1. preparando ferramentas e acessórios
<ol><li>Pontas/rolhas de funil
	<ol>
<li>Obter duas fichas de esponja (o diâmetro das fichas deve ser ligeiramente maior do que o diâmetro interno dos frascos utilizados para transferir moscas). Faça um furo nos centros das fichas de esponja com um ferro de solda elétrico aquecido.</li>
		<li>Obter duas pontas de pipeta de 1 mL, cortar um ao meio transversalmente com uma faca afiada, e descartar a extremidade pontiaguda. Em seguida, corte 1,5 cm da extremidad...

<ol>
	<li>Jennings, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+&#8211;+a+versatile+model+in+biology+&#38;+medicine.">Drosophila &#8211; a versatile model in biology &#38; medicine.</a> Materials Today. 14 (5), 190-195 (2011).</li><li>JoVE Science Education Database. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biology I: yeast, Drosophila and C. elegans. An Introduction to Drosophila melanogaster. , (2018).</li><li>Ashburner, M., Roote, J., Sullivan, W., Ashburner, M., Hawley, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laboratory+Culture+of+Drosophila.">Laboratory Culture of Drosophila.</a> Drosophila Protocols. , (2000).</li><li>Greenspan, R. 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M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Drosophila: A Guide to Species Identification and Use. , (2006).</li><li>Artiss, T., Hughes, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taking+the+Headaches+Out+of+Anesthetizing+Drosophila:+A+Cheap+&#38;+Easy+Method+of+Constructing+Carbon+Dioxide+Staging.">Taking the Headaches Out of Anesthetizing Drosophila: A Cheap &#38; Easy Method of Constructing Carbon Dioxide Staging.</a> The American Biology Teacher. 69 (8), e77-e80 (2007).</li><li>Qu, W. -. H., Zhu, T. -. B., Yang, D. -. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Modified+Cooling+Method+and+its+Application+in+Drosophila+Experiments.">A Modified Cooling Method and its Application in Drosophila Experiments.</a> Journal Of Biological Education. 49 (3), 302-308 (2015).</li><li>. Egg-laying cages for drosophila Available from: <a target="_blank" href="https://www.kisker-biotech.com/frontoffice/product?produitId=0H-19-17">https://www.kisker-biotech.com/frontoffice/product?produitId=0H-19-17</a> (2018)</li><li>Roberts, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Drosophila: a practical approach. , (1998).</li><li>Tang, M., Peng, Q. -. F., Yang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+devices+for+Drosophila+experiments+(in+Chinese).">Two devices for Drosophila experiments (in Chinese).</a> Bulletin of Biology. 45 (11), 49-50 (2010).</li><li>Zhou, T. -. y., Gan, J., Yang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+sponge+plug+and+sponge+plug+based+fly+transferring+device+for+Drosophila+experiments+(in+Chinese).">Preparation of sponge plug and sponge plug based fly transferring device for Drosophila experiments (in Chinese).</a> Bulletin of Biology. 46 (6), 49-50 (2011).</li><li>Yang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Genetics laboratory investigation. , (2016).</li><li>Yang, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carnivory+in+the+larvae+of+Drosophila+melanogaster+and+other+Drosophila+species.">Carnivory in the larvae of Drosophila melanogaster and other Drosophila species.</a> Scientific Reports. 8, (2018).</li><li>Stocker, H., Gallant, P., Dahmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Getting+Started:+An+Overview+on+Raising+and+Handling+Drosophila.">Getting Started: An Overview on Raising and Handling Drosophila.</a> Drosophila: Methods and Protocols. , (2008).</li></ol>

Algumas ferramentas caseiras para lidar com atividades básicas envolvidas na criação e experimentação de Drosophila são descritas neste artigo. Estas ferramentas são simples, mas bastante eficaz. Virtualmente, qualquer laboratório pode fazer essas ferramentas com facilidade, e uma pesquisa ou um laboratório de ensino não precisa encontrar uma alternativa pronta que talvez não esteja disponível localmente.
Fly transferência é a prática mais comum e uma tarefa difícil em...

A mosca-das-frutas, Drosophila melanogaster, é um organismo modelo amplamente utilizado na educação biológica de pesquisa e biologia para estudar uma ampla gama de tópicos1,2. Os problemas básicos de manipulação de Drosophila são a transferência de adultos de frasco para injetáveis e imobilização das moscas para que eles são mais fáceis de manusear, como todos os adultos (exceto para alguns mutantes3,4) pode voar.
Convencionalmente, um pesquisador transfere moscas de um frasco para outro, segurando dois frascos boca-a-boca, batendo as moscas para baixo ou permitindo moscas para voar em outro frasco, em seguida, separando e reconectando ambos os frascos4. Obviamente, isso requer que a abertura de dois frascos com o mesmo diâmetro, e é difícil controlar a quantidade de moscas transferidas. Enquanto isso, isso requer mãos rápidas para conseguir o trabalho feito, e escapar moscas perdidas pode resultar em problemas para o laboratório ou sala de aula. Adicionar moscas virgens extras ou moscas masculinas a uma cruz já preparada é outra tarefa rotineira em experimentos de Drosophila . Convencionalmente, as moscas devem ser imobilizadas no frasco cruzado antes da adição de moscas extra.
A Drosophila adulta é rotineiramente anestesiada por éter, co2ou refrigeração5. Em comparação com a exposição ao éter e ao co2 , o resfriamento é o agente mais eficiente em termos de custo para imobilizar a Drosophila adulta e o menos prejudicial para as moscas e pesquisadores (especialmente estudantes jovens)6,7. No entanto, a água que se condensa continuamente sobre a superfície fria ou câmara molha as moscas. É difícil determinar os fenótipos de moscas molhadas, e podem facilmente tornar-se danificados durante a manipulação8,9. Isso manteve o método de refrigeração de se tornar mais amplamente aceito.
As ferramentas para o transferência da mosca e um método para refrigerar da mosca foram descritas previamente10. Nisto, uma técnica de refrigeração modificada da anestesia é relatada que é segura, de confiança, e praticável para experimentos de Drosophila . Também descrito neste artigo são 1) métodos para matar adultos para a contagem, triagem, ou descartando, 2) dispositivos e protocolos de poupança de trabalho para a limpeza de frascos de cultura de vidro, e 3) uma gaiola simples para a coleta de ovos. As ferramentas facilmente projetadas e rentáveis descritas aqui podem ser usadas para abordar as difíceis questões de manuseio de mosca, e esses métodos foram testados e são comprovados para serem robustos, confiáveis e fáceis de manusear para pesquisadores experientes e novatos.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>a pair of pliers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cordless drill driver</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>max speed: 500 rpm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>electric soldering iron</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>file</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>funnel</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>diameter of disk&#60;60mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ice box</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>insect pins</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>infrared thermometer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>HCIYET HT-830</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>long cuff rubber gloves</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mechanical pencils</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>medical gauze</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microcentrifuge tube</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>100 ul</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>microwave oven</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>peri dish</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>internal diameter 60 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pipette tips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>1 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plastic film</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plastic peri dish</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>&#934;36 mm used to cover the empty vial</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>point tweezers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>protective work gloves</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>re-freezable hard icepacks</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>26.5&#215;14.5&#215;2.5 cm or larger</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rubber air blower</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>snap cutter</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>soft drink bottle</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>500 ml, internal diameter c.a. 65 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sponge stopper</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stainless steel sponges</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tube brush</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vial</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>&#934;34 mm &#215; 90 mm</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

simple homemade tools to handle fruit flies&#8212;drosophila melanogaster

A mosca-das-frutas, Drosophila melanogaster, é amplamente utilizada tanto na pesquisa biológica quanto na educação em biologia. Manipulação de moscas adultas é comum, mas difícil na prática, como moscas adultas voam. Demonstrado aqui é como fazer algumas ferramentas simples e rentáveis para abordar problemas difíceis no manuseio da Drosophila. Furos em rolhas de espuma são feitas e pontas de pipeta ou funis são inseridos nos furos. As moscas movem-se então somente em uma direção na ponta da pipeta/assemblage do funil, permitindo o controle eficiente da transferência da Drosophila adulta dentro ou fora de um frasco. Protocolos existentes foram modificados para cool-anestesiando moscas por refrigeração em gelo esmagado e transferi-los para uma superfície fria, dura IcePack. O IcePack é coberto com uma parte de gaze médica que mantem moscas imobilizadas da água condensada quando examinado um stereomicroscope. As moscas são finalmente eutanasiado para a contagem e triagem ou descartados por microondulação. Uma gaiola em forma de garrafa também foi desenvolvida para a coleta de ovos, bem como um dispositivo de poupança de mão de obra e protocolo de acompanhamento para frascos de cultura de vidro de limpeza.

As rolhas T e F foram desenvolvidas como um conjunto de ferramentas simples que podem ser adaptadas e utilizadas em qualquer atividade de transferência de mosca. A transferência de moscas de uma cultura antiga em várias culturas frescas envolve a remoção dos plugues dos frascos frescos, substituindo-os por F-rolhas, em seguida, batendo as moscas no frasco velho, removendo rapidamente o plugue, e substituindo-o por um T-rolha. Se o alimento velho é compacto, a seguir é importante la...

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Simple Homemade Tools to Handle Fruit FliesÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â‚¬ÂDrosophila melanogaster

Descrito aqui é o uso de várias ferramentas caseiras para transferir, Chill, e matar a Drosophilaadulta, bem como para limpar frascos de cultura de vidro e coletar ovos. Estas ferramentas são fáceis de fazer e são bastante eficientes no manuseio da Drosophila.

Ferramentas caseiras simples para lidar com moscas de frutas —Drosophila melanogaster

The fruit fly, Drosophila melanogaster, is widely used both in biological research and biology education. Handling adult flies is common but difficult in ...

Pode ser desafiador transferir e imobilizar moscas frutíferas. Usando essas técnicas e ferramentas, você pode facilitar a transferência e a imobilização de moscas de rotina. Os materiais necessários para fazer essas ferramentas são baratos e fáceis de obter.O laboratório de consultoria e ensino ou pesquisa pode torná-los com facilidade. Antes de iniciar este procedimento, use um ferro de sodlering elétrico para fazer um furo nos centros de dois plugues de esponja que são maiores do que o diâmetro interno dos frascos que serão usados para transferir as moscas. Em seguida, use uma faca afiada para cortar uma ponta de micropipette de um milímetro transversalmente ao meio e cortar 1,5 centímetros da ponta de uma segunda ponta de micropipette de um milímetro.Cole as peças das duas pontas de pipeta junto com um adesivo para todos os fins. Em seguida, insira a ponta de micropipette alongada em um plugue de esponja, e insira um funil no outro plugue de esponja, e tampe as pontas da pipeta com tubos individuais de microcentrífa de 100 microliter. Para preparar as agulhas de microdisseção, selecione pinos de inseto que combinem com os diâmetros das recargas de chumbo de lápis mecânicos ergonômicos e use um alicate para cortar as extremidades de um olho só dos pinos.Em seguida, coloque os cortes plano e substitua o chumbo nos lápis pelos pinos modificados. Para preparar uma caixa de coleta de ovos Drosophila, use um cortador de encaixe para cortar uma garrafa de bebida de plástico macio de 500 mililitros aproximadamente 2/3 abaixo da garrafa, e use fita para fixar uma tira de papel de cartão em torno de uma placa de suco de maçã de 60 milímetros de diâmetro. Para transferir as moscas adultas entre frascos, verifique cuidadosamente a haste do funil na rolha do funil e a ponta da pipeta na rolha de ponta.Bata nas moscas no primeiro frasco e substitua o plugue por uma rolha de ponta. Conecte o segundo frasco com uma rolha de funil, e coloque o primeiro frasco sobre o segundo frasco de tal forma que a ponta da ponta da pipeta da rolha de ponta seja inserida na abertura do funil da rolha do funil. Bata a borda do primeiro frasco para permitir que as moscas deslizem para fora da ponta pipeta e através da haste do funil para o segundo frasco.Se qualquer alimento velho no primeiro frasco se tornar menos compacto e cair quando o frasco é invertido, inverta o segundo frasco sobre o primeiro frasco, e permita que as moscas es arrastem até o segundo frasco. Quando o número desejado de moscas tiver sido transferido, separe a rolha de ponta da rolha do funil e substitua a rolha de ponta pelo plugue original. Em seguida, substitua a rolha do funil no segundo frasco por um plugue apropriado.Para a imobilização da mosca de frutas adultas por frio, coloque uma bolsa de gelo recongelável, que foi resfriada a menos 80 graus Celsius por pelo menos 24 horas, em temperatura ambiente, e esfrie um frasco vazio em gelo esmagado. 20 minutos depois, umedeça ligeiramente um pedaço de gaze médica não asséptica, que é ligeiramente menor do que a bolsa de gelo gelada, com água corrente. Coloque a gaze sobre a superfície da bolsa de gelo para que a gaze se agarre perto da superfície da embalagem.Em seguida, use um pedaço de papel absorvente para limpar a água do frasco refrigerado e vazio, e transfira as moscas adultas que precisam ser imobilizadas para o frasco. Quando todas as moscas tiverem sido transferidas, cubra o frasco resfriado, e bata o frasco contra o gelo esmagado duas a três vezes para tocar todas as moscas até o fundo do frasco. As moscas se tornarão imediatamente imobilizadas.Coloque o frasco de volta no gelo por um minuto antes de despejar as moscas na gaze que cobre a bolsa de gelo. Em seguida, use um pincel para espalhar as moscas sobrepostas. Para examinar as moscas imobilizadas sob um microscópio estéreo, remova os clipes de palco do microscópio dissecando e cubra o palco com um pedaço de filme plástico.Coloque a bolsa de gelo no palco e ligue a fonte de luz fria do microscópio conforme disponível. Em seguida, concentre o microscópio estéreo, e mova a bolsa de gelo até que as moscas geladas possam ser vistas claramente. Depois de ver as moscas, transfira cada mosca, pela asa, para um novo frasco de cultura.Para sacrificar o micro-ondas, o adulto voa para contar, classificar ou descartar, transferir as moscas adultas de interesse para um frasco vazio, e cobrir o frasco com uma placa de Petri. Em seguida, inverta o frasco dentro de um micro-ondas, e aqueça o frasco em temperatura padrão por 80 segundos. As moscas mortas cairão na placa de Petri.Usando luvas de trabalho de proteção, despeje as moscas em um branco, cartão de papel, e transfira o cartão sob um microscópio estéreo para exame e/ou contando com as agulhas de microdisseção previamente preparadas. As moscas podem ser descartadas no final do exame. Para a transferência da gaiola de coleta de ovos em forma de garrafa, insira a garrafa de gaiola de coleta de ovos modificadas no prato de suco de maçã.Use uma tira de filme de parafina para selar a articulação em torno dos dois componentes. Em seguida, tampe a gaiola com uma rolha de funil, e inverta o frasco de cultura na rolha. Em seguida, adicione as moscas à gaiola, através da rolha do funil, antes de conectar a gaiola com a rolha de frasco de cultura.Para mudar a comida, transfira as moscas para um frasco vazio antes de substituir o prato de suco de maçã por um novo prato. Então transfira as moscas do frasco de volta para a gaiola. No final da coleta de ovos, transfira as moscas para um frasco vazio antes de transferir as moscas para vários frascos de cultura.Usando este método de anestesia de frio modificado, as moscas são mantidas imóveis na bolsa de gelo, e a gaze médica que absorve a água condensadora mantém as moscas secas e permite fenotismo ou manuseio das moscas geladas com facilidade. A temperatura ambiente de 25 graus Celsius, a temperatura da superfície de uma bolsa de gelo fria e dura aumenta drasticamente, de menos 19 graus Celsius para menos dois graus Celsius, dentro de 20 minutos, atingindo rapidamente um platô que é seguro para moscas velhas e recém-eclodidas. O aquecimento dielétrico de micro-ondas é um agente mais rápido e conveniente para matar moscas adultas em comparação com o excesso de etherização ou congelamento profundo.Semelhante às moscas superetherizadas, moscas micro-ondas estendem suas asas em ângulos retos do corpo. Geralmente, carcaças de moscas mortas por microwaving são significativamente mais leves em peso do que aquelas mortas por éter ou congelamento, mas o calor não distorce a forma do corpo, e as carcaças não se tornam nítidas ou turvas. Certifique-se de espremer o máximo de água possível da gaze umedeçada antes de pressioná-la sobre a bolsa de gelo, e para ter certeza de que a gaze se agarra perto da bolsa de gelo.Também é importante limpar a água condensada do frasco refrigerado e vazio antes de transferir moscas para o frasco.

Research

JoVE Journal

Biology

Simple Homemade Tools to Handle Fruit Flies&#8212;Drosophila melanogaster

Studying Aggression in Drosophila (fruit flies)

Studying Aggression in Drosophila fruit flies

Agressão a estudar em Drosophila (mosca da fruta)

Aggression is an innate behavior that evolved in the framework of defending or obtaining resources.  This complex social behavior is influenced by ...

Biologia

Using Micro-Electro-Mechanical Systems (MEMS) to Develop Diagnostic Tools

Using Micro-Electro-Mechanical Systems MEMS to Develop Diagnostic Tools

Usando Micro-Electro-Mechanical Systems (MEMS) para desenvolver ferramentas de diagnóstico

Homemade Site Directed Mutagenesis of Whole Plasmids

Mutagênese do site caseiros Direção de Plasmids Whole

Site directed mutagenesis of whole plasmids is a simple way to create slightly different variations of an original plasmid. With this method the cloned ...

Dissection of Oenocytes from Adult Drosophila melanogaster

Dissection of Oenocytes from Adult Drosophila melanogaster

Dissecção da Oenocytes de Adultos Drosophila melanogaster</em

In Drosophila melanogaster, as in other insects, a waxy layer on the outer surface of the cuticle, composed primarily of hydrocarbon compounds, provides ...

Insulin Injection and Hemolymph Extraction to Measure Insulin Sensitivity in Adult Drosophila melanogaster

Insulin Injection and Hemolymph Extraction to Measure Insulin Sensitivity in Adult Drosophila melanogaster

Injeção de insulina e Extração de hemolinfa para medir a sensibilidade à insulina em adultos Drosophila melanogaster</em

Conserved nutrient sensing mechanisms exist between mammal and fruit fly where peptides resembling mammalian insulin and glucagon, respectively function ...

Isolation and Biophysical Study of Fruit Cuticles

Isolamento e Estudo de Biofísica de Cutículas Frutas

The cuticle, a hydrophobic protective layer on the aerial parts of terrestrial plants, functions as a versatile defensive barrier to various biotic and ...

Fruit Volatile Analysis Using an Electronic Nose

Análise de Frutas volátil Usando um Nariz Eletrônico

Numerous and diverse physiological changes occur during fruit ripening, including the development of a specific volatile blend that characterizes fruit ...

Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster

Measurement of Lifespan in Drosophila melanogaster

Medição do Tempo de vida em<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Aging is a phenomenon that results in steady physiological deterioration in nearly all organisms in which it has been examined, leading to reduced ...

High-throughput Functional Screening using a Homemade Dual-glow Luciferase Assay

De alta capacidade de Triagem funcional usando um caseiro Dual-brilho ensaio de luciferase

We present a rapid and inexpensive high-throughput screening protocol to identify transcriptional regulators of alpha-synuclein, a gene associated with ...

Simple Method for Fluorescence DNA In Situ Hybridization to Squashed Chromosomes

Simple Method for Fluorescence DNA In Situ Hybridization to Squashed Chromosomes

Método simples para DNA de Fluorescência<em&gt; In Situ</em&gt; A hibridação com Cromossomos Squashed

DNA in situ hybridization (DNA ISH) is a commonly used method for mapping sequences to specific chromosome regions. This approach is particularly ...