Name: translating ribosome affinity purification (trap) for rna isolation from endothelial cells in vivo
Uploaded: 2019-05-25T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Translating Ribosome Affinity Purification TRAP for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo at JoVE.com

Il lavoro del dottor Ren è sostenuto dall'American Heart Association (13SDG14800019; BR), ann's Hope Foundation (FP00011709; BR), l'American Cancer Society (86-004-26; il MCW Cancer Center to BR), e il National Institute of Health (HL136423; BR); Jordan Palmer è supportato dal 2018 MCW CTSI 500 Stars Internship Program; P. Moran è supportato da una borsa di studio institutional research Training di NHLBI (5T35 HL072483-34).

Per gli esperimenti sugli animali, tutti i metodi qui descritti sono stati approvati dall'Institutional Animal Care and Use Committee del Medical College of Wisconsin.
1. Preparare i reagenti
<ol><li>Preparare il buffer di lisi a concentrazioni di 10 mM HEPES, pH 7,4, 150 mM KCl, 5 mM MgCl2, 0,5 mM DTT, 100 mg/mL cicloxeximide, inibitori della proteasi e inibitori RNaseor ricombinanti alle concentrazioni come descritto di seguito.<ol>
<li>Aggiungere i seguenti reagenti a 500 mL di...

<ol>
	<li>Heiman, M., Kulicke, R., Fenster, R. J., Greengard, P., Heintz, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+type-specific+mRNA+purification+by+translating+ribosome+affinity+purification+(TRAP).">Cell type-specific mRNA purification by translating ribosome affinity purification (TRAP).</a> Nature Protocols. 9, 1282-1291 (2014).</li><li>Zhou, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interrogating+translational+efficiency+and+lineage-specific+transcriptomes+using+ribosome+affinity+purification.">Interrogating translational efficiency and lineage-specific transcriptomes using ribosome affinity purification.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110, 15395-15400 (2013).</li><li>Best, B., Moran, P., Ren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF/PKD-1+signaling+mediates+arteriogenic+gene+expression+and+angiogenic+responses+in+reversible+human+microvascular+endothelial+cells+with+extended+lifespan.">VEGF/PKD-1 signaling mediates arteriogenic gene expression and angiogenic responses in reversible human microvascular endothelial cells with extended lifespan.</a> Molecular and Cellular Biochemistry. 446, 199-207 (2018).</li><li>Ren, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LPA/PKD-1-FoxO1+Signaling+Axis+Mediates+Endothelial+Cell+CD36+Transcriptional+Repression+and+Proangiogenic+and+Proarteriogenic+Reprogramming.">LPA/PKD-1-FoxO1 Signaling Axis Mediates Endothelial Cell CD36 Transcriptional Repression and Proangiogenic and Proarteriogenic Reprogramming.</a> Arteriosclerosclerosis Thrombosis, Vascular Biology. 36, 1197-1208 (2016).</li><li>Ren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+Kinase+D1+Signaling+in+Angiogenic+Gene+Expression+and+VEGF-Mediated+Angiogenesis.">Protein Kinase D1 Signaling in Angiogenic Gene Expression and VEGF-Mediated Angiogenesis.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 4, 37 (2016).</li><li>Ren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FoxO1+transcriptional+activities+in+VEGF+expression+and+beyond:+a+key+regulator+in+functional+angiogenesis?.">FoxO1 transcriptional activities in VEGF expression and beyond: a key regulator in functional angiogenesis?.</a> Journal of Pathology. 245, 255-257 (2018).</li><li>Hupe, M., Li, M. X., Gertow Gillner, K., Adams, R. H., Stenman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+TRAP-sequencing+technology+with+a+versatile+conditional+mouse+model.">Evaluation of TRAP-sequencing technology with a versatile conditional mouse model.</a> Nucleic Acids Research. 42, e14 (2014).</li><li>Dong, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diet-induced+obesity+links+to+ER+positive+breast+cancer+progression+via+LPA/PKD-1-CD36+signaling-mediated+microvascular+remodeling.">Diet-induced obesity links to ER positive breast cancer progression via LPA/PKD-1-CD36 signaling-mediated microvascular remodeling.</a> Oncotarget. 8, 22550-22562 (2017).</li><li>Ren, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ERK1/2-Akt1+crosstalk+regulates+arteriogenesis+in+mice+and+zebrafish.">ERK1/2-Akt1 crosstalk regulates arteriogenesis in mice and zebrafish.</a> Journal of Clinical Investigation. 120, 1217-1228 (2010).</li><li>Skuli, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+HIF-2alpha+regulates+murine+pathological+angiogenesis+and+revascularization+processes.">Endothelial HIF-2alpha regulates murine pathological angiogenesis and revascularization processes.</a> Journal of Clinical Investigation. 122, 1427-1443 (2012).</li></ol>

L'angiogenesi è un complesso processo a più fasi, in cui la trascrizione e l'espressione genica angiogenica specifica della CE svolgono un ruolo essenziale nella differenziazione CE e nella riprogrammazione angiogenica3,4. Per superare le barriere della diversità cellulare e della complessità architettonica per comprendere meglio la funzione del sistema vascolare dei mammiferi a livello molecolare in vivo, abbiamo creato topi TRAP specifici per eC, accompagna...

Nei tessuti complessi come il cervello, il cuore e il polmone dei mammiferi, gli alti livelli di eterogeneità cellulare complicano l'analisi dei dati di espressione genica derivati da campioni di tessuto intero. Per osservare i profili di espressione genica in un particolare tipo di cellula in vivo, recentemente è stata sviluppata una nuova metodologia, che consente l'interrogatorio dell'intero complemento di mRNA tradotto di qualsiasi tipo di cellula geneticamente definita. Questa metodologia è nota come tecnica di purificazione dell'affinità del ribosoma di traduzione (TRAP)1,2. È uno strumento utile per studiare la biologia endoteliale e l'angiogenesi quando combinato con la manipolazione genetica di altri geni associati all'angiogenesi negli animali.
Abbiamo dimostrato che la segnalazione angiogenica del PKD-1 e la trascrizione del gene angiogenico CD36 sono fondamentali per la differenziazione delle cellule endoteliali (EC) e l'angiogenesi funzionale3,4,5,6. Per determinare i meccanismi molecolari della segnalazione angiogenica e metabolica nella trascrizione genica e nella trasdifferenza EC, abbiamo creato topi TRAP geneticamente ingegnerizzati con geni angiogenici specificamente eliminati sulla base della tecnica TRAP1 , 2. Inoltre, nei nostri animali TRAP, non solo hanno pkd-1 o cd36 carenza genica nell'endotelio vascolare o deduzione globale del gene cd36, ma una proteina di fluorescenza verde migliorata (EGFP) è anche geneticamente etichettata su La CE sta traducendo i ribosomi. Il TRAP consente la purificazione dell'affinità dell'mRNA legato al ribosoma direttamente dall'endotelia vascolare dei tessuti mirati, consentendo l'analisi dell'espressione genica e l'identificazione di nuovi trascrittomi associati alla differenziazione e angiogenesi direttamente in condizioni in vivo. Abbiamo isolato con successo l'RNA legato al ribosoma dagli endoti in questi animali geneticamente modificati. L'RNA purificato può essere utilizzato per un'ulteriore caratterizzazione dei geni angiogenici o arteriogenici nella regolazione della differenziazione e delle funzioni CE. Questo protocollo fornisce una guida passo-passo per implementare l'approccio TRAP per l'isolamento dell'mRNA in EC direttamente in vivo.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:591px;" width="589">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">2100 Electrophoresis Bioanalyzer with Nanochips and Picochips</td>
			<td style="width:73px;">Agilent</td>
			<td style="width:123px;">G2939AA, 5067-1511 &#38; 5067-1513</td>
			<td style="width:172px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Cell scrapers</td>
			<td style="width:73px;">Sarstedt</td>
			<td align="right" style="width:123px;">83.1832</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Homogenizers</td>
			<td style="width:73px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:123px;">K8855100020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Magnet (Dynamag-2)</td>
			<td style="width:73px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:123px;">123-21D</td>
			<td>Will depend on purification scale; samples in 1.5-mL tubes can be concentrated on a DynaMag-2</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Minicentrifuge</td>
			<td style="width:73px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:123px;">05-090-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">NanoDrop 2000C spectrophotometer</td>
			<td style="width:73px;">Thermo Scientific&#160;</td>
			<td style="width:123px;">ND-2000C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Refrigerated centrifuge</td>
			<td style="width:73px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:123px;">5430R</td>
			<td>with rotor for 1.5-mL microcentrifuge tubes</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">RNase-free 1.5mL microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:73px;">Applied Biosystems&#160;</td>
			<td style="width:123px;">AM12450</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Rnase-free 50-mL conical tubes</td>
			<td style="width:73px;">Applied Biosystems&#160;</td>
			<td style="width:123px;">AM12501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">RNase-free 1000-&#956;l filter tips</td>
			<td style="width:73px;">Rainin</td>
			<td style="width:123px;">RT-1000F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">RNase-free 200-&#956;l filter tips</td>
			<td style="width:73px;">Rainin&#160;</td>
			<td style="width:123px;">RT-200F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">RNase-free 20-&#956;l filter tips</td>
			<td style="width:73px;">Rainin&#160;</td>
			<td style="width:123px;">RT-20F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Rotor for homogenizers</td>
			<td style="width:73px;">Yamato&#160;</td>
			<td style="width:123px;">LT-400D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Tube rotator, Labquake brand</td>
			<td style="width:73px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:123px;">13-687-12Q</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

translating ribosome affinity purification (trap) for rna isolation from endothelial cells in vivo

Molti studi si sono limitati all'utilizzo di saggi cellulari in vitro e tessuti interi o all'isolamento di specifici tipi di cellule da animali per l'analisi in vitro del trascrittoma e dell'espressione genica mediante qPCR e sequenziamento dell'RNA. Il trascrittoma completo e l'analisi dell'espressione genica di specifici tipi di cellule in tessuti e organi complessi sarà fondamentale per comprendere i meccanismi cellulari e molecolari con cui i geni sono regolati e la loro associazione con l'omeostasi dei tessuti e l'organo Funzioni. In questo articolo, dimostriamo la metodologia per l'isolamento dell'RNA legato al ribosoma direttamente in vivo nell'endotelio vascolare dei polmoni animali come esempio. Saranno descritti i materiali e le procedure specifici per la lavorazione dei tessuti e la purificazione dell'RNA, compresa la valutazione della qualità e della resa dell'RNA, nonché qPCR in tempo reale per i saggi genici arteriogenici. Questo approccio, noto come tecnica di purificazione dell'affinità ribosomiana (TRAP), può essere utilizzato per la caratterizzazione dell'espressione genica e l'analisi del trascrittoma di alcuni tipi di cellule direttamente in vivo in qualsiasi tipo specifico nei tessuti complessi.

I nostri studi precedenti4,7 suggeriscono che CD36 può funzionare come un interruttore per la differenziazione arteriolar e arterializzazione capillare tramite la via di segnalazione LPA/PKD-1. Per studiare se l'asse di segnalazione LPA/PKD-1-CD36 è essenziale per l'arteriogenesi in vivo, abbiamo stabilito le nuove linee TRAP che non solo hanno carenza globale di cd36 o endoteliano specifico-cd36- o pkd-1-deficizione, ma permettono anche l'isolamento selettivo ...

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Translating Ribosome Affinity Purification TRAP for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Presentiamo un approccio per purificare l'mRNA legato al ribosoma dalle cellule endoteliali vascolari (EC) direttamente nel cervello del topo, nei polmoni e nei tessuti cardiaci attraverso il tag genetico specifico della Proteina di fluorescenza verde avanzata (EGFP) nei ribosomi in combinazione con la purificazione dell'RNA .

Traduzione della purificazione dell'affinità del ribosoma (TRAP) per l'isolamento dell'RNA dalle cellule endoteliali In vivo

Many studies have been limited to using in vitro cellular assays and whole tissues or isolating of specific cell types from animals for in vitro analysis ...

Ciao, sono Bin Ren, sono professore associato di chirurgia e ingegneria biomedica all'Università dell'Alabama alla Birmingham School of Medicine. Il nostro laboratorio è interessato alla funzione di angiogenesi della funzione di biologia cellulare endoteliale nel contesto di queste comuni malattie cardiovascolari e tumori. Una delle nostre ricerche si concentra sulla regolazione epigenetica e trascrizione della transdifferenziazione endoteliale delle cellule e dell'angiogenesi.Per comprendere i meccanismi trascrittivi dell'angiogenesi, abbiamo stabilito linee di topo ingegnerizzate transgeniche, in cui non solo abbiamo eliminato uno specifico geni associato all'angiogenesi nelle cellule endoteliali, ma una sonda GFP potenziata sarà geneticamente taggata su un ribosoma di cellule endoteliali native. In questo modo, possiamo isolare e purificare anelli di RNA messaggero associato da cellule endoteliali in diversi organi tissutali direttamente negli animali transgenici. Possiamo quindi usare l'RNA messaggero purificato per l'analisi a valle delle trascrizioni e del trascrittame.Con il sequenziamento dell'RNA e la PCR fredda in tempo reale. In questo video, i miei studenti Patrick Moran e Jordan Palmer e i tecnici di ricerca Nicholas Barnekow e Rong Yuan vi mostreranno un approccio che genotipizza i topi transgenici e l'aspirazione dell'RNA messaggero direttamente dall'endoteliale negli animali transgenici. La genotipizzazione è un importante preliminare in questo protocollo per garantire che il ghiaccio abbia il tag GFP sui ribosomi delle cellule endoteliali.Poiché tutti i passaggi di isolamento RNAi a valle si basano sulla presenza di ribosomi taggati GFP, è essenziale determinare il genotipo prima di iniziare l'esperimento. Prima di iniziare l'isolamento dell'RNA, è necessario completare diverse fasi preparatorie. Questi includono la preparazione tampone e il legame dell'anticorpo anti-GFP alle perline di dina G proteiche.I tamponi possono durare fino a un mese a quattro gradi Celsius e le perline legate agli anticorpi possono durare fino a una settimana a quattro gradi Celsius. Quindi prendi in considerazione queste limitazioni quando pianifichiamo il tuo esperimento. L'uso di un omogeneizzatore a spinta molare è un modo eccellente per aumentare la resa dell'RNA.Assicurati di utilizzare impostazioni e durate di frequenza inferiore per ridurre la degradazione dell'RNA. Come accennato in precedenza, il genotipizzazione è un importante passo preliminare nel protocollo di prova. Garantire che i topi il cui RNA deve essere isolato utilizzando la tecnica TRAP siano positivi per il gene TRAP, almeno gli eterozigoti, ma idealmente omozigoti per il gene TRAP è un passo importante perché garantire che il tag GFP sia sul ribosoma è essenziale per ritirarsi usando la reazione anticorpale dell'antigene e le perline anti-GFP che avrai preparato prima di iniziare l'esperimento.Isolare i tessuti desiderati dal mouse e posizionarli immediatamente in un PBS ghiacciato con soluzione di cicloesamide da 100 microgrammi per millilitro. Ciò garantisce che la traduzione venga interrotta e che il trascrittame sia una rappresentazione accurata del mouse prima dell'eutanasia. Utilizzare un omogeneizzatore motorizzatore per omogeneizzare il tessuto in una sospensione cellulare.Le impostazioni ideali di temporizzazione e frequenza dovranno essere determinate dal singolo laboratorio in base al particolare omogeneizzatore a motore che utilizzerai. L'uso di un'impostazione di frequenza troppo alta può portare alla degradazione dell'RNA e interrompere il resto del protocollo. Sospendere il pellet di cella all'interno del tampone dilisi che si dovrebbe preparare prima di iniziare l'esperimento.Assicurarsi di omogeneizzare ulteriormente questa miscela al fine di garantire un'adeguata omogeneizzazione prima di procedere con il resto del protocollo. Centrifugare l'omogeneato per 10 minuti a 2.000 volte G in una centrifuga di quattro gradi Celsius. Ciò si pelletterà i nuclei e i grandi detriti cellulari che possono interferire con la reazione di immunoprecipitazione a valle.Aggiungere lipidi DHPC e CA-630 al supernatante dalla fase di centrifugazione precedente. Questi lipidi aiuteranno a separare le fasi proteiche dagli altri componenti intracellulari. Posizionare la sospensione sul ghiaccio per cinque minuti e lasciare riposare.Centrifugare il lysate per 10 minuti a 13.000 volte G per pelletare qualsiasi materiale solubile. Mantenere il 15% del lysate chiaro per i passaggi futuri. Aggiungere le perline legate all'anticorpo anti-GFP al supernatante lisato cellulare e incubare la miscela a quattro gradi Celsius con rotazione finale su fine per 30 minuti.È qui che gli anticorpi anti-GFP legheranno i ribosomi taggati GFP, permettendoci di isolare ulteriormente l'RNA da questi ribosomi. Raccogli le perline sul rack magnetico e lava le perline cinque volte usando il tuo tampone di lavaggio polisome ad alto sale che avrai preparato prima di iniziare l'isolamento. Procedere immediatamente al passaggio successivo in cui si posizioneranno le perline nel buffer RLT.Centrifugare il lysate per tre minuti a tutta velocità e rimuovere con cura il supernatante e trasferirlo su un nuovo tubo di microfugo. Aggiungere un volume di 70%etanolo al lysate sgombrato e mescolare immediatamente con pipettazione. Procedere immediatamente al passaggio successivo in cui si trasferiranno fino a 700 microlitri del campione, incluso qualsiasi precipitato che potrebbe aver formato, in una colonna di spin posta in un tubo di raccolta a due millilitri.Centrifugare il lysate per 15 secondi a più di 8.000 volte G per lavare la membrana della colonna di rotazione. Scartare il flusso e procedere al passaggio successivo. Aggiungere 350 microlitri di buffer RW1 alla colonna di rotazione.Centrifugare per 15 secondi a più di 8.000 volte G per lavare la membrana della colonna di spin e scartare il flusso. Ripetere questo passaggio utilizzando altri 350 microlitri di buffer RW1 prima di procedere al passaggio successivo. Aggiungere 500 microlitri di buffer RPE alla colonna di rotazione.Centrifugare per 15 secondi a più di 8.000 volte G per lavare la membrana della colonna di rotazione. Scartare il flusso e procedere a ripetere questo passaggio aggiungendo altri 500 microlitri di buffer RPE alla colonna di rotazione. Questa volta, centrifugare per due minuti a più di 8.000 volte G per lavare la membrana della colonna di rotazione.Scartare il flusso attraverso e posizionare la colonna di rotazione in un nuovo tubo di raccolta a due millilitri e procedere alla centrifugazione a tutta velocità per un minuto per rimuovere qualsiasi tampone residuo che potrebbe essere presente sulla colonna di rotazione. Scartare il flusso e posizionare la colonna di rotazione in un nuovo tubo di raccolta da 1,5 millilitri. Procedere ad aggiungere da 30 a 50 microlitri di acqua libera da RNasi direttamente alla membrana della colonna di rotazione.Centrifugare per un minuto a più di 8.000 volte G per elutare l'RNA dalla membrana della colonna di spin. A questo punto, l'RNA viene sciolto in acqua libera da RNasi e può essere conservato a meno 80 gradi Celsius per un massimo di un anno. Procedere a quantificare e controllare la purezza dell'RNA isolato utilizzando uno spettrofotometro.Stai cercando un picco a 260 nanometri, che è acido nucleico, incluso l'RNA, assorbe al massimo. La quantità è raffigurata nella parte inferiore destra dell'immagine in nanogrammi per microlitro. La qualità può essere dedotta dal rapporto 260 230 che mostra un articolo sopra la quantità nella parte in basso a destra dello schermo.Il nostro approccio ha mostrato basse rese di RNA, specialmente quando abbiamo purificato l'mRNA dai tessuti cardiaci o dai tessuti precedentemente congelati. Dobbiamo quindi optare per le condizioni per aumentare i rendimenti. Tuttavia, abbiamo osservato in EC specifici topi carenti di CD-36, il livello di efrina B2 e DLL4 è stato significativamente aumentato sia nell'endotelia polmonare che in quello cardiaca, rispetto al controllo.Questi risultati sono stati coerenti con i nostri precedenti studi in vitro, il che suggerisce che la qualità dell'RNA è sufficiente per l'analisi a valle. La resa è stata bassa a causa delle rigorose condizioni nel nostro spazio di lavoro. Per superare questa limitazione, è fondamentale creare una zona di lavoro libera dalla RNasi e decontaminare superfici di lavoro e attrezzature che possono essere contaminate da RNasi e cambiare frequentemente i guanti al fine di estrarre RNA di qualità e aumentare le rese.È inoltre fondamentale trovare concentrazioni adeguate di anticorpi GFP nella matrice di affinità e utilizzare concentrazioni appropriate di inibitore della RNasi nel tampone di lisi tissutale e utilizzare materiale plastico privo di RNasi e reagenti per l'estrazione dell'RNA da ribosomi endoteliali dei tessuti mirati.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Translating Ribosome Affinity Purification (TRAP) for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Isolation of Cognate RNA-protein Complexes from Cells Using Oligonucleotide-directed Elution

Isolamento di cognate Complessi RNA-proteina da Cellule con eluizione oligonucleotidi-diretto

Ribonucleoprotein particles direct the biogenesis and post-transcriptional regulation of all mRNAs through distinct combinations of RNA binding proteins. ...

Ricerca

Biochimica

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Affinity capture is an effective technique for isolating endogenous protein complexes for further study. When used in conjunction with an antibody, this ...

An Efficient Method for the Isolation of Highly Purified RNA from Seeds for Use in Quantitative Transcriptome Analysis

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Tandem Affinity Purification of Protein Complexes from Eukaryotic Cells

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Purifying a Fibrinolytic Enzyme from Sipunculus nudus via Affinity Chromatography

Affinity Purification of a Fibrinolytic Enzyme from Sipunculus nudus

Affinity Purification of a Fibrinolytic Enzyme from Sipunculus nudus (Video) | JoVE 

Purificazione per affinità di un enzima fibrinolitico da Sipunculus nudus

The fibrinolytic enzyme from Sipunculus nudus (sFE) is a novel fibrinolytic agent that can both activate plasminogen into plasmin and degrade fibrin ...