Name: a mouse model of vascularized heterotopic spleen transplantation for studying spleen cell biology and transplant immunity
Uploaded: 2019-06-11T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model of Vascularized Heterotopic Spleen Transplantation for Studying Spleen Cell Biology and Transplant Immunity at JoVE.com

ويشكر المؤلفون المركز الشامل لزراعه الكليات في جامعه نورث وسترن وبرنامج مدرسه فاينبرغ للبحوث الطبية لدعم الموارد والتمويل. علي وجه التحديد, تدفق الخلوي والانسجه الخدمات التي قدمتها جامعه نورث وسترن التدفق الخلوي الاساسيه مرفق والماوس الانسجه ومختبر التنميط, علي التوالي, ويدعم كل منها من قبل P30 CA060553 منحت لروبرت H مركز لوري الشامل للسرطان. نشكر السيد نيت اسبارزا علي تصحيح هذه المخطوطة.

وقد أجريت جميع الإجراءات واستخدام الحيوانية في هذه الدراسة وفقا للبروتوكولات التي وافقت عليها اللجنة الداخلية للرعاية الحيوانية والاستخدام في جامعه نورث وسترن (IACUC). في هذه الدراسة ، واستخدمت 8 إلى 10 الأسبوع الذكور CD 45.2 و CD 45.1 الفئران (سواء علي الخلفية BALB/c ، من مختبر جاكسون) والمتبرعين الطح...

<ol>
	<li>Cesta, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+structure,+function,+and+histology+of+the+spleen.">Normal structure, function, and histology of the spleen.</a> Toxicologic Pathology. 34 (5), 455-465 (2006).</li><li>Mebius, R. E., Kraal, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+function+of+the+spleen.">Structure and function of the spleen.</a> Nature Reviews Immunology. 5 (8), 606-616 (2005).</li><li>Misiakos, E. P., Bagias, G., Liakakos, T., Machairas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laparoscopic+splenectomy:+Current+concepts.">Laparoscopic splenectomy: Current concepts.</a> World Journal of Gastrointestinal Endoscopy. 9 (9), 428-437 (2017).</li><li>Kristinsson, S. Y., Gridley, G., Hoover, R. N., Check, D., Landgren, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+risks+after+splenectomy+among+8,149+cancer-free+American+veterans:+a+cohort+study+with+up+to+27+years+follow-up.">Long-term risks after splenectomy among 8,149 cancer-free American veterans: a cohort study with up to 27 years follow-up.</a> Haematologica. 99 (2), 392-398 (2014).</li><li>Thai, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+complications+of+splenectomy+in+adult+immune+thrombocytopenia.">Long-term complications of splenectomy in adult immune thrombocytopenia.</a> Medicine (Baltimore). 95 (48), e5098 (2016).</li><li>Sinwar, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overwhelming+post+splenectomy+infection+syndrome+-+review+study.">Overwhelming post splenectomy infection syndrome - review study.</a> International Journal of Surgery. 12 (12), 1314-1316 (2014).</li><li>Rorholt, M., Ghanima, W., Farkas, D. K., Norgaard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risk+of+cardiovascular+events+and+pulmonary+hypertension+following+splenectomy+-+a+Danish+population-based+cohort+study+from+1996-2012.">Risk of cardiovascular events and pulmonary hypertension following splenectomy - a Danish population-based cohort study from 1996-2012.</a> Haematologica. 102 (8), 1333-1341 (2017).</li><li>Crary, S. E., Buchanan, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+complications+after+splenectomy+for+hematologic+disorders.">Vascular complications after splenectomy for hematologic disorders.</a> Blood. 114 (14), 2861-2868 (2009).</li><li>Di Carlo, I., Pulvirenti, E., Toro, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+technique+for+spleen+autotransplantation.">A new technique for spleen autotransplantation.</a> Surgical Innovation. 19 (2), 156-161 (2012).</li><li>Holdsworth, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+the+spleen+and+splenic+autotransplantation.">Regeneration of the spleen and splenic autotransplantation.</a> British Journal of Surgery. 78 (3), 270-278 (1991).</li><li>Tzoracoleftherakis, E., Alivizatos, V., Kalfarentzos, F., Androulakis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complications+of+splenic+tissue+reimplantation.">Complications of splenic tissue reimplantation.</a> Annals of the Royal College of Surgeons of England. 73 (2), 83-86 (1991).</li><li>Kato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+the+spleen:+effect+of+splenic+allograft+in+human+multivisceral+transplantation.">Transplantation of the spleen: effect of splenic allograft in human multivisceral transplantation.</a> Annals of Surgery. 246 (3), 436-444 (2007).</li><li>Aronovich, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correction+of+hemophilia+as+a+proof+of+concept+for+treatment+of+monogenic+diseases+by+fetal+spleen+transplantation.">Correction of hemophilia as a proof of concept for treatment of monogenic diseases by fetal spleen transplantation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (50), 19075-19080 (2006).</li><li>Cohen, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Splenosis;+review+and+report+of+subcutaneous+splenic+implant.">Splenosis; review and report of subcutaneous splenic implant.</a> Archives of surgery. 69 (6), 777-784 (1954).</li><li>Coburn, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spleen+transplantation+in+the+rat.">Spleen transplantation in the rat.</a> Transplantation. 8 (1), 86-88 (1969).</li><li>Lee, S., Orloff, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+for+splenic+transplantation+in+the+rat.">A technique for splenic transplantation in the rat.</a> Surgery. 65 (3), 436-439 (1969).</li><li>Swirski, F. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+splenic+reservoir+monocytes+and+their+deployment+to+inflammatory+sites.">Identification of splenic reservoir monocytes and their deployment to inflammatory sites.</a> Science. 325 (5940), 612-616 (2009).</li><li>Hsiao, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spleen-derived+classical+monocytes+mediate+lung+ischemia-reperfusion+injury+through+IL-1beta.">Spleen-derived classical monocytes mediate lung ischemia-reperfusion injury through IL-1beta.</a> Journal of Clinical Investigation. 128 (7), 2833-2847 (2018).</li><li>Robbins, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extramedullary+hematopoiesis+generates+Ly-6C(high)+monocytes+that+infiltrate+atherosclerotic+lesions.">Extramedullary hematopoiesis generates Ly-6C(high) monocytes that infiltrate atherosclerotic lesions.</a> Circulation. 125 (2), 364-374 (2012).</li><li>Kim, E., Yang, J., Beltran, C. D., Cho, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+spleen-derived+monocytes/macrophages+in+acute+ischemic+brain+injury.">Role of spleen-derived monocytes/macrophages in acute ischemic brain injury.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 34 (8), 1411-1419 (2014).</li><li>Bronte, V., Pittet, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+spleen+in+local+and+systemic+regulation+of+immunity.">The spleen in local and systemic regulation of immunity.</a> Immunity. 39 (5), 806-818 (2013).</li><li>Wang, N. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recruitment+of+macrophages+from+the+spleen+contributes+to+myocardial+fibrosis+and+hypertension+induced+by+angiotensin+II.">Recruitment of macrophages from the spleen contributes to myocardial fibrosis and hypertension induced by angiotensin II.</a> Journal of the Renin-Angiotensin-Aldosterone System. 18 (2), 1470320317706653 (2017).</li><li>Tian, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+spleen+contributes+importantly+to+myocardial+infarct+exacerbation+during+post-ischemic+reperfusion+in+mice+via+signaling+between+cardiac+HMGB1+and+splenic+RAGE.">The spleen contributes importantly to myocardial infarct exacerbation during post-ischemic reperfusion in mice via signaling between cardiac HMGB1 and splenic RAGE.</a> Basic Research in Cardiology. 111 (6), 62 (2016).</li><li>Jang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutting+Edge:+Check+Your+Mice-A+Point+Mutation+in+the+Ncr1+Locus+Identified+in+CD45.1+Congenic+Mice+with+Consequences+in+Mouse+Susceptibility+to+Infection.">Cutting Edge: Check Your Mice-A Point Mutation in the Ncr1 Locus Identified in CD45.1 Congenic Mice with Consequences in Mouse Susceptibility to Infection.</a> Journal of Immunology. 200 (6), 1982-1987 (2018).</li></ol>

أدله دامغه تشير إلى ان الخلايا الاحاديه المستمدة من الطحال تلعب دورا هاما في العمليات التهابيه العقيمة مثل تصلب الشرايين19, الدماغ نقص التروية الحاد20 أو أصابه الرئة18, وكذلك عضله القلب I/R أصابه أعاده عرض21,22,<sup class="...

الطحال هو أكبر جهاز لمفاوي ثانوي في الجسم ، وهو أمر بالغ الاهميه في الجهاز المناعي والاجهزه التي تكون الدم. وتضطلع بمهامها في المقام الأول من قبل اثنين من المقصورات المتميزة شكليا, اللب الأحمر واللب الأبيض1. اللب الأحمر هو العمل ثلاثي الابعاد من الجيوب الوريدية والحبال الطحال التي تتكون من ألياف شبكي ، خلايا شبكي ، والضامة المرتبطة بها. هذا الهيكل الفريد يسمح للب الأحمر بالعمل كفلتر دم فعال يزيل المواد الاجنبيه والكريات الحمر القديمة أو التالفة. ويشمل اللب الأبيض بصيلات, منطقه هامشيه, والبيريارتيريولار اللمفاوية (الزملاء) وهو موقع مهم لمحاصره مستضد ومعالجه, اللمفاوية الموجه, التحول, انتشار, ونضوج2. ومع ذلك, وقد اعتبر الطحال عاده كجهاز استغناء عن لان الاجهزه اللمفاوية الأخرى, مثل الغدد الليمفاوية, يمكن أيضا تنفيذ بعض وظائفها وفقدان الطحال لا يؤدي عاده إلى الموت. ولذلك تم اجراء استئصال الطحال علي نطاق واسع كطريقه علاجيه للمرضي الذين يعانون من إصابات الطحال أو امراض الدم الحميدة3. ومع ذلك ، يواجه المرضي الذين يعانون من استئصال الطحال عددا من المضاعفات علي المدى الطويل. التهابات البكتيرية هي أفضل المضاعفات المعترف بها من استئصال الطحال4,5. في الاونه الاخيره ، تم الاعتراف بالإنتان الساحق بعد استئصال الطحال كمضاعفات مكثفه لاستئصال الطحال المرتبطة بارتفاع معدل الوفاات6. وعلاوة علي ذلك ، تشير الدراسات الوبائية الاخيره إلى ان استئصال الطحال قد تترافق مع حدوث امراض القلب والاوعيه الدموية ، مما يوحي بان المزيد من الوظائف الفسيولوجية من الطحال لا تزال لاستكشاف7،8.
وقد استخدمت كل من زرع الطحال الذاتي وزراعه الطحال في العيادة. حاليا ، الطحال زرع الذاتي من خلال زرع الأجزاء من الانسجه الطحال في الحقائب التي تم إنشاؤها في مينوتوم أكبر يعتبر الامكانيه الوحيدة للحفاظ علي وظيفة الطحال بعد الصدمة استئصال الطحال9،10. ومع ذلك ، فان فعاليه هذه الجراحة قابله للنقاش كمضاعفات ما بعد الجراحة مثل نخر العقيم للانسجه الطحال وانسداد الأمعاء الدقيقة بسبب التصاقات بعد العملية الجراحية يمكن ان تحدث11. وتشارك زراعه الطحال في زرع متعدد الأحشاء12. تشير الادله السريرية من الزرع المتعدد الأحشاء إلى ان زراعه الطحال قد تلعب دورا وقائيا في رفض الكسب غير المزروع بالأمعاء الصغيرة دون التسبب في مرض الطعم مقابل المضيف (GVHD)12. ومع ذلك ، لا تزال الأدبيات المتعلقة بالتاثير المفيد لزراعه الطحال كمكون للزرع المتعدد الأحشاء محدوده ولا تزال أليات الاساسيه التي يتعين تحديدها. وفي ال2006 ، ذكر ياير راتنر وآخرون ان زرع انسجه الطحال الجنينية التي لا توجد بها خلايا تائية للفئران يمكن ان يشفي الاصابه بالشلل النصفي A ، وهو مرض وراثي دون ان يسبب GVHD13، ودعم ان زرع الطحال يحمل وعدا علاجيا في بعض الامراض. لذلك ، هناك حاجه لمزيد من التحقيقات حول الإمكانيات العلاجية لزراعه الطحال.
النماذج الحيوانية من زرع الطحال هي قيمه لاستكشاف وظيفة غير مقدره من الخلايا المناعية المستمدة من الطحال في تطور المرض وكذلك لاختبار التاثير العلاجي المحتمل لزرع الطحال. تم توثيق نماذج زراعه الطحال الكاملة التجريبية منذ أوائل القرن العشرين ، كما استعرضها كوهين14. في 1969, coburn ريتشارد j. ولي et al. مفصله تقنيه زرع الطحال في الفئران15,16. وفي الاونه الاخيره ، وصفت الدوامات FK وآخرون نموذج الماوس لزرع الطحال17. بالمقارنة مع نماذج الفئران ، نماذج الفار من زرع الطحال هي أكثر جاذبيه بسبب العديد من المزايا المتاصله. علي سبيل المثال ، من خلال استخدام نموذج الماوس ، يمكننا الوصول إلى مجموعه واسعه من الكواشف غير متوفرة لتلك النماذج الفئران. وعلاوة علي ذلك ، باستخدام الفئران الجينية (علي سبيل المثال ، الفئران مع CD 45.1/CD 45.2 الخلفية) ، وزرع الطحال synجينه يجعل من الممكن لتتبع مصير ، وطول العمر ، ووظيفة الطحال18. استنادا إلى العمل الذي تقوم به الدوامات FK وآخرون17، انشانا كذلك هذا البروتوكول المبسط والمعزز لزرع الطحال في الفئران. يجمع البروتوكول الموصوف أدناه بين الموثوقيه والجدوى بطريقه موحده ويمكن استخدامه كاداه لدراسة بيولوجيا الطحال ومناعة الزرع.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Wyeth</td>
			<td>206205-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Lloyd Laboratories</td>
			<td>139-236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin solution</td>
			<td>Abraxis Pharmaceutical Products</td>
			<td>504031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection grade normal saline</td>
			<td>Hospira Inc.</td>
			<td>NDC 0409-4888-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Ethanol</td>
			<td>Pharmco Products Inc.</td>
			<td>111000140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ThermoCare Small Animal ICU System</td>
			<td>Thermocare, Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adson Forceps</td>
			<td>Roboz Surgical Instruments</td>
			<td>RS-5230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Derf Needle Holder</td>
			<td>Roboz Surgical Instruments</td>
			<td>RS-7822</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extra Fine Micro Dissecting Scissors</td>
			<td>Roboz Surgical Instruments</td>
			<td>RS-5881</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-clip</td>
			<td>Roboz Surgical Instruments</td>
			<td>RS-5420</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7-0 silk</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>SUT-S 103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>11-0 nylon on 4-mm (3/8) needle</td>
			<td>Sharpoint DR4</td>
			<td>AK-2119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD45.2 antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>553772</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD45.1 antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>553776</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD11b antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>557657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms B220 antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>553089</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms Ly6C antibody</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>48-5932-80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms Ly6G antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>561236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms F4/80 antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>565614</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD11c antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>558079</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD3 antibody</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>48-0032-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD4 antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>552051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD8 antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>563786</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD&#8482; Fixable Violet Dead Cell Stain Kit</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>L34955</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a mouse model of vascularized heterotopic spleen transplantation for studying spleen cell biology and transplant immunity

الطحال هو الجهاز اللمفاوية فريدة من نوعها التي تلعب دورا حاسما في التوازن من الجهاز المناعي والاجهزه التي تكون الدم. المرضي الذين خضعوا لاستئصال الطحال بغض السبب عن الأسباب المسببة هي عرضه لتطوير الساحقة بعد استئصال الطحال العدوى والخبرة زيادة مخاطر التخثر الوريدي العميق والأورام الخبيثة. في الاونه الاخيره ، أشارت الدراسات الوبائية إلى ان استئصال الطحال قد يكون مرتبطا بحدوث امراض القلب والاوعيه الدموية ، مما يوحي بان الوظائف الفسيولوجية لطحال لم يتم الاعتراف بها بعد بشكل كامل. هنا ، ونحن نقدم نموذج الماوس من الاوعيه الدموية غير المتجانسة زرع الطحال ، والتي ليس فقط يمكن استخدامها لدراسة وظيفة والنشاط السلوكي لمجموعات فرعيه الخلايا المناعية الطحال في العمليات البيولوجية المختلفة ، ولكن أيضا يمكن ان تكون أداه قويه لاختبار الإمكانيات العلاجية لزراعه الطحال في بعض الامراض. وتشمل الخطوات الجراحية الرئيسية لهذا النموذج حصاد الطحال المتبرع, أزاله الطحال الأصلي المتلقي, والطحال الترقيع التطعيم. باستخدام سلالات الماوس المنشا (علي سبيل المثال ، الفئران مع CD 45.1/CD 45.2 الخلفيات) ، لاحظنا انه بعد الزرع المتزامن ، هاجرت كل من الخلايا الليمفاوية المستمدة من المانحين والخلية النخاعية من الكسب غير المشروع في وقت لاحق من اليوم السابق للجراحة 1 ، يصاحب ذلك تدفق أنواع متعددة من الخلايا المتلقية ، التالي توليد الوهم فريدة من نوعها.  وعلي الرغم من التقنيات الصعبة نسبيا ، يمكن تنفيذ هذا الاجراء مع معدل النجاح > 90 ٪. هذا النموذج يسمح تتبع مصير ، وطول العمر ، ووظيفة من الطحال خلال حاله مستقره وفي وضع المرض بعد زرع الطحال ، التالي تقديم فرصه كبيره لاكتشاف دور متميز للخلايا المناعية المستمدة من الطحال في مختلف العمليات المرض.

يمكن إكمال الاجراء بأكمله من زراعه الطحال الفئران في غضون 90 دقيقه من قبل الجراحين المجهريين ذوي الخبرة. وقد أجريت لدينا مختبر أكثر من 100 زرع الطحال في الفئران. معدل النجاح هو أكثر من 90 ٪ ، كما هو محدد من قبل بقاء كل من الماوس المتلقي والطعم الطحال ليوم ما بعد الجراحة (POD) 1 أو ...

Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model of Vascularized Heterotopic Spleen Transplantation for Studying Spleen Cell Biology and Transplant Immunity at JoVE.com

A Mouse Model of Vascularized Heterotopic Spleen Transplantation for Studying Spleen Cell Biology and Transplant Immunity

نموذج الماوس من الاوعيه الدموية غير المتجانسة زرع الطحال لدراسة البيولوجيا خليه الطحال وزرع المناعة

هذا البروتوكول تفاصيل الخطوات الجراحية للنموذج الماوس من الاوعيه الدموية غير المتجانسة زرع الطحال ، وهو نموذج صعبه من الناحية الفنية التي يمكن ان تكون بمثابه أداه قويه في دراسة مصير وطول العمر من خلايا الطحال ، أليات الطحال متميزة الخلايا السكانية في تطور المرض ، وزرع المناعة.

The spleen is a unique lymphoid organ that plays a critical role in the homeostasis of the immune and hematopoietic systems. Patients that have undergone ...

نموذج الماوس من زرع الطحال يوفر فرصة كبيرة للكشف عن دور خلايا الطحال في تنظيم الاستجابات المناعية المحلية والجهازية في الأمراض الالتهابية. الميزة الرئيسية لهذا البروتوكول هو أنه باستخدام الفئران congenic، زرع الطحال يجعل من الممكن للتحقق من مصير وطول العمر، ووظيفه خلايا الطحال. قبل البدء في العملية، ضع ستارة معقمة يمكن التخلص منها على المنصة الجراحية وتأكد من عدم الاستجابة لقرصة إصبع في فأر المتبرع المُجرّد.حلق الشعر من منطقة البطن بأكملها ووضع الماوس على منصة جراحية معقمة تحت مجهر التشغيل في التكبير 6 إلى 10X. تعقيم الجلد المكشوف مع وسادة إعداد الكحول وتأمين الأطراف مع الشريط الجراحي. أدخل البطن عن طريق شق الجلد العمودي المتوسط من العانة إلى عملية الإكسيفويد من ثلاثة إلى أربعة سنتيمترات.الكي الأوعية الجلدية وتوسيع شق إلى البطن الجانبي على كلا الجانبين لتحقيق التعرض أفضل. باستخدام مسحة القطن العقيمة، قم بتحريك الأمعاء إلى الجناح الأيمن من البطن لفضح الطحال واستخدام الكي العقيم منخفض الحرارة لتكويد الوريد المعدة القصير المرفق بالطححال. ضع قطعة من الشاش العقيم المنقوعة بملوحة 37 درجة مئوية فوق الطحال لإبقائها رطبة ومنفصلة وتعبئة الوريد البوادي من أنسجة البنكرياس.Ligate فروع الوريد المدخل كما هو موضح. وضع خياطة حول الوريد بوابة من الوريد الزلي والوجه الطحال إلى الجانب الأيمن لفضح الشريان الأورطي والشريان الزبال على جذع الاضطرابات الهضمية. تشريح وتعبئة الشرايين السيلية الأبهرية السلية ووضع خياطة حول الشريان الأورطي إلى الشريان الاضطرابات الهضمية.حقن 100 وحدة دولية من الهيبارين في الكافا فينا السفلي أو IVC ل heparinize الجسم كله. بعد ثلاث دقائق، ligate الشرايين الكبدية والمُهدية في الشريان الأبهري القريبة إلى الشريان الاضطرابات الهضمية. Transect الوريد المدخل و perfuse الجسم كله مع 10 ملليلتر من أربعة درجة مئوية heparinized المالحة من الشريان الأورطي البطن إلى جذع الاضطرابات الهضمية.جمع الكسب غير المشروع الطحال وكتلة مع الجزء المرتبط السيلية الأبهري في الوريد المدخل جنبا إلى جنب مع الجزء من الوريد السليك وجزء صغير من أنسجة البنكرياس. ثم الحفاظ على الكسب غير المشروع في خمسة ملليلتر من الملحية درجة أربع درجة مئوية. أدخل البطن المتلقي عن طريق شق منتصف بعد يتم إعداد المنطقة الجراحية كما هو للمتبرع وإزالة الطحال الأصلي المتلقي عن طريق ربط الوريد splenic والشريان.غطي أنسجة الأمعاء بالشاش المنقوع بـ37 درجة مئوية، واحرك الأمعاء بعناية إلى الجانب الأيسر. تشريح وligate الفروع القطنية من الشريان الأورطي infrarenal في IVC وعبر المشبك الشريان الأورطي في IVC مع اثنين من المشابك الأربعة المليلتر microvascular. وضع خياطة النايلون 11-0 من خلال الشريان الأبهر في الرخوية والتراجع عن السفينة للسماح بإنشاء الشريان الأورطي البيضاوي مع microscisors.استخدام إبرة قياس 30 لاختراق IVC لخلق فينومي بيضاوي الشكل وتمديد فتح لطول الوريد بوابة المانحة. دافق الشريان الأورطي و IVC مع 500 ميكرولترات من محلول ملحي heparinized لمسح الدم داخل الأمعاء أو جلطات الدم من الأوعية ووضع الكسب غير المشروع الطحال المانح في الجناح الأيمن من البطن المتلقي. تحديد بعناية الكفة الأبهري المانحة والوريد المدخل.بعد التأكد من أن الأوعية ليست ملتوية، وتغطي الكسب غير المشروع الطحال مع أربع درجات مئوية المالحة الشاش المنقوع. باستخدام اثنين من خياطة البقاء 11-0، وربط الكفة الأبهري المانحة إلى قمة قريبة وهضم من الشريان الأورطي المتلقي وجعل anastomosis مع اثنين إلى ثلاثة لدغات من خياطة النايلون المستمر 11-0 بين الكفة الأبهر المانحة والجدار الأمامي من الشريان الأورطي المتلقي. بدوره الكسب غير المشروع الطحال إلى الجانب الأيسر من المتلقي وجعل anastomosis بين الكفة الأبهري المانحة والجدار الخلفي من الشريان الأورطي المتلقي.إجراء osistomosis الوريدي بين الوريد بوابة المانحة والمتلقي IVC مع أربع إلى خمس لدغات من الغرز المستمر على كل جانب. خياطة الجدار الخلفي داخل تجويف السفينة أولا ثم إغلاق الجدار الأمامي باستخدام نفس خياطة. أكمل الورم الدرقي مع عقدة وضعت في الزاوية السفلى خارج IVC.الآن الافراج عن المشابك السفينة واستخدام مسحة القطن العقيمة لتدبير النزيف حتى يتم استرداد لون الطحال. أغلق البطن مع خياطة 5-0 الاصطناعية فيكريل قابلة للامتصاص في نمط مستمر وإغلاق طبقة الجلد مع خياطة النايلون 5-0 في نمط توقف. ثم حقن 250 ميكرولترات من الحارة المالحة تحت الجلد في أربعة مواقع منفصلة ودفء الماوس في 30 درجة مئوية درجة الحرارة التي تسيطر على حاضنة للعمليات بعد الساعات الأولى مع الرصد حتى الحيوان قد استعاد الوعي الكافي لنقل إلى القفص المنزلي.Hematoxylin وeosin من الطحال isografts أيام واحد وسبعة بعد زرع يكشف عن أن الهندسة المعمارية من الأيزوجرافت الطحال لا تزال سليمة خلال الأسبوع المنطوق في مرحلة ما بعد الأول. تحليل تدفق الخلايا الخلوية للتحقيق في الهجرة خلية الطحال المانحة بعد زرع يدل على أن ما يقرب من 50٪ من خلايا الطحال هي المانحة مشتقة في يوم واحد بعد زرع وحوالي 46٪ هي المتلقية مشتقة. سبعة أيام بعد زرع, المانحة الكريات البيض المشتقة تمثل ما يقرب من 32٪ من مجموع خلايا الطحال في حين أن الخلايا المشتقة المتلقي زادت ما يصل إلى ما يقرب من 53٪ الكريات البيض المانحة splenic هاجر أيضا إلى الغدد الليمفاوية, الدم, ونخاع العظام في وقت مبكر من اليوم الأول ويتم الاحتفاظ بها إلى اليوم السابع على الأقل توليد الكيميرا قيمة فريدة من نوعها للبحث عن الاتجار splenocyte.استخدام الفأرة المعدلة وراثيا في طرق في والمتبرعين الطحال سوف تسمح التحقيق في أدوار الخلايا الطحالية المشتقة أو مسارات إشارات رئيسية في عمليات المرض. يمكن أن يكون هذا النموذج أداة قوية لاستكشاف آليات مجموعات خلايا الطحال استجابة لمسببات الأمراض أو الإصابة أو الالتهاب أو رفض الزراعة.

Research

JoVE Journal

Medicine

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

زرع مثلي الأورطي : نموذج الفأر لدراسة تطوير المزمنة اعتلال وعائي

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

A Mouse Model of in Utero Transplantation

A Mouse Model of in Utero Transplantation

نموذج الفأر من في الرحم زراعة

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) Research

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation VCA Research

A معدلة غيري مكاني الخنازير هند أطرافهم نموذج زرع أوعية دموية لبالحركة المجمع زرع الطعم الخيفي (VCA) بحوث

Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) such as hand and face transplants represent a viable treatment option for complex musculoskeletal trauma ...

A Modified Method for Heterotopic Mouse Heart Transplantion

وهناك طريقة معدلة لغيري مكاني ماوس القلب Transplantion

Mice are often used as heart transplant donors and recipients in studies of transplant immunology due to the wide range of transgenic mice and reagents ...

Murine Heterotopic Heart Transplant Technique

الفئران غيري مكاني القلب زرع تقنية

It is now over forty years since this technique was first reported by Corry, Wynn and Russell. Although it took some years for other labs to become ...

Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

زرع صمام الرئوي عن طريق نموذج الفأر من غيري مكاني القلب زرع

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

A Novel Microsurgical Model for Heterotopic, En Bloc Chest Wall, Thymus, and Heart Transplantation in Mice

A المجهرية نموذج رواية لمنتبذ، جناح كتلة جدار الصدر، الغدة الصعترية، وزرع القلب في الفئران

Exploration of novel strategies in organ transplantation to prolong allograft survival and minimizing the need for long-term maintenance immunosuppression ...

Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse

مثلي هند الاطراف زرع في ماوس

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and ...

Heterotopic Renal Autotransplantation in a Porcine Model: A Step-by-Step Protocol

منتبذ الكلوي الزرع الذاتي في لحم الخنزير نموذج: بروتوكول خطوة بخطوة

Kidney transplantation is the treatment of choice for patients suffering from end-stage renal disease. It offers better life expectancy and higher quality ...