Name: characterization of proteins by size-exclusion chromatography coupled to multi-angle light scattering (sec-mals)
Uploaded: 2019-06-20T13:30:00
Duration: 10 min
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हम सलाह और सहयोग के लिए डॉ Tsafi डेनिएली (Wolfson सेंटर एप्लाइड स्ट्रक्चरल बायोलॉजी, हिब्रू विश्वविद्यालय के लिए धन्यवाद। हम भी सहायता और विश्लेषणात्मक FPLC-MALS इस अध्ययन में उपयोग की प्रणाली की स्थापना के लिए डैनियल बायोटेक लिमिटेड (Rehovot, इसराइल) धन्यवाद।

डी एस Wyatt प्रौद्योगिकी निगम, जिसका MALS उत्पादों इस प्रोटोकॉल में उपयोग किया जाता है के एक कर्मचारी है. एटी Danyel बायोटेक, Wyatt MALS और AKTA FPLC उपकरणों के एक वितरक के एक कर्मचारी है.

एसईसी-एमएल्स प्रयोग ने प्रत्येक चोटी के मोलर द्रव्यमान और हाइड्रोडायनामिक आकारों के लिए मोनोमर, डाइमर और ट्रिमर का अच्छा पृथक्करण और मात्रात्मक परिणाम प्रदान किए हैं। यह बारी में स्पष्ट रूप से दिखाता है और प्रत्येक प्रजातियों वर्तमान की विशेषता है, साथ ही शुद्धता की मात्रा निर्धारित. आमतौर पर प्राप्त परिणाम 5% के भीतर करने के लिए सटीक और repeatable के भीतर कर रहे हैं 1-2%3,69. परिशुद्धता और repeatability के इस स्तर को आत्मविश्वास से मेगावाट में बंद हो सकता है कि प्रजातियों के बीच अंतर करने के लिए संभव बनाता है, जब तक वे एसईसी द्वारा अलग कर रहे हैं (एक ही चोटी के भीतर आंशिक रूप से ओवरलैप हो सकता है). प्रोटीन गुणवत्ता नियंत्रण और मौलिक जैव भौतिक लक्षण के लिए लाभ स्पष्ट कर रहे हैं.
कणों की अनुपस्थिति का सत्यापन संवेदनशील, दोहराने योग्य एसईसी-माल माप के लिए काफी महत्वपूर्ण है। कण चोटियों आम तौर पर तुलनीय यूवी या आरआई संकेतों के साथ संगत बड़े MALS संकेतों के रूप में दिखाई देते हैं। मोबाइल चरण और नमूना ध्यान से इस तरह के कणों को खत्म करने के लिए तैयार किया जाना चाहिए। HPLC ग्रेड अभिकर्मकों या बेहतर का उपयोग करें, मोबाइल चरण के निस्पंदन और कमजोर पड़ने बफर करने के लिए 0.1 - 0.2 m (पूर्व धोने फिल्टर कणों कि हमेशा सूखी झिल्ली पर मौजूद हैं को खत्म करने के लिए), अतिरिक्त स्वच्छ मोबाइल चरण की बोतलों और अन्य कांच के बर्तन के रखरखाव के लिए SEC-MALS और विस्तारित स्तंभ संतुलन प्रवाह के तहत (कणों और समुच्चय को हटाने के लिए जो प्रवाह बंद कर दिया गया था या एक स्तंभ उपयोग में नहीं था, जमा हो सकता है) सभी की सिफारिश की जाती है। नमूना सबसे छोटी pores आकार है कि ब्याज की सामग्री को दूर नहीं करता है, आमतौर पर 0.1 डिग्री से बड़ा नहीं है और, यदि संभव हो तो, 0.02 डिग्री करने के लिए फ़िल्टर किया जाना चाहिए। यदि फिल्टर जल्दी से रोकना, नमूना centrifuged हो सकता है, अवरोही pores आकार के चरणों में फ़िल्टर, और / जब सिस्टम लगातार उच्च गुणवत्ता, ताजा और फ़िल्टर किए गए मोबाइल चरण के साथ बनाए रखा जाता है, स्तंभ झटके रोका जाता है, नमूने साफ कर रहे हैं और स्तंभ का पालन नहीं करते, माप ऊपर उल्लिखित कण शोर प्रदर्शन नहीं होगा और प्रदान करेगा उच्च गुणवत्ता वाले डेटा.
MALS प्रोटीन के लिए ठेठ एसईसी बफ़र्स के लिए नास्तिक है; पीबीएस के अलावा कई अन्य बफर सिस्टम जुदाई और स्थिरता का अनुकूलन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, excipients71की एक किस्म सहित. MALS भी विशिष्ट स्तंभ है, जो इष्टतम जुदाई और वसूली के लिए चुना जाना चाहिए करने के लिए नास्तिक है. विश्लेषण के बारे में excipients के लिए प्राथमिक चिंताओं अपवर्तक सूचकांक में महत्वपूर्ण परिवर्तन कर रहे हैं, विशिष्ट अपवर्तक सूचकांक वृद्धि dn/dcके संशोधन के लिए अग्रणी, और excipients कि 280 एनएम अवशोषित जब यूवी विश्लेषण की जरूरत है. उदाहरण के लिए, arginine एक आम एकत्रीकरण कम excipient है कि नाटकीय रूप से एक ठेठ प्रोटीन के dn/dc को प्रभावित कर सकते हैं, यहां तक कि यह नकारात्मक शासन में लाने (नकारात्मक dn/dc के साथ एक प्रोटीन अभी भी एसईसी-MALS द्वारा विश्लेषण किया जा सकता है अगर dn / डीसी अनुभवजन्य रूप से निर्धारित किया जाता है, लेकिन यदि dn/dc - 0 प्रोटीन द्वारा बिखरे हुए प्रकाश की तीव्रता शून्य हो जाएगा और मेगावाट विश्लेषण असंभव हो जाएगा). प्रोटीन के लिए dn/dc मूल्यों के विषय पर बड़े पैमाने पर चर्चा की है झाओ एट अल.35 जहां यह दिखाया गया है कि मानक जलीय बफ़र्स के लिए, असंशोधित प्रोटीन के विशाल बहुमत मानक मूल्य के 2-3% के भीतर गिर (0.185 या 0.186 एमएल/g पर $ 660 एनएम) यद्यपि 10 केडी से नीचे के प्रोटीन अधिक परिवर्तनशील होते हैं और कुछ प्रजातियां ऐसी प्रजातियां होती हैं जो 0ण्21 एमएल/ग्राम तक बढ़ सकती हैं।
प्रस्तुत डेटा में बीएसए मोनोमर और डिमर चोटियों भर में मेगावाट प्रोफाइल 2% या उससे कम के भीतर करने के लिए काफी सजातीय थे, मोनोdisperse प्रजातियों का संकेत. एक चोटी भर में गैर-यूनिफ़ॉर्म मेगावाट मूल्यों विषमता या अनुचित विश्लेषण से उत्पन्न हो सकता है। विशेष रूप से, एक बीएसए मेगावाट प्रोफ़ाइल है कि अवतल है ('मुस्कान') या उत्तल ('grimace') सही ढंग से बैंड-ब्रॉडिंग सुधार लागू नहीं करने से परिणाम हो सकता है. अन्य प्रोटीन के लिए, एक उत्तल प्रोफ़ाइल भी monomers और oligomers के बीच गतिशील संतुलन से उत्पन्न हो सकता है, जहां monomer के अनुपात oligomer के लिए और इसलिए स्पष्ट मेगावाट मूल्य चोटी एकाग्रता पर निर्भर करता है (BSA इस व्यवहार का प्रदर्शन नहीं करता है और अक्सर प्रयोग किया जाता है सही बैंड व्यापक मापदंडों को सत्यापित करने के लिए एक नियंत्रण नमूने के रूप में). एक मेगावाट प्रोफ़ाइल जो अग्रणी से पीछे के किनारे तक भिन्न होती है और नमूना सांद्रता के साथ परिवर्तित नहीं होती है, आणविक वजन प्रजातियों के वितरण की विशिष्ट है जो एसईसी द्वारा आंशिक रूप से हल की जाती हैं। गतिशील संतुलन आसानी से दूसरे से अलग है प्रोटीन की विभिन्न कुल मात्राओं का इंजेक्शन लगाकर जाहिरा तौर पर असमांग वितरण के स्रोत- वितरण गतिशील संतुलन के साथ भिन्न होगा, लेकिन एक निश्चित वितरण या गलत बैंड-ब्रॉडिंग सुधार के साथ नहीं।
ऊपर वर्णित बाधाओं को देखते हुए, एसईसी-माल ्स विभिन्न कार्यों के लिए उपयुक्त नहीं है। यह कच्चे तेल के नमूनों के विश्लेषण के लिए उपयुक्त नहीं है; नमूने मानक आत्मीयता और चमकाने के तरीकों से अच्छी तरह से शुद्ध किया जाना चाहिए. यह पर्याप्त सटीकता या म्यूटेंट और एक ही या बहुत करीब जन के साथ एक प्रोटीन या maAb के वेरिएंट की पहचान करने के लिए शक्ति को हल करने की शक्ति नहीं है, और analytes कि से या एक एसईसी स्तंभ पर अलग नहीं है के साथ इस्तेमाल नहीं किया जा सकता है, हालांकि हाल ही में यह दिखाया गया है कि आयन-exchang ई या रिवर्स चरण क्रोमैटोग्राफी को MALS के साथ जोड़ा जा सकता है ताकि वे प्रजातियों को अलग और विशेषता में शामिल किया जा सके जो एसईसी72,73,74द्वारा हल नहीं की गई हैं . जहां प्रोटीन की मात्रा गंभीर रूप से विवश कर रहे हैं, एसईसी-MALS संभव नहीं हो सकता है क्योंकि यह आम तौर पर की आवश्यकता होती है 10 - 200 $g3 और भी अधिक एक FPLC प्रणाली द्वारा आवश्यक हो सकता है ट्यूबिंग आंतरिक व्यास से अधिक के साथ 0.25 मिमी; हालांकि, छोटी मात्रा UHPLC-SEC-MALS द्वारा विश्लेषण किया जा सकता है. मोबाइल चरण के परिचय पर समग्र अत्यधिक अस्थिर प्रोटीन एसईसी-MALS विश्लेषण के लिए उपयुक्त नहीं हैं, हालांकि ऑफ-लाइन गतिशील प्रकाश प्रकीर्णन का उपयोग करके बफर अनुकूलन इस समस्याकोदूर कर सकता है।
अतिरिक्त प्रयास है कि एसईसी-MALS जरूरत पर जोर देता है के बावजूद, यह प्रोटीन अनुसंधान के लिए अमूल्य है और बड़े पैमाने पर शैक्षिक और biopharmaceutical समुदायों द्वारा प्रयोग किया जाता है. ऊपर प्रोटोकॉल में वर्णित मोनोमर, ओलिगोमर और समुच्चय की विशेषता के अलावा, एसईसी-मेल्स ग्लाइकोप्रोटीन जैसे संशोधित प्रोटीन की विशेषता की विशेषता कर सकते हैं (प्रोटीन और ग्लिकन घटकों के मेगावाट को व्यक्तिगत रूप से निर्धारित करना), सर्फैक्टेंट- या लिपिड-सोलुबिलाइज़्ड झिल्ली प्रोटीन (व्यक्तिगत रूप से प्रोटीन और solubilizer घटकों के मेगावाट का निर्धारण), प्रोटीन विधानसभाओं जैसे वायरस जैसे कण, प्रोटीन प्रोटीन और प्रोटीन-न्यूक्लिक एसिड कॉम्प्लेक्स, पॉलीसैकेराइड्स, प्रोटीन-पॉलीसैकराइड संयुग्मी, पेप्टाइड्स और कई अन्य जैव मैक्रो अणु।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:770px;" width="770">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:266px;">AKTA pure</td>
			<td style="width:140px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:123px;">29-0182-26</td>
			<td style="width:242px;">fast protein liquid chromatograph (FPLC)&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:266px;">AKTA UNICORN</td>
			<td style="width:140px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>FPLC control software</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:266px;">ASTRA</td>
			<td style="width:140px;">Wyatt Technology</td>
			<td></td>
			<td>MALS data acquisition and analysis software</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:266px;">Bovine serum albumine (purity &#62;97%)</td>
			<td style="width:140px;">Sigma&#160;</td>
			<td>A1900</td>
			<td>analyte</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:266px;">DAWN or miniDAWN</td>
			<td style="width:140px;">Wyatt Technology</td>
			<td style="width:123px;">WH2 or WTREOS</td>
			<td>multi-angle light scattering (MALS) detector</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:266px;">Increase 200 10/300</td>
			<td style="width:140px;">GE Healthcare</td>
			<td></td>
			<td>size exclusion column, 200 &#197; pores, 10 mm i.d., 300 mm length</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:266px;">Optilab</td>
			<td style="width:140px;">Wyatt Technology</td>
			<td style="width:123px;">WTREX</td>
			<td>differential refractive index (RI) detector</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:266px;">Sodium chloride NaCl</td>
			<td style="width:140px;">Sigma&#160;</td>
			<td style="width:123px;">71382</td>
			<td>HPLC grade NaCl</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:266px;">Stericup bottle top filter polyether sulfone 0.1 &#181;m 1000 mL&#160;</td>
			<td style="width:140px;">Millipore</td>
			<td style="width:123px;">SCVPU11RE</td>
			<td>mobile phase filter</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:266px;">Whatman Anotop 10 syringe filter 0.02 &#181;m</td>
			<td style="width:140px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:123px;">6809-1002</td>
			<td>sample filter</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:266px;">Whatman Anotop 10 syringe-tip filter, 0.1 &#181;m pore, 10 mm diameter</td>
			<td style="width:140px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:123px;">6809-1012</td>
			<td>sample filter</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:266px;">Whatman Anotop 25 syringe filter 0.1 &#181;m</td>
			<td style="width:140px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:123px;">6809-2012</td>
			<td>mobile phase filter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:266px;">WyattQELS</td>
			<td style="width:140px;">Wyatt Technology</td>
			<td>WIQ</td>
			<td>dynamic light scattering detector</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

characterization of proteins by size-exclusion chromatography coupled to multi-angle light scattering (sec-mals)

विश्लेषणात्मक आकार-निष्कर्ष क्रोमैटोग्राफी (एसईसी), आमतौर पर समाधान में प्रोटीन और प्रोटीन-प्रोटीन परिसरों के आणविक वजन के निर्धारण के लिए उपयोग किया जाता है, एक सापेक्ष तकनीक है जो आणविक अनुमान लगाने के लिए एनेलाइट की एल्यूशन मात्रा पर निर्भर करती है वजन. जब प्रोटीन गोलाकार नहीं है या गैर-आदर्श स्तंभ बातचीत से गुजरता है, प्रोटीन मानकों के आधार पर अंशांकन वक्र अमान्य है, और elution मात्रा से निर्धारित आणविक वजन गलत है. बहु-कोण प्रकाश प्रकीर्णन (MALS) एक निरपेक्ष तकनीक है जो मूल भौतिक समीकरणों से विलयन में एनालाइट के आण्विक भार को निर्धारित करती है। विश्लेषण के लिए MALS के साथ जुदाई के लिए एसईसी का संयोजन मोनोमर, देशी ओलिगोमर्स या समुच्चय, और विषमपरिसरों सहित एक या अधिक प्रोटीन प्रजातियों के समाधान की विशेषता के लिए एक बहुमुखी, विश्वसनीय साधन का गठन करता है। चूंकि माप प्रत्येक elution मात्रा में किया जाता है, एसईसी-MALS निर्धारित कर सकते हैं अगर एक eluting चोटी सजातीय या विषम है और गतिशील संतुलन बनाम एक निश्चित आणविक वजन वितरण के बीच अंतर. ग्लाइकोप्रोटीन या लिपोप्रोटीन जैसे संशोधित प्रोटीन का विश्लेषण, या डिटर्जेंट-सोलुबिलाइज्ड झिल्ली प्रोटीन जैसे संयुग्मी का विश्लेषण भी संभव है। इसलिए, एसईसी-MALS प्रोटीन केमिस्ट के लिए एक महत्वपूर्ण उपकरण है जो जैविक या जैव-प्रौद्योगिकी अनुसंधान के लिए उत्पादित अणुओं के जैवभौतिक गुणों और समाधान व्यवहार की पुष्टि करनी चाहिए। एसईसी-MALS के लिए यह प्रोटोकॉल आणविक वजन और शुद्ध प्रोटीन monomers और समुच्चय के आकार का विश्लेषण करती है। प्राप्त डेटा आगे एसईसी-MALS विश्लेषण के लिए एक नींव के रूप में सेवा करता है जिसमें परिसर, ग्लाइकोप्रोटीन और सर्फैक्टेंट-बाउंड झिल्ली प्रोटीन शामिल हैं।

चित्र 1क, बी से पता चलता है कि बीएसए के तीन अल्पगोलक रूप: मोनोमर, डिमर और ट्रिमर, मोनोमर और डाइमर के आधारभूत संकल्प के साथ 200 ] छिद्र स्तंभ पर अच्छी तरह से अलग थे, जबकि चित्र 2क से पता चलता है कि 75 ] छिद्र स्तंभ पर पृथक्करण नहीं था अच्छा मोनोमर-डिमर संकल्प प्राप्त करना। बाद के उदाहरण के लिए एक "गरीब" परिणाम वर्णन शामिल किया गया था; दो कॉलम के लिए जुदाई में इन मतभेदों, वास्तव में, निर्माता की कहा जुदाई पर्वतमाला के अनुसार उम्मीद की जा सकती है. ट्रिमर डिमर से पूरी तरह से अलग नहीं है और उच्च ओलिगोमर ट्रिमर और एक दूसरे से अलग नहीं हैं। चित्रा 2ख क्रोमेटोग्राम भर में मौजूद कणों के साथ शोर प्रकाश प्रकीर्णन संकेत का एक उदाहरण है, जो सटीक मेगावाट निर्धारण को रोकता है।
इसके बाद हम चित्र 1खपर ध्यान केंद्रित करते हैं। मोनोमर, जो 13.8 एमएल पर पेश किया गया है, में 64.1 के भार-औसत मोलर द्रव्यमान मड ड को दर्शाता है - 0.4 केडीए का निर्धारण MALS तथा हाइड्रोडायनामिक त्रिज्या Rh द्वारा 3.54 - 0.01 nm. ये परिणाम बीएसए के अनुक्रम द्रव्यमान और ज्ञात हाइड्रोडायनामिक त्रिज्या, 66.4 केडीए और 3.5 एनएम क्रमशः68के साथ अनुबंध कर रहे हैं, एसईसी-मेल्स की सामान्य सटीकता के भीतर, 5%3,69. डिमर, जो 12 एमएल पर लगाया गया था, ने 127 के एमडब्ल्यू मूल्य का प्रदर्शन किया - 1 केडीए ने MALS द्वारा निर्धारित किया गया था-जैसा कि अपेक्षित था, दो बार मोनोमर की जो प्रयोगात्मक परिशुद्धता के भीतर और 5.68 के आरएच के भीतर निर्धारित किया गया था । Trimer चोटी भी 11 एमएल पर मनाया गया था एमडब्ल्यू के साथ 194 - 9 kDa MALS द्वारा निर्धारित, तीन बार है कि मोनोमर के प्रयोगात्मक परिशुद्धता के भीतर करने के लिए, के रूप में की उम्मीद है. आर डीएलएस सिग्नल की कम तीव्रता के कारण ट्रिमर का ज निर्धारित नहीं किया जा सका।
मोनोमर शिखर पर परिकलित मोलर द्रव्यमान बिंदु 2-5% के भीतर एक समान होते हैं, जो एकरूपता को दर्शाते हैं। यह 38-50 केडीए की सीमा में मोलर द्रव्यमान के साथ एक पीछे कंधे खोजने के लिए असामान्य नहीं है, बीएसए टुकड़े70के लिए इसी . द्वि-अंगी तथा त्रिमकी शिखरों पर मोलर द्रव्यमान बिंदु एक समान नहीं होते हैं, जो विषमता का सूचक होते हैं। डिमर पीक डिमर पीक के निशान के कारण कुछ विषम है जो डिमर पीक में खून बह रहा है, और ट्रिमर पीक खराब-समाधान उच्च ओलिगोमर के सह-एल्यूशन के कारण विषम है।
मोनोमर चोटी के सिग्नल-टू-शोर स्तर सभी तीन संकेतों में काफी स्वीकार्य है, 100:1 से अधिक, के रूप में संकेत करने के लिए शोर के साथ dimer चोटी है 40:1. प्रोटीन चोटियों से परे क्रोमैटोग्राम क्षेत्रों फ्लैट हैं, एलएस ट्रेस में कुल बहिष्करण (void) मात्रा के पास कण के कारण एक चोटी के अपवाद के साथ और एक (नकारात्मक) नमक चोटी और एक (नकारात्मक) dRI ट्रेस में हवा चोटी भंग, कुल permeation के पास आयतन. चित्र 1कमें इन बातों का उल्लेख किया गया है .
शुद्धता के स्तर की गणना एसईसी-MALS प्रयोग में भी की जा सकती है: रिपोर्ट में एकमेरिक शिखर का द्रव्यमान अंश एकात्मक रूप की शुद्धता के प्रतिशत का प्रतिनिधित्व करता है। बीएसए मोनोमर के लिए, परिकलित शुद्धता 88% है।
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59615/59615fig1.jpg"> चित्र 1 : एक 200 pores आकार बहिष्कार स्तंभ का उपयोग कर गोजातीय सीरम एल्बुमिन (BSA) के एसईसी-MALS विश्लेषण. क्रोमैटोग्राम निशान मोनोमर चोटी के लिए सामान्यीकृत और स्पष्टता के लिए ऑफसेट कर रहे हैं। (ए) सामान्य कलाकृतियों, जिनकी उपेक्षा की जा सकती है, उनकी ओर संकेत दिया जाता है, जिसमें प्रकाश प्रकीर्णन संकेत की शुरुआत के निकट एक कण शिखर तथा अपवर्तक सूचकांक संकेत में कुल परमीशन आयतन के निकट लवण तथा भंग वायु चोटियों शामिल हैं। (बी) क्रोमैटोग्राम उत्कृष्ट मोनोमर-डिमर-ट्रिमर पृथक्करण और प्रकाश प्रकीर्णन संकेत उच्च संकेत-से-शोर दर्शाती है। मोनोमर और डाइमर मेगावाट मूल्य उच्च एकरूपता प्रदर्शित करते हैं। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59615/59615fig1large.jpg" target="_blank">कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59615/59615fig2.jpg"> चित्र 2 : कम गुणवत्ता वाले एसईसी-MALS विश्लेषण के उदाहरण। क्रोमैटोग्राम निशान मोनोमर चोटी के लिए सामान्यीकृत और स्पष्टता के लिए ऑफसेट कर रहे हैं। (क) 75 ] छिद्र आकार बहिष्करण स्तंभ पर अपर्याप्त पृथक्करण; 8 - 9 मिनट के बीच एक कण चोटी अच्छी तरह से प्रोटीन से अलग नहीं है। (ख) अपर्याप्त संकेत-से-शोर अनुपात और प्रोटीन के निकट व्यापक कण प्रकाश प्रकीर्णन (एलएस) संकेत में स्पष्ट होते हैं। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59615/59615fig2large.jpg" target="_blank">कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>

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Characterization of Proteins by Size-Exclusion Chromatography Coupled to Multi-Angle Light Scattering SEC-MALS

यह प्रोटोकॉल समाधान में प्रोटीन और परिसरों की पूर्ण विशेषता के लिए बहु कोण प्रकाश प्रकीर्णन (एसईसी-MALS) के साथ आकार बहिष्करण क्रोमैटोग्राफी के संयोजन का वर्णन करता है। एसईसी-MALS आणविक वजन और शुद्ध प्रोटीन, देशी oligomers, विषमपरिसरों और ग्लाइकोप्रोटीन के रूप में संशोधित प्रोटीन के आकार को निर्धारित करता है।

आकार-निष्कर्ष क्रोमैटोग्राफी द्वारा प्रोटीन की विशेषता मल्टी-एंगल लाइट स्कैटरिंग (एसईसी-मेल्स) के लिए जोड़ा गया

Analytical size-exclusion chromatography (SEC), commonly used for the determination of the molecular weight of proteins and protein-protein complexes in ...

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Characterization of Proteins by Size-Exclusion Chromatography Coupled to Multi-Angle Light Scattering (SEC-MALS)

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Biological small angle X-ray scattering (BioSAXS) is a powerful technique in molecular and structural biology used to determine solution structure, ...

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