Name: a mouse model of vascularized heterotopic spleen transplantation for studying spleen cell biology and transplant immunity
Uploaded: 2019-06-11T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model of Vascularized Heterotopic Spleen Transplantation for Studying Spleen Cell Biology and Transplant Immunity at JoVE.com

Yazarlar Northwestern Üniversitesi kapsamlı nakil merkezi ve kaynak ve finansman desteği için Feinberg Tıp araştırma çekirdekleri programı teşekkür ederiz. Özellikle, akış Cytometri ve histoloji Hizmetleri Northwestern Üniversitesi akış sitometri çekirdek tesis ve fare histolojisi ve phenotyping Laboratuvarı tarafından, sırasıyla, her ikisi de NCı P30 tarafından desteklenmektedir-CA060553 Robert H verilir Lurie kapsamlı Kanser Merkezi. Bu taslağı düzeltmek için Bay Nate Esparza 'ya teşekkür ederiz.

Bu çalışmada tüm prosedürler ve hayvan kullanımı Northwestern Üniversitesi Iç hayvan bakımı ve kullanım Komitesi (ıABUC) tarafından onaylanmış protokollere göre yapılmıştır. Bu çalışmada, 8 ila 10 hafta eski erkek CD 45.2 ve CD 45.1 fareler (hem BALB/c arka planda, Jackson laboratuvarından) dalak bağış ve alıcılar olarak kullanılan, sırasıyla syngeneic dalak transplantasyon modelleri oluşturmak için. Tüm hayvanlar Northwestern Üniversitesi hayvan tesislerinde steril ortamda yer aldı....

<ol>
	<li>Cesta, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+structure,+function,+and+histology+of+the+spleen.">Normal structure, function, and histology of the spleen.</a> Toxicologic Pathology. 34 (5), 455-465 (2006).</li><li>Mebius, R. E., Kraal, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+function+of+the+spleen.">Structure and function of the spleen.</a> Nature Reviews Immunology. 5 (8), 606-616 (2005).</li><li>Misiakos, E. P., Bagias, G., Liakakos, T., Machairas, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laparoscopic+splenectomy:+Current+concepts.">Laparoscopic splenectomy: Current concepts.</a> World Journal of Gastrointestinal Endoscopy. 9 (9), 428-437 (2017).</li><li>Kristinsson, S. Y., Gridley, G., Hoover, R. N., Check, D., Landgren, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+risks+after+splenectomy+among+8,149+cancer-free+American+veterans:+a+cohort+study+with+up+to+27+years+follow-up.">Long-term risks after splenectomy among 8,149 cancer-free American veterans: a cohort study with up to 27 years follow-up.</a> Haematologica. 99 (2), 392-398 (2014).</li><li>Thai, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+complications+of+splenectomy+in+adult+immune+thrombocytopenia.">Long-term complications of splenectomy in adult immune thrombocytopenia.</a> Medicine (Baltimore). 95 (48), e5098 (2016).</li><li>Sinwar, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overwhelming+post+splenectomy+infection+syndrome+-+review+study.">Overwhelming post splenectomy infection syndrome - review study.</a> International Journal of Surgery. 12 (12), 1314-1316 (2014).</li><li>Rorholt, M., Ghanima, W., Farkas, D. K., Norgaard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risk+of+cardiovascular+events+and+pulmonary+hypertension+following+splenectomy+-+a+Danish+population-based+cohort+study+from+1996-2012.">Risk of cardiovascular events and pulmonary hypertension following splenectomy - a Danish population-based cohort study from 1996-2012.</a> Haematologica. 102 (8), 1333-1341 (2017).</li><li>Crary, S. E., Buchanan, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+complications+after+splenectomy+for+hematologic+disorders.">Vascular complications after splenectomy for hematologic disorders.</a> Blood. 114 (14), 2861-2868 (2009).</li><li>Di Carlo, I., Pulvirenti, E., Toro, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+technique+for+spleen+autotransplantation.">A new technique for spleen autotransplantation.</a> Surgical Innovation. 19 (2), 156-161 (2012).</li><li>Holdsworth, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regeneration+of+the+spleen+and+splenic+autotransplantation.">Regeneration of the spleen and splenic autotransplantation.</a> British Journal of Surgery. 78 (3), 270-278 (1991).</li><li>Tzoracoleftherakis, E., Alivizatos, V., Kalfarentzos, F., Androulakis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complications+of+splenic+tissue+reimplantation.">Complications of splenic tissue reimplantation.</a> Annals of the Royal College of Surgeons of England. 73 (2), 83-86 (1991).</li><li>Kato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+the+spleen:+effect+of+splenic+allograft+in+human+multivisceral+transplantation.">Transplantation of the spleen: effect of splenic allograft in human multivisceral transplantation.</a> Annals of Surgery. 246 (3), 436-444 (2007).</li><li>Aronovich, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correction+of+hemophilia+as+a+proof+of+concept+for+treatment+of+monogenic+diseases+by+fetal+spleen+transplantation.">Correction of hemophilia as a proof of concept for treatment of monogenic diseases by fetal spleen transplantation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 103 (50), 19075-19080 (2006).</li><li>Cohen, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Splenosis;+review+and+report+of+subcutaneous+splenic+implant.">Splenosis; review and report of subcutaneous splenic implant.</a> Archives of surgery. 69 (6), 777-784 (1954).</li><li>Coburn, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spleen+transplantation+in+the+rat.">Spleen transplantation in the rat.</a> Transplantation. 8 (1), 86-88 (1969).</li><li>Lee, S., Orloff, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+for+splenic+transplantation+in+the+rat.">A technique for splenic transplantation in the rat.</a> Surgery. 65 (3), 436-439 (1969).</li><li>Swirski, F. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+splenic+reservoir+monocytes+and+their+deployment+to+inflammatory+sites.">Identification of splenic reservoir monocytes and their deployment to inflammatory sites.</a> Science. 325 (5940), 612-616 (2009).</li><li>Hsiao, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spleen-derived+classical+monocytes+mediate+lung+ischemia-reperfusion+injury+through+IL-1beta.">Spleen-derived classical monocytes mediate lung ischemia-reperfusion injury through IL-1beta.</a> Journal of Clinical Investigation. 128 (7), 2833-2847 (2018).</li><li>Robbins, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extramedullary+hematopoiesis+generates+Ly-6C(high)+monocytes+that+infiltrate+atherosclerotic+lesions.">Extramedullary hematopoiesis generates Ly-6C(high) monocytes that infiltrate atherosclerotic lesions.</a> Circulation. 125 (2), 364-374 (2012).</li><li>Kim, E., Yang, J., Beltran, C. D., Cho, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+spleen-derived+monocytes/macrophages+in+acute+ischemic+brain+injury.">Role of spleen-derived monocytes/macrophages in acute ischemic brain injury.</a> Journal of Cerebral Blood Flow &amp; Metabolism. 34 (8), 1411-1419 (2014).</li><li>Bronte, V., Pittet, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+spleen+in+local+and+systemic+regulation+of+immunity.">The spleen in local and systemic regulation of immunity.</a> Immunity. 39 (5), 806-818 (2013).</li><li>Wang, N. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recruitment+of+macrophages+from+the+spleen+contributes+to+myocardial+fibrosis+and+hypertension+induced+by+angiotensin+II.">Recruitment of macrophages from the spleen contributes to myocardial fibrosis and hypertension induced by angiotensin II.</a> Journal of the Renin-Angiotensin-Aldosterone System. 18 (2), 1470320317706653 (2017).</li><li>Tian, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+spleen+contributes+importantly+to+myocardial+infarct+exacerbation+during+post-ischemic+reperfusion+in+mice+via+signaling+between+cardiac+HMGB1+and+splenic+RAGE.">The spleen contributes importantly to myocardial infarct exacerbation during post-ischemic reperfusion in mice via signaling between cardiac HMGB1 and splenic RAGE.</a> Basic Research in Cardiology. 111 (6), 62 (2016).</li><li>Jang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutting+Edge:+Check+Your+Mice-A+Point+Mutation+in+the+Ncr1+Locus+Identified+in+CD45.1+Congenic+Mice+with+Consequences+in+Mouse+Susceptibility+to+Infection.">Cutting Edge: Check Your Mice-A Point Mutation in the Ncr1 Locus Identified in CD45.1 Congenic Mice with Consequences in Mouse Susceptibility to Infection.</a> Journal of Immunology. 200 (6), 1982-1987 (2018).</li></ol>

Çekici kanıtlar, dalak türevi monositlerin ateroskleroz19, akut iskemik beyin20 veya akciğer hasarı18gibi steril inflamatuar süreçlerde önemli bir rol oynarlar, hem de miyokard I/R yaralanma ve remodeling21,22,23. Bu raporlar, kalp-damar hastalığının önemli bir (özellikle de bir numaralı katil küresel olduğu verilen) bir çok kronik hastalı...

Dalak vücutta en büyük ikincil lenfoid organ ve bağışıklık ve hematopoetik sistemlerde kritik öneme sahiptir. Fonksiyonları öncelikle iki morfolojik ayrı bölmeler, kırmızı hamuru ve beyaz hamuru1tarafından gerçekleştirilir. Kırmızı selüloz, venöz sinüslerin ve retiküler liflerden, retiküler hücrelerden ve ilişkili makrofajlardan oluşan splenik kabloların üç boyutlu meshişidir. Bu eşsiz yapı, kırmızı hamuru, yabancı maddeleri ve eski veya hasarlı eritrositleri kaldıran etkili bir kan filtresi olarak hareket etmesini sağlar. Beyaz hamuru foliküller, marjinal bölge ve periarteriolar lenfoid Kılıf (PALS) içerir ve antijen bindirme ve işleme, lenfosit homing, dönüşüm, proliferasyon ve olgunlaşma için önemli bir sitedir2. Yine de, dalak genellikle bir vazgeçilebilir organ olarak kabul edilmiştir, çünkü diğer lenfatik organlar, lenf nodları gibi, ayrıca bazı işlevlerini yürütmek ve dalak kaybı genelde ölüme yol açmaz. Splenektomi bu nedenle splenik yaralanma veya benign hematolojik hastalıklar olan hastalar için terapötik bir yöntem olarak yaygın olarak yapılmıştır3. Ancak splenektomi olan hastalarda uzun süreli komplikasyonlar görülmektedir. Bakteriyel enfeksiyonlar splenektomi en iyi tanınan komplikasyonlarıdır4,5. Son zamanlarda, ezici sonrası splenektomi sepsis yüksek mortalite ile ilişkili splenektomi yoğun bir komplikasyon olarak tanınmıştır6. Dahası, son epidemiyolojik çalışmalar splenektomi kardiyovasküler hastalıkların oluşumu ile ilişkili olabileceğini gösteriyor, dalak daha fazla fizyolojik fonksiyonların incelenecek kalır düşündürmektedir,7,8.
Klinikte hem dalak ototransplantasyon hem de dalak allotransplantasyon kullanılmıştır. Şu anda, splenik doku bölümlerini büyük omentum 'da oluşturulan torbalar içine yerleştirerek dalak ototransplantasyon, travmatik splenektomi sonrası splenik fonksiyon korunması için tek olasılık olarak kabul edilir9,10. Bununla birlikte, bu ameliyatın etkinliği, Dalik dokuda aseptik nekroz ve postoperatif yapışmalar nedeniyle küçük barsak tıkanıklığı gibi cerrahi sonrası komplikasyonlar ortaya çıkabilir11. Dalak allotransplantasyonu çok viseral transplantasyon12' de yer almaktadır. Multivisceral transplantasyondan gelen klinik kanıtlar, dalak allonakli 'nin, Greft-versus-Host hastalığına (GVHD)12' ye neden olmadan küçük barsak allogreft reddi içinde koruyucu rol oynayabileceği anlamına gelmiştir. Ancak dalak allotransplantasyonunun çok viseral transplantasyonun bir bileşeni olarak yararlı etkisi ile ilgili literatür hala sınırlıdır ve temel mekanizmalar tanımlanmaya devam eder. 2006 yılında, Yair Reisner ve ark., GVHD13neden olmadan bir genetik hastalık hemofili a tedavi edebilir fareler hiçbir T hücreleri olan nakil domuz embriyonik dalak doku bildirdi, bu dalak transplantasyonu destekleyen terapötik söz tutar Bazı hastalıklar. Bu nedenle, dalak nakli terapötik potansiyeli hakkında daha fazla soruşturma için bir ihtiyaç vardır.
Dalak transplantasyonunun hayvan modelleri, hastalık ilerlemesinde dalak türevi immün hücrelerin tanınmaz fonksiyonunu keşfetmek ve dalak transplantasyonunun potansiyel terapötik etkisini test etmek için değerlidir. Deneysel tüm dalak nakil modelleri, Cohen14tarafından gözden geçirildiği gibi 1900 ' lerin başlarında belgelenmiştir. 1969 yılında, Coburn Richard J. ve Lee et al. fareler15,16dalak transplantasyon tekniği detaylı. Daha Geçenlerde, Swirski FK ve ark. dalak nakli17bir fare modeli nitelendirdi. Sıçan modelleriyle karşılaştırıldığında, dalak transplantasyonunun fare modelleri, çeşitli doğal avantajları nedeniyle daha çekicidir. Örneğin, bir fare modeli kullanarak, biz sıçan modelleri için kullanılamıyor reaktifler geniş bir çeşitlilik erişebilirsiniz. Ayrıca, konjenik fareler kullanarak (örneğin, CD 45.1/CD 45.2 arka plan ile fareler), bir syngeneic dalak nakli mümkün kaderi izlemek için yapar, uzun ömürlü, ve splenanosit fonksiyonu18. Swirski FK ve ark.17' nin çalışmalarına dayanarak, farelerde Bu basitleştirilmiş ve gelişmiş dalak nakli protokolünü kurduk. Aşağıda açıklanan protokol hem güvenilirlik hem de fizibilite standartlaştırılmış bir şekilde birleştirir ve dalak biyoloji ve nakil bağışıklık çalışması için bir araç olarak kullanılabilir.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Wyeth</td>
			<td>206205-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Lloyd Laboratories</td>
			<td>139-236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin solution</td>
			<td>Abraxis Pharmaceutical Products</td>
			<td>504031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection grade normal saline</td>
			<td>Hospira Inc.</td>
			<td>NDC 0409-4888-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% Ethanol</td>
			<td>Pharmco Products Inc.</td>
			<td>111000140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ThermoCare Small Animal ICU System</td>
			<td>Thermocare, Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adson Forceps</td>
			<td>Roboz Surgical Instruments</td>
			<td>RS-5230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Derf Needle Holder</td>
			<td>Roboz Surgical Instruments</td>
			<td>RS-7822</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extra Fine Micro Dissecting Scissors</td>
			<td>Roboz Surgical Instruments</td>
			<td>RS-5881</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro-clip</td>
			<td>Roboz Surgical Instruments</td>
			<td>RS-5420</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7-0 silk</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>SUT-S 103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>11-0 nylon on 4-mm (3/8) needle</td>
			<td>Sharpoint DR4</td>
			<td>AK-2119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD45.2 antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>553772</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD45.1 antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>553776</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD11b antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>557657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms B220 antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>553089</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms Ly6C antibody</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>48-5932-80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms Ly6G antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>561236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms F4/80 antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>565614</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD11c antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>558079</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD3 antibody</td>
			<td>eBioscience</td>
			<td>48-0032-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD4 antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>552051</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ms CD8 antibody</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>563786</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD&#8482; Fixable Violet Dead Cell Stain Kit</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>L34955</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a mouse model of vascularized heterotopic spleen transplantation for studying spleen cell biology and transplant immunity

Dalak, bağışıklık ve hematopoetik sistemlerin homeostazı 'te kritik bir rol oynayan benzersiz bir lenfoid organıdır. Ne olursa olsun çökelme nedenleri splenektomi geçirmiş hastalar ezici bir sonrası splenektomi enfeksiyon geliştirmek ve derin venöz tromboz ve malignite riskleri artan deneyim eğilimli. Son zamanlarda, epidemiyolojik çalışmalar splenektomi kardiyovasküler hastalıkların oluşumu ile ilişkili olabileceğini belirtti, dalak fizyolojik fonksiyonları henüz tam olarak tanınmadı düşündürmektedir. Burada, sadece farklı biyolojik süreçlerde splenik immün hücre alt setlerinin fonksiyon ve davranışsal aktivitesini incelemek için kullanılabilecek değil, aynı zamanda test etmek için güçlü bir araç olabilir vaskülarize heterotopik dalak nakli, bir fare modeli tanıtmak bazı hastalıklarda dalak nakli terapötik potansiyeli. Bu modelin Ana cerrahi adımlar donör dalak hasat içerir, alıcı yerli dalak kaldırılması, ve dalak greft revaskülarizasyon. Konjenik fare suşları (örn., CD 45.1/CD 45.2 arka planlar ile fareler) kullanarak, syngeneic transplantasyondan sonra, hem donör türetilen splenik lenfositler ve miyeloid hücreler, ameliyat sonrası gün olarak erken olarak greft dışına göç ederek böylece benzersiz bir Chimera üreten alıcı hücrelerinin birden fazla tür akını.  Nispeten zorlu tekniklere rağmen, bu prosedür >% 90 başarı oranı ile yapılabilir. Bu model, sürekli devlet sırasında ve dalak nakli takiben bir hastalık ayarında, böylece dalak türevi bağışıklık hücrelerinin farklı rolünü keşfetmek için büyük bir fırsat sunan, kaderin, uzun ömürlü ve splenanositlerin fonksiyonunu izleme sağlar farklı hastalık süreçleri.

Fare dalak nakli tüm prosedür deneyimli mikrocerrahlar tarafından 90 dk içinde tamamlanabilir. Laboratuvarımız farelerde 100 üzerinde dalak nakli gerçekleştirdi. Başarı oranı her iki alıcı fare ve dalak greft sonrası ameliyat günü (POD) 1 veya POD 7 (bizim çalışma uç noktası) hayatta kalma tarafından tanımlanan% 90 üzerinde. Dalak greftinin hayatta kalması, splenanositlerin makroskopik görünümü ve akış sitometri analizi ile doğrulandı. Deneyimimize dayana...

Watch this Scientific Journal Video about A Mouse Model of Vascularized Heterotopic Spleen Transplantation for Studying Spleen Cell Biology and Transplant Immunity at JoVE.com

A Mouse Model of Vascularized Heterotopic Spleen Transplantation for Studying Spleen Cell Biology and Transplant Immunity

Dalak hücre biyoloji ve nakli bağışıklık eğitimi için vascularized heterotopik dalak transplantasyonunun fare modeli

Bu protokol, dalak hücrelerin kaderi ve uzun ömürlü çalışmasında güçlü bir araç olarak hizmet veren, farklı dalak mekanizmaları olan vaskülarized heterotopik dalak transplantasyonunun bir fare modelinin cerrahi adımlarını ayrıntılarıyla araştırabilir. hastalık progresyonunda hücre nüfusa ve nakli bağışıklık.

The spleen is a unique lymphoid organ that plays a critical role in the homeostasis of the immune and hematopoietic systems. Patients that have undergone ...

Dalak transplantasyonunun fare modeli, inflamatuar hastalıklarda lokal ve sistemik immün yanıtların düzenlenmesinde dalak hücrelerinin rolünü ortaya çıkarmak için büyük bir fırsat sunmaktadır. Bu protokolün en büyük avantajı, konjenijen fareler kullanılarak dalak naklinin dalak hücrelerinin kaderini, uzun ömürlülüğünü ve işlevini kontrol etmeyi mümkün kılmıştır. İşleme başlamadan önce, cerrahi platform üzerine steril bir tek kullanımlık perde yerleştirin ve anestezi donör farede parmak kıskacına yanıt eksikliğini onaylayın.Tüm karın bölgesinden saç tıraş ve 6 ila 10X büyütme bir işletim mikroskop altında steril bir cerrahi platform üzerine fare yerleştirin. Bir alkol hazırlık pedi ile maruz kalan cildi sterilize ve cerrahi bant ile uzuvları güvenli. Pubis'ten ksifoid sürecine kadar 3-4 santimetrelik orta hat dikey deri kesisinden karına girin.Cilt damarları cauterize ve daha iyi pozlama elde etmek için her iki tarafta lateral karın kesi uzatmak. Steril bir pamuklu bez kullanarak, dalak maruz bırakmak için karın sağ kanadına bağırsak hareket ve dalak bağlı kısa mide damarı cauterize için steril bir düşük sıcaklık cautery kullanın. Nemli tutmak ve ayrı ve pankreas dokusundan portal ven seferber etmek için dalak üzerinde 37 derece santigrat tuzlu tuzlu ile ıslatılmış steril gazlı bez bir parça yerleştirin.Gösterildiği gibi portal venin dallarını inkâr edin. Dalak ven portal ven distal etrafında bir dikiş yerleştirin ve çölyak gövde üzerinde aort ve dalak arter ortaya çıkarmak için sağ tarafa dalak çevirmek. Diseksiyon ve aort çölyak dalak arterler seferber ve çölyak artera aort proksimal etrafında bir dikiş yerleştirin.Tüm vücudu heparinize etmek için inferior vena kava veya IVC içine heparin 100 uluslararası birimleri enjekte. Üç dakika sonra, çölyak artera aort proksimal hepatik ve gastrik arterler ligate. Portal ven transect ve çölyak gövde abdominal aort distal gelen dört derece santigrat heparinize salin 10 mililitre ile tüm vücut perfit.Dalak grefti toplamak ve portal ven ilişkili aort çölyak dalak segmenti ile blok ve pankreas dokusunun küçük bir kısmı ile birlikte. Sonra grefti dört derece santigrat derece lik beş mililitrede koruyun. Cerrahi bölge donör için olduğu gibi hazırlandıktan sonra orta hat kesi ile alıcı karın girin ve dalak ve arter ligating tarafından alıcı yerli dalak çıkarın.37 derece santigrat ıslatılmış gazlı bez ile bağırsak dokuları kapak ve dikkatle sol tarafa bağırsak hareket ettirin. IVC'deki infrarenal aortun lomber dallarını kesip inceleyin ve kesin ve ivc'deki infrarenal aortu iki dört mililitrelik mikrovasküler klemplerle çapraz kelepçeleyin. Infrarenal aort yoluyla bir 11-0 naylon dikiş yerleştirin ve mikroscissors ile eliptik bir aortomi oluşturulmasına izin vermek için damar geri.Eliptik bir venotomi oluşturmak ve donör portal damar uzunluğuna açıklık uzatmak için IVC delmek için 30 gauge iğne kullanın. Aort ve IVC'yi 500 mikrolitre heparinize salin ile yıkayın, intralüminaal kan veya kan pıhtılarını damarlardan temizleyin ve donör dalak greftini alıcı karının sağ kanına yerleştirin. Dikkatle donör aort manşet ve portal ven tanımlayın.Damarların bükülmediğini doğruladıktan sonra, dalak greftini dört derece santigrat derece tuzlu gazlı bezle kaplayın. İki 11-0 kalmak sütür kullanarak, alıcı aortotomi proksimal ve distal apeks donör aort manşet bağlayın ve donör aort manşet ve alıcı aortotomi ön duvarı arasında sürekli 11-0 naylon dikiş iki ila üç ısırık ile bir anastomoz yapmak. Dalak greftini alıcının sol tarafına çevirin ve donör aort manşeti ile alıcıa aortotominin arka duvarı arasındaki anastomoz yapın.Donör portal ven ve alıcı IVC arasında venöz anastomoz her iki tarafta sürekli dikiş dört ila beş ısırık ile gerçekleştirin. Önce damar lümeni içindeki arka duvarı dikin ve sonra aynı sütürle ön duvarı kapatın. Anastomozu IVC'nin alt köşesine yerleştirilen bir düğümle tamamlayın.Şimdi damar kelepçeleri bırakın ve dalak rengi iyileşene kadar kanama tamponade steril bir pamuklu bez kullanın. Sürekli bir desen 5-0 sentetik emilebilir Vicryl dikiş ile karın kapatın ve kesilen bir desen 5-0 naylon dikiş ile cilt tabakası kapatın. Daha sonra 250 mikrolitre ılık salini dört ayrı yere enjekte edin ve fareyi 30 derece sıcaklık kontrollü bir kuluçka makinesinde ilk birkaç saat boyunca hayvan ev kafesine nakletmek için yeterli bilinci kazanana kadar izleyerek ısıtın.Transplantasyondan bir ve yedi gün sonra dalak İzogreftlerinin hematoksilin ve eozini, ameliyat sonrası ilk hafta boyunca dalak isogreftlerinin mimarisinin bozulmadığını ortaya koymaktadır. Transplantasyon sonrası donör dalak hücre göçünü araştırmak için yapılan akış sitometrik analizi, dalak hücrelerinin yaklaşık %50'sinin transplantasyondan bir gün sonra donör dendiğini ve yaklaşık %46'sının alıcı kaynaklı olduğunu göstermektedir. Transplantasyondan yedi gün sonra, donörden elde edilen lökositler toplam dalak hücrelerinin yaklaşık %32'sini oluştururken, alıcı elde edilen hücreler yaklaşık %53'e kadar artmış olan Donör dalak lökositler de ilk gün gibi erken saatlerde lenf düğümlerine, kana ve kemik iliğine göç etmiş ve en az yedinci güne kadar splenocyte ticareti araştırmaları için değerli benzersiz bir Chimera oluşturur.Dalak donörleri olarak genetiği değiştirilmiş knock-in farelerin kullanılması, dalak hücre kaynaklı arabulucuların veya hastalık süreçlerinde anahtar sinyal yollarının rollerinin araştırılmasına olanak sağlayacaktır. Bu model patojenler yanıt dalak hücre popülasyonlarının mekanizmalarını keşfetmek için güçlü bir araç olabilir, yaralanma, inflamasyon, veya organ nakli reddi.

Research

JoVE Journal

Medicine

Orthotopic Aortic Transplantation: A Rat Model to Study the Development of Chronic Vasculopathy

Ortotopik Aort Nakli: Rat Modeli Kronik Vaskülopati Geliştirme Çalışması

Research models of chronic rejection are essential to investigate pathobiological and pathophysiological processes during the development of transplant ...

A Mouse Model of in Utero Transplantation

A Mouse Model of in Utero Transplantation

Bir Fare Modeli Utero Organ Nakli

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) Research

A Modified Heterotopic Swine Hind Limb Transplant Model for Translational Vascularized Composite Allotransplantation VCA Research

Translational Vaskülarize Kompozit allotransplantasyon (VCA) Araştırma için Modifiye heterotopik Domuz Hind Ekstremite nakli Modeli

Vascularized Composite Allotransplantation (VCA) such as hand and face transplants represent a viable treatment option for complex musculoskeletal trauma ...

A Modified Method for Heterotopic Mouse Heart Transplantion

Heterotopik Fare Kalp NAKLİ için Modifiye Yöntem

Mice are often used as heart transplant donors and recipients in studies of transplant immunology due to the wide range of transgenic mice and reagents ...

Murine Heterotopic Heart Transplant Technique

Mürin Heterotopik Kalp Nakli Tekniği

It is now over forty years since this technique was first reported by Corry, Wynn and Russell. Although it took some years for other labs to become ...

Transplantation of Pulmonary Valve Using a Mouse Model of Heterotopic Heart Transplantation

Heterotopik Kalp Nakli bir Fare Modeli Kullanarak Pulmoner Vana Nakli

Tissue engineered heart valves, especially decellularized valves, are starting to gain momentum in clinical use of reconstructive surgery with mixed ...

A Novel Microsurgical Model for Heterotopic, En Bloc Chest Wall, Thymus, and Heart Transplantation in Mice

Farelerde A Novel Mikrocerrahi Heterotopik Modeli, En Bloku Göğüs Duvarı, Thymus ve Kalp Nakli

Exploration of novel strategies in organ transplantation to prolong allograft survival and minimizing the need for long-term maintenance immunosuppression ...

Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse

Fare Ortotopik Hind Ekstremite nakli

In vivo animal model systems, and in particular mouse models, have evolved into powerful and versatile scientific tools indispensable to basic and ...

Heterotopic Renal Autotransplantation in a Porcine Model: A Step-by-Step Protocol

Bir Domuz Modeli heterotopik Böbrek Ototransplantasyon: Bir Adım-Adım Protokolü

Kidney transplantation is the treatment of choice for patients suffering from end-stage renal disease. It offers better life expectancy and higher quality ...