopy
Uploaded: 2019-07-10T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Functionalization of Atomic Force Microscope Cantilevers with Single-T Cells or Single-Particle for Immunological Single-Cell Force Spectroscopy at JoVE.com

यह काम चीन के जनरल प्रोग्राम (31370878), राज्य कुंजी कार्यक्रम (31630023) और अभिनव अनुसंधान समूह कार्यक्रम (81621002) के राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन द्वारा समर्थित है।

माउस प्रयोग प्रोटोकॉल Tsinghua विश्वविद्यालय के पशु देखभाल दिशा निर्देशों का पालन करता है
1. एकल टी कोशिकाओं के साथ Cantilver कार्यात्मककरण
<ol><li>माउस तिल्ली कोशिकाओं की तैयारी<ol>
<li>माउस बलिदान (8-16 उम्र के ?...

<ol>
	<li>Benoit, M., Gabriel, D., Gerisch, G., Gaub, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discrete+interactions+in+cell+adhesion+measured+by+single-molecule+force+spectroscopy.">Discrete interactions in cell adhesion measured by single-molecule force spectroscopy.</a> Nature Cell Biology. 2 (6), 313-317 (2000).</li><li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strong+adhesion+by+regulatory+T+cells+induces+dendritic+cell+cytoskeletal+polarization+and+contact-dependent+lethargy.">Strong adhesion by regulatory T cells induces dendritic cell cytoskeletal polarization and contact-dependent lethargy.</a> Journal of Experimental Medicine. 214 (2), 327-338 (2017).</li><li>Liu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanotransduction-modulated+fibrotic+microniches+reveal+the+contribution+of+angiogenesis+in+liver+fibrosis.">Mechanotransduction-modulated fibrotic microniches reveal the contribution of angiogenesis in liver fibrosis.</a> Nature Materials. 16 (12), 1252-1261 (2017).</li><li>Mu, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+phosphatidylinositol+4,5-bisphosphate+redistribution-based+sensing+mechanism+initiates+a+phagocytosis+programing.">A phosphatidylinositol 4,5-bisphosphate redistribution-based sensing mechanism initiates a phagocytosis programing.</a> Nature Communications. 9, (2018).</li><li>Qi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathology-targeted+cell+delivery+via+injectable+micro-scaffold+capsule+mediated+by+endogenous+TGase.">Pathology-targeted cell delivery via injectable micro-scaffold capsule mediated by endogenous TGase.</a> Biomaterials. 126, 1-9 (2017).</li><li>Muller, D. J., Helenius, J., Alsteens, D., Dufrene, Y. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Force+probing+surfaces+of+living+cells+to+molecular+resolution.">Force probing surfaces of living cells to molecular resolution.</a> Nature Chemical Biology. 5 (6), 383-390 (2009).</li><li>Muller, D. J., Dufrene, Y. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atomic+force+microscopy:+a+nanoscopic+window+on+the+cell+surface.">Atomic force microscopy: a nanoscopic window on the cell surface.</a> Trends in Cell Biology. 21 (8), 461-469 (2011).</li><li>Radotic, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atomic+force+microscopy+stiffness+tomography+on+living+Arabidopsis+thaliana+cells+reveals+the+mechanical+properties+of+surface+and+deep+cell-wall+layers+during+growth.">Atomic force microscopy stiffness tomography on living Arabidopsis thaliana cells reveals the mechanical properties of surface and deep cell-wall layers during growth.</a> Biophysics Journal. 103 (3), 386-394 (2012).</li><li>Kuznetsova, T. G., Starodubtseva, M. N., Yegorenkov, N. I., Chizhik, S. A., Zhdanov, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atomic+force+microscopy+probing+of+cell+elasticity.">Atomic force microscopy probing of cell elasticity.</a> Micron. 38 (8), 824-833 (2007).</li><li>Scheuring, S., Dufrene, Y. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atomic+force+microscopy:+probing+the+spatial+organization,+interactions+and+elasticity+of+microbial+cell+envelopes+at+molecular+resolution.">Atomic force microscopy: probing the spatial organization, interactions and elasticity of microbial cell envelopes at molecular resolution.</a> Molecular Microbiology. 75 (6), 1327-1336 (2010).</li><li>Berdyyeva, T. K., Woodworth, C. D., Sokolov, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+epithelial+cells+increase+their+rigidity+with+ageing+in+vitro:+direct+measurements.">Human epithelial cells increase their rigidity with ageing in vitro: direct measurements.</a> Physics in Medicine and Biology. 50 (1), 81-92 (2005).</li><li>Sokolov, I., Dokukin, M. E., Guz, N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Method+for+quantitative+measurements+of+the+elastic+modulus+of+biological+cells+in+AFM+indentation+experiments.">Method for quantitative measurements of the elastic modulus of biological cells in AFM indentation experiments.</a> Methods. 60 (2), 202-213 (2013).</li><li>Bozna, B. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binding+strength+and+dynamics+of+invariant+natural+killer+cell+T+cell+receptor/CD1d-glycosphingolipid+interaction+on+living+cells+by+single+molecule+force+spectroscopy.">Binding strength and dynamics of invariant natural killer cell T cell receptor/CD1d-glycosphingolipid interaction on living cells by single molecule force spectroscopy.</a> Journal of Biological Chemistry. 286 (18), 15973-15979 (2011).</li><li>Flach, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alum+interaction+with+dendritic+cell+membrane+lipids+is+essential+for+its+adjuvanticity.">Alum interaction with dendritic cell membrane lipids is essential for its adjuvanticity.</a> Nature Medicine. 17 (4), 479-487 (2011).</li><li>Ng, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Receptor-independent,+direct+membrane+binding+leads+to+cell-surface+lipid+sorting+and+Syk+kinase+activation+in+dendritic+cells.">Receptor-independent, direct membrane binding leads to cell-surface lipid sorting and Syk kinase activation in dendritic cells.</a> Immunity. 29 (5), 807-818 (2008).</li><li>Helenius, J., Heisenberg, C. P., Gaub, H. E., Muller, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+force+spectroscopy.">Single-cell force spectroscopy.</a> Journal of Cell Science. 121 (11), 1785-1791 (2008).</li><li>Litvinov, R. I., Shuman, H., Bennett, J. S., Weisel, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Binding+strength+and+activation+state+of+single+fibrinogen-integrin+pairs+on+living+cells.">Binding strength and activation state of single fibrinogen-integrin pairs on living cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99 (11), 7426-7431 (2002).</li><li>Evans, E., Ritchie, K., Merkel, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitive+Force+Technique+to+Probe+Molecular+Adhesion+and+Structural+Linkages+at+Biological+Interfaces.">Sensitive Force Technique to Probe Molecular Adhesion and Structural Linkages at Biological Interfaces.</a> Biophysics Journal. 68 (6), 2580-2587 (1995).</li><li>Lamprecht, C., Hinterdorfer, P., Ebner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+biosensing+atomic+force+microscopy+in+monitoring+drug+and+nanoparticle+delivery.">Applications of biosensing atomic force microscopy in monitoring drug and nanoparticle delivery.</a> Expert Opinion on Drug Delivery. 11 (8), 1237-1253 (2014).</li><li>Charras, G. T., Horton, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+cell+mechanotransduction+and+its+modulation+analyzed+by+atomic+force+microscope+indentation.">Single cell mechanotransduction and its modulation analyzed by atomic force microscope indentation.</a> Biophysics Journal. 82 (6), 2970-2981 (2002).</li><li>Sun, M. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+membrane+tethers+probed+by+atomic+force+microscopy.">Multiple membrane tethers probed by atomic force microscopy.</a> Biophysics Journal. 89 (6), 4320-4329 (2005).</li><li>Yan, J. C., Liu, B., Shi, Y., Qi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Class+II+MHC-independent+suppressive+adhesion+of+dendritic+cells+by+regulatory+T+cells+in+vivo.">Class II MHC-independent suppressive adhesion of dendritic cells by regulatory T cells in vivo.</a> Journal of Experimental Medicine. 214 (2), 319-326 (2017).</li><li>Hao, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phospholipase+C-mediated+hydrolysis+of+PIP2+releases+ERM+proteins+from+lymphocyte+membrane.">Phospholipase C-mediated hydrolysis of PIP2 releases ERM proteins from lymphocyte membrane.</a> Journal of Cell Biology. 184 (3), 451-462 (2009).</li><li>Rodriguez, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphocyte-T+Adhesion+to+Fibronectin+(Fn)+-+a+Possible+Mechanism+for+T-Cell+Accumulation+in+the+Rheumatoid+Joint.">Lymphocyte-T Adhesion to Fibronectin (Fn) - a Possible Mechanism for T-Cell Accumulation in the Rheumatoid Joint.</a> Clinical and Experimental Immunology. 89 (3), 439-445 (1992).</li><li>Kimura, A., Ersson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+Lymphocytes-T+by+Lectins+and+Carbohydrate-Oxidizing+Reagents+Viewed+as+an+Immunological+Recognition+of+Cell-Surface+Modifications+Seen+in+the+Context+of+Self+Major+Histocompatibility+Complex+Antigens.">Activation of Lymphocytes-T by Lectins and Carbohydrate-Oxidizing Reagents Viewed as an Immunological Recognition of Cell-Surface Modifications Seen in the Context of Self Major Histocompatibility Complex Antigens.</a> European Journal of Immunology. 11 (6), 475-483 (1981).</li><li>Miller, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Stimulation+of+Human+Lymphocyte-B+and+Lymphocyte-T+by+Various+Lectins.">The Stimulation of Human Lymphocyte-B and Lymphocyte-T by Various Lectins.</a> Immunobiology. 165 (2), 132-146 (1983).</li><li>Vitte, J., Pierres, A., Benoliel, A. M., Bongrand, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+quantification+of+the+modulation+of+interaction+between+cell-+or+surface-bound+LFA-1+and+ICAM-1.">Direct quantification of the modulation of interaction between cell- or surface-bound LFA-1 and ICAM-1.</a> Journal of Leukocyte Biology. 76 (3), 594-602 (2004).</li><li>Beaussart, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+the+forces+guiding+microbial+cell+adhesion+using+single-cell+force+spectroscopy.">Quantifying the forces guiding microbial cell adhesion using single-cell force spectroscopy.</a> Nature Protocols. 9 (5), 1049-1055 (2014).</li><li>Shu, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholesterol+Crystal-Mediated+Inflammation+Is+Driven+by+Plasma+Membrane+Destabilization.">Cholesterol Crystal-Mediated Inflammation Is Driven by Plasma Membrane Destabilization.</a> Frontiers in Immunology. 9, (2018).</li><li>Hosseini, B. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+synapse+formation+determines+interaction+forces+between+T+cells+and+antigen-presenting+cells+measured+by+atomic+force+microscopy.">Immune synapse formation determines interaction forces between T cells and antigen-presenting cells measured by atomic force microscopy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (42), 17852-17857 (2009).</li></ol>

AFM आधारित एकल कोशिका बल स्पेक्ट्रोस्कोपी जीवित कोशिकाओं के biophysical गुणों को संबोधित करने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण होने के लिए विकसित किया गया है. उन अनुप्रयोगों के लिए, cantilver ब्याज की कोशिकाओं पर विशिष्ट बा...

परमाणु बल माइक्रोस्कोपी (एएफएम), एक बहुमुखी उपकरण, सेल जीव विज्ञान अनुसंधान1,2,3,4,5में कई अनुप्रयोगों पाया गया है। इसकी उच्च-रिज़ॉल्यूशन इमेजिंग क्षमता के अलावा, मूल बल-प्रस्तावित सुविधा जीवित कोशिकाओं के जैवभौतिक गुणों की एकल-कोशिका स्तर6,7पर सीधे सिटू में जांच करने की अनुमति देती है। इनमें उपकोशिकीय संरचनाओं या यहां तक कि पूरी कोशिकाओं की कठोरता8,9,10,11,12, विशिष्ट लिगन्ड/ कोशिका पृष्ठ13पर एकल अणु स्तर तथा आसंजन बल ठोस कणों तथाकोशिकाओं के एकल-युग्मों के बीच अथवा दो कोशिकाओं 1,2,14,15के बीच होते हैं। बाद के दो अक्सर एकल कोशिका बल स्पेक्ट्रोस्कोपी के रूप में वर्गीकृत कर रहे हैं (SCFS)16. विभिन्न वसंत निरंतर के साथ आसानी से उपलब्ध cantilevers के कारण, AFM के लिए सुलभ बल रेंज बल्कि कुछ piconewtons से व्यापक है (pN) micronewtons के लिए ($N), जो पर्याप्त रूप से सेलुलर कुछ दसियों से बलों को शामिल घटनाओं की पूरी रेंज को शामिल किया गया पीएएन की, जैसे रिसेप्टर-आधारित एकल-अणु बंधन, एन एन के लिए, जैसे कि फैगोसाइटिक सेलुलर इवेंट15। इस बड़े गतिशील बल रेंज AFM ऑप्टिकल / चुंबकीय चिमटी और एक biomembrane बल जांच के रूप में अन्य बल-प्रोबेक्ट तकनीकों पर फायदेमंद बनाता है, के रूप में वे कमजोर बल माप के लिए अधिक उपयुक्त हैं, बल के साथ आम तौर पर कम से कम 200 pN17 , 18. इसके अतिरिक्त , एएफएम एक उच्च परिशुद्धता हेरफेर के रूप में कार्य कर सकता है ताकि एकल कोशिकाओं पर विभिन्न उत्तेजनाओं को एक spatiotempoly परिभाषित तरीके से4,19में वितरित किया जा सके . यह वास्तविक समय एकल सेल सक्रियण अध्ययन के लिए वांछनीय है. लाइव-सेल फ्लोरोसेंट इमेजिंग के साथ संयुक्त, विशिष्ट उत्तेजना के लिए बाद में सेलुलर प्रतिक्रिया समवर्ती नजर रखी जा सकती है, इस प्रकार AFM आधारित SCFS बेहद मजबूत बनाने के रूप में ऑप्टिकल इमेजिंग सेलुलर संकेतन की जांच करने के लिए एक व्यावहारिक उपकरण प्रदान. उदाहरण के लिए, एएफएम का उपयोग ऑस्टियोब्लास्ट्स20में कैल्शियम के क्षणिकों को प्राप्त करने के लिए आवश्यक उपभेदों को निर्धारित करने के लिए किया गया था। इस काम में, कैल्शियम यात्रियों को एक AFM टिप के साथ सुसंस्कृत ऑस्टियोब्लास्ट्स पर स्थानीय बलों के आवेदन के बाद कैल्शियम अनुपातइमेजिंग के माध्यम से फ्लोरोसेंट ट्रैक किया गया। हाल ही में, AFM कोलेजन फाइब्रिल्स जिस पर यकृत stellate कोशिकाओं (HSC) बड़े हो रहे थे और इस mechano-transduced HSC सक्रियण वास्तविक समय एक फ्लोरोसेंट एस आरसी biosensor, जिसका फॉस्फोरिलेशन द्वारा प्रतिनिधित्व के रूप में द्वारा निगरानी की गई थी खींच करने के लिए नियोजित किया गया था बायोसेंसर की प्रतिदीप्ति तीव्रता एचएससी सक्रियण3से संबंधित है।
AFM आधारित SCFS प्रयोगों में, AFM cantilevers के उचित functionalization सफल माप की ओर एक महत्वपूर्ण कदम है. चूंकि हमारे अनुसंधान ब्याज प्रतिरक्षा कोशिकाओं सक्रियण पर केंद्रित है, हम नियमित रूप से इस तरह के एक ठोस कणों कि phagocytosis को गति प्रदान कर सकते हैं और / , 15 और एकल टी कोशिकाओं है कि प्रतिजन पेश कोशिकाओं के साथ एक प्रतिरक्षा synapse फार्म कर सकते हैं, जैसे सक्रिय डेन्ड्रिटिक कोशिकाओं (डीसी)2. एकल ठोस कणों को आम तौर पर हवा के वातावरण में एक epoxy गोंद के माध्यम से एक cantilver करने के लिए युग्मित कर रहे हैं, जबकि एकल टी कोशिकाओं, उनके गैर चिपकने वाला प्रकृति के कारण, समाधान में एक bioसंगत गोंद के माध्यम से atilever करने के लिए functionalized हैं. यहाँ, हम cantilver संशोधन के इन दो प्रकार के प्रदर्शन और दो संबद्ध अनुप्रयोगों के रूप में अच्छी तरह से देने के लिए तरीकों का वर्णन. पहला आवेदन सेल यांत्रिकी दृष्टिकोण से नियामक टी कोशिकाओं के दमनकारी तंत्र को समझने के लिए एएफएम-एससीएफएस के साथ टी सेल/डीसी बातचीत की जांच करना है। दूसरा एक जीवित सेल फ्लोरोसेंट इमेजिंग के साथ एएफएम के संयोजन शामिल है वास्तविक समय में एक ठोस कण के लिए मैक्रोफेज की सेलुलर प्रतिक्रिया की निगरानी करने के लिए रिसेप्टर स्वतंत्र फॉस्फेटीलिनोसिटोल के आणविक तंत्र प्रकट 4,5-bisphosphate (PIP2)- मोसिन मध्ये फागोसाइटोसिस. इस प्रोटोकॉल का उद्देश्य इच्छुक शोधकर्ताओं के लिए एक संदर्भ रूपरेखा प्रदान करने के लिए डिजाइन और प्रतिरक्षा अनुसंधान के लिए AFM आधारित एकल सेल विश्लेषण के साथ अपने स्वयं के प्रयोगात्मक सेटिंग्स को लागू करने के लिए है.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Material</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#956;l pipette tip</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>104-Q</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 ml tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430791</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6 cm diameter culture dish</td>
			<td>NALGENE nunc</td>
			<td>150462</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well culture plate</td>
			<td>JET</td>
			<td>TCP011006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AFM Cantilever</td>
			<td>NanoWorld</td>
			<td>Arrow-TL1-50</td>
			<td>tipless cantilever</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-Mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>7604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biocompatible glue</td>
			<td>BD Cell-Tak</td>
			<td>354240</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD4+ T cell isolation Cocktail</td>
			<td>STEMCELL</td>
			<td>19852C.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DC2.4 cell line</td>
			<td>A gift from K. Rock (University of Massachusetts Medical School, Worcester, MA)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextran-coated magnetic particles</td>
			<td>STEMCELL</td>
			<td>SV30010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>GENEray</td>
			<td>Generay-E1101-500 ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epoxy</td>
			<td>ERGO</td>
			<td>7100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>twbio</td>
			<td>00019</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Ex Cell Bio</td>
			<td>FSP500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FcR blocker</td>
			<td>STEMCELL</td>
			<td>18731</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass coverslip</td>
			<td>local vender (Hai Men Lian Sheng)</td>
			<td>HX-E37</td>
			<td>24mm diameter, 0.17mm thinckness</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass slides</td>
			<td>JinTong department of laboratory and equipment management, Haimen&#160;</td>
			<td>N/A</td>
			<td>customized</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H2O2 (30%)</td>
			<td>Sino pharm</td>
			<td>10011218</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H2SO4</td>
			<td>Sino pharm</td>
			<td>80120892</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>51558</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnet</td>
			<td>STEMCELL</td>
			<td>18000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mesh nylon strainer</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>REF 352350</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moesin-EGFP</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
			<td>cloned in laboratory</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse CD25 Treg cell positive isolation kit</td>
			<td>STEMCELL</td>
			<td>18782</td>
			<td>Component: FcR Blocker,Regulatory T cell Positive Selection Cocktail, PE Selection Cocktail, Dextran RapidSpheres,</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse CD4+ Tcell isolation kit</td>
			<td>STEMCELL</td>
			<td>19852</td>
			<td>Component:CD4+T cell isolation Cocktail, Streptavidin RapidSpheres, Rat Serum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>Lanyi chemical products co., LTD&#65292; Beijing</td>
			<td>1310-73-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>P1022-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE selection cocktail</td>
			<td>STEMCELL</td>
			<td>18151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SV30010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PLC&#948;-PH-mCherry</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>36075</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystyrene microspheres 6.0&#956;m</td>
			<td>Polysciences</td>
			<td>07312-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>polystyrene round bottom tube</td>
			<td>BD Falcon</td>
			<td>352054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat serum</td>
			<td>STEMCELL</td>
			<td>13551</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RAW264.7</td>
			<td>&#160;ATCC</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human Interleukin-2</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>Peprotech, 200-02-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red blood cell lysis buffer</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>C3702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Regulatory T cell positive selection cocktail</td>
			<td>STEMCELL</td>
			<td>18782C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>Life</td>
			<td>C11875500BT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sample chamber</td>
			<td>Home made</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptavidin-coated magnetic particles</td>
			<td>STEMCELL</td>
			<td>50001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfection kit</td>
			<td>Clontech</td>
			<td>631318</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin 0.25% EDTA</td>
			<td>Life</td>
			<td>25200114</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tweezers</td>
			<td>JD</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20x objective NA 0.8</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>420650-9901</td>
			<td>Plan-Apochromat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atomic force microscope</td>
			<td>JPK</td>
			<td>cellHesion200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Beckman coulter</td>
			<td>Allegra X-12R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence imaging</td>
			<td>home-made objective-type total internal reflection fluorescence microscop based on a Zeiss microscope stand</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Humidified CO2 incubator</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>HERACELL 150i</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted light microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Observer A1 manual</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

functionalization of atomic force microscope cantilevers with single-t cells or single-particle for immunological single-cell force spectroscopy

परमाणु बल माइक्रोस्कोपी आधारित एकल सेल बल स्पेक्ट्रोस्कोपी (AFM-SCFS) जीवित कोशिकाओं के biophysical गुणों का अध्ययन करने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण है. इस तकनीक एक जीवित कोशिका झिल्ली पर बातचीत ताकत और गतिशीलता की जांच के लिए अनुमति देता है, कोशिकाओं के बीच उन सहित, रिसेप्टर और ligands, और कई अन्य विविधताओं के साथ. यह भी एक spatiotempoly नियंत्रित तरीके से एकल कोशिकाओं पर एक भौतिक या जैव रासायनिक उत्तेजना देने के लिए एक तंत्र के रूप में काम करता है, इस प्रकार विशिष्ट सेल सक्रियण और बाद में सेलुलर घटनाओं वास्तविक समय में नजर रखी जा करने की अनुमति जब लाइव सेल के साथ संयुक्त प्रतिदीप् ति इमेजिंग. उन AFM-SCFS माप में महत्वपूर्ण कदम AFM-cantilver functionalization है, या दूसरे शब्दों में, cantilever के लिए ब्याज का एक विषय संलग्न. यहाँ, हम प्रतिरक्षा अध्ययन के लिए क्रमशः एक टी सेल और एक एकल polystyrene मनका के साथ AFM cantilevers को संशोधित करने के लिए तरीकों मौजूद है. पूर्व एक bioसंगत गोंद है कि जोड़ों एक समाधान में एक फ्लैट cantilver की नोक करने के लिए एकल टी कोशिकाओं शामिल है, जबकि बाद हवा के वातावरण में एकल मनका आसंजन के लिए एक epoxy गोंद पर निर्भर करता है. दो प्रतिरक्षा अनुप्रयोगों प्रत्येक cantilver संशोधन के साथ जुड़े के रूप में अच्छी तरह से प्रदान की जाती हैं. यहाँ वर्णित विधियों को आसानी से विभिन्न प्रकार के सेल और ठोस कणों के लिए अनुकूलित किया जा सकता है।

चित्र 4क एक उपागम-प्रतिस्था चक्र में एकल-टी सेल और एकल-डीसी के बीच बाइंडिंग इंटरैक्शन से विशिष्ट बल-दूरी वक्रों को दर्शाता है। प्रकाश लाल वक्र विस्तार वक्र है और गहरे लाल एक वापस?...

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Functionalization of Atomic Force Microscope Cantilevers with Single-T Cells or Single-Particle for Immunological Single-Cell Force Spectroscopy

हम एक एकल टी सेल और प्रतिरक्षा अध्ययन के लिए मनका कण के साथ परमाणु बल माइक्रोस्कोप (एएफएम) cantilevers functionalize करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं। AFM द्वारा एकल जोड़ी टी सेल-डेन्ड्रिटिक सेल बाइंडिंग की जांच करने के लिए और फ्लोरोसेंट इमेजिंग के साथ एएफएम द्वारा एक ठोस कण के लिए मैक्रोफेज की वास्तविक समय सेलुलर प्रतिक्रिया की निगरानी करने के लिए प्रक्रियाओं दिखाए जाते हैं।

एकल-टी सेल या इम्यूनोलॉजिकल सिंगल-सेल फोर्स स्पेक्ट्रोस्कोपी के लिए सिंगल-पार्टिकल के साथ परमाणु बल माइक्रोस्कोप कैनटाइलवर्स का कार्यात्मककरण

Atomic force microscopy based single cell force spectroscopy (AFM-SCFS) is a powerful tool for studying biophysical properties of living cells. This ...

यह प्रोटोकॉल बताता है कि एकल टी कोशिकाओं और ठोस कणों का उपयोग करके एएफएम कैंटिलीवर्स को कार्यात्मक बनाने के लिए सबसे अच्छा कैसे है। इन युक्तियों का उपयोग क्रमशः एकल जोड़ी डेंड्रिटिक सेल-टी सेल इंटरैक्शन की जांच करने और चंचल आकार की सेलुलर प्रतिक्रियाओं की निगरानी करने के लिए किया जा सकता है। इस तकनीक का एक मुख्य लाभ यह है कि यह कैंटिलीवर के एकल टी सेल कार्यात्मकता के लिए एक जैव संगत गोंद का उपयोग करता है।यह गोंद यूकेरियोटिक कोशिकाओं के लिए निष्क्रिय है, इस प्रकार टी कोशिकाओं को उनके बेसलाइन सक्रियण चरण में रखते हैं। ये विधियां प्रतिरक्षा कोशिका सक्रियण और जटिल अंतरकोशिकीय घटनाओं, जैसे प्रतिरक्षा सिनेप्स गठन में अंतर्दृष्टि प्रदान करते हैं। तरीकों को सेल-सेल या सेल-सरफेस इंटरैक्शन से जुड़े अन्य सिस्टम्स में भी बढ़ाया जा सकता है ।किसी ऐसे व्यक्ति के लिए जो इस तकनीक के लिए नया है, यह सुनिश्चित करना महत्वपूर्ण है कि उपयोग करने से पहले टी कोशिकाएं अच्छी स्थिति में हैं और वे रातोंरात आईएल-2 के साथ पूर्वउपचारित हैं। इसके अतिरिक्त, जैव संगत गोंद का उपयोग करते समय, इसे अनावश्यक ऑक्सीकरण से बचाने के लिए जल्दी से आगे बढ़ें। इस प्रक्रिया को शुरू करने के लिए, पाठ प्रोटोकॉल में साथ-साथ पालन करके माइक्रोस्कोपी के लिए एकल टी कोशिकाओं को तैयार करें।फिर, DC2.4 कोशिकाओं के साथ वरीयता प्राप्त ग्लास कवरस्लिप तैयार करें, और 37 डिग्री सेल्सियस और 5% CO2 पर एक आर्द्रीकृत कक्ष में रात भर कोशिकाओं को इनक्यूबेट करें। पिरान्हा उपचार, प्लाज्मा सफाई, या यूवी-ओजोन सफाई का उपयोग करके कम वसंत स्थिर के साथ नरम, टिपलेस कैंटिलीवर्स को साफ करें। फिर, एएफएम स्कैनिंग हेड को साफ कैंटिलीवर माउंट करें।इसके बाद, एक साफ नमूना कक्ष तैयार करें, और इसे शुद्ध पानी से भरें। कैंटिलीवर की संवेदनशीलता प्राप्त करने के लिए पहले ग्लास सब्सट्रेट पर एक बल वक्र चलाकर पानी के समाधान में कैंटिलीवर को कैलिब्रेट करें। फिर, वसंत को स्थिर निकालने के लिए थर्मल शोर स्पेक्ट्रम रिकॉर्ड करें।जब कैंटिलीवर को ठीक से कैलिब्रेट किया जाए तो एएफएम स्कैनिंग हेड को घोल से हटा दें। घुड़सवार कैंटिलीवर को शुद्ध इथेनॉल की कुछ बूंदों से धोएं, और स्कैनिंग सिर पर कैंटिलीवर को सूखा रखें। 5% CO2 के साथ 37 डिग्री सेल्सियस के लिए एक जीवित सेल पर्यावरण बाड़े पहले गरम करना।फिर, नमूना कक्ष असेंबली में DC2.4 कोशिकाओं के साथ वरीयता प्राप्त ग्लास कवरलिप माउंट करें, और तुरंत कक्ष में मध्यम बी के 600 माइक्रोलीटर जोड़ें। एएफएम नमूना चरण पर पूरा विधानसभा रखें। नमूना कक्ष में मानव आईएल-2-इनक्यूबेटेड सीडी 4-पॉजिटिव टी कोशिकाओं को जोड़ें।जब तक लक्ष्यीकरण टी कोशिकाओं को पूरी तरह से कवरस्लिप के तल पर बस रहे हैं रुको, और फिर माइक्रोस्कोप के तहत देखने के क्षेत्र में कोशिकाओं को लाने के लिए । अब, एक पिपेट के साथ घुड़सवार कैंटिलीवर के अंत पर जैव संगत गोंद की दो-माइक्रोलीटर बूंद जोड़ें। एक बार बायो संगत गोंद कैंटिलीवर पर लागू किया गया है, बाद के चरणों को आसंजन को अधिकतम करने के लिए जितनी जल्दी हो सके समाप्त करने की आवश्यकता है।जल्दी से स्कैनिंग सिर को नमूना चरण पर रखें, समाधान में गोंद-लेपित कैंटिलीवर को विसर्जित करें। जब तक एक स्वास्थ्य टी सेल कैंटिलीवर की नोक के नीचे स्थित है नमूना चरण ले जाएँ। फिर, स्कैनिंग सिर को हिलाकर अपनी स्थिति को बारीक समायोजित करें।इसके बाद, कैंटिलीवर को मैन्युअल रूप से कम करें। 50-माइक्रोन चरण आकार के साथ शुरू करें, और फिर 10, पांच और दो और अंत में 0.5 माइक्रोन धीरे-धीरे कम हो जाते हैं, जैसा कि कैंटिलीवर छवि के तीखेपन से संकेत मिलता है। अब, स्टेपर मोटर्स की स्थिति को पकड़ें, और कैंटिलीवर टिप और सेल को बेहतर ी से संरेखित करने के लिए स्कैनिंग हेड की स्थिति को समायोजित करें।जब तक फर्म संपर्क लेजर की स्थिति के एक छोटे से विस्थापन द्वारा इंगित किया जाता है, ०.५ से १.५ नैनोन्यूटन के एक ठेठ बल के अनुरूप जारी रखें । संपर्क के 30 सेकंड के बाद, कैंटिलीवर को वापस लें। अगर सेल कैंटिलीवर के साथ चलता है तो अटैचमेंट सफल रहा।यदि नहीं, तो एक नए कैंटिलीवर पर स्विच करने से पहले आसंजन कदम को तीन बार तक दोहराएं। नमूना चरण और स्कैनिंग सिर को स्थानांतरित करके संलग्न टी सेल को DC2.4 सेल के ऊपर रखें। उचित मापदंडों की स्थापना के बाद, नमूने पर बल स्पेक्ट्रोस्कोपी चलाएं।जांच के एक नए दौर के लिए, एक नया, स्वच्छ कैंटिलीवर माउंट । इसे शुद्ध पानी में कैलिब्रेट करें, और फिर एक टी सेल-डेंड्रिटिक सेल जोड़ी पर वापस जाएं और स्कैन दोहराएं। नमूना कक्ष विधानसभा के लिए एक साफ ग्लास कवरलिप माउंट।कवरस्लिप के बाईं ओर, एक मनका समाधान की एक बूंद जोड़ें जिसे इथेनॉल में पतला किया गया है और इसमें छह-माइक्रोन व्यास पॉलीस्टीरिन मोती शामिल हैं। एक बार सॉल्वेंट वाष्पित हो जाता है, एक उज्ज्वल क्षेत्र माइक्रोस्कोप एक 20x उद्देश्य से लैस का उपयोग कर मोतियों की रिक्ति की जांच करें । सुनिश्चित करें कि व्यक्तिगत मोती अच्छी तरह से अलग हो गए हैं।फिर, एक माइक्रोपिपेट टिप या टूथपिक को एक अच्छी तरह से मिश्रित एपॉक्सी गोंद में डुबोएं, और गोंद की एक छोटी मात्रा को दाईं ओर लगातार कोमल स्पर्श के साथ तीन अलग-अलग स्थानों पर स्थानांतरित करें, लेकिन कवरस्लिप के केंद्र के करीब, जैसा कि यहां दिखाया गया है। इसके बाद, एएफएम स्कैनिंग सिर पर एक साफ, टिपलेस कैंटिलीवर माउंट करें, और वसंत को स्थिर प्राप्त करने के लिए इसे एक साफ सतह के साथ हवा में कैलिब्रेट करें। फिर, पिछले एपॉक्सी गोंद स्थान की बाईं सीमा पर कैंटिलीवर टिप की स्थिति रखें, और धीरे-धीरे स्टेपर मोटर्स पर छोटे कदम आकारों का उपयोग करके कैंटिलीवर को गोंद के करीब लाएं।एक बार संपर्क गोंद के साथ किया गया है, तेजी से AFM स्कैनिंग सिर पीछे ले जाकर कैंटिलीवर खींचो । इसे कांच के खिलाफ रगड़कर किसी भी अतिरिक्त गोंद को हटा दें, टिप के अंत में केवल थोड़ी मात्रा में गोंद छोड़ दें। अब, एक अच्छी तरह से अलग मनका के शीर्ष पर कैंटिलीवर टिप ले जाएँ।एक मनका धीरे से दृष्टिकोण, और के बारे में 10 सेकंड के लिए दो से पांच नैनोन्यूटन की सीमा में इसके साथ एक फर्म संपर्क बनाते हैं । संपर्क करते समय, टिप के अंत में मनका को स्थान देने के लिए ठीक-ठाक समायोजन का उपयोग करें। संपर्क के अंत में टिप को वापस लें।यदि मनका मूल फोकल विमान से गायब हो जाता है, तो एक सफल आसंजन घटना हुई है। अंत में, मनका-संशोधित कैंटिलीवर को सावधानी से डिमाउंट करें, और इसे पूरी तरह से इलाज करने के लिए एपॉक्सी के लिए रात भर एक कैंटिलीवर बॉक्स में स्टोर करें। यहां एक दृष्टिकोण-वापस लेने चक्र के दौरान एक ही टी सेल और एक एकल डेंड्रिटिक सेल के बीच बाध्यकारी बातचीत से विशिष्ट बल-दूरी घटता है।हल्के लाल वक्र विस्तार वक्र है, और गहरे लाल एक रिऐक्शन वक्र है। वक्र में न्यूनतम मूल्य टी सेल और डेंड्रिटिक सेल के बीच अधिकतम आसंजन बल का एक उपाय देता है, और वक्र के तहत क्षेत्र उन्हें अलग करने के लिए आवश्यक काम का प्रतिनिधित्व करता है। तेज और सौतेली गति टूटने की घटनाओं को सेल-सेल इंटरफेस पर मजबूत बाध्यकारी होने के कारण कोशिका की सतह से बाहर निकाला जा रहा है और फिर निरंतर खींचने के तहत सावधानी से तोड़ने के रूप में व्याख्या की जा सकती है।यहां, पारंपरिक टी सेल डेंड्रिटिक कोशिकाओं के लिए बाध्यकारी ग्रे में दिखाया गया है, और नियामक टी कोशिकाओं को बाध्यकारी डींड्रिटिक कोशिकाओं को नीले रंग में दिखाया गया है। एक पारंपरिक टी सेल और एक नियामक टी सेल के बीच आसंजन बलों एंटीजन पेश कोशिकाओं द्वारा प्रस्तुत पेप्टाइड एंटीजन पहचानता है, जबकि नियामक टी कोशिकाओं को दबाने टी कोशिकाओं है कि नीचे एक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के अंत की ओर पारंपरिक टी सेल मध्यस्थता प्रतिरक्षा बंद कर रहे हैं । फ्लोरोसेंटली लेबल, फैगोसाइटिक RAW264.7 सेल का यह योजनाबद्ध कोशिका को एक नग्न, छह-माइक्रोन व्यास, पॉलीस्टीरिन मनका के साथ संपर्क किया जा रहा है।मनका को उलझाने पर, झिल्ली PIP2 को संपर्क स्थल पर हल किया जाता है, बी के पास, जो तब मोसिन की झिल्ली भर्ती को प्रेरित करता है, जिसके परिणामस्वरूप एक फेगोसाइटिक घटना होती है। यहां वर्णित प्रक्रिया के अलावा, एएफएम-आधारित एकल-सेल बल स्पेक्ट्रोस्कोपी का उपयोग एकल-कोशिका स्तर पर वास्तविक समय में प्रतिरक्षा कोशिका सक्रियण का अध्ययन करने के लिए फ्लोरेसेंस इमेजिंग के साथ किया जा सकता है। संयुक्त फ्लोरेसेंस तकनीक, यह विधि वास्तविक समय में अधिक जटिल सेलुलर प्रक्रियाओं को संबोधित करने की अनुमति देती है, जैसे कि डेंड्रिटिक सेल और टी सेल जोड़ी के बीच प्रतिरक्षा सिनेप्स का गठन।

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Facilitating the Analysis of Immunological Data with Visual Analytic Techniques

Visual विश्लेषणात्मक तकनीकों के साथ रोग प्रतिरक्षण डेटा के विश्लेषण की सुविधा

Visual analytics (VA) has emerged as a new way to analyze large dataset through interactive visual display. We demonstrated the utility and the ...

Single-cell Analysis of Bacillus subtilis Biofilms Using Fluorescence Microscopy and Flow Cytometry

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एकल कक्ष का विश्लेषण बेसिलस subtilis प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी और फ्लो का उपयोग Biofilms

Biofilm formation is a general attribute to almost all bacteria 1-6. When bacteria form biofilms, cells are encased in extracellular matrix that is mostly ...

Quantitative High-throughput Single-cell Cytotoxicity Assay For T Cells

मात्रात्मक उच्च throughput टी कोशिकाओं के लिए एकल कक्ष cytotoxicity परख

Cancer immunotherapy can harness the specificity of  immune response to target and eliminate tumors. Adoptive cell therapy (ACT)  based on the adoptive ...

An Endothelial Planar Cell Model for Imaging Immunological Synapse Dynamics

इमेजिंग रोग प्रतिरक्षण Synapse गतिशीलता के लिए एक endothelial Planar सेल मॉडल

Adaptive immunity is regulated by dynamic interactions between T cells and antigen presenting cells (&#39;APCs&#39;) referred to as &#39;immunological ...

Cortical Actin Flow in T Cells Quantified by Spatio-temporal Image Correlation Spectroscopy of Structured Illumination Microscopy Data

संरचित रोशनी माइक्रोस्कोपी डेटा की spatio- लौकिक छवि सहसंबंध स्पेक्ट्रोस्कोपी द्वारा मात्रा टी कोशिकाओं में cortical एक्टिन प्रवाह

Filamentous-actin plays a crucial role in a majority of cell processes including motility and, in immune cells, the formation of a key cell-cell ...

Analysis of Lymphocyte Extravasation Using an In Vitro Model of the Human Blood-brain Barrier

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लिम्फोसाइट परिस्त्राव के विश्लेषण से एक का उपयोग करना<em&gt; इन विट्रो</em&gt; मानव रक्त मस्तिष्क बाधा के मॉडल

Lymphocyte extravasation into the central nervous system (CNS) is critical for immune surveillance. Disease-related alterations of lymphocyte ...

Induction of Cellular Differentiation and Single Cell Imaging of Vibrio parahaemolyticus Swimmer and Swarmer Cells

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सेलुलर भेदभाव और सिंगल सेल इमेजिंग का प्रेरण<em&gt; विब्रियो परहामोलीटिकस</emतैरने वाला और स्वांबर कक्ष

The ability to study the intracellular localization of proteins is essential for the understanding of many cellular processes. In turn, this requires the ...

Quantification of Efferocytosis by Single-cell Fluorescence Microscopy

सिंगल सेल प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी द्वारा Efferocytosis की ठहराव

Studying the regulation of efferocytosis requires methods that are able to accurately quantify the uptake of apoptotic cells and to probe the signaling ...

Opsonophagocytic Killing Assay to Assess Immunological Responses Against Bacterial Pathogens

बैक्टीरियल रोगजनकों के खिलाफ Immunological प्रतिक्रियाओं का आकलन करने के लिए Opsonophagocytic हत्या परख

A key aspect of the immune response to bacterial colonization of the host is phagocytosis. An opsonophagocytic killing assay (OPKA) is an experimental ...

Application of Consistent Massage-Like Perturbations on Mouse Calves and Monitoring the Resulting Intramuscular Pressure Changes

माउस Calves पर लगातार मालिश की तरह perturbations के आवेदन और परिणामी इंट्रामस्क्युलर दबाव परिवर्तन की निगरानी

Massage is generally recognized to be beneficial for relieving pain and inflammation. Although previous studies have reported anti-inflammatory effects of ...