Name: a mouse model of vascularized heterotopic spleen transplantation for studying spleen cell biology and transplant immunity
Uploaded: 2019-06-11T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model of Vascularized Heterotopic Spleen Transplantation for Studying Spleen Cell Biology and Transplant Immunity at JoVE.com

Forfattere tak Northwestern University omfattende transplantations Center og Feinberg School of Medicine Research Cores program for ressource-og finansieringsstøtte. Specifikt, flow cytometry og histologi tjenester blev leveret af Northwestern University flow cytometry Core Facility og Mouse histologi og phenotyping laboratorium, som begge er støttet af NIC P30-CA060553 tildelt Robert H Lurie Comprehensive Cancer Center. Vi takker hr. Nate Esparza for korrekturlæsning af dette manuskript.

Alle procedurer og dyre brug i denne undersøgelse blev udført i henhold til protokoller godkendt af det nordvestlige Universitets interne udvalg for dyrepasning og-brug (IACUC). I denne undersøgelse, 8 til 10 uge gamle mandlige CD 45.2 og CD 45.1 mus (både på Balb/c baggrund, fra Jackson laboratorium) blev brugt som milt donorer og recipienter, henholdsvis at skabe murinsynogene milt transplantation modeller. Alle dyr blev anbragt i det sterile miljø i dyre faciliteterne på Northwestern University. Øjen smøremid...

<ol>
	<li>Cesta, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+structure,+function,+and+histology+of+the+spleen.">Normal structure, function, and histology of the spleen.</a> Toxicologic Pathology. 34 (5), 455-465 (2006).</li><li>Mebius, R. E., Kraal, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+function+of+the+spleen.">Structure and function of the spleen.</a> Nature Reviews Immunology. 5 (8), 606-616 (2005).</li><li>Misiakos, E. P., Bagias, G., Liakakos, T., Machairas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laparoscopic+splenectomy:+Current+concepts.">Laparoscopic splenectomy: Current concepts.</a> World Journal of Gastrointestinal Endoscopy. 9 (9), 428-437 (2017).</li><li>Kristinsson, S. Y., Gridley, G., Hoover, R. N., Check, D., Landgren, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+risks+after+splenectomy+among+8,149+cancer-free+American+veterans:+a+cohort+study+with+up+to+27+years+follow-up.">Long-term risks after splenectomy among 8,149 cancer-free American veterans: a cohort study with up to 27 years follow-up.</a> Haematologica. 99 (2), 392-398 (2014).</li><li>Thai, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+complications+of+splenectomy+in+adult+immune+thrombocytopenia.">Long-term complications of splenectomy in adult immune thrombocytopenia.</a> Medicine (Baltimore). 95 (48), e5098 (2016).</li><li>Sinwar, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overwhelming+post+splenectomy+infection+syndrome+-+review+study.">Overwhelming post splenectomy infection syndrome - review study.</a> International Journal of Surgery. 12 (12), 1314-1316 (2014).</li><li>Rorholt, M., Ghanima, W., Farkas, D. K., Norgaard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risk+of+cardiovascular+events+and+pulmonary+hypertension+following+splenectomy+-+a+Danish+population-based+cohort+study+from+1996-2012.">Risk of cardiovascular events and pulmonary hypertension following splenectomy - a Danish population-based cohort study from 1996-2012.</a> Haematologica. 102 (8), 1333-1341 (2017).</li><li>Crary, S. E., Buchanan, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+complications+after+splenectomy+for+hematologic+disorders.">Vascular complications after splenectomy for hematologic disorders.</a> Blood. 114 (14), 2861-2868 (2009).</li><li>Di Carlo, I., Pulvirenti, E., Toro, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+technique+for+spleen+autotransplantation.">A new technique for spleen autotransplantation.</a> Surgical Innovation. 19 (2), 156-161 (2012).</li><li>Holdsworth, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+the+spleen+and+splenic+autotransplantation.">Regeneration of the spleen and splenic autotransplantation.</a> British Journal of Surgery. 78 (3), 270-278 (1991).</li><li>Tzoracoleftherakis, E., Alivizatos, V., Kalfarentzos, F., Androulakis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complications+of+splenic+tissue+reimplantation.">Complications of splenic tissue reimplantation.</a> Annals of the Royal College of Surgeons of England. 73 (2), 83-86 (1991).</li><li>Kato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+the+spleen:+effect+of+splenic+allograft+in+human+multivisceral+transplantation.">Transplantation of the spleen: effect of splenic allograft in human multivisceral transplantation.</a> Annals of Surgery. 246 (3), 436-444 (2007).</li><li>Aronovich, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correction+of+hemophilia+as+a+proof+of+concept+for+treatment+of+monogenic+diseases+by+fetal+spleen+transplantation.">Correction of hemophilia as a proof of concept for treatment of monogenic diseases by fetal spleen transplantation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (50), 19075-19080 (2006).</li><li>Cohen, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Splenosis;+review+and+report+of+subcutaneous+splenic+implant.">Splenosis; review and report of subcutaneous splenic implant.</a> Archives of surgery. 69 (6), 777-784 (1954).</li><li>Coburn, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spleen+transplantation+in+the+rat.">Spleen transplantation in the rat.</a> Transplantation. 8 (1), 86-88 (1969).</li><li>Lee, S., Orloff, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+for+splenic+transplantation+in+the+rat.">A technique for splenic transplantation in the rat.</a> Surgery. 65 (3), 436-439 (1969).</li><li>Swirski, F. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+splenic+reservoir+monocytes+and+their+deployment+to+inflammatory+sites.">Identification of splenic reservoir monocytes and their deployment to inflammatory sites.</a> Science. 325 (5940), 612-616 (2009).</li><li>Hsiao, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spleen-derived+classical+monocytes+mediate+lung+ischemia-reperfusion+injury+through+IL-1beta.">Spleen-derived classical monocytes mediate lung ischemia-reperfusion injury through IL-1beta.</a> Journal of Clinical Investigation. 128 (7), 2833-2847 (2018).</li><li>Robbins, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extramedullary+hematopoiesis+generates+Ly-6C(high)+monocytes+that+infiltrate+atherosclerotic+lesions.">Extramedullary hematopoiesis generates Ly-6C(high) monocytes that infiltrate atherosclerotic lesions.</a> Circulation. 125 (2), 364-374 (2012).</li><li>Kim, E., Yang, J., Beltran, C. D., Cho, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+spleen-derived+monocytes/macrophages+in+acute+ischemic+brain+injury.">Role of spleen-derived monocytes/macrophages in acute ischemic brain injury.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 34 (8), 1411-1419 (2014).</li><li>Bronte, V., Pittet, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+spleen+in+local+and+systemic+regulation+of+immunity.">The spleen in local and systemic regulation of immunity.</a> Immunity. 39 (5), 806-818 (2013).</li><li>Wang, N. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recruitment+of+macrophages+from+the+spleen+contributes+to+myocardial+fibrosis+and+hypertension+induced+by+angiotensin+II.">Recruitment of macrophages from the spleen contributes to myocardial fibrosis and hypertension induced by angiotensin II.</a> Journal of the Renin-Angiotensin-Aldosterone System. 18 (2), 1470320317706653 (2017).</li><li>Tian, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+spleen+contributes+importantly+to+myocardial+infarct+exacerbation+during+post-ischemic+reperfusion+in+mice+via+signaling+between+cardiac+HMGB1+and+splenic+RAGE.">The spleen contributes importantly to myocardial infarct exacerbation during post-ischemic reperfusion in mice via signaling between cardiac HMGB1 and splenic RAGE.</a> Basic Research in Cardiology. 111 (6), 62 (2016).</li><li>Jang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutting+Edge:+Check+Your+Mice-A+Point+Mutation+in+the+Ncr1+Locus+Identified+in+CD45.1+Congenic+Mice+with+Consequences+in+Mouse+Susceptibility+to+Infection.">Cutting Edge: Check Your Mice-A Point Mutation in the Ncr1 Locus Identified in CD45.1 Congenic Mice with Consequences in Mouse Susceptibility to Infection.</a> Journal of Immunology. 200 (6), 1982-1987 (2018).</li></ol>

Overbevisende beviser antyder, at milt-afledte monocytter spiller en vigtig rolle i sterile inflammatoriske processer såsom åreforkalkning19, akut iskæmisk hjerne20 eller lungeskade18, samt myokardial I/R skade og remodeling21,22,23. Disse rapporter fremhæver under-anerkendelse rolle milten i mange kroniske sygdomme, hvoraf hjerte-kar-sygdom er en vigtig...

Milten er den største sekundære lymfoide organ i kroppen og er kritisk i immun og hæmatopoietiske systemer. Dens funktioner er primært udført af to morfologisk adskilte rum, den røde pulp og den hvide pulp1. Den røde pulp er en tredimensionel trabekelværket af venøse bihuler og milt ledninger, der består af rekulære fibre, rekulære celler, og tilhørende makrofager. Denne unikke struktur gør det muligt for den røde Pulp at fungere som et effektivt blod filter, der fjerner fremmede materialer og gamle eller beskadigede erythrocytter. Den hvide pulp omfatter follikler, marginal zone, og periarteriolar lymfoide skeder (Pals) og er et vigtigt sted for antigen fældefangst og forarbejdning, lymfocyt homing, transformation, proliferation, og modning2. Ikke desto mindre, milten har almindeligvis været betragtet som en udgivende organ, fordi andre lymfe organer, såsom lymfeknuder, kan også udføre nogle af sine funktioner og tabet af milt ikke normalt fører til døden. Splenektomi er derfor blevet bredt udført som en terapeutisk metode til patienter med milt skade eller benign hæmatologiske sygdomme3. Men, patienter med splenektomi står over for en række langsigtede komplikationer. Bakterielle infektioner er de bedst kendte komplikationer af splenektomy4,5. For nylig, den overvældende post-splenektomi sepsis er blevet anerkendt som en intensiv komplikation af splenektomi forbundet med en høj dødelighed6. Desuden tyder nylige epidemiologiske undersøgelser på, at splenektomi kan være forbundet med forekomsten af hjerte-kar-sygdomme, hvilket tyder på, at yderligere fysiologiske funktioner i milten stadig skal udforskes med7,8.
Både milt autotransplantation og milt allotransplantation er blevet udnyttet i klinikken. I øjeblikket anses milt autotransplantation ved at implanterer sektioner af splenisk væv i poser, der er skabt i Greater omentum, som den eneste mulighed for at bevare splenisk funktion efter traumatisk splenektomi9,10. Men, effekten af denne operation kan diskuteres som post-kirurgi komplikationer som aseptisk nekrose af milt væv og små tarmobstruktion på grund af postoperative klæbestoffer kan forekomme11. Milt allotransplantation er involveret i multi visceral transplantation12. Klinisk evidens fra multi visceral transplantation tyder på, at milt allotransplantation kan spille en beskyttende rolle i små tarm allograft afvisning uden at forårsage graft-versus-Host sygdom (GVHD)12. Men litteraturen om den gavnlige virkning af milt allotransplantation som bestanddel af multi visceral transplantation er stadig begrænset, og de underliggende mekanismer mangler at blive defineret. I 2006, Yair Reisner et al. rapporterede, at transplantations svin embryonale milt væv, der ikke har T-celler til mus kan helbrede hæmofili A, en genetisk sygdom uden at forårsage GVHD13, støtte, at milt transplantation holder terapeutiske løfte i visse sygdomme. Der er derfor behov for yderligere undersøgelser af det terapeutiske potentiale ved milt transplantation.
Dyremodeller af milt transplantation er værdifulde til at udforske den upåskønnede funktion af milt-afledte immunceller i sygdomsprogression samt til at teste den potentielle terapeutiske virkning af milt transplantation. Eksperimentelle hele milt transplantations modeller er blevet dokumenteret siden begyndelsen af 1900-tallet, som revideret af Cohen14. I 1969, Coburn Richard J. og Lee et al. detaljeret teknikken til milt transplantation i rotter15,16. For nylig beskrev Swirski FK et al. en musemodel af milt transplantation17. Sammenlignet med rotte modeller, musemodeller af milt transplantation er mere attraktive på grund af dens mange iboende fordele. For eksempel ved at udnytte en musemodel, kan vi få adgang til en ekspansiv række reagenser utilgængelige for at af rotte modeller. Ved at bruge kongeniske mus (f. eks. mus med CD 45.1/CD 45.2 baggrund) gør en syngeneisk milt transplantation det muligt at spore den skæbne, levetid og funktion af splenocytter18. Baseret på det arbejde, som Swirski FK et al.17, vi yderligere etableret denne forenklede og forbedrede protokol af milt transplantation i mus. Den protokol, der er beskrevet nedenfor kombinerer både pålidelighed og gennemførlighed på en standardiseret måde og kan udnyttes som et redskab til at studere milt biologi og transplantation immunitet.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Wyeth</td>
			<td>206205-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Lloyd Laboratories</td>
			<td>139-236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin solution</td>
			<td>Abraxis Pharmaceutical Products</td>
			<td>504031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection grade normal saline</td>
			<td>Hospira Inc.</td>
			<td>NDC 0409-4888-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Ethanol</td>
			<td>Pharmco Products Inc.</td>
			<td>111000140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ThermoCare Small Animal ICU System</td>
			<td>Thermocare, Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adson Forceps</td>
			<td>Roboz Surgical Instruments</td>
			<td>RS-5230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Derf Needle Holder</td>
			<td>Roboz Surgical Instruments</td>
			<td>RS-7822</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extra Fine Micro Dissecting Scissors</td>
			<td>Roboz Surgical Instruments</td>
			<td>RS-5881</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-clip</td>
			<td>Roboz Surgical Instruments</td>
			<td>RS-5420</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7-0 silk</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>SUT-S 103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>11-0 nylon on 4-mm (3/8) needle</td>
			<td>Sharpoint DR4</td>
			<td>AK-2119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD45.2 antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>553772</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD45.1 antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>553776</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD11b antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>557657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms B220 antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>553089</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms Ly6C antibody</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>48-5932-80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms Ly6G antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>561236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms F4/80 antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>565614</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD11c antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>558079</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD3 antibody</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>48-0032-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD4 antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>552051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD8 antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>563786</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD&#8482; Fixable Violet Dead Cell Stain Kit</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>L34955</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a mouse model of vascularized heterotopic spleen transplantation for studying spleen cell biology and transplant immunity

Milten er et unikt lymfoid organ, der spiller en afgørende rolle i homøostase af immun-og hæmatopoietiske systemer. Patienter, der har gennemgået splenektomi uanset udfældende årsager, er tilbøjelige til at udvikle en overvældende post-splenektomi infektion og opleve øget risiko for dyb venetrombose og maligniteter. For nylig indikerede epidemiologiske undersøgelser, at splenektomi kan være forbundet med forekomsten af hjerte-kar-sygdomme, hvilket tyder på, at de fysiologiske funktioner i milten endnu ikke er fuldt ud anerkendt. Her introducerer vi en musemodel af vaskulariseret heterotop milt transplantation, som ikke kun kan udnyttes til at studere funktion og adfærdsmæssige aktivitet af spleniske immuncelle undersæt i forskellige biologiske processer, men også kan være et kraftfuldt værktøj til at teste det terapeutiske potentiale af milt transplantation i visse sygdomme. De vigtigste kirurgiske trin i denne model omfatter donor milt høst, fjernelse af recipient indfødte milt, og milt graft revascularization. Ved hjælp af kongeniske muse stammer (f. eks. mus med CD 45.1/CD 45.2 baggrunde) observerede vi, at både donor-afledte spleniske lymfocytter og myeloide celler, der blev migreret ud af transplantatet så tidligt som postoperative dag 1, samtidig med tilstrømningen af flere typer af modtager celler, hvilket skaber en unik Chimera.  På trods af relativt udfordrende teknikker, denne procedure kan udføres med > 90% succesrate. Denne model gør det muligt at spore den skæbne, levetid, og funktion af splenocytes under Steady State og i en sygdom indstilling efter en milt transplantation, hvilket giver en stor mulighed for at opdage den særskilte rolle for milt-afledte immunceller i forskellige sygdomsprocesser.

Hele proceduren for mus milt transplantation kan afsluttes inden for 90 min af erfarne mikrokirurger. Vores laboratorium har udført over 100 milt transplantationer i mus. Succesraten er over 90%, som defineret ved overlevelse af både modtager mus og milt transplantatet til postoperative dag (POD) 1 eller POD 7 (vores undersøgelse Endpoint). Overlevelsen af milt transplantatet blev bekræftet af splenocytterne ved makroskopisk udseende og flow cytometri analyse. Baseret på vores erfari...

Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model of Vascularized Heterotopic Spleen Transplantation for Studying Spleen Cell Biology and Transplant Immunity at JoVE.com

A Mouse Model of Vascularized Heterotopic Spleen Transplantation for Studying Spleen Cell Biology and Transplant Immunity

En muse model af vascularized Heterotopic milt transplantation for at studere milt cellebiologi og transplantations immunitet

Denne protokol beskriver de kirurgiske trin af en musemodel af vaskulariseret heterotop milt transplantation, en teknisk udfordrende model, der kan tjene som et kraftfuldt værktøj til at studere skæbne og levetiden af milt celler, mekanismerne i distinkte milt cellepopulationer i sygdomsprogression og transplantations immunitet.

The spleen is a unique lymphoid organ that plays a critical role in the homeostasis of the immune and hematopoietic systems. Patients that have undergone ...

Musemodellen for milttransplantation giver en stor mulighed for at afdække miltcellernes rolle i reguleringen af lokale og systemiske immunresponser i inflammatorisk sygdom. Den største fordel ved denne protokol er, at ved hjælp af medfødte mus, milt transplantation gør det muligt at kontrollere skæbne, levetid, og funktion af miltceller. Før du begynder proceduren, placere en steril engangstændere drapere over den kirurgiske platform og bekræfte den manglende reaktion på tå knivspids i bedøvet donor mus.Barber håret fra hele maveregionen og placere musen på en steril kirurgisk platform under en fungerende mikroskop på en 6 til 10X forstørrelse. Steriliser den eksponerede hud med en alkohol prep pad og sikre lemmer med kirurgisk tape. Indtast maven via en tre til fire centimeter midterlinjen lodret hud snit fra pubis til den fremmedfjendske proces.Ætse huden fartøjer og udvide snittet til lateral maven på begge sider for at opnå bedre eksponering. Ved hjælp af en steril vatpind, flytte tarmene til højre flanke af maven for at udsætte milten og bruge en steril lav temperatur ætsning til at ætse den korte gastrisk vene knyttet til milten. Placer et stykke steril gaze dyppet med 37 grader Celsius saltvand over milten for at holde det fugtigt og adskille og mobilisere portalen vene fra bugspytkirtlen væv.Ligate grenene af portalen vene som påvist. Placer en sutur omkring portalen vene distale fra milt vene og flip milten til højre side for at udsætte aorta og milt arterie på cøliaki stammen. Dissekere og mobilisere aorta cøliakierne milt arterier og placere en sutur omkring aorta proksimale til cøliaki arterie.Injicer 100 internationale enheder af heparin i ringere vena cava eller IVC at heparinize hele kroppen. Efter tre minutter, ligate hepatiske og gastrisk arterier i aorta proksimale til cøliaki arterie. Transect portalen vene og gennemgå hele kroppen med 10 milliliter af fire grader Celsius heparinized saltvand fra abdominal aorta distalt til cøliaki stammen.Saml milt graft og blokere med den tilhørende aorta cølin milt segment i portalen vene sammen med segmentet af milt vene og en lille del af pancreas væv. Derefter bevare transplantatet i fem milliliter af fire grader Celsius saltvand. Indtast modtageren maven via midterlinjen snit efter det kirurgiske område er forberedt som det er for donor og fjerne modtageren indfødte milt ved ligating milten vene og arterie.Dæk tarmen væv med en 37 grader Celsius gennemblødt gaze og forsigtigt flytte tarmen til venstre side. Dissekere og ligat lændegrenene i den infrarenale aorta i IVC og krydsklemme den infrarenale aorta i IVC med to fire milliliter mikrovaskulære klemmer. Anlæste en 11-0 nylonsutur gennem den infrarenale aorta, og træk fartøjet tilbage, så der kan skabes en elliptisk atotomy med mikroscissorer.Brug en 30 gauge nål til at gennembore IVC at skabe en elliptisk venotomy og udvide åbningen til længden af donor portal vene. Skyl aorta og IVC med 500 mikroliter hepariniseret saltvand for at fjerne det intraluminale blod eller blodpropper fra karrene og placere donor milttransplantatet i højre flanke af modtagerens mave. Omhyggeligt identificere donor aorta manchet og portal vene.Efter bekræftelse af, at fartøjerne ikke er snoet, dække milt graft med fire grader Celsius saltvand gennemblødt gaze. Ved hjælp af to 11-0 ophold suturer, forbinde donor aorta manchet til den proksimale og distale spids af modtageren atotomy og gøre en anastotomose med to til tre bid af kontinuerlig 11-0 nylon suturer mellem donor aorta manchet og den forreste væg af modtageren atotomy. Drej milttransplantatet til venstre side af modtageren og gøre anastoosis mellem donor aorta manchet og den bageste væg af modtageren aortotomy.Udfør den venøse anastomose mellem donorportalvenen og modtageren IVC med fire til fem bid kontinuerlige suturer på hver side. Sutur den bageste væg i fartøjet lumen først og derefter lukke den forreste væg ved hjælp af samme sutur. Fuldfør anastomose med en knude placeret på det nederste hjørne uden for IVC.Slip nu karklemmerne og brug en steril vatpind til at tæmme blødningen, indtil miltfarven er fundet. Luk maven med en 5-0 syntetisk absorberbar Vicryl sutur i et kontinuerligt mønster og luk hudlaget med en 5-0 nylon sutur i et afbrudt mønster. Derefter injiceres 250 mikroliter af varmt saltvand subkutant i fire separate steder og varm musen i en 30 grader Celsius temperaturstyret inkubator i de første par timer efter operationen med overvågning, indtil dyret har genvundet tilstrækkelig bevidsthed til overførsel til hjemmet bur.Hematoxylin og eosin af miltisografts dage et og syv efter transplantation afslører, at arkitekturen af milten isografter forbliver intakt i løbet af den første post operative uge. Flow cytometrisk analyse til undersøgelse af donor miltcellemigration efter transplantation viser, at ca. 50 % af miltcellerne er donorafledte én dag efter transplantationen, og ca. 46 % er modtagerbaserede. Syv dage efter transplantation, donor afledte leukocytter tegner sig for ca 32% af den samlede milt celler, mens modtageren afledte celler steg op til ca 53% Donor splenic leukocytter også migreret ind i lymfeknuder, blod og knoglemarv så tidligt som dag ét og vedligeholdes til mindst dag syv genererer en unik Chimera værdifulde forskning.Ved hjælp af genetisk modificerede knock-in mus som milt donorer vil gøre det muligt at undersøge roller milt celle afledt mæglere eller centrale signalering veje i sygdomsprocesser. Denne model kunne være et effektivt værktøj til at udforske mekanismerne i miltcellepopulationer som reaktion på patogener, skade, betændelse eller transplantationsafstødning.

Research

JoVE Journal

Medicine

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

A Mouse Model of in Utero Transplantation

A Mouse Model of in Utero Transplantation

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) Research

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation VCA Research

En modificeret Heterotop Svin Hind Limb Transplant Model for Translationel vaskulariserede Composite allotransplantation (VCA) Forskning

Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) such as hand and face transplants represent a viable treatment option for complex musculoskeletal trauma ...

A Modified Method for Heterotopic Mouse Heart Transplantion

En modificeret Metode til Heterotop Mouse Heart Transplantion

Mice are often used as heart transplant donors and recipients in studies of transplant immunology due to the wide range of transgenic mice and reagents ...

Murine Heterotopic Heart Transplant Technique

Murine Heterotop Heart Transplant Teknik

It is now over forty years since this technique was first reported by Corry, Wynn and Russell. Although it took some years for other labs to become ...

Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

Transplantation af pulmonale ventilen med en musemodel af Heterotop Heart Transplantation

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

A Novel Microsurgical Model for Heterotopic, En Bloc Chest Wall, Thymus, and Heart Transplantation in Mice

A Novel Microsurgical Model for Heterotop, En Bloc brystvæggen, Thymus, og hjertetransplantation i mus

Exploration of novel strategies in organ transplantation to prolong allograft survival and minimizing the need for long-term maintenance immunosuppression ...

Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse

Ortotopisk Hind Limb Transplantation i Mus

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and ...

Heterotopic Renal Autotransplantation in a Porcine Model: A Step-by-Step Protocol

Heterotop Renal autotransplantation i en Porcine Model: En trin-for-trin-protokollen

Kidney transplantation is the treatment of choice for patients suffering from end-stage renal disease. It offers better life expectancy and higher quality ...