Name: translating ribosome affinity purification (trap) for rna isolation from endothelial cells in vivo
Uploaded: 2019-05-25T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Translating Ribosome Affinity Purification TRAP for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo at JoVE.com

Le travail du Dr Ren est soutenu par l'American Heart Association (13SDG14800019; BR), la Fondation Ann's Hope (FP00011709; BR), l'American Cancer Society (86-004-26; MCW Cancer Center to BR), et le National Institute of Health (HL136423; BR); Jordan Palmer est soutenu par le programme de stages MCW CTSI 500 Stars 2018; P. Moran bénéficie d'une subvention de formation en recherche institutionnelle de NHLBI (5T35 HL072483-34).

Pour les expériences animales, toutes les méthodes décrites ici ont été approuvées par le Comité institutionnel de soins et d'utilisation des animaux du Medical College of Wisconsin.
1. Préparer des réactifs
<ol><li>Préparer un tampon de lyse à des concentrations de 10 mM HEPES, pH 7,4, 150 mM KCl, 5 mM MgCl2, 0,5 mM DTT, 100 mg/mL cycloheximide, inhibiteurs de la protéase, et inhibiteurs recombinants RNase aux concentrations telles que décrites ci-dessous.<ol>
<li>Aj...

<ol>
	<li>Heiman, M., Kulicke, R., Fenster, R. J., Greengard, P., Heintz, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+type-specific+mRNA+purification+by+translating+ribosome+affinity+purification+(TRAP).">Cell type-specific mRNA purification by translating ribosome affinity purification (TRAP).</a> Nature Protocols. 9, 1282-1291 (2014).</li><li>Zhou, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interrogating+translational+efficiency+and+lineage-specific+transcriptomes+using+ribosome+affinity+purification.">Interrogating translational efficiency and lineage-specific transcriptomes using ribosome affinity purification.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110, 15395-15400 (2013).</li><li>Best, B., Moran, P., Ren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF/PKD-1+signaling+mediates+arteriogenic+gene+expression+and+angiogenic+responses+in+reversible+human+microvascular+endothelial+cells+with+extended+lifespan.">VEGF/PKD-1 signaling mediates arteriogenic gene expression and angiogenic responses in reversible human microvascular endothelial cells with extended lifespan.</a> Molecular and Cellular Biochemistry. 446, 199-207 (2018).</li><li>Ren, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LPA/PKD-1-FoxO1+Signaling+Axis+Mediates+Endothelial+Cell+CD36+Transcriptional+Repression+and+Proangiogenic+and+Proarteriogenic+Reprogramming.">LPA/PKD-1-FoxO1 Signaling Axis Mediates Endothelial Cell CD36 Transcriptional Repression and Proangiogenic and Proarteriogenic Reprogramming.</a> Arteriosclerosclerosis Thrombosis, Vascular Biology. 36, 1197-1208 (2016).</li><li>Ren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+Kinase+D1+Signaling+in+Angiogenic+Gene+Expression+and+VEGF-Mediated+Angiogenesis.">Protein Kinase D1 Signaling in Angiogenic Gene Expression and VEGF-Mediated Angiogenesis.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 4, 37 (2016).</li><li>Ren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FoxO1+transcriptional+activities+in+VEGF+expression+and+beyond:+a+key+regulator+in+functional+angiogenesis?.">FoxO1 transcriptional activities in VEGF expression and beyond: a key regulator in functional angiogenesis?.</a> Journal of Pathology. 245, 255-257 (2018).</li><li>Hupe, M., Li, M. X., Gertow Gillner, K., Adams, R. H., Stenman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+TRAP-sequencing+technology+with+a+versatile+conditional+mouse+model.">Evaluation of TRAP-sequencing technology with a versatile conditional mouse model.</a> Nucleic Acids Research. 42, e14 (2014).</li><li>Dong, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diet-induced+obesity+links+to+ER+positive+breast+cancer+progression+via+LPA/PKD-1-CD36+signaling-mediated+microvascular+remodeling.">Diet-induced obesity links to ER positive breast cancer progression via LPA/PKD-1-CD36 signaling-mediated microvascular remodeling.</a> Oncotarget. 8, 22550-22562 (2017).</li><li>Ren, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ERK1/2-Akt1+crosstalk+regulates+arteriogenesis+in+mice+and+zebrafish.">ERK1/2-Akt1 crosstalk regulates arteriogenesis in mice and zebrafish.</a> Journal of Clinical Investigation. 120, 1217-1228 (2010).</li><li>Skuli, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+HIF-2alpha+regulates+murine+pathological+angiogenesis+and+revascularization+processes.">Endothelial HIF-2alpha regulates murine pathological angiogenesis and revascularization processes.</a> Journal of Clinical Investigation. 122, 1427-1443 (2012).</li></ol>

L'angiogenèse est un processus complexe en plusieurs étapes, dans lequel la transcription et l'expression de gènes angiogéniques spécifiques aux CE jouent un rôle essentiel dans la différenciation et la reprogrammation angiogénique3,4. Pour surmonter les barrières de la diversité cellulaire et de la complexité architecturale pour mieux comprendre la fonction du système vasculaire des mammifères au niveau moléculaire in vivo, nous avons créé des so...

Dans les tissus complexes tels que le cerveau, le cœur et le poumon des mammifères, les niveaux élevés d'hétérogénéité cellulaire compliquent l'analyse des données d'expression génique dérivées d'échantillons de tissus entiers. Pour observer les profils d'expression génique dans un type de cellule particulier in vivo, une nouvelle méthodologie a été développée récemment, qui permet l'interrogation de l'ensemble de l'ARNm traduit de tout type de cellule génétiquement défini. Cette méthodologie est connue sous le nom de traduction ribosome affinity purification (TRAP) technique1,2. C'est un outil utile pour étudier la biologie cellulaire endothéliale et l'angiogenèse lorsqu'il est combiné avec la manipulation génétique d'autres gènes associés à l'angiogenèse chez les animaux.
Nous avons montré que la signalisation angiogénique PKD-1 et la transcription du gène angiogénique CD36 sont critiques pour la différenciation des cellules endothéliales (EC) et l'angiogenèse fonctionnelle3,4,5,6. Pour déterminer les mécanismes moléculaires de la signalisation angiogénique et métabolique dans la transcription génique et la transdifférenciation EC, nous avons créé des souris TRAP génétiquement modifiées avec des gènes angiogéniques spécifiquement supprimés sur la base de la technique TRAP1 , 2. En outre, chez nos animaux TRAP, non seulement ils ont une déficience génétique pkd-1 ou cd36 dans l'endothélia vasculaire ou la suppression globale du gène cd36, mais une protéine de fluorescence verte améliorée (EGFP) est également génétiquement étiquetée sur EC traduise des ribosomes. TRAP permet la purification d'affinité de l'ARNm lié au ribosome directement à partir de l'endothelia vasculaire des tissus ciblés, permettant l'analyse de l'expression génique et l'identification de nouveaux transcriptomes qui sont associés à la différenciation des CE et angiogenèse directement dans des conditions in vivo. Nous avons réussi à isoler l'ARN lié au ribosome de l'endothélie chez ces animaux génétiquement modifiés. L'ARN purifié peut être utilisé pour la caractérisation des gènes angiogéniques ou artériogéniques dans la régulation de la différenciation et des fonctions eC. Ce protocole fournit un guide étape par étape pour mettre en œuvre l'approche TRAP pour l'isolement de l'ARNm dans les EC directement in vivo.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:591px;" width="589">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">2100 Electrophoresis Bioanalyzer with Nanochips and Picochips</td>
			<td style="width:73px;">Agilent</td>
			<td style="width:123px;">G2939AA, 5067-1511 &#38; 5067-1513</td>
			<td style="width:172px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Cell scrapers</td>
			<td style="width:73px;">Sarstedt</td>
			<td align="right" style="width:123px;">83.1832</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Homogenizers</td>
			<td style="width:73px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:123px;">K8855100020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Magnet (Dynamag-2)</td>
			<td style="width:73px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:123px;">123-21D</td>
			<td>Will depend on purification scale; samples in 1.5-mL tubes can be concentrated on a DynaMag-2</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Minicentrifuge</td>
			<td style="width:73px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:123px;">05-090-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">NanoDrop 2000C spectrophotometer</td>
			<td style="width:73px;">Thermo Scientific&#160;</td>
			<td style="width:123px;">ND-2000C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Refrigerated centrifuge</td>
			<td style="width:73px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:123px;">5430R</td>
			<td>with rotor for 1.5-mL microcentrifuge tubes</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">RNase-free 1.5mL microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:73px;">Applied Biosystems&#160;</td>
			<td style="width:123px;">AM12450</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Rnase-free 50-mL conical tubes</td>
			<td style="width:73px;">Applied Biosystems&#160;</td>
			<td style="width:123px;">AM12501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">RNase-free 1000-&#956;l filter tips</td>
			<td style="width:73px;">Rainin</td>
			<td style="width:123px;">RT-1000F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">RNase-free 200-&#956;l filter tips</td>
			<td style="width:73px;">Rainin&#160;</td>
			<td style="width:123px;">RT-200F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">RNase-free 20-&#956;l filter tips</td>
			<td style="width:73px;">Rainin&#160;</td>
			<td style="width:123px;">RT-20F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Rotor for homogenizers</td>
			<td style="width:73px;">Yamato&#160;</td>
			<td style="width:123px;">LT-400D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Tube rotator, Labquake brand</td>
			<td style="width:73px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:123px;">13-687-12Q</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

translating ribosome affinity purification (trap) for rna isolation from endothelial cells in vivo

De nombreuses études ont été limitées à l'utilisation d'essais cellulaires in vitro et de tissus entiers ou l'isolating de types cellulaires spécifiques d'animaux pour l'analyse in vitro du transcriptome et l'expression des gènes par qPCR et le séquençage de l'ARN. L'analyse complète de transcriptome et d'expression génique de types cellulaires spécifiques dans des tissus et organes complexes sera essentielle pour comprendre les mécanismes cellulaires et moléculaires par lesquels les gènes sont réglementés et leur association avec l'homéostasie tissulaire et l'organe Fonctions. Dans cet article, nous démontrons la méthodologie pour l'isolement de l'ARN ribosome-lié directement in vivo dans l'endothélia vasculaire des poumons animaux comme exemple. Les matériaux et procédures spécifiques pour le traitement des tissus et la purification de l'ARN seront décrits, y compris l'évaluation de la qualité et du rendement de l'ARN ainsi que qPCR en temps réel pour les essais de gènes artériogènes. Cette approche, connue sous le nom de technique de purification d'affinité de ribosome de traduction (TRAP), peut être employée pour la caractérisation de l'expression de gène et de l'analyse de transcriptome de certains types de cellules directement in vivo dans n'importe quel type spécifique dans les tissus complexes.

Nos études précédentes4,7 suggèrent que CD36 peut fonctionner comme un commutateur pour la différenciation artériolaire et l'artérielisation capillaire par l'intermédiaire de la voie de signalisation De LPA/PKD-1. Pour étudier si l'axe de signalisation LPA/PKD-1-CD36 est essentiel pour l'artériogenèse in vivo, nous avons établi les nouvelles lignes TRAP qui non seulement ont une carence mondiale en cd36 ou endothélial-spécifique-cd36- ou pkd-1-défi...

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Translating Ribosome Affinity Purification TRAP for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Nous présentons une approche pour purifier l'ARNm ribosome-lié des cellules endothéliales vasculaires (ECs) directement dans le cerveau de souris, poumon et tissus cardiaques par l'intermédiaire de l'étiquette génétique EC-spécifique de la protéine verte améliorée de fluorescence (EGFP) dans des ribosomes en combination avec la purification d'ARN .

Traduire Ribosome Affinity Purification (TRAP) pour l'isolement de l'ARN des cellules endothéliales in vivo

Many studies have been limited to using in vitro cellular assays and whole tissues or isolating of specific cell types from animals for in vitro analysis ...

Salut, je suis Bin Ren, je suis professeur agrégé de chirurgie et de génie biomédical à l’Université de l’Alabama à la Birmingham School of Medicine. Notre laboratoire s’intéresse à la biologie cellulaire endothéliale fonction angiogenèse acuogenèse dans le contexte de ces maladies cardiovasculaires et cancers communs. Une de nos recherches se concentre sur la régulation épigénétique et transcriptionnelle de la transdifferentiation et de l’angiogenèse des cellules endothéliales.Pour comprendre les mécanismes transcriptionnels de l’angiogenèse, nous avons établi des lignées de souris transgéniques, dans lesquelles nous avons non seulement supprimé un gène spécifique associé à l’angiogenèse dans les cellules endothéliales, mais une sonde GFP améliorée sera génétiquement étiquetée sur un ribosome de cellules endothéliales indigènes. De cette façon, nous pouvons isoler et purifier les boucles de l’ARN messager associé à partir de cellules endothéliales dans différents organes tissulaires directement chez les animaux transgéniques. Nous pouvons ensuite utiliser l’ARN messager purifié pour l’analyse en aval des transcriptions et du transcriptome.Par séquençage de l’ARN et le PCR froid en temps réel. Dans cette vidéo, mes étudiants Patrick Moran et Jordan Palmer et les techniciens de recherche Nicholas Barnekow et Rong Yuan vous montreront une approche génotypage souris transgéniques et l’ARN messager aspirant directement à partir de l’endothélial chez les animaux transgéniques. Le génotypage est un préliminaire important dans ce protocole pour s’assurer que la glace a l’étiquette GFP sur les ribosomes des cellules endothéliales.Étant donné que toutes les étapes d’isolement en aval du RNAi reposent sur la présence de ribosomes marqués GFP, il est essentiel de déterminer le génotype avant de commencer l’expérience. Avant de commencer l’isolement de l’ARN, plusieurs étapes préparatoires doivent être accomplies. Il s’agit notamment de la préparation tampon et la liaison de l’anticorps anti-GFP à la protéine G dina perles.Les tampons peuvent durer jusqu’à un mois à quatre degrés Celsius et les perles liées aux anticorps peuvent durer jusqu’à une semaine à quatre degrés Celsius. Prenez donc en compte ces limitations lors de la planifier de votre expérience. L’utilisation d’un homogénéiseur molar conduit est un excellent moyen d’augmenter le rendement en ARN.Assurez-vous d’utiliser des paramètres et des durées de fréquence plus faibles afin de réduire la dégradation de l’ARN. Comme nous l’avons mentionné précédemment, le génotypage est une étape préliminaire importante du protocole d’essai. S’assurer que les souris dont l’ARN doit être isolé à l’aide de la technique TRAP sont positives pour le gène TRAP, au moins les hétérozygotes, mais idéalement homozygotes pour le gène TRAP est une étape importante parce que s’assurer que l’étiquette GFP est sur le ribosome est essentiel afin de tirer vers le bas en utilisant la réaction anticorps antigène et les perles anti-GFP que vous aurez préparé avant de commencer l’expérience.Isoler les tissus désirés de la souris et le placer immédiatement dans un PBS glacé avec 100 microgrammes par millilitre solution cyclohexamide. Cela garantit que la traduction sera arrêtée et que le transcriptome sera une représentation exacte de la souris avant l’euthanasie. Utilisez un homogénéiseur à moteur pour homogénéiser le tissu en suspension cellulaire.Le moment idéal et les paramètres de fréquence devront être déterminés par le laboratoire individuel en fonction de l’homogénéiseur moteur particulier que vous utiliserez. L’utilisation d’un réglage de fréquence trop élevé peut entraîner une dégradation de l’ARN et perturber le reste du protocole. Suspendez la pastille cellulaire dans le tampon de lyse que vous auriez dû préparer avant de commencer l’expérience.Assurez-vous d’homogénéiser davantage ce mélange afin d’assurer une homogénéisation adéquate avant de procéder au reste du protocole. Centrifugeuse l’homogénéisation pendant 10 minutes à 2000 fois G dans une centrifugeuse de quatre degrés Celsius. Cela va pelleter les noyaux et les gros débris cellulaires qui peuvent interférer avec la réaction d’immunoprécipitation en aval.Ajouter les lipides DHPC et CA-630 au supernatant dès l’étape précédente de centrifugalisation. Ces lipides aideront à séparer les phases protéiques des autres composants intracellulaires. Placez la suspension sur la glace pendant cinq minutes et laissez-la reposer.Centrifugeuse le lysate pendant 10 minutes à 13 000 fois G pour granuler n’importe quel matériau soluble. Gardez 15% du lysate clair pour les étapes futures. Ajouter les perles liées à l’anticorps anti-GFP à la cellule lysate supernatant et incuber le mélange à quatre degrés Celsius avec la fin sur la rotation de fin pendant 30 minutes.C’est là que les anticorps anti-GFP lieront les ribosomes marqués GFP, ce qui nous permettra d’isoler davantage l’ARN de ces ribosomes. Recueillir les perles sur votre grille magnétique et laver les perles cinq fois en utilisant votre tampon de lavage en polysome à haute teneur en sel que vous aurez préparé avant de commencer l’isolement. Passez immédiatement à l’étape suivante au cours de laquelle vous placez les perles dans le tampon RLT.Centrifugeuse le lysate pendant trois minutes à pleine vitesse et retirez soigneusement le supernatant et transférez-le dans un nouveau tube de microfuge. Ajouter un volume de 70% d’éthanol au lysate défriché et mélanger immédiatement par pipetting. Passez immédiatement à l’étape suivante au cours de laquelle vous transférerez jusqu’à 700 microlitres de l’échantillon, y compris tout précipité qui aurait pu se former, à une colonne de spin placée dans un tube de collecte de deux millilitres.Centrifugeuse le lysate pendant 15 secondes à plus de 8000 fois G pour laver la membrane de la colonne de spin. Jetez le flux à travers et passer à l’étape suivante. Ajouter 350 microlitres de tampon RW1 à la colonne de spin.Centrifugeuse pendant 15 secondes à plus de 8000 fois G pour laver la membrane de la colonne de spin et jeter le flux à travers. Répétez cette étape à l’aide de 350 microlitres de tampon RW1 avant de passer à l’étape suivante. Ajouter 500 microlitres de RPE tampon à la colonne de spin.Centrifugeuse pendant 15 secondes à plus de 8000 fois G pour laver la membrane de la colonne de spin. Jetez le flux à travers et procéder à répéter cette étape en ajoutant un autre 500 microlitres de RPE tampon à la colonne de spin. Cette fois, centrifugeuse pendant deux minutes à plus de 8.000 fois G pour laver la membrane de la colonne de spin.Jetez le flux à travers et placez la colonne de spin dans un nouveau tube de collecte de deux millilitres et procéder à la centrifugeuse à pleine vitesse pendant une minute pour éliminer tout tampon résiduel qui peut être présent sur la colonne de spin. Jetez le flux à travers et placez la colonne de spin dans un nouveau tube de collecte de 1,5 millilitre. Procéder à l’ajout de 30 à 50 microlitres d’eau libre RNase directement à la membrane de la colonne de spin.Centrifugeuse pendant une minute à plus de 8000 fois G pour électrifier l’ARN de la membrane de la colonne de spin. À ce stade, votre ARN est dissous dans l’eau libre RNase et peut être stocké à moins 80 degrés Celsius pour un an. Procédez à la quantification et à la vérification de la pureté de l’ARN que vous avez isolé à l’aide d’un spectrophotomètre.Vous êtes à la recherche d’un pic à 260 nanomètres, qui est l’acide nucléique, y compris l’ARN, absorbe au maximum. La quantité est représentée dans la partie inférieure droite de l’image en nanogrammes par microlitre. La qualité peut être déduite par le rapport 260 230 qui est montré un élément au-dessus de la quantité dans la partie inférieure droite de l’écran.Notre approche a montré de faibles rendements d’ARN, particulièrement quand nous avons purifié l’ARNm des tissus cardiaques ou des tissus précédemment congelés. Nous devons donc opter pour les conditions d’augmentation des rendements. Cependant, nous avons observé chez les souris déficientes spécifiques au CD-36, le niveau d’ephrin B2 et de DLL4 ont été sensiblement augmentés dans les endothélies pulmonaires et cardiaques, par rapport au contrôle.Ces résultats étaient conformes à nos études in vitro précédentes, ce qui suggère que la qualité de l’ARN est suffisante pour l’analyse en aval. Le rendement était faible en raison des conditions rigoureuses dans notre espace de travail. Pour surmonter cette limitation, il est essentiel de mettre en place une zone de travail sans RNase et de décontaminer les surfaces de travail et l’équipement qui peuvent être contaminés par la RNase et changer fréquemment de gants afin d’extraire de l’ARN de qualité et d’augmenter les rendements.Il est également essentiel de trouver des concentrations appropriées d’anticorps GFP dans la matrice d’affinité et d’utiliser des concentrations appropriées d’inhibiteur de la RNase dans le tampon de lyse tissulaire et d’utiliser des marchandises en plastique sans RNase et des réagengenèses pour l’extraction de l’ARN à partir de ribosomes endothéliales des tissus ciblés.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Translating Ribosome Affinity Purification (TRAP) for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Isolation of Cognate RNA-protein Complexes from Cells Using Oligonucleotide-directed Elution

L&#39;isolement des Cognate complexes ARN-protéine à partir des cellules en utilisant une élution Oligonucleotide-directed

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Recherche

Biochimie

Protein Complex Affinity Capture from Cryomilled Mammalian Cells

Protein Complex Affinity Capture à partir de cellules de mammifères Cryomilled

Affinity capture is an effective technique for isolating endogenous protein complexes for further study. When used in conjunction with an antibody, this ...

An Efficient Method for the Isolation of Highly Purified RNA from Seeds for Use in Quantitative Transcriptome Analysis

Une méthode efficace pour l&#39;isolement de l&#39;ARN hautement purifiées de semences pour une utilisation dans quantitative transcriptome Analyse

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The purification of active protein-protein and protein-nucleic acid complexes is crucial for the characterization of enzymatic activities and de novo ...

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Purification of Biotinylated Cell Surface Proteins from Rhipicephalus microplus Epithelial Gut Cells

Purification of Biotinylated Cell Surface Proteins from Rhipicephalus microplus Epithelial Gut Cells

Purification des protéines de surface cellulaire biotinylées de<em&gt; Rhipicephalus microplus</em&gt; Cellules intestinales épithéliales

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Although small regulatory RNAs (sRNAs) are widespread among the bacterial domain of life, the functions of many of them remain poorly characterized ...

Purification of Ubiquitinated p53 Proteins from Mammalian Cells

Purification des protéines p53 ubiquitinées à partir de cellules de mammifères

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Purifying a Fibrinolytic Enzyme from Sipunculus nudus via Affinity Chromatography

Affinity Purification of a Fibrinolytic Enzyme from Sipunculus nudus

Affinity Purification of a Fibrinolytic Enzyme from Sipunculus nudus (Video) | JoVE 

Purification par affinité d’une enzyme fibrinolytique de Sipunculus nudus

The fibrinolytic enzyme from Sipunculus nudus (sFE) is a novel fibrinolytic agent that can both activate plasminogen into plasmin and degrade fibrin ...