Name: a mouse model of vascularized heterotopic spleen transplantation for studying spleen cell biology and transplant immunity
Uploaded: 2019-06-11T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model of Vascularized Heterotopic Spleen Transplantation for Studying Spleen Cell Biology and Transplant Immunity at JoVE.com

מחברים תודה נורת'ווסט המרכז להשתלות מקיף ובית הספר פיינברג לחקר הרפואה תוכנית ליבות לתמיכה משאבים ומימון. במיוחד, הזרימה Cy, היסטולוגיה שירותים סופקו על-ידי האוניברסיטה הצפון מערבי זרימה Cy, מתקן ליבה המכון והיסטולוגיה העכבר המעבדה פנוטיפים, בהתאמה, שניהם נתמכים על ידי NCI P30-CA060553 הוענק רוברט H מרכז לוריא לסרטן מקיף. אנו מודים למר נייט אגספזה. על הגהה של כתב היד

כל ההליכים ואת השימוש בעלי חיים במחקר זה נערכו על פי פרוטוקולים שאושרו על ידי האוניברסיטה הצפון מערבי טיפול בעלי חיים והוועדה השתמש (IACUC). במחקר זה, 8 כדי 10 שבוע בן זכר 45.2 CD ו-CD 45.1 עכברים (שניהם על רקע BALB/c, מ מעבדה ג'קסון) שימשו תורמים הטחול והנמענים, בהתאמה, כדי ליצור מודלים השתלת הטחול syngeneic. כל...

<ol>
	<li>Cesta, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+structure,+function,+and+histology+of+the+spleen.">Normal structure, function, and histology of the spleen.</a> Toxicologic Pathology. 34 (5), 455-465 (2006).</li><li>Mebius, R. E., Kraal, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+function+of+the+spleen.">Structure and function of the spleen.</a> Nature Reviews Immunology. 5 (8), 606-616 (2005).</li><li>Misiakos, E. P., Bagias, G., Liakakos, T., Machairas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laparoscopic+splenectomy:+Current+concepts.">Laparoscopic splenectomy: Current concepts.</a> World Journal of Gastrointestinal Endoscopy. 9 (9), 428-437 (2017).</li><li>Kristinsson, S. Y., Gridley, G., Hoover, R. N., Check, D., Landgren, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+risks+after+splenectomy+among+8,149+cancer-free+American+veterans:+a+cohort+study+with+up+to+27+years+follow-up.">Long-term risks after splenectomy among 8,149 cancer-free American veterans: a cohort study with up to 27 years follow-up.</a> Haematologica. 99 (2), 392-398 (2014).</li><li>Thai, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+complications+of+splenectomy+in+adult+immune+thrombocytopenia.">Long-term complications of splenectomy in adult immune thrombocytopenia.</a> Medicine (Baltimore). 95 (48), e5098 (2016).</li><li>Sinwar, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overwhelming+post+splenectomy+infection+syndrome+-+review+study.">Overwhelming post splenectomy infection syndrome - review study.</a> International Journal of Surgery. 12 (12), 1314-1316 (2014).</li><li>Rorholt, M., Ghanima, W., Farkas, D. K., Norgaard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risk+of+cardiovascular+events+and+pulmonary+hypertension+following+splenectomy+-+a+Danish+population-based+cohort+study+from+1996-2012.">Risk of cardiovascular events and pulmonary hypertension following splenectomy - a Danish population-based cohort study from 1996-2012.</a> Haematologica. 102 (8), 1333-1341 (2017).</li><li>Crary, S. E., Buchanan, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+complications+after+splenectomy+for+hematologic+disorders.">Vascular complications after splenectomy for hematologic disorders.</a> Blood. 114 (14), 2861-2868 (2009).</li><li>Di Carlo, I., Pulvirenti, E., Toro, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+technique+for+spleen+autotransplantation.">A new technique for spleen autotransplantation.</a> Surgical Innovation. 19 (2), 156-161 (2012).</li><li>Holdsworth, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+the+spleen+and+splenic+autotransplantation.">Regeneration of the spleen and splenic autotransplantation.</a> British Journal of Surgery. 78 (3), 270-278 (1991).</li><li>Tzoracoleftherakis, E., Alivizatos, V., Kalfarentzos, F., Androulakis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complications+of+splenic+tissue+reimplantation.">Complications of splenic tissue reimplantation.</a> Annals of the Royal College of Surgeons of England. 73 (2), 83-86 (1991).</li><li>Kato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+the+spleen:+effect+of+splenic+allograft+in+human+multivisceral+transplantation.">Transplantation of the spleen: effect of splenic allograft in human multivisceral transplantation.</a> Annals of Surgery. 246 (3), 436-444 (2007).</li><li>Aronovich, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correction+of+hemophilia+as+a+proof+of+concept+for+treatment+of+monogenic+diseases+by+fetal+spleen+transplantation.">Correction of hemophilia as a proof of concept for treatment of monogenic diseases by fetal spleen transplantation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (50), 19075-19080 (2006).</li><li>Cohen, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Splenosis;+review+and+report+of+subcutaneous+splenic+implant.">Splenosis; review and report of subcutaneous splenic implant.</a> Archives of surgery. 69 (6), 777-784 (1954).</li><li>Coburn, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spleen+transplantation+in+the+rat.">Spleen transplantation in the rat.</a> Transplantation. 8 (1), 86-88 (1969).</li><li>Lee, S., Orloff, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+for+splenic+transplantation+in+the+rat.">A technique for splenic transplantation in the rat.</a> Surgery. 65 (3), 436-439 (1969).</li><li>Swirski, F. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+splenic+reservoir+monocytes+and+their+deployment+to+inflammatory+sites.">Identification of splenic reservoir monocytes and their deployment to inflammatory sites.</a> Science. 325 (5940), 612-616 (2009).</li><li>Hsiao, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spleen-derived+classical+monocytes+mediate+lung+ischemia-reperfusion+injury+through+IL-1beta.">Spleen-derived classical monocytes mediate lung ischemia-reperfusion injury through IL-1beta.</a> Journal of Clinical Investigation. 128 (7), 2833-2847 (2018).</li><li>Robbins, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extramedullary+hematopoiesis+generates+Ly-6C(high)+monocytes+that+infiltrate+atherosclerotic+lesions.">Extramedullary hematopoiesis generates Ly-6C(high) monocytes that infiltrate atherosclerotic lesions.</a> Circulation. 125 (2), 364-374 (2012).</li><li>Kim, E., Yang, J., Beltran, C. D., Cho, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+spleen-derived+monocytes/macrophages+in+acute+ischemic+brain+injury.">Role of spleen-derived monocytes/macrophages in acute ischemic brain injury.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 34 (8), 1411-1419 (2014).</li><li>Bronte, V., Pittet, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+spleen+in+local+and+systemic+regulation+of+immunity.">The spleen in local and systemic regulation of immunity.</a> Immunity. 39 (5), 806-818 (2013).</li><li>Wang, N. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recruitment+of+macrophages+from+the+spleen+contributes+to+myocardial+fibrosis+and+hypertension+induced+by+angiotensin+II.">Recruitment of macrophages from the spleen contributes to myocardial fibrosis and hypertension induced by angiotensin II.</a> Journal of the Renin-Angiotensin-Aldosterone System. 18 (2), 1470320317706653 (2017).</li><li>Tian, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+spleen+contributes+importantly+to+myocardial+infarct+exacerbation+during+post-ischemic+reperfusion+in+mice+via+signaling+between+cardiac+HMGB1+and+splenic+RAGE.">The spleen contributes importantly to myocardial infarct exacerbation during post-ischemic reperfusion in mice via signaling between cardiac HMGB1 and splenic RAGE.</a> Basic Research in Cardiology. 111 (6), 62 (2016).</li><li>Jang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutting+Edge:+Check+Your+Mice-A+Point+Mutation+in+the+Ncr1+Locus+Identified+in+CD45.1+Congenic+Mice+with+Consequences+in+Mouse+Susceptibility+to+Infection.">Cutting Edge: Check Your Mice-A Point Mutation in the Ncr1 Locus Identified in CD45.1 Congenic Mice with Consequences in Mouse Susceptibility to Infection.</a> Journal of Immunology. 200 (6), 1982-1987 (2018).</li></ol>

ראיות משכנעות עולה כי הטחול נגזר מונוציטים לשחק תפקיד חשוב בתהליכים דלקתיים סטרילי כגון טרשת עורקים19, המוח האיסכמי חריפה20 או פציעה בריאה18, כמו גם שריר הלב I/R פציעה . שיפוץ21,22,23 דוחות אלה להדגיש את תפק...

הטחול הוא איבר הלימפה המשני הגדול ביותר בגוף, והוא קריטי במערכות החיסונית המטפאות. הפונקציות שלה מתבצעות בעיקר על ידי שני תאים ברורים מורפולוגית, את הציפה האדומה ואת עיסת לבן1. הציפה האדומה היא עבודה תלת ממדית של הסינוסים ורידים ומיתרי הטחול המורכבים מסיבים רשתית, תאי רשתית ומקרופאגים משויכים. זה מבנה ייחודי מאפשר עיסת אדום לפעול כמסנן דם אפקטיבי המסירה חומרים זרים או הישן או ניזוק אריתרופוציטים. הזולה הלבנה כוללת זקיקי, אזור שולי, ומעילי הלימפה periarteriolar (ידידי) והוא אתר חשוב להשמנה ועיבוד אנטיגן, ביות לימפוציטים, טרנספורמציה, התפשטות והתבגרות2. עם זאת, הטחול בדרך כלל נחשב כאיבר מותר כי איברים לימפתיים אחרים, כגון בלוטות הלימפה, יכול גם לבצע כמה פונקציות שלה ואת אובדן הטחול לא בדרך כלל להוביל למוות. כריתת טחול התבצע אפוא באופן נרחב כשיטה טיפולית עבור חולים עם פציעה הטחול או מחלות המטקולוגיות שפיר3. עם זאת, חולים עם כריתת טחול הפנים מספר סיבוכים ארוכי טווח. זיהומים חיידקיים הם הסיבוכים המוכרים ביותר של כריתת טחול4,5. לאחרונה הכירו את אלח-הדם המכריע שלאחר הטחול, כסיבוך אינטנסיבי של כריתת טחול הקשורה לתמותה גבוהה6. יתר על כן, מחקרים אפידמיולוגיים האחרונות מצביעים על כך שניתוח הטחול עשוי להיות קשור להתרחשות של מחלות לב וכלי דם, הרומז כי פונקציות פיזיולוגיות נוספות של הטחול נותרו לחקור7,8.
שניהם השתלת הטחול autotransplantation שתלת טחול השתמשו במרפאה. כיום, הטחול השתלת אוטומטית על ידי שתילת חלקים של רקמת הטחול לתוך שקיות שנוצרו במנטום הגדול נחשב האפשרות היחידה לשימור תפקוד הטחול לאחר כריתת טחול טראומטי9,10. עם זאת, את היעילות של ניתוח זה הוא במחלוקת כמו לאחר הניתוח סיבוכים כמו נמק אספטי של רקמת הטחול ואת חסימת המעי הקטן עקב הידקויות לאחר הניתוח יכול להתרחש11. השתלת הטחול מעורבת. בהשתלה מרובת הקרביים12 ראיות קליניות מפני השתלת מרובת הקרביים מציע כי השתלת הטחול עשוי לשחק תפקיד המגן דחייה קטנה אלוגרפט המעי ללא גרימת השתל-מול-מארחים מחלה (gvhd)12. עם זאת, ספרות לגבי ההשפעה המועילה של השתלת הטחול כרכיב של השתלת רב הקרביים עדיין מוגבל והמנגנונים הבסיסיים נשארים להיות מוגדרים. בשנת 2006, יאיר רייזנר ואח ' דיווחו כי שתילת רקמת הטחול מתחלקים חזיר כי אין תאי T לעכברים יכול לרפא המופיליה A, מחלה גנטית מבלי לגרום GVHD13, תמיכה השתלת הטחול מחזיקה הבטחה טיפולית מחלות מסוימות. לכן, יש צורך בחקירות נוספות על הפוטנציאל הטיפולי של השתלת הטחול.
מודלים של בעלי חיים של השתלת הטחול הם יקרי ערך כדי לחקור את תפקוד לא מוערך של תאים החיסון נגזר הטחול בהתקדמות המחלה, כמו גם כדי לבדוק את ההשפעה הטיפולית הפוטנציאלית של השתלת הטחול. השתלת הטחול המלא הדגמים תועדו מאז תחילת 1900, כפי שנבדקו על ידי כהן14. בשנת 1969, קובורן ריצ'רד ג'יי ולי ואח ' מפורטים הטכניקה של השתלת הטחול בחולדות15,16. לאחרונה, מסוויסקי FK אל. תיאר מודל העכבר של השתלת טחול17. לעומת מודלים חולדה, העכבר מודלים של השתלת הטחול הם אטרקטיביים יותר בשל היתרונות הטבועים שלה מספר. לדוגמה, על ידי ניצול מודל העכבר, אנחנו יכולים לגשת למגוון רחב של ריאגנטים לא זמין זה של מודלים חולדה. יתר על כן, באמצעות עכברים הקונגניים (למשל, עכברים עם CD 45.1/CD 45.2 רקע), השתלת הטחול syngeneic מאפשר לעקוב אחר הגורל, אריכות-החיים, ותפקוד של הטחול18. בהתבסס על העבודה על ידי מערבולות FK et al.17, הקמנו את הפרוטוקול הזה פשוט ומשופר של השתלת הטחול בעכברים. הפרוטוקול המתואר להלן משלב אמינות והיתכנות באופן מתוקננת ויכול להיות מנוצל ככלי למחקר ביולוגיה הטחול וחסינות השתלת.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Wyeth</td>
			<td>206205-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Lloyd Laboratories</td>
			<td>139-236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin solution</td>
			<td>Abraxis Pharmaceutical Products</td>
			<td>504031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection grade normal saline</td>
			<td>Hospira Inc.</td>
			<td>NDC 0409-4888-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Ethanol</td>
			<td>Pharmco Products Inc.</td>
			<td>111000140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ThermoCare Small Animal ICU System</td>
			<td>Thermocare, Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adson Forceps</td>
			<td>Roboz Surgical Instruments</td>
			<td>RS-5230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Derf Needle Holder</td>
			<td>Roboz Surgical Instruments</td>
			<td>RS-7822</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extra Fine Micro Dissecting Scissors</td>
			<td>Roboz Surgical Instruments</td>
			<td>RS-5881</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-clip</td>
			<td>Roboz Surgical Instruments</td>
			<td>RS-5420</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7-0 silk</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>SUT-S 103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>11-0 nylon on 4-mm (3/8) needle</td>
			<td>Sharpoint DR4</td>
			<td>AK-2119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD45.2 antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>553772</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD45.1 antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>553776</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD11b antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>557657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms B220 antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>553089</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms Ly6C antibody</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>48-5932-80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms Ly6G antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>561236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms F4/80 antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>565614</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD11c antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>558079</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD3 antibody</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>48-0032-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD4 antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>552051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD8 antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>563786</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD&#8482; Fixable Violet Dead Cell Stain Kit</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>L34955</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a mouse model of vascularized heterotopic spleen transplantation for studying spleen cell biology and transplant immunity

הטחול הוא איבר הלימפה ייחודי המשחק תפקיד קריטי הומאוסטזיס של המערכת החיסונית המטתית. מטופלים שעברו כריתת טחול ללא קשר לגורמים מאיצים נוטים לפתח זיהום מוחץ לאחר כריתת הטחול וניסיון מוגבר של פקקת ורידים עמוקים וממאירות. לאחרונה, מחקרים אפידמיולוגיים ציין כי כריתת טחול עשוי להיות קשור להתרחשות של מחלות לב וכלי דם, הרומז כי פונקציות פיזיולוגיות של הטחול עדיין לא הכירו במלואו. כאן, אנו מציגים מודל העכבר של השתלת הטחול הטרולייום, אשר לא רק יכול להיות מנוצל כדי ללמוד את הפונקציה ואת פעילות התנהגותית של קבוצות החיסון של תאים חיסוניים הטחול בתהליכים יולוגי שונים, אבל גם יכול להיות כלי רב עוצמה כדי לבדוק הפוטנציאל הטיפולי של השתלת הטחול במחלות מסוימות. השלבים העיקריים כירורגי של מודל זה כוללים הקציר הטחול התורם, הסרת טחול יליד הנמען, ו הטחול השתל revascularization. באמצעות זני העכבר הקונגניים (למשל, עכברים עם 45.1 CD/CD 45.2 רקעים), הבחנו כי לאחר השתלת syngeneic, הן לימפוציטים הטחול הנגזר שניהם, התאים מיאלואיד היגרו מתוך השתל מוקדם כמו יום שלאחר הניתוח 1, במקביל עם זרם של סוגים מרובים של תאים הנמען, ובכך לייצר כמירה ייחודית.  למרות טכניקות מאתגרות יחסית, הליך זה ניתן לבצע עם > 90% שיעור הצלחה. מודל זה מאפשר מעקב אחר גורל, אריכות ימים, ותפקוד של הטחול במהלך המצב היציב בקביעת המחלה בעקבות השתלת הטחול, ובכך מציע הזדמנות גדולה לגלות את התפקיד הייחודי עבור תאים חיסוניים הנגזרים הטחול ב תהליכי מחלה שונים.

ההליך כולו של השתלת הטחול העכבר ניתן להשלים בתוך 90 דקות על ידי מיקרו מנתחים מנוסים. המעבדה שלנו הופיעה על 100 השתלות הטחול בעכברים. שיעור ההצלחה הוא מעל 90%, כפי שהוגדר על ידי ההישרדות של שני העכבר הנמען ואת שתל הטחול ליום לאחר הניתוח (POD) 1 או POD 7 (נקודת הקצה של המחקר שלנו). ההיש?...

Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model of Vascularized Heterotopic Spleen Transplantation for Studying Spleen Cell Biology and Transplant Immunity at JoVE.com

A Mouse Model of Vascularized Heterotopic Spleen Transplantation for Studying Spleen Cell Biology and Transplant Immunity

מודל של העכבר של ואסיאני הטרוגרההשתלת הטחול ללמוד תא הטחול ביולוגיה וחסינות להשתלות

פרוטוקול זה מפרט את הצעדים הכירורגית של מודל העכבר של השתלת הטחול הטרולפית, מודל מאתגר מבחינה טכנית שיכול לשמש כלי רב עוצמה בחקר הגורל ואריכות החיים של תאי הטחול, מנגנונים של טחול ברורים אוכלוסיות תאים בהתקדמות המחלה, וחסינות להשתלה.

The spleen is a unique lymphoid organ that plays a critical role in the homeostasis of the immune and hematopoietic systems. Patients that have undergone ...

מודל העכבר של השתלת טחול מציע הזדמנות מצוינת לחשוף את התפקיד של תאי טחול בוויסות של תגובות חיסוניות מקומיות ומערכתיות במחלות דלקתיות. היתרון העיקרי של פרוטוקול זה הוא כי באמצעות עכברים חביבים, השתלת טחול מאפשרת לבדוק את גורלם, אריכות ימים, ותפקוד של תאי טחול. לפני תחילת ההליך, מניחים וילון חד פעמי סטרילי מעל הפלטפורמה הכירורגית ומאשרים את חוסר התגובה לצביטת בוהן בעכבר התורם הרדמה.גילחו את השיער מכל אזור הבטן והמקמים את העכבר על פלטפורמה כירורגית סטרילית תחת מיקרוסקופ הפעלה בהגדלה של פי 6 עד 10. לעקר את העור החשוף עם כרית הכנת אלכוהול ולאבטח את הגפיים עם סרט כירורגי. הזן את הבטן באמצעות חתך עור אנכי של שלושה עד ארבעה סנטימטרים מהעווית לתהליך הקסיפואיד.לצרוב את כלי העור ולהרחיב את החתך לבטן הצדדית משני הצדדים כדי להשיג חשיפה טובה יותר. באמצעות צמר גפן סטרילי, להעביר את המעיים לאגף הימני של הבטן כדי לחשוף את הטחול ולהשתמש צרוב טמפרטורה נמוכה סטרילית כדי לצרוב את וריד הקיבה הקצר המחובר לטחול. מניחים חתיכת גזה סטרילית ספוגה מלוחים 37 מעלות צלזיוס מעל הטחול כדי לשמור אותו לח ונפרד ולגייס את וריד הפורטל מרקמת הלבלב.Ligate הענפים של וריד הפורטל כפי שהוכח. מניחים תפר סביב דיסטל וריד הפורטל מן וריד הטחול ולהפוך את הטחול לצד ימין כדי לחשוף את אבי העורקים ואת העורק הטחול על גזע הצליאק. לנתח ולגייס את העורקים הטחול של הצליאק האורטי ולה מניחים תפר סביב העורקים proximal אל עורק הצליאק.להזריק 100 יחידות בינלאומיות של הפרין לתוך ונה קאווה נחות או IVC כדי heparinize את כל הגוף. לאחר שלוש דקות, ליגטה את עורקי הלחץ והקיבה ב- aorta proximal לעורק הצליאק. חוצים את וריד הפורטל ומבלבלים את כל הגוף עם 10 מיליליטר של מלוחים בעלי 4 מעלות צלזיוס מאבי העורקים בבטן דיסטלי לתא המטען של הצליאק.לאסוף את שתל הטחול ולחסום עם קטע הצליאק האורטי הקשורים בווריד הפורטל יחד עם קטע של וריד הטחול וחלק קטן של רקמת הלבלב. ואז לשמר את השתל בחמישה מיליליטר של ארבע מעלות צלזיוס מלוחים. הזן את הבטן המטופל באמצעות חתך קו האמצע לאחר האזור הכירורגי מוכן כפי שהוא עבור התורם ולהסיר טחול יליד המטופל על ידי קשירה של וריד הטחול ואת העורק.מכסים את רקמות המעי עם גזה ספוגה 37 מעלות צלזיוס בזהירות להעביר את המעי לצד שמאל. לנתח וללקט את הענפים המותניים של האב העורקים המסגרתיים ב- IVC ולהצליב את האב העורקים המסגרתיים ב- IVC עם שני מלחציים מיקרו-וסקולריים ארבעה מיליליטר. מניחים תפר ניילון 11-0 דרך ביתן infrarenal ולמשוך את הכלי כדי לאפשר יצירה של aortotomy אליפטי עם מיקרו-סיסורים.השתמש מחט מד 30 לנקב את IVC כדי ליצור venotomy אליפטי ולהרחיב את הפתח לאורך וריד פורטל התורם. לשטוף את העורקים ו- IVC עם 500 microliters של מלוחים heparinized כדי לנקות את הדם התוך-תאי או קרישי דם מכלי הדם ולהמקם את שתל הטחול התורם לתוך האגף הימני של הבטן המטופל. זהה בזהירות את שרוול אבי המין התורם ואת וריד הפורטל.לאחר אישור כי כלי הדם אינם מעוותים, לכסות את שתל הטחול עם גזה ספוגה מלוחים ארבע מעלות צלזיוס. באמצעות שני תפרים שהייה 11-0, לחבר את האזיק אבי האאורטיק התורם לשיא proximal ודיסטלי של אבי האאורטוטומיה המטופל ולעשות anastomosis עם שתיים עד שלוש ביסים של תפרים רציפים 11-0 ניילון בין שרוול אבי האאורטיק התורם ואת הקיר האחורי של aortotomy הנמען. סובבו את שתל הטחול לצד שמאל של המטופל והפכו את האנטומוזיס בין שרוול אבי העורקים התורם לקיר האחורי של אבי העורקים של המטופל.בצע את האנטומיה הווריד בין וריד פורטל התורם לבין IVC הנמען עם ארבע עד חמש ביסים של תפרים רציפים בכל צד. תפר תחילה את הקיר האחורי בתוך כלי השיט ולאחר מכן סגור את הקיר האחורי באמצעות אותו תפר. להשלים את האנטומיה עם קשר ממוקם בפינה התחתונה מחוץ IVC.עכשיו לשחרר את מהדקי כלי ולהשתמש ספוגית כותנה סטרילית כדי טמפונדה הדימום עד צבע הטחול הוא התאושש. סגור את הבטן עם תפר Vicryl סינטטי 5-0 נספג בתבנית רציפה ולסגור את שכבת העור עם תפר ניילון 5-0 בתבנית מופרעת. ואז להזריק 250 microliters של מלוחים חמים תת עורית לארבעה מקומות נפרדים לחמם את העכבר באינקובטור מבוקר טמפרטורה 30 מעלות צלזיוס במשך השעות הראשונות לאחר הפעולה עם ניטור עד החיה חזרה להכרה מספקת להעברה לכלוב הבית.Hematoxylin ו- eosin של טחול isografts ימים אחד ושבע לאחר ההשתלה מגלה כי הארכיטקטורה של isografts הטחול נשאר שלם במהלך השבוע שלאחר הניתוח הראשון. ניתוח ציטומטרי זרימה כדי לחקור את הגירת תאי הטחול התורם לאחר ההשתלה מראה כי כ -50% מתאי הטחול נגזרים ביום אחד לאחר ההשתלה וכ -46% נגזרים. שבעה ימים לאחר ההשתלה, לויקוציטים נגזר התורם מהווים כ 32% מכלל תאי הטחול בעוד התאים הנגזרים הנמען גדל עד כ 53% לויקוציטים טחול התורם גם היגרו לתוך בלוטות הלימפה, דם, ומח העצם כבר ביום הראשון ומתוחזקים לפחות יום שבע יצירת כימרה ייחודי יקר עבור מחקר סחר splenocyte.שימוש בעכברים מהונדסים גנטית כתורמים טחול יאפשר את חקירת התפקידים של מתווכים שמקורם בתא הטחול או מסלולי איתות מרכזיים בתהליכי מחלה. מודל זה יכול להיות כלי רב עוצמה לחקר המנגנונים של אוכלוסיות תאי הטחול בתגובה לפתוגנים, פציעה, דלקת או דחיית השתלה.

Research

JoVE Journal

Medicine

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Orthotopic אבי העורקים להשתלות: מודל עכברוש לחקר התפתחות vasculopathy כרונית

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

A Mouse Model of in Utero Transplantation

A Mouse Model of in Utero Transplantation

במודל עכבר של בתוך הרחם השתלה

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) Research

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation VCA Research

דגם השתלות Heterotopic החזירים הינד איבר השתנה לTranslational vascularized Composite Allotransplantation מחקר (VCA)

Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) such as hand and face transplants represent a viable treatment option for complex musculoskeletal trauma ...

A Modified Method for Heterotopic Mouse Heart Transplantion

שיטה שונה לHeterotopic מאוס לב Transplantion

Mice are often used as heart transplant donors and recipients in studies of transplant immunology due to the wide range of transgenic mice and reagents ...

Murine Heterotopic Heart Transplant Technique

טכניקת השתלות Murine Heterotopic לב

It is now over forty years since this technique was first reported by Corry, Wynn and Russell. Although it took some years for other labs to become ...

Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

השתלה של הריאה Valve שימוש במודל עכבר של Heterotopic לב והשתלות

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

A Novel Microsurgical Model for Heterotopic, En Bloc Chest Wall, Thymus, and Heart Transplantation in Mice

Microsurgical דגם חדשני לHeterotopic, כמקשה אחת בחזה קיר, קורנית, ולב השתלה בעכברים

Exploration of novel strategies in organ transplantation to prolong allograft survival and minimizing the need for long-term maintenance immunosuppression ...

Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse

Orthotopic הינד לימב השתלה בבית העכבר

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and ...

Heterotopic Renal Autotransplantation in a Porcine Model: A Step-by-Step Protocol

Heterotopic כליה Autotransplantation במודל חזירי: פרוטוקול צעד-אחר-צעד

Kidney transplantation is the treatment of choice for patients suffering from end-stage renal disease. It offers better life expectancy and higher quality ...