1. Preparazione di strumenti e accessori
<ol><li>Arresti a punta/funnel
	<ol>
<li>Ottenere due tappi di spugna (il diametro dei tappi deve essere leggermente maggiore del diametro interno delle fiale utilizzate per trasferire le mosche). Fare un buco nei centri della spugna tappi con un ferro da saldatura elettrica riscaldato.</li>
		<li>Ottenere due punte pipette da 1 mL, tagliarne una a metà trasversalmente con un coltello affilato e scartare l'estremità appuntita. Quindi, tagliare 1,5 cm dell'estr...

<ol>
	<li>Jennings, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+&#8211;+a+versatile+model+in+biology+&#38;+medicine.">Drosophila &#8211; a versatile model in biology &#38; medicine.</a> Materials Today. 14 (5), 190-195 (2011).</li><li>JoVE Science Education Database. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biology I: yeast, Drosophila and C. elegans. An Introduction to Drosophila melanogaster. , (2018).</li><li>Ashburner, M., Roote, J., Sullivan, W., Ashburner, M., Hawley, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+Culture+of+Drosophila.">Laboratory Culture of Drosophila.</a> Drosophila Protocols. , (2000).</li><li>Greenspan, R. 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Alcuni strumenti fatti in casa per la gestione delle attività di base coinvolte nell'allevamento e nella sperimentazione della Drosophila sono descritti in questo documento. Questi strumenti sono semplici ma piuttosto efficaci. Praticamente, qualsiasi laboratorio può fare questi strumenti con facilità, e una ricerca o un laboratorio didattico non ha bisogno di trovare un'alternativa già pronta che forse non è disponibile a livello locale.
Il trasferimento del volo è la pratica p...

La mosca della frutta, La Drosophila melanogaster, è un organismo modello ampiamente utilizzato nella ricerca biologica e nell'educazione alla biologia per studiare una vasta gamma di argomenti1,2. I problemi di base di gestione della Drosophila sono il trasferimento di adulti dalla fiala alla fiala e l'immobilizzazione delle mosche in modo che siano più facili da gestire, come tutti gli adulti (ad eccezione di alcuni mutanti3,4) possono volare.
Convenzionalmente, un ricercatore trasferisce le mosche da una fiala all'altra tenendo due fiale bocca a bocca, toccando le mosche verso il basso o permettendo alle mosche di volare su un'altra fiala, quindi separando e ricollegando entrambe le fiale4. Ovviamente, questo richiede che l'apertura di due fiale con lo stesso diametro, ed è difficile controllare la quantità di mosche trasferite. Nel frattempo, questo richiede mani veloci per portare a termine il lavoro, e fuggire dalle mosche vaganti può causare problemi per il laboratorio o la classe. L'aggiunta di mosche extra virginiche o mosche maschili a una croce già preparata è un altro compito di routine negli esperimenti di Drosophila. Convenzionalmente, le mosche devono essere immobilizzate nella fiala trasversale prima dell'aggiunta di mosche extra.
La Drosophila adulta è regolarmente anestesizzata da etere, CO2o refrigerante5. Rispetto all'esposizione all'etere e al CO 2, l'agghiacciamento è l'agente più conveniente per immobilizzare la Drosophila adulta e la meno dannosa sia per le mosche che per i ricercatori (soprattutto i giovani studenti)6,7. Tuttavia, l'acqua che si condensa continuamente sulla superficie fredda o sulla camera bagnata le mosche. È difficile determinare i fenotipi delle mosche bagnate e possono facilmente danneggiarsi durante la manipolazione8,9. Questo ha mantenuto il metodo di raffreddamento di diventare più ampiamente accettato.
Strumenti per il trasferimento di mosca e un metodo per il raffreddamento a mosca sono stati descritti in precedenza10. Qui, viene riportata una tecnica di anestesia refrigerante modificata che è sicura, affidabile e fattibile per gli esperimenti di Drosophila. In questo documento sono descritti anche 1) metodi per uccidere gli adulti per il conteggio, lo smistamento o lo scarto, 2) dispositivi e protocolli per il risparmio di lavoro per la pulizia delle fiale di coltura del vetro e 3) una semplice gabbia per la raccolta delle uova. Gli strumenti facilmente progettati ed economici descritti qui possono essere utilizzati per affrontare i difficili problemi della movimentazione del volo, e questi metodi sono stati testati e si sono dimostrati robusti, affidabili e facili da gestire per ricercatori esperti e principianti.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>a pair of pliers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cordless drill driver</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>max speed: 500 rpm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>electric soldering iron</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>file</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>funnel</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>diameter of disk&#60;60mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ice box</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>insect pins</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>infrared thermometer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>HCIYET HT-830</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>long cuff rubber gloves</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mechanical pencils</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>medical gauze</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microcentrifuge tube</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>100 ul</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microwave oven</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>peri dish</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>internal diameter 60 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pipette tips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>1 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plastic film</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plastic peri dish</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>&#934;36 mm used to cover the empty vial</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>point tweezers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>protective work gloves</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>re-freezable hard icepacks</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>26.5&#215;14.5&#215;2.5 cm or larger</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rubber air blower</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>snap cutter</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>soft drink bottle</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>500 ml, internal diameter c.a. 65 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sponge stopper</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stainless steel sponges</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tube brush</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vial</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>&#934;34 mm &#215; 90 mm</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

simple homemade tools to handle fruit flies&#8212;drosophila melanogaster

La mosca della frutta, La Drosophila melanogaster, è ampiamente utilizzata sia nella ricerca biologica che nell'educazione biologica. La manipolazione delle mosche adulte è comune ma difficile nella pratica, poiché le mosche adulte volano. Dimostrata qui è come fare alcuni strumenti semplici ed economici per affrontare problemi difficili nella gestione della Drosophila. I fori nei tappi di schiuma sono fatti e punte pipette o imbuti vengono inseriti nei fori. Le mosche si spostano quindi solo in una direzione nell'assemblaggio della punta/imbuto della pipetta, consentendo un controllo efficiente del trasferimento di Drosophila adulti dentro o fuori da una fiala. I protocolli esistenti sono stati modificati per raffreddare le mosche raffreddando raffreddandoili raffreddando nel ghiaccio tritato e trasferendole su una superficie fredda e dura del gelato. Il gelato è coperto da un pezzo di garza medica che mantiene le mosche immobilizzate dall'acqua condensata quando esaminate sotto uno stereoscopio. Le mosche vengono infine eutanasia per il conteggio e lo smistamento o scartate mediante microonde. Una gabbia a forma di bottiglia è stata sviluppata anche per la raccolta delle uova, nonché un dispositivo di risparmio di manodopera e un protocollo di accompagnamento per la pulizia delle fiale di coltura del vetro.

I T- e F-stopper sono stati sviluppati come un insieme di strumenti semplici che possono essere adattati e utilizzati in qualsiasi attività di trasferimento di mosca. Trasferire mosche da una vecchia cultura in diverse culture fresche comporta la rimozione dei tappi delle fiale fresche, la loro sostituzione con i tappi F, quindi toccando le mosche nella vecchia fiala, rimuovendo rapidamente la spina e sostituendola con un T-stopper. Se il vecchio cibo è compatto, allora è importante ca...

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Simple Homemade Tools to Handle Fruit FliesÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â‚¬ÂDrosophila melanogaster

Descritto qui è l'uso di diversi strumenti fatti in casa per trasferire, raffreddare e uccidere la Drosophilaadulta , così come per pulire fiale di cultura del vetro e raccogliere le uova. Questi strumenti sono facili da realizzare e sono piuttosto efficienti nella gestione della Drosophila.

Semplici strumenti fatti in casa per gestire le mosche della frutta -Drosophila melanogaster

The fruit fly, Drosophila melanogaster, is widely used both in biological research and biology education. Handling adult flies is common but difficult in ...

Può essere difficile trasferire e immobilizzare i moscerini della frutta. Utilizzando queste tecniche e strumenti, puoi semplificare il trasferimento e l'immobilizzazione delle voli di routine. I materiali necessari per realizzare questi strumenti sono economici e facili da ottenere.Il laboratorio di consulenza e insegnamento o ricerca può renderli con facilità. Prima di iniziare questa procedura, utilizzare un ferro da stiro elettrico per fare un foro al centro di due tappi di spugna che sono più grandi del diametro interno delle fiale che verranno utilizzate per trasferire le mosche. Quindi, utilizzare un coltello affilato per tagliare una punta di micropipetta di un millimetro trasversalmente a metà e per tagliare 1,5 centimetri dalla punta di una seconda punta di micropipetta di un millimetro.Incollare i pezzi delle due punte della pipetta insieme a un adesivo per tutti gli scopi. Quindi inserire la punta di micropipetta allungata in un tappo di spugna e inserire un imbuto nell'altro tappo di spugna e chiudere le punte della pipetta con singoli tubi a microcentrifugo da 100 microliter. Per preparare gli aghi di microdisezione, selezionare i perni degli insetti che corrispondono ai diametri delle ricariche di piombo delle matite meccaniche ergonomiche e utilizzare un paio di pinze per tagliare le estremità con un occhio solo dei perni.Quindi filettare i tagli piatti e sostituire il piombo nelle matite con i perni modificati. Per preparare una custodia per la raccolta delle uova Drosophila, utilizzare un taglierino a scatto per tagliare una bottiglia di bevanda da 500 millilitri di plastica morbida circa 2/3 lungo la bottiglia e utilizzare del nastro adesivo per fissare una striscia di carta di carta intorno a un piatto di succo di mela di 60 millimetri di diametro. Per trasferire le mosche adulte tra le fiale, controllare attentamente il gambo dell'imbuto nel tappo dell'imbuto e la punta della pipetta nel tappo della punta.Toccare le mosche nella prima fiala e sostituire la spina con un tappo di punta. Collegare la seconda fiala con un tappo a imbuto e posizionare la prima fiala sulla seconda fiala in modo che l'estremità della pipetta-punta del tappo della punta sia inserita nell'apertura dell'imbuto del tappo dell'imbuto. Sbattere il bordo della prima fiala per consentire alle mosche di scivolare fuori dalla punta della pipetta e attraverso lo stelo dell'imbuto nella seconda fiala.Se un vecchio cibo nella prima fiala diventa meno compatto e cade quando il flaconcino viene invertito, invertire la seconda fiala sulla prima fiala e lasciare che le mosche strisciano nella seconda fiala. Quando il numero desiderato di mosche è stato trasferito, separare il tappo della punta dal tappo dell'imbuto e sostituire il tappo della punta con la spina originale. Quindi sostituire il tappo dell'imbuto nella seconda fiala con una spina appropriata.Per l'immobilizzazione della mosca della frutta adulta agghiacciante, posizionare una confezione di ghiaccio rigelabile, che è stata refrigerata a meno 80 gradi Celsius per almeno 24 ore, a temperatura ambiente, e raffreddare una fiala vuota nel ghiaccio tritato. 20 minuti dopo, inumidire leggermente un pezzo di garza medica non asettica, che è leggermente più piccola della confezione di ghiaccio refrigerata, con acqua corrente. Posizionare la garza sulla superficie della confezione di ghiaccio in modo che la garza si agghiacci strettamente sulla superficie della confezione.Quindi usa un pezzo di carta assorbente per pulire l'acqua dalla fiala refrigerata e vuota e trasferire le mosche adulte che devono essere immobilizzate nel flaconcino. Quando tutte le mosche sono state trasferite, coprire la fiala refrigerata e battere la fiala contro il ghiaccio schiacciato da due a tre volte per toccare tutte le mosche sul fondo del flaconcino. Le mosche diventeranno immediatamente immobilizzate.Riposizionare il flaconcino sul ghiaccio per un minuto prima di versare le mosche sulla garza che copre il pacchetto di ghiaccio. Quindi usa un pennello per stendere le mosche sovrapposte. Per esaminare le mosche immobilizzate al microscopio stereo, rimuovere le clip del palco dal microscopio sezionato e coprire il palco con un pezzo di pellicola di plastica.Posizionare la confezione di ghiaccio sul palco e accendere la fonte di luce fredda del microscopio, se disponibile. Quindi mettere a fuoco il microscopio stereo e spostare il pacchetto di ghiaccio fino a quando le mosche refrigerate possono essere viste chiaramente. Dopo aver visto le mosche, trasferisci ogni mosca, dall'ala, in una nuova fiala culturale.Per sacrificare le microonde, l'adulto vola per contare, smistare o scartare, trasferire le mosche adulte di interesse in una fiala vuota e coprire la fiala con una piastra di Petri. Quindi invertire il flaconcino all'interno di un forno a microonde e riscaldare il flaconcino a temperatura standard per 80 secondi. Le mosche morte scenderanno nella piastra di Petri.Indossando guanti da lavoro protettivi, versare le mosche su una scheda di carta bianca e trasferire la scheda al microscopio stereo per l'esame e / o il conteggio con gli aghi di microdisezione precedentemente preparati. Le mosche possono essere scartate alla fine dell'esame. Per il trasferimento della gabbia di raccolta delle uova a forma di bottiglia, inserire la bottiglia della gabbia di raccolta delle uova modificata nel piatto di succo di mela.Utilizzare una striscia di pellicola di paraffina per sigillare il giunto attorno ai due componenti. Quindi collegare la gabbia con un tappo a imbuto e invertire la fiala della coltura sul tappo. Quindi aggiungere le mosche alla gabbia, attraverso il tappo dell'imbuto, prima di tappare la gabbia con il tappo del flaconcino della coltura.Per cambiare il cibo, trasferire le mosche in una fiala vuota prima di sostituire il piatto di succo di mela con un nuovo piatto. Quindi trasferire le mosche dal flaconcino alla gabbia. Alla fine della raccolta delle uova, trasferisci le mosche in una fiala vuota prima di trasferire le mosche in diverse nuove fiale di coltura.Utilizzando questo metodo di anestetizzazione del freddo modificato, le mosche vengono mantenute immobili sulla confezione di ghiaccio e la garza medica che assorbe l'acqua di condensazione mantiene le mosche asciutte e consente di fenotipizzare o maneggiare facilmente le mosche refrigerate. A temperatura ambiente di 25 gradi Celsius, la temperatura della superficie di un pacchetto di ghiaccio freddo e duro aumenta drasticamente, da meno 19 gradi Celsius a meno due gradi Celsius, entro 20 minuti, raggiungendo rapidamente un altopiano sicuro sia per le mosche vecchie che per le mosche appena schiuse. Il riscaldamento dielettrico a microonde è un agente più veloce e conveniente per uccidere le mosche adulte rispetto all'iperetherizzazione o al congelamento profondo.Simile alle mosche eteree, le mosche a microonde estendono le ali ad angolo retto dal corpo. Generalmente, le carcasse di mosca uccise dalla microwaving hanno un peso significativamente più leggero di quelle uccise dall'etere o dal congelamento, ma il calore non distorce la forma del corpo e le carcasse non diventano croccanti o turgidi. Assicurati di spremere quanta più acqua possibile dalla garza inumidita prima di premerla sulla confezione di ghiaccio e assicurarti che la garza si agghiacci strettamente al ghiacciaio.È anche importante pulire l'acqua condensata dalla fiala refrigerata e vuota prima di trasferire le mosche nel flaconcino.

Research

JoVE Journal

Biology

Simple Homemade Tools to Handle Fruit Flies&#8212;Drosophila melanogaster

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