Name: a mouse model of vascularized heterotopic spleen transplantation for studying spleen cell biology and transplant immunity
Uploaded: 2019-06-11T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model of Vascularized Heterotopic Spleen Transplantation for Studying Spleen Cell Biology and Transplant Immunity at JoVE.com

Авторы благодаря Северо-Западного университета Всеобъемлющий центр трансплантации и Фейнберг школы медицины исследований программы для ресурсов и финансирования поддержки. В частности, поток Цитометрии и гистологии услуги были предоставлены Северо-Западного университета потока цитометрии основных средств и мышь гистологии и фенотипирования лаборатории, соответственно, оба из которых поддерживаются NCI P30-CA060553 награжден Роберт H Лурье Всеобъемлющий онкологический центр. Мы благодарим мистера Нейта Эспарсу за коррективы этой рукописи.

Все процедуры и использование животных в этом исследовании были выполнены в соответствии с протоколами, утвержденными Комитетом по уходу и использованию животных Северо-Западного университета (IACUC). В этом исследовании, от 8 до 10 недель мужчин CD45.2 и CD45.1 мышей (как на BALB/c фон, из лаборатор...

<ol>
	<li>Cesta, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+structure,+function,+and+histology+of+the+spleen.">Normal structure, function, and histology of the spleen.</a> Toxicologic Pathology. 34 (5), 455-465 (2006).</li><li>Mebius, R. E., Kraal, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+function+of+the+spleen.">Structure and function of the spleen.</a> Nature Reviews Immunology. 5 (8), 606-616 (2005).</li><li>Misiakos, E. P., Bagias, G., Liakakos, T., Machairas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laparoscopic+splenectomy:+Current+concepts.">Laparoscopic splenectomy: Current concepts.</a> World Journal of Gastrointestinal Endoscopy. 9 (9), 428-437 (2017).</li><li>Kristinsson, S. Y., Gridley, G., Hoover, R. N., Check, D., Landgren, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+risks+after+splenectomy+among+8,149+cancer-free+American+veterans:+a+cohort+study+with+up+to+27+years+follow-up.">Long-term risks after splenectomy among 8,149 cancer-free American veterans: a cohort study with up to 27 years follow-up.</a> Haematologica. 99 (2), 392-398 (2014).</li><li>Thai, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+complications+of+splenectomy+in+adult+immune+thrombocytopenia.">Long-term complications of splenectomy in adult immune thrombocytopenia.</a> Medicine (Baltimore). 95 (48), e5098 (2016).</li><li>Sinwar, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overwhelming+post+splenectomy+infection+syndrome+-+review+study.">Overwhelming post splenectomy infection syndrome - review study.</a> International Journal of Surgery. 12 (12), 1314-1316 (2014).</li><li>Rorholt, M., Ghanima, W., Farkas, D. K., Norgaard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risk+of+cardiovascular+events+and+pulmonary+hypertension+following+splenectomy+-+a+Danish+population-based+cohort+study+from+1996-2012.">Risk of cardiovascular events and pulmonary hypertension following splenectomy - a Danish population-based cohort study from 1996-2012.</a> Haematologica. 102 (8), 1333-1341 (2017).</li><li>Crary, S. E., Buchanan, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+complications+after+splenectomy+for+hematologic+disorders.">Vascular complications after splenectomy for hematologic disorders.</a> Blood. 114 (14), 2861-2868 (2009).</li><li>Di Carlo, I., Pulvirenti, E., Toro, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+technique+for+spleen+autotransplantation.">A new technique for spleen autotransplantation.</a> Surgical Innovation. 19 (2), 156-161 (2012).</li><li>Holdsworth, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+the+spleen+and+splenic+autotransplantation.">Regeneration of the spleen and splenic autotransplantation.</a> British Journal of Surgery. 78 (3), 270-278 (1991).</li><li>Tzoracoleftherakis, E., Alivizatos, V., Kalfarentzos, F., Androulakis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complications+of+splenic+tissue+reimplantation.">Complications of splenic tissue reimplantation.</a> Annals of the Royal College of Surgeons of England. 73 (2), 83-86 (1991).</li><li>Kato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+the+spleen:+effect+of+splenic+allograft+in+human+multivisceral+transplantation.">Transplantation of the spleen: effect of splenic allograft in human multivisceral transplantation.</a> Annals of Surgery. 246 (3), 436-444 (2007).</li><li>Aronovich, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correction+of+hemophilia+as+a+proof+of+concept+for+treatment+of+monogenic+diseases+by+fetal+spleen+transplantation.">Correction of hemophilia as a proof of concept for treatment of monogenic diseases by fetal spleen transplantation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (50), 19075-19080 (2006).</li><li>Cohen, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Splenosis;+review+and+report+of+subcutaneous+splenic+implant.">Splenosis; review and report of subcutaneous splenic implant.</a> Archives of surgery. 69 (6), 777-784 (1954).</li><li>Coburn, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spleen+transplantation+in+the+rat.">Spleen transplantation in the rat.</a> Transplantation. 8 (1), 86-88 (1969).</li><li>Lee, S., Orloff, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+for+splenic+transplantation+in+the+rat.">A technique for splenic transplantation in the rat.</a> Surgery. 65 (3), 436-439 (1969).</li><li>Swirski, F. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+splenic+reservoir+monocytes+and+their+deployment+to+inflammatory+sites.">Identification of splenic reservoir monocytes and their deployment to inflammatory sites.</a> Science. 325 (5940), 612-616 (2009).</li><li>Hsiao, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spleen-derived+classical+monocytes+mediate+lung+ischemia-reperfusion+injury+through+IL-1beta.">Spleen-derived classical monocytes mediate lung ischemia-reperfusion injury through IL-1beta.</a> Journal of Clinical Investigation. 128 (7), 2833-2847 (2018).</li><li>Robbins, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extramedullary+hematopoiesis+generates+Ly-6C(high)+monocytes+that+infiltrate+atherosclerotic+lesions.">Extramedullary hematopoiesis generates Ly-6C(high) monocytes that infiltrate atherosclerotic lesions.</a> Circulation. 125 (2), 364-374 (2012).</li><li>Kim, E., Yang, J., Beltran, C. D., Cho, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+spleen-derived+monocytes/macrophages+in+acute+ischemic+brain+injury.">Role of spleen-derived monocytes/macrophages in acute ischemic brain injury.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 34 (8), 1411-1419 (2014).</li><li>Bronte, V., Pittet, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+spleen+in+local+and+systemic+regulation+of+immunity.">The spleen in local and systemic regulation of immunity.</a> Immunity. 39 (5), 806-818 (2013).</li><li>Wang, N. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recruitment+of+macrophages+from+the+spleen+contributes+to+myocardial+fibrosis+and+hypertension+induced+by+angiotensin+II.">Recruitment of macrophages from the spleen contributes to myocardial fibrosis and hypertension induced by angiotensin II.</a> Journal of the Renin-Angiotensin-Aldosterone System. 18 (2), 1470320317706653 (2017).</li><li>Tian, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+spleen+contributes+importantly+to+myocardial+infarct+exacerbation+during+post-ischemic+reperfusion+in+mice+via+signaling+between+cardiac+HMGB1+and+splenic+RAGE.">The spleen contributes importantly to myocardial infarct exacerbation during post-ischemic reperfusion in mice via signaling between cardiac HMGB1 and splenic RAGE.</a> Basic Research in Cardiology. 111 (6), 62 (2016).</li><li>Jang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutting+Edge:+Check+Your+Mice-A+Point+Mutation+in+the+Ncr1+Locus+Identified+in+CD45.1+Congenic+Mice+with+Consequences+in+Mouse+Susceptibility+to+Infection.">Cutting Edge: Check Your Mice-A Point Mutation in the Ncr1 Locus Identified in CD45.1 Congenic Mice with Consequences in Mouse Susceptibility to Infection.</a> Journal of Immunology. 200 (6), 1982-1987 (2018).</li></ol>

Убедительные данные свидетельствуют о том, что моноциты селезенки играют важную роль в стерильных воспалительных процессах, таких как атеросклероз19, острый ишемический мозг20 или травмы легких18, а также травмы имиокарда I /R и реконструкция<sup class="xr...

Селезенка является крупнейшим вторичным лимфоидным органом в организме и имеет решающее значение в иммунной и гематопойетической систем. Его функции в основном выполняются двумя морфологически отдельными отсеками, красной мякотью и белой мякотью1. Красная мякоть представляет собой трехмерную сетку из венозных пазух и селезенки, которые состоят из ретикулярных волокон, ретикулярных клеток и связанных с ними макрофагов. Эта уникальная структура позволяет красной мякоти выступать в качестве эффективного фильтра крови, который удаляет посторонние материалы и старые или поврежденные эритроциты. Белая мякоть включает в себя фолликулы, маргинальные зоны, и периартериолярных лимфоидных оболочек (PALS) и является важным местом для антигена захвата и обработки, лимфоцитов самонаведения, преобразования, распространения и созревания2. Тем не менее, селезенка обычно рассматривается как незаменимый орган, потому что другие лимфатические органы, такие как лимфатические узлы, также могут выполнять некоторые из своих функций и потеря селезенки обычно не приводит к смерти. Поэтому спленэктомия широко выполняется в качестве терапевтического метода для пациентовс селезенкой или доброкачественными гематологическими заболеваниями 3. Однако пациенты с спленэктомией сталкиваются с рядом длительных осложнений. Бактериальные инфекции являются наиболее признанными осложнениями спленэктомии4,5. В последнее время подавляющее пост-спленэктомии сепсис был признан интенсивным осложнением спленэктомии, связанные с высокой смертностью6. Кроме того, последние эпидемиологические исследования показывают, что спленэктомия может быть связана с возникновением сердечно-сосудистых заболеваний, предполагая, что дальнейшие физиологические функции селезенки еще предстоит изучить7,8.
В клинике были использованы аутотрансплантация селезенки и аллотрансплантация селезенки. В настоящее время аутотрансплантация селезенки путем имплантации секций селезенки в мешки, созданные в большей области, рассматривается как единственная возможность для сохранения селезенки после травматической спленэктомии9,10. Тем не менее, эффективность этой операции является спорным, как послеоперационные осложнения, как асептический некроз селезенки и мелкой непроходимости кишечника из-за послеоперационных спаек может произойти11. Аллотрансплантация селезенки участвует в многовисцеральной трансплантации12. Клинические данные от многовисцеральной трансплантации предполагает, что аллотрансплантация селезенки может играть защитную роль в отторжении аллотрансплантата тонкой кишки, не вызывая трансплантата против хозяина болезни (GVHD)12. Однако литература о благотворном воздействии аллотрансплантации селезенки как компонента многовисцеральной трансплантации по-прежнему ограничена, и основные механизмы еще предстоит определить. В 2006 году Яир Райснер и др. сообщили, что пересадка ткани эмбриональной селезенки свиньи, которая не имеет Т-клеток для мышей, может вылечить гемофилию А, генетическое заболевание, не вызывая GVHD13, поддерживая, что трансплантация селезенки имеет терапевтические перспективы в определенных заболеваний. Поэтому необходимо провести дальнейшие исследования терапевтического потенциала трансплантации селезенки.
Модели трансплантации селезенки животных являются ценными для изучения недооцененной функции иммунных клеток селезенки при прогрессировании заболевания, а также для проверки потенциального терапевтического эффекта трансплантации селезенки. Экспериментальные модели пересадки цельной селезенки были задокументированы с начала 1900-х годов, как было рассмотрено Коэном14. В 1969 году Коберн Ричард J. и Ли и др. подробно техники трансплантации селезенки у крыс15,16. Совсем недавно, Swirski FK et al. описал модель мыши трансплантации селезенки17. По сравнению с крысиными моделями, мышиные модели трансплантации селезенки более привлекательны из-за ряда присущих ей преимуществ. Например, используя модель мыши, мы можем получить доступ к обширному разнообразию реагентов, недоступных для моделей крыс. Кроме того, с помощью конгенических мышей (например, мышей с CD45.1/CD45.2 фоне), сингенной трансплантации селезенки позволяет отслеживать судьбу, долговечность, и функции спленоцитов18. На основе работы Swirski FK et al.17, мы дополнительно установили этот упрощенный и расширенный протокол трансплантации селезенки у мышей. Описанный ниже протокол сочетает в себе как надежность, так и осуществимость в стандартизированном порядке и может быть использован в качестве инструмента для изучения биологии селезенки и иммунитета к трансплантации.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Wyeth</td>
			<td>206205-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Lloyd Laboratories</td>
			<td>139-236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin solution</td>
			<td>Abraxis Pharmaceutical Products</td>
			<td>504031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection grade normal saline</td>
			<td>Hospira Inc.</td>
			<td>NDC 0409-4888-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Ethanol</td>
			<td>Pharmco Products Inc.</td>
			<td>111000140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ThermoCare Small Animal ICU System</td>
			<td>Thermocare, Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adson Forceps</td>
			<td>Roboz Surgical Instruments</td>
			<td>RS-5230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Derf Needle Holder</td>
			<td>Roboz Surgical Instruments</td>
			<td>RS-7822</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extra Fine Micro Dissecting Scissors</td>
			<td>Roboz Surgical Instruments</td>
			<td>RS-5881</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-clip</td>
			<td>Roboz Surgical Instruments</td>
			<td>RS-5420</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7-0 silk</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>SUT-S 103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>11-0 nylon on 4-mm (3/8) needle</td>
			<td>Sharpoint DR4</td>
			<td>AK-2119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD45.2 antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>553772</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD45.1 antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>553776</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD11b antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>557657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms B220 antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>553089</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms Ly6C antibody</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>48-5932-80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms Ly6G antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>561236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms F4/80 antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>565614</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD11c antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>558079</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD3 antibody</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>48-0032-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD4 antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>552051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD8 antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>563786</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD&#8482; Fixable Violet Dead Cell Stain Kit</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>L34955</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a mouse model of vascularized heterotopic spleen transplantation for studying spleen cell biology and transplant immunity

Селезенка является уникальным лимфоидным органом, который играет важную роль в гомеостазе иммунной и гематопойетической систем. Пациенты, которые подверглись спленэктомии, независимо от осаждения причин склонны к развитию подавляющего пост-спленэктомии инфекции и опыт повышенный риск глубокого венозного тромбоза и злокачественных новообразований. Недавно эпидемиологические исследования показали, что спленэктомия может быть связана с возникновением сердечно-сосудистых заболеваний, что свидетельствует о том, что физиологические функции селезенки еще не полностью признаны. Здесь мы представляем модель вылагостающих гетеротопических трансплантаций селезенки, которая не только может быть использована для изучения функции и поведенческой активности подмножеств селезенки иммунной клетки в различных биологических процессах, но и может быть мощным инструментом для тестирования терапевтический потенциал трансплантации селезенки при определенных заболеваниях. Основные хирургические шаги этой модели включают сбор донорской селезенки, удаление реципиента родной селезенки, и реваскуляризации селезенки трансплантата. Используя конгенические штаммы мыши (например, мыши с CD45.1/CD45.2 фонами), мы заметили, что после сингенной трансплантации, как донорские селезенки лимфоцитов и миелоидные клетки мигрировали из трансплантата уже после операционный день 1, в соответствии с приток нескольких типов клеток-реципиентов, тем самым генерируя уникальную химеру.  Несмотря на относительно сложные методы, эта процедура может быть выполнена с коэффициентом успеха 90%. Эта модель позволяет отслеживать судьбу, долговечность и функцию спленоцитов во время устойчивого состояния и в условиях болезни после трансплантации селезенки, тем самым предлагая прекрасную возможность открыть для себя определенную роль для селезенки полученных иммунных клеток в различных процессов заболевания.

Вся процедура пересадки мышечной селезенки может быть завершена в течение 90 минут опытными микрохирургами. Наша лаборатория провела более 100 пересадок селезенки у мышей. Коэффициент успеха составляет более 90%, как это определено выживанием мыши получателя и пересадк?...

Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model of Vascularized Heterotopic Spleen Transplantation for Studying Spleen Cell Biology and Transplant Immunity at JoVE.com

A Mouse Model of Vascularized Heterotopic Spleen Transplantation for Studying Spleen Cell Biology and Transplant Immunity

Мышь Модель васкуляризированной гетеротопной трансплантации селезенки для изучения биологии селезенки и трансплантации иммунитета

Этот протокол детализирует хирургические шаги мышиной модели васкуляризированной трансплантации гетеротопической селезенки, технически сложной модели, которая может служить мощным инструментом в изучении судьбы и долговечности клеток селезенки, механизмов различных селезенки популяций клеток в прогрессировании заболевания и трансплантации иммунитета.

The spleen is a unique lymphoid organ that plays a critical role in the homeostasis of the immune and hematopoietic systems. Patients that have undergone ...

Модель мыши трансплантации селезенки предлагает большие возможности для выявления роли клеток селезенки в регуляции местных и системных иммунных реакций при воспалительных заболеваниях. Основным преимуществом этого протокола является то, что с помощью конгенных мышей трансплантация селезенки позволяет проверить судьбу, долговечность и функцию клеток селезенки. Перед началом процедуры поместите стерильную одноразовую драпировку над хирургической платформой и подтвердите отсутствие реакции на щепотку ноша в анестезированной донорской мыши.Бритье волос со всей области живота и поместите мышь на стерильную хирургическую платформу под операционным микроскопом при увеличении от 6 до 10X. Стерилизовать открытые кожи с алкоголем подготовки площадку и обеспечить конечностей с хирургической лентой. Введите брюшной полости через три-четыре сантиметра средней линии вертикального разреза кожи от лобков до процесса ксифоида.Прижигать сосуды кожи и расширить разрез на боковой живот с обеих сторон для достижения лучшего воздействия. Используя стерильный ватный тампон, переместите кишечник на правый фланг живота, чтобы разоблачить селезенку и использовать стерильную низкотеморную прижигание, чтобы прижигать короткую желудочную вену, прикрепленную к селезенке. Поместите кусок стерильной марли, пропитанной 37 градусов по Цельсию солевой раствор над селезенкой, чтобы держать его влажным и отделить и мобилизовать портал вены из ткани поджелудочной железы.Ligate ветви портала вены, как попродемонстрировано. Поместите шов вокруг портала вены дистальной от селезенки и перевернуть селезенку в правую сторону, чтобы разоблачить аорты и селезенки артерии на целиакии ствола. Вскрыть и мобилизовать аорты целиакии splenic артерий и место шва вокруг аорты проксимальной целиакии.Ввись 100 международных единиц гепарина в нижняя кава вены или IVC, чтобы гепаринизировать все тело. Через три минуты, ligate печеночных и желудочных артерий в аорты проксимальной целиакии. Трансект портала вены и perfuse всего тела с 10 миллилитров четыре степени Цельсия гепаринизированный солевой раствор от брюшной аорты дистальной целиакии ствола.Соберите пересадку селезенки и блок с сопутской аорты целиакии splenic сегмента в портале вены вместе с сегментом селезенки вены и небольшая часть ткани поджелудочной железы. Затем сохранить трансплантат в пять миллилитров четыре степени по Цельсию солевой раствор. Введите получателя живота через разрез средней линии после хирургической области готовится, как это для донора и удалить реципиент родной селезенки путем лигатирования селезенки и артерии.Обложка тканей кишечника с 37 градусов по Цельсию пропитанной марлей и тщательно переместить кишечник в левую сторону. Вскрыть и лигат поясничных ветвей инфраренальной аорты в IVC и перекрестного зажима инфраренальной аорты в IVC с двумя четырьмя миллилитров микрососудистыми зажимами. Поместите 11-0 нейлоновый шов через инфраренальной аорты и втягивать сосуд, чтобы создать эллиптической аортотомии с микросхемами.Используйте 30 калибровочных игл для прокола IVC для создания эллиптической венозомии и расширения отверстия до длины донорской вены портала. Промыть аорту и IVC с 500 микролитров гепаринизированного солевого раствора, чтобы очистить интралюминальной крови или сгустков крови от сосудов и место донора селезенки трансплантата в правом фланге живота получателя. Тщательно определите донорскую аорта манжету и портвейную вену.Подтвердив, что сосуды не скручены, накройте селезенку четырехградусным солевым раствором, пропитанным марлей. Используя два 11-0 пребывания швы, подключить донора аортальной манжеты к проксимальной и дистальной вершины аортотомии реципиента и сделать анастомоз с двумя-тремя укусами непрерывного 11-0 нейлоновых швов между донорской аортальной манжеты и передней стенки реципиента аортотомии. Поверните пересадку селезенки на левую сторону реципиента и сделайте анатомоз между донорской аортальной манжетой и задней стенкой реципиента аортотомии.Выполните венозный анатомоз между донорской вены портала и реципиента IVC с четырьмя-пятью укусами непрерывных швов с каждой стороны. Шов задней стенки в сосуде люмена, а затем закрыть переднюю стенку, используя тот же шов. Завершите анатомоз узлом, расположенным на нижнем углу за пределами IVC.Теперь отпустите зажимы сосуда и используйте стерильный ватный тампон, чтобы тампонировать кровотечение до тех пор, пока цвет селезенки не будет восстановлен. Закройте брюшную полость с 5-0 синтетическим абсорбируемым швом Vicryl в непрерывном картине и закройте слой кожи с швом 5-0 нейлона в прерванном картине. Затем ввимите 250 микролитров теплого солевого подкожно в четыре отдельных места и согреете мышь в 30-градусном температурном инкубаторе в течение первых нескольких часов после операции с мониторингом до тех пор, пока животное не обретет достаточное сознание для перевода в домашнюю клетку.Гематоксилин и эозин селезенки изотрансплантатов дней один и семь после трансплантации показывает, что архитектура селезенки изографов остается неизменным в течение первой послеоперационной недели. Цитометрический анализ потока для исследования миграции донорских клеток селезенки после трансплантации показывает, что примерно 50% клеток селезенки являются донорами, полученными в один день после трансплантации, и примерно 46% являются реципиентами. Через семь дней после трансплантации, донор полученных лейкоцитов приходится около 32% от общего числа клеток селезенки в то время как получатель производных клеток увеличилось примерно до 53%Донор splenic лейкоцитов также мигрировали в лимфатические узлы, кровь и костный мозг уже в первый день и поддерживаются по крайней мере день семь генерации уникальной химеры ценный для исследования торговли сленоцитами.Использование генетически модифицированных стук-в мышей в качестве доноров селезенки позволит исследование роли селезенки клеток, полученных посредников или ключевых сигнальных путей в процессах заболевания. Эта модель может быть мощным инструментом для изучения механизмов популяций клеток селезенки в ответ на патогенные микроорганизмы, травмы, воспаление или отторжение трансплантата.

Research

JoVE Journal

Medicine

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Ортотопическая аорты трансплантации: Крыса модель для изучения развития хронического заболевания сосудов

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

A Mouse Model of in Utero Transplantation

A Mouse Model of in Utero Transplantation

Мышь Модель В утробе матери Трансплантации

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) Research

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation VCA Research

Изменения Гетеротопическая Свиной задних конечностей Пересадка Модель для трансляционных васкуляризированных Composite аллотрансплантации (VCA) научно-исследовательского

Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) such as hand and face transplants represent a viable treatment option for complex musculoskeletal trauma ...

A Modified Method for Heterotopic Mouse Heart Transplantion

Модифицированный метод для гетеротопической Mouse сердца Transplantion

Mice are often used as heart transplant donors and recipients in studies of transplant immunology due to the wide range of transgenic mice and reagents ...

Murine Heterotopic Heart Transplant Technique

Мышиные Гетеротопическая пересадке сердца Техника

It is now over forty years since this technique was first reported by Corry, Wynn and Russell. Although it took some years for other labs to become ...

Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

Трансплантация клапана легочной артерии с помощью мыши Модель гетеротопической Трансплантация сердца

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

A Novel Microsurgical Model for Heterotopic, En Bloc Chest Wall, Thymus, and Heart Transplantation in Mice

Роман микрохирургические модели для Гетеротопическая, Собственная Блока грудной стенки, тимус, и Трансплантация сердца у мышей

Exploration of novel strategies in organ transplantation to prolong allograft survival and minimizing the need for long-term maintenance immunosuppression ...

Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse

Ортотопическая задних конечностей трансплантации у мышей

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and ...

Heterotopic Renal Autotransplantation in a Porcine Model: A Step-by-Step Protocol

Гетеротопическая Почечная Аутотрансплантация в свиной модели: Протокол Шаг за шагом

Kidney transplantation is the treatment of choice for patients suffering from end-stage renal disease. It offers better life expectancy and higher quality ...