Name: translating ribosome affinity purification (trap) for rna isolation from endothelial cells in vivo
Uploaded: 2019-05-25T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Translating Ribosome Affinity Purification TRAP for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo at JoVE.com

Dr Ren's arbejde er støttet af American Heart Association (13SDG14800019; BR), ann's Hope Foundation (FP00011709; BR), American Cancer Society (86-004-26; MCW Cancer Center til BR), og National Institute of Health (HL136423; BR); Jordan palmer understøttes af 2018 MCW CTSI 500 Stars Internship-programmet; P. Moran understøttes af et institutionelt forsknings uddannelses stipendium fra NHLBI (5T35 HL072483-34).

For dyreforsøg, alle metoder, der er beskrevet her er blevet godkendt af den institutionelle Animal Care og brug Udvalget af Medical College of Wisconsin.
1. Forbered reagenser
<ol><li>Forbered lyse buffer til koncentrationer af 10 mM HEPES, pH 7,4, 150 mM KCl, 5 mM MgCl2, 0,5 mm dtt, 100 mg/ml cycloheximid, proteasehæmmere og rekombinante rnasehæmmere til koncentrationer som beskrevet nedenfor.<ol>
<li>Tilsæt følgende reagenser til 500 mL RNase-frit deioniseret vand: 1,19 g ...

<ol>
	<li>Heiman, M., Kulicke, R., Fenster, R. J., Greengard, P., Heintz, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+type-specific+mRNA+purification+by+translating+ribosome+affinity+purification+(TRAP).">Cell type-specific mRNA purification by translating ribosome affinity purification (TRAP).</a> Nature Protocols. 9, 1282-1291 (2014).</li><li>Zhou, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interrogating+translational+efficiency+and+lineage-specific+transcriptomes+using+ribosome+affinity+purification.">Interrogating translational efficiency and lineage-specific transcriptomes using ribosome affinity purification.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110, 15395-15400 (2013).</li><li>Best, B., Moran, P., Ren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF/PKD-1+signaling+mediates+arteriogenic+gene+expression+and+angiogenic+responses+in+reversible+human+microvascular+endothelial+cells+with+extended+lifespan.">VEGF/PKD-1 signaling mediates arteriogenic gene expression and angiogenic responses in reversible human microvascular endothelial cells with extended lifespan.</a> Molecular and Cellular Biochemistry. 446, 199-207 (2018).</li><li>Ren, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LPA/PKD-1-FoxO1+Signaling+Axis+Mediates+Endothelial+Cell+CD36+Transcriptional+Repression+and+Proangiogenic+and+Proarteriogenic+Reprogramming.">LPA/PKD-1-FoxO1 Signaling Axis Mediates Endothelial Cell CD36 Transcriptional Repression and Proangiogenic and Proarteriogenic Reprogramming.</a> Arteriosclerosclerosis Thrombosis, Vascular Biology. 36, 1197-1208 (2016).</li><li>Ren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+Kinase+D1+Signaling+in+Angiogenic+Gene+Expression+and+VEGF-Mediated+Angiogenesis.">Protein Kinase D1 Signaling in Angiogenic Gene Expression and VEGF-Mediated Angiogenesis.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 4, 37 (2016).</li><li>Ren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FoxO1+transcriptional+activities+in+VEGF+expression+and+beyond:+a+key+regulator+in+functional+angiogenesis?.">FoxO1 transcriptional activities in VEGF expression and beyond: a key regulator in functional angiogenesis?.</a> Journal of Pathology. 245, 255-257 (2018).</li><li>Hupe, M., Li, M. X., Gertow Gillner, K., Adams, R. H., Stenman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+TRAP-sequencing+technology+with+a+versatile+conditional+mouse+model.">Evaluation of TRAP-sequencing technology with a versatile conditional mouse model.</a> Nucleic Acids Research. 42, e14 (2014).</li><li>Dong, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diet-induced+obesity+links+to+ER+positive+breast+cancer+progression+via+LPA/PKD-1-CD36+signaling-mediated+microvascular+remodeling.">Diet-induced obesity links to ER positive breast cancer progression via LPA/PKD-1-CD36 signaling-mediated microvascular remodeling.</a> Oncotarget. 8, 22550-22562 (2017).</li><li>Ren, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ERK1/2-Akt1+crosstalk+regulates+arteriogenesis+in+mice+and+zebrafish.">ERK1/2-Akt1 crosstalk regulates arteriogenesis in mice and zebrafish.</a> Journal of Clinical Investigation. 120, 1217-1228 (2010).</li><li>Skuli, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+HIF-2alpha+regulates+murine+pathological+angiogenesis+and+revascularization+processes.">Endothelial HIF-2alpha regulates murine pathological angiogenesis and revascularization processes.</a> Journal of Clinical Investigation. 122, 1427-1443 (2012).</li></ol>

Angiogenese er en kompleks flertrinsproces, hvor EF-specifik angiogen gen transskription og udtryk spiller en væsentlig rolle i EF-differentiering og angiogen omprogrammering3,4. For at overvinde barriererne fra den cellulære mangfoldighed og arkitektoniske kompleksitet for bedre at forstå funktionen af det pattedyrs vaskulære system på molekylært niveau in vivo, har vi skabt EF-specifikke TRAP-mus, ledsaget af EF-specifikke CD36 , EF-specifik ...

I komplekse væv som pattedyr hjernen, hjertet og lungerne komplicerer de høje niveauer af cellulær heterogenitet analysen af data fra Gen-ekspression, som stammer fra hele vævsprøver. For at observere profiler for genekspression i en bestemt celletype in vivo er der for nylig udviklet en ny metodologi, som gør det muligt at forhør hele det oversatte mRNA-komplement af enhver genetisk defineret celletype. Denne metode er kendt som oversætte ribosom affinitet rensning (fælde) teknik1,2. Det er et nyttigt værktøj til at studere endotel cellebiologi og angiogenese, når det kombineres med genetisk manipulerende andre angiogenese-associerede gener i dyr.
Vi har vist, at angiogen PKD-1 signalering og transkriptionen af angiogen gen CD36 er afgørende for endotelcelle (EC) differentiering og funktionelle angiogenese3,4,5,6. For at bestemme molekylære mekanismer af angiogen og metabolisk signalering i gentransskription og EF-Trans differentiering har vi skabt genetisk manipulerede FÆLDE mus med specifikt slettede angiogene gener på grundlag af TRAP Technique1 , 2. Desuden, i vores fælde dyr, ikke kun har de PKD-1 eller CD36 gen mangel i den vaskulære endothelia eller global sletning af CD36 gen, men et forbedret grønt fluorescens protein (egfp) er også genetisk tagget på EF'S oversættelse af ribosomer. TRAP tillader affinitet rensning af ribosome-bundet mRNA direkte fra den vaskulære endothelia af målrettede væv, muliggør analyse af genekspression og identifikation af nye transkriptomer, der er forbundet med EF-differentiering og angiogenese direkte under in vivo-betingelser. Vi har med succes isoleret ribosome-bundet RNA fra endothelia i disse genetisk manipulerede dyr. Det rensede RNA kan anvendes til yderligere karakterisering af angiogene eller arteriogene gener i reguleringen af EF-differentiering og-funktioner. Denne protokol giver en trinvis vejledning til gennemførelse af FÆLDEN tilgang til isolering af mRNA i ECs direkte in vivo.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:591px;" width="589">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">2100 Electrophoresis Bioanalyzer with Nanochips and Picochips</td>
			<td style="width:73px;">Agilent</td>
			<td style="width:123px;">G2939AA, 5067-1511 &#38; 5067-1513</td>
			<td style="width:172px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Cell scrapers</td>
			<td style="width:73px;">Sarstedt</td>
			<td align="right" style="width:123px;">83.1832</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Homogenizers</td>
			<td style="width:73px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:123px;">K8855100020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Magnet (Dynamag-2)</td>
			<td style="width:73px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:123px;">123-21D</td>
			<td>Will depend on purification scale; samples in 1.5-mL tubes can be concentrated on a DynaMag-2</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Minicentrifuge</td>
			<td style="width:73px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:123px;">05-090-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">NanoDrop 2000C spectrophotometer</td>
			<td style="width:73px;">Thermo Scientific&#160;</td>
			<td style="width:123px;">ND-2000C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Refrigerated centrifuge</td>
			<td style="width:73px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:123px;">5430R</td>
			<td>with rotor for 1.5-mL microcentrifuge tubes</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">RNase-free 1.5mL microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:73px;">Applied Biosystems&#160;</td>
			<td style="width:123px;">AM12450</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Rnase-free 50-mL conical tubes</td>
			<td style="width:73px;">Applied Biosystems&#160;</td>
			<td style="width:123px;">AM12501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">RNase-free 1000-&#956;l filter tips</td>
			<td style="width:73px;">Rainin</td>
			<td style="width:123px;">RT-1000F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">RNase-free 200-&#956;l filter tips</td>
			<td style="width:73px;">Rainin&#160;</td>
			<td style="width:123px;">RT-200F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">RNase-free 20-&#956;l filter tips</td>
			<td style="width:73px;">Rainin&#160;</td>
			<td style="width:123px;">RT-20F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Rotor for homogenizers</td>
			<td style="width:73px;">Yamato&#160;</td>
			<td style="width:123px;">LT-400D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Tube rotator, Labquake brand</td>
			<td style="width:73px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:123px;">13-687-12Q</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

translating ribosome affinity purification (trap) for rna isolation from endothelial cells in vivo

Mange undersøgelser har været begrænset til at anvende in vitro cellulære assays og hele væv eller isolering af specifikke celletyper fra dyr til in vitro-analyse af transkriptomer og genekspression ved qPCR og RNA Sequencing. Omfattende transkriptomer og analyse af genekspression af specifikke celletyper i komplekse væv og organer vil være afgørende for at forstå cellulære og molekylære mekanismer, hvorved gener reguleres, og deres tilknytning til vævs homøostase og organ Funktioner. I denne artikel viser vi metoden til isolering af ribosome-bundet RNA direkte in vivo i den vaskulære endotelas af dyre lunger som et eksempel. De specifikke materialer og procedurer for vævs behandling og RNA-rensning vil blive beskrevet, herunder vurdering af RNA-kvalitet og-udbytte samt realtids qPCR for arteriogene gen-assays. Denne fremgangsmåde, kendt som at oversætte ribosom affinitets rensning (Trap) teknik, kan udnyttes til karakterisering af genekspression og transkriptomanalyse af visse celletyper direkte in vivo i enhver specifik type i komplekse væv.

Vores tidligere undersøgelser4,7 tyder på, at CD36 kan fungere som en switch for arteriolær differentiering og kapillar arterialisering via LPA/PKD-1 signalering pathway. For at undersøge, om LPA/PKD-1-CD36 signalering-aksen er essentiel for arteriogenesis in vivo, har vi etableret de nye FÆLDNINGS linjer, der ikke kun har global CD36-mangel eller Endothelial-specifik-CD36-eller PKD-1-mangel, men også tillader selektiv isolation af ribosome-bundet RNA fra C...

Watch this Scientific Journal Video about Translating Ribosome Affinity Purification TRAP for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo at JoVE.com

Translating Ribosome Affinity Purification TRAP for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Vi præsenterer en tilgang til at rense ribosome-bundet mRNA fra vaskulære endotelceller (ECs) direkte i mus hjerne, lunge og hjerte væv via EF-specifik genetisk tag af forstærket grønt fluorescens protein (EGFP) i ribosomer i kombination med RNA rensning .

Oversættelse af Ribosome affinitets rensning (TRAP) for RNA-isolation fra endotelceller in vivo

Many studies have been limited to using in vitro cellular assays and whole tissues or isolating of specific cell types from animals for in vitro analysis ...

Hej, jeg er Bin Ren, jeg er lektor i kirurgi og biomedicinsk teknik ved University of Alabama Birmingham School of Medicine. Vores laboratorium er interesseret i endotelcellebiologi funktion angiogenese akuogenese i forbindelse med disse fælles hjerte-kar-sygdomme og kræft. En af vores forskning fokuserer på epigenetiske og transskription regulering af endotel celle transdifferentiering og angiogenese.For at forstå de transskriptionelle mekanismer angiogenese, har vi etableret transgene manipuleret muselinjer, hvor vi ikke kun har slettet en bestemt gener forbundet med angiogenese i endotelceller, men en forbedret GFP sonde vil blive genetisk mærket på en ribosome af indfødte endotelceller. På denne måde kan vi isolere og rense sløjfer af tilhørende messenger RNA fra endotelceller i forskellige vævsorganer direkte i transgene dyr. Vi kan derefter bruge den rensede messenger RNA til downstream analyse af udskrifter og transskription.Ved RNA sekventering og realtid chill PCR. I denne video, vil mine elever Patrick Moran og Jordan Palmer og forskning teknikere Nicholas Barnekow og Rong Yuan vise dig en tilgang genotyping transgene mus og den aspirerende messenger RNA direkte fra endotel i de transgene dyr. Genotyping er en vigtig foreløbig i denne protokol for at sikre, at isen har GFP-mærket på ribosomerne af endotelceller.Da alle downstream RNAi isolationstrin er afhængige af tilstedeværelsen af GFP-mærkede ribosomer, er det vigtigt at bestemme genotypen, før eksperimentet påbegyndes. Før RNA-isolationen påbegyndes, skal flere forberedende trin fuldføres. Disse omfatter buffer forberedelse og binding af anti-GFP antistof til proteinet G dina perler.Bufferne kan vare op til en måned ved fire grader Celsius, og de antistofbundne perler kan vare op til en uge ved fire grader Celsius. Så tag højde for disse begrænsninger, når du planlægger dit eksperiment. Ved hjælp af en kindtand drevet homogenisator er en glimrende måde at øge RNA udbytte.Sørg for at bruge lavere frekvensindstillinger og varigheder for at reducere RNA-nedbrydningen. Som tidligere nævnt er genotypebestemmelse et vigtigt indledende skridt i forsøgsprotokollen. Sikring af, at mus, hvis RNA skal isoleres ved hjælp af TRAP-teknikken, er positive for TRAP-genet, i det mindste heterozygoter, men ideelt homozygot for TRAP-genet er et vigtigt skridt, fordi det er vigtigt at sikre, at GFP-mærket er på ribosomet, for at trække ned ved hjælp af antigenantistofreaktionen og de anti-GFP perler, du har forberedt, før du begynder forsøget.Isoler det ønskede væv fra musen og læg det straks i en iskold PBS med 100 mikrogram pr. milliliter cykcyklopædiopløsning. Dette sikrer, at oversættelsen stoppes, og at transskriptoen vil være en nøjagtig skildring af musen før aktiv dødshjælp. Brug en motordrevet homogenisator til at homogenisere vævet i en celle suspension.Ideelle timing og frekvens indstillinger skal bestemmes af de enkelte lab baseret på den særlige motordrevne homogenisator du vil bruge. Brug for høj af en frekvensindstilling kan føre til RNA-nedbrydning og forstyrre resten af protokollen. Afhæng cellepellet i lysisbufferen, som du skulle have forberedt, før du begyndte forsøget.Sørg for at homogenisere denne blanding yderligere for at sikre tilstrækkelig homogenisering, inden resten af protokollen fortsættes. Centrifuge homogenate i 10 minutter ved 2, 000 gange G i en fire grader Celsius centrifuge. Dette vil pellet kernen og store cellulære rester, som kan forstyrre downstream immunoprecipitation reaktion.Tilføj DHPC og CA-630 lipider til supernatant fra den tidligere centrifugalisering trin. Disse lipider vil hjælpe med at adskille protein udfaser fra de andre intracellulære komponenter. Sæt suspensionen på is i fem minutter og lad den sidde.Centrifuge lysatet i 10 minutter ved 13,000 gange G til pellet ethvert opløseligt materiale. Hold 15% af den klare lysate for fremtidige skridt. Tilsæt anti-GFP antistof bundet perler til cellen lysate supernatant og inkubere blandingen ved fire grader Celsius med ende over ende rotation i 30 minutter.Det er her anti-GFP antistoffer vil binde GFP mærkede ribosomer, så vi kan yderligere isolere RNA fra disse ribosomer. Saml perlerne på din magnetiske rack og vask perlerne fem gange ved hjælp af din høje salt polysome vask buffer, som du vil have forberedt før begyndelsen af isolationen. Gå straks videre til næste trin, hvor du vil placere perlerne i RLT bufferen.Centrifuge lysatet i tre minutter ved fuld hastighed og forsigtigt fjerne supernatant og overføre det til en ny microfuge rør. Tilsæt et volumen på 70% ethanol til det ryddede lysate og bland straks ved pipettering. Fortsæt straks til næste trin, hvor du overfører op til 700 mikroliter af prøven, herunder eventuelle udfældede, der måtte have dannet, til en spinkolonne placeret i et 2 milliliteropsamlingsrør.Centrifuge lysatet i 15 sekunder ved større end 8,000 gange G for at vaske spin kolonnemembranen. Kassér strømmen igennem, og fortsæt til næste trin. Tilføj 350 mikroliter buffer-RW1 til spinkolonnen.Centrifuge i 15 sekunder ved større end 8.000 gange G for at vaske spinkolonnemembranen og kassere strømmen igennem. Gentag dette trin ved hjælp af yderligere 350 mikroliter af buffer-RW1, før du fortsætter til næste trin. Tilføj 500 mikroliter af buffer RPE til spin kolonne.Centrifuge i 15 sekunder ved større end 8.000 gange G for at vaske spinsøjlemembranen. Kassér strømmen igennem, og fortsæt med at gentage dette trin ved at tilføje yderligere 500 mikroliter af buffer-RPE til spinkolonnen. Denne gang centrifuge i to minutter ved større end 8.000 gange G for at vaske spin kolonnemembranen.Kassér strømmen igennem og placer spinkolonnen i et nyt 2-milliliteropsamlingsrør, og fortsæt til centrifuge ved fuld hastighed i et minut for at fjerne eventuelle resterende buffere, der måtte være til stede på spinkolonnen. Kassér strømmen igennem, og drejkolonnen anbringes i et nyt 1,5 milliliteropsamlingsrør. Fortsæt med at tilføje 30 til 50 mikroliter RNase frit vand direkte til spin kolonnemembranen.Centrifuge i et minut ved mere end 8.000 gange G for at elutere RNA'et fra spinkolonnemembranen. På dette tidspunkt opløses dit RNA i RNase-frit vand og kan opbevares ved minus 80 grader Celsius i op til et år. Fortsæt med at kvantificere og kontrollere renheden af det RNA, du har isoleret ved hjælp af et spektrofotometer.Du er på udkig efter et højdepunkt på 260 nanometer, som er nukleinsyre, herunder RNA, absorberer maksimalt. Mængden er afbildet i nederste højre del af billedet i nanogram pr mikroliter. Kvaliteten kan udledes af forholdet 260 230, som vises en vare over kvantiteten i nederste højre del af skærmen.Vores tilgang viste lavt RNA udbytter, især når vi renset mRNA fra hjertet væv eller fra tidligere frosne væv. Vi er derfor nødt til at optomize betingelserne for at øge udbyttet. Men vi observerede i EF-specifikke CD-36 mangelfuld mus, niveauet af ephrin B2 og DLL4 blev signifikant forøget i både lunge og hjerte endothelia, sammenlignet med kontrol.Disse resultater var i overensstemmelse med vores tidligere in vitro-undersøgelser, hvilket tyder på, at RNA-kvaliteten er tilstrækkelig til downstream-analyse. Udbyttet var lavt på grund af de strenge forhold i vores arbejdsplads. For at overvinde denne begrænsning er det afgørende at oprette en RNase fri arbejdszone og dekontaminere arbejdsflader og udstyr, der kan blive forurenet med RNase og skifte handsker ofte for at udtrække kvalitet RNA og øge udbyttet.Det er også afgørende at finde passende koncentrationer af GFP-antistoffer i affinitetsmatrixen og anvende passende koncentrationer af RNase-hæmmer i vævslysisbufferen og anvende RNase-fri plast ware og reagenser til RNA-ekstraktion fra endotel ribosomer af det målrettede væv.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Translating Ribosome Affinity Purification (TRAP) for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Isolation of Cognate RNA-protein Complexes from Cells Using Oligonucleotide-directed Elution

Isolering af sammenhørende RNA-protein-komplekser fra celler under anvendelse Oligonucleotid-rettet Eluering

Ribonucleoprotein particles direct the biogenesis and post-transcriptional regulation of all mRNAs through distinct combinations of RNA binding proteins. ...

Protein Complex Affinity Capture from Cryomilled Mammalian Cells

Protein Complex Affinity Capture fra Cryomilled pattedyrsceller

Affinity capture is an effective technique for isolating endogenous protein complexes for further study. When used in conjunction with an antibody, this ...

An Efficient Method for the Isolation of Highly Purified RNA from Seeds for Use in Quantitative Transcriptome Analysis

En effektiv metode til isolering af stærkt Renset RNA fra Frø til brug i Kvantitative Transkriptomet Analysis

Plant seeds accumulate large amounts of storage reserves comprising biodegradable organic matter. Humans rely on seed storage reserves for food and as ...

Tandem Affinity Purification of Protein Complexes from Eukaryotic Cells

Tandem affinitetsoprensning af proteinkomplekser fra eukaryote celler

The purification of active protein-protein and protein-nucleic acid complexes is crucial for the characterization of enzymatic activities and de novo ...

A G-quadruplex DNA-affinity Approach for Purification of Enzymatically Active G4 Resolvase1

En G-quadruplex DNA-affinitet tilgang til oprensning af enzymatisk aktivt G4 Resolvase1

Higher-order nucleic acid structures called G-quadruplexes (G4s, G4 structures) can form in guanine-rich regions of both DNA and RNA and are highly ...

Purification of Biotinylated Cell Surface Proteins from Rhipicephalus microplus Epithelial Gut Cells

Purification of Biotinylated Cell Surface Proteins from Rhipicephalus microplus Epithelial Gut Cells

Oprensning af biotinylerede celleoverfladeproteiner fra<em&gt; Rhipicephalus microplus</em&gt; Epitelceller

Rhipicephalus microplus &#8211; the cattle tick &#8211; is the most significant ectoparasite in terms of economic impact on livestock as a vector of ...

Purification of Hepatocytes and Sinusoidal Endothelial Cells from Mouse Liver Perfusion

Rensning af hepatocytter og sinusformet endotelceller fra mus lever Perfusion

This protocol demonstrates a method for obtaining high yield and viability for mouse hepatocytes and sinusoidal endothelial cells (SECs) suitable for ...

MS2-Affinity Purification Coupled with RNA Sequencing in Gram-Positive Bacteria

MS2-Affinitetsrensning kombineret med RNA-sekventering i gram-positive bakterier

Although small regulatory RNAs (sRNAs) are widespread among the bacterial domain of life, the functions of many of them remain poorly characterized ...

Purification of Ubiquitinated p53 Proteins from Mammalian Cells

Oprensning af allestedsnærværende p53-proteiner fra pattedyrceller

Ubiquitination is a type of posttranslational modification that regulates not only the stability but also the localization and function of a substrate ...

Purifying a Fibrinolytic Enzyme from Sipunculus nudus via Affinity Chromatography

Affinity Purification of a Fibrinolytic Enzyme from Sipunculus nudus

Affinity Purification of a Fibrinolytic Enzyme from Sipunculus nudus (Video) | JoVE 

Affinitetsoprensning af et fibrinolytisk enzym fra Sipunculus nudus

The fibrinolytic enzyme from Sipunculus nudus (sFE) is a novel fibrinolytic agent that can both activate plasminogen into plasmin and degrade fibrin ...