Name: translating ribosome affinity purification (trap) for rna isolation from endothelial cells in vivo
Uploaded: 2019-05-25T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Translating Ribosome Affinity Purification TRAP for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo at JoVE.com

レン博士の研究は、アメリカ心臓協会(13SDG14800019;)BR)、アンの希望財団(FP00011709;BR)、米国癌学会(86-004-26;BRへのMCW癌センター)、および国立衛生研究所(HL136423);BR);ジョーダン・パーマーは、2018年MCW CTSI 500スターインターンシッププログラムによってサポートされています。P.モランは、NHLBI(5T35 HL072483-34)からの機関研究訓練助成金によってサポートされています。

動物実験のために、ここに記載されているすべての方法は、ウィスコンシン医科大学の機関動物ケアおよび使用委員会によって承認されています。
1. 試薬の準備
<ol><li>10mM HEPES、pH 7.4、150mM KCl、5mM MgCl 2、0.5 mM DTT、100mg/mLシクロヘキシミド、プロテアーゼ阻害剤、および組換えRNase阻害剤の濃度に対するリシスバッファーを以下に説明する。<ol>
<li>RNaseフリー脱イ?...

<ol>
	<li>Heiman, M., Kulicke, R., Fenster, R. J., Greengard, P., Heintz, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+type-specific+mRNA+purification+by+translating+ribosome+affinity+purification+(TRAP).">Cell type-specific mRNA purification by translating ribosome affinity purification (TRAP).</a> Nature Protocols. 9, 1282-1291 (2014).</li><li>Zhou, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interrogating+translational+efficiency+and+lineage-specific+transcriptomes+using+ribosome+affinity+purification.">Interrogating translational efficiency and lineage-specific transcriptomes using ribosome affinity purification.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110, 15395-15400 (2013).</li><li>Best, B., Moran, P., Ren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF/PKD-1+signaling+mediates+arteriogenic+gene+expression+and+angiogenic+responses+in+reversible+human+microvascular+endothelial+cells+with+extended+lifespan.">VEGF/PKD-1 signaling mediates arteriogenic gene expression and angiogenic responses in reversible human microvascular endothelial cells with extended lifespan.</a> Molecular and Cellular Biochemistry. 446, 199-207 (2018).</li><li>Ren, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LPA/PKD-1-FoxO1+Signaling+Axis+Mediates+Endothelial+Cell+CD36+Transcriptional+Repression+and+Proangiogenic+and+Proarteriogenic+Reprogramming.">LPA/PKD-1-FoxO1 Signaling Axis Mediates Endothelial Cell CD36 Transcriptional Repression and Proangiogenic and Proarteriogenic Reprogramming.</a> Arteriosclerosclerosis Thrombosis, Vascular Biology. 36, 1197-1208 (2016).</li><li>Ren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+Kinase+D1+Signaling+in+Angiogenic+Gene+Expression+and+VEGF-Mediated+Angiogenesis.">Protein Kinase D1 Signaling in Angiogenic Gene Expression and VEGF-Mediated Angiogenesis.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 4, 37 (2016).</li><li>Ren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FoxO1+transcriptional+activities+in+VEGF+expression+and+beyond:+a+key+regulator+in+functional+angiogenesis?.">FoxO1 transcriptional activities in VEGF expression and beyond: a key regulator in functional angiogenesis?.</a> Journal of Pathology. 245, 255-257 (2018).</li><li>Hupe, M., Li, M. X., Gertow Gillner, K., Adams, R. H., Stenman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+TRAP-sequencing+technology+with+a+versatile+conditional+mouse+model.">Evaluation of TRAP-sequencing technology with a versatile conditional mouse model.</a> Nucleic Acids Research. 42, e14 (2014).</li><li>Dong, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diet-induced+obesity+links+to+ER+positive+breast+cancer+progression+via+LPA/PKD-1-CD36+signaling-mediated+microvascular+remodeling.">Diet-induced obesity links to ER positive breast cancer progression via LPA/PKD-1-CD36 signaling-mediated microvascular remodeling.</a> Oncotarget. 8, 22550-22562 (2017).</li><li>Ren, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ERK1/2-Akt1+crosstalk+regulates+arteriogenesis+in+mice+and+zebrafish.">ERK1/2-Akt1 crosstalk regulates arteriogenesis in mice and zebrafish.</a> Journal of Clinical Investigation. 120, 1217-1228 (2010).</li><li>Skuli, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+HIF-2alpha+regulates+murine+pathological+angiogenesis+and+revascularization+processes.">Endothelial HIF-2alpha regulates murine pathological angiogenesis and revascularization processes.</a> Journal of Clinical Investigation. 122, 1427-1443 (2012).</li></ol>

血管新生は、EC特異的血管新生遺伝子転写および発現がEC分化および血管新生リプログラミング3、4において重要な役割を果たす複雑な多段階プロセスである。細胞の多様性と建築の複雑さから、生体内の分子レベルで哺乳類血管系の機能をよりよく理解するために、EC特異的なCD36を伴うEC特異的TRAPマウスを作成しました。 、EC特異的pkd-1</...

哺乳類の脳、心臓、肺などの複雑な組織では、細胞の不均一性の高いレベルは、組織サンプル全体から得られる遺伝子発現データの分析を複雑にします。生体内の特定の細胞型における遺伝子発現プロファイルを観察するために、最近新しい方法論が開発され、遺伝子決定された任意の細胞型の翻訳されたmRNA補体全体の尋問が可能になった。この方法論は、翻訳リボソーム親和性精製(TRAP)技術1、2として知られている。これは、動物の他の血管新生関連遺伝子を遺伝的に操作する場合、内皮細胞生物学と血管新生を研究するのに有用なツールです。
血管新生PKD-1シグナル伝達および血管新生遺伝子CD36の転写は、内皮細胞(EC)分化および機能血管新生3、4、5、6に重要であることを示した。遺伝子転写およびECトランス分化における血管新生および代謝シグナル伝達の分子機構を決定するために、TRAP技術1に基づいて特異的に削除された血管新生遺伝子を用いた遺伝子組み換えTRAPマウスを作成した。,2.さらに、TRAP動物では、血管内皮またはcd36遺伝子の世界的な欠失にpkd-1またはcd36遺伝子欠損があるだけでなく、増強された緑色蛍光タンパク質(EGFP)も遺伝的にタグ付けされています。ECのリボソームの翻訳TRAPは、標的組織の血管内皮から直接リボソーム結合mRNAの親和性精製を可能にし、遺伝子発現の解析とEC分化に関連する新しい転写物の同定を可能にし、生体内条件下で直接血管新生。これらの遺伝子組み換え動物では、内皮からリボソーム結合RNAを単離することに成功しました。精製されたRNAは、EC分化および機能の調節における血管新生または動脈系遺伝子のさらなる特徴付けに使用することができる。このプロトコルは、生体内で直接IC内のmRNAを単離するためのTRAPアプローチを実装するためのステップバイステップガイドを提供します。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:591px;" width="589">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">2100 Electrophoresis Bioanalyzer with Nanochips and Picochips</td>
			<td style="width:73px;">Agilent</td>
			<td style="width:123px;">G2939AA, 5067-1511 &#38; 5067-1513</td>
			<td style="width:172px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Cell scrapers</td>
			<td style="width:73px;">Sarstedt</td>
			<td align="right" style="width:123px;">83.1832</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Homogenizers</td>
			<td style="width:73px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:123px;">K8855100020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Magnet (Dynamag-2)</td>
			<td style="width:73px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:123px;">123-21D</td>
			<td>Will depend on purification scale; samples in 1.5-mL tubes can be concentrated on a DynaMag-2</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Minicentrifuge</td>
			<td style="width:73px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:123px;">05-090-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">NanoDrop 2000C spectrophotometer</td>
			<td style="width:73px;">Thermo Scientific&#160;</td>
			<td style="width:123px;">ND-2000C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Refrigerated centrifuge</td>
			<td style="width:73px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:123px;">5430R</td>
			<td>with rotor for 1.5-mL microcentrifuge tubes</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">RNase-free 1.5mL microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:73px;">Applied Biosystems&#160;</td>
			<td style="width:123px;">AM12450</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Rnase-free 50-mL conical tubes</td>
			<td style="width:73px;">Applied Biosystems&#160;</td>
			<td style="width:123px;">AM12501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">RNase-free 1000-&#956;l filter tips</td>
			<td style="width:73px;">Rainin</td>
			<td style="width:123px;">RT-1000F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">RNase-free 200-&#956;l filter tips</td>
			<td style="width:73px;">Rainin&#160;</td>
			<td style="width:123px;">RT-200F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">RNase-free 20-&#956;l filter tips</td>
			<td style="width:73px;">Rainin&#160;</td>
			<td style="width:123px;">RT-20F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Rotor for homogenizers</td>
			<td style="width:73px;">Yamato&#160;</td>
			<td style="width:123px;">LT-400D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Tube rotator, Labquake brand</td>
			<td style="width:73px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:123px;">13-687-12Q</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

translating ribosome affinity purification (trap) for rna isolation from endothelial cells in vivo

多くの研究は、qPCRおよびRNAシーケンシングによる転写物および遺伝子発現のインビトロ分析のために、インビトロ細胞アッセイおよび全組織または動物からの特定の細胞型の単離に限定されている。複雑な組織や臓器における特定の細胞型の包括的な転写物および遺伝子発現解析は、遺伝子が調節される細胞および分子機構と組織恒常性および器官との関連を理解するために重要である。関数。本稿では、動物肺の血管内皮におけるリボソーム結合RNAを生体内で直接単離する方法論を例として示す。組織処理およびRNA精製のための具体的な材料および手順について説明し、RNAの品質と収量の評価、ならびに動脈系遺伝子アッセイのためのリアルタイムqPCRを含む。このアプローチは、リボソーム親和性精製(TRAP)技術の翻訳として知られており、複雑な組織における任意の特定のタイプの生体内で直接生体内の特定の細胞タイプの遺伝子発現およびトランスクリプトーム分析の特性評価に利用することができる。

我々の以前の研究4,7は、CD36がLPA/PKD-1シグナル伝達経路を介した動脈分化および毛細血管動脈化のスイッチとして機能する可能性があることを示唆している。LPA/PKD-1-CD36シグナル伝達軸が生体内の動脈形成に不可欠であるかどうかを調べるために、我々は、グローバルCD36欠乏症または内皮特異的CD36-またはpkd-1欠乏症を有するだけでなく、選択的分離...

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Translating Ribosome Affinity Purification TRAP for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

我々は、RNA精製と組み合わせてリボソーム中の増強された緑色蛍光タンパク質(EGFP)のEC特異的遺伝的タグを介して、マウス脳、肺および心臓組織における血管内皮細胞(EC)からリボソーム結合mRNAを精製するアプローチを提示する。.

生体内細胞からのRNA単離に対するリボソーム親和性精製(TRAP)の翻訳

Many studies have been limited to using in vitro cellular assays and whole tissues or isolating of specific cell types from animals for in vitro analysis ...

こんにちは、私はビンレンです、私はアラバマ大学バーミンガム医学部の外科と生物医学工学の准教授です。我々の研究室は、これらの一般的な心血管疾患および癌の文脈における血管新生の血管新生機能に興味を持っています。我々の研究の一つは、内皮細胞のトランスセ分化と血管新生のエピジェネティックおよび転写調節に焦点を当てています。血管新生の転写機構を理解するために、内皮細胞の血管新生に関連する特定の遺伝子を削除しただけでなく、強化されたGFPプローブをネイティブ内皮細胞のリボソームに遺伝的にタグ付けするトランスジェニック工学的マウスラインを確立しました。このようにして、トランスジェニック動物の異なる組織器官の内皮細胞から関連メッセンジャーRNAのループを直接分離して精製することができます。その後、精製されたメッセンジャーRNAを使用して、トランスクリプトとトランスクリプトームの下流分析を行うことができます。RNAシーケンシングとリアルタイムチルPCRによって。このビデオでは、私の学生パトリック・モランとジョーダン・パーマーと研究技術者ニコラス・バーネコウとロン・ユアンは、トランスジェニックマウスとトランスジェニック動物の内皮から直接吸引メッセンジャーRNAのアプローチを紹介します。ジェノタイピングは、このプロトコルにおいて、氷が内皮細胞のリボソームにGFPタグを持つことを保証するための重要な予備です。すべての下流のRNAi分離ステップは、GFPタグリボソームの存在に依存しているため、実験を開始する前に遺伝子型を決定することが不可欠です。RNAの単離を開始する前に、いくつかの準備ステップを完了する必要があります。これらには、抗GFP抗体をタンパク質Gディナビーズに対して緩衝製剤および結合させる。バッファーは摂氏4度で最大1ヶ月間持続することができ、抗体結合ビーズは摂氏4度で最大1週間持続することができます。実験を計画する際には、これらの制限を考慮してください。モル駆動ホモジナイザーを使用すると、RNAの収量を増加させる優れた方法です。RNA の分解を減らすために、低い周波数設定と持続時間を使用してください。前述のように、ジェノタイピングは試用プロトコルにおける重要な予備ステップです。TRAP技術を用いてRNAを単離するマウスがTRAP遺伝子、少なくともヘテロ接合性の遺伝子に陽性であることを確認するが、理想的にはTRAP遺伝子のホモ接合性が重要なステップである。マウスから所望の組織を分離し、ミリリットルシクロヘキサミド溶液あたり100マイクログラムの氷冷PBSにすぐに置きます。これにより、翻訳が停止し、転写が安楽死前のマウスの正確な描写になります。モーター駆動のホモジナイザーを使用して、組織を細胞懸濁液に均質化します。理想的なタイミングと周波数の設定は、使用する特定のモータ駆動ホモジナイザーに基づいて、個々のラボによって決定する必要があります。周波数設定を高くしすぎると、RNA の分解が発生し、プロトコルの残りの部分が中断する可能性があります。実験を開始する前に準備しておく必要のあるリシスバッファー内の細胞ペレットを中断します。プロトコルの残りの部分を進める前に、適切な均質化を確実にするために、この混合物をさらに均質化してください。ホモジュネートを摂氏4度の遠心分離機で2,000倍Gで10分間遠心分離する。これは、下流の免疫沈降反応を妨げる可能性のある核および大きな細胞破片をペレット化する。DHPCおよびCA-630脂質を前の遠心分離工程から上清に加えます。これらの脂質は、タンパク質の相を他の細胞内成分から分離するのに役立ちます。懸濁液を氷の上に5分間置き、座るようにします。13,000倍Gで10分間溶解物を遠心分離し、任意の可溶性物質をペレットする。将来のステップのために明確なlysateの15%を保ちます。抗GFP抗体結合ビーズを細胞の上清に加え、エンドオーバーエンド回転で摂氏4度で30分間インキュベートします。そこで抗GFP抗体がGFPタグリボソームを結合し、RNAをこれらのリボソームからさらに分離することができます。あなたの磁気ラックにビーズを収集し、分離を開始する前に準備した高塩ポリソーム洗浄バッファーを使用してビーズを5回洗います。すぐに次のステップに進み、RLT バッファにビーズを配置します。全速力で3分間のリセートを遠心分離し、上清を慎重に取り除き、新しいマイクロフュージチューブに移します。70%エタノールの1つのボリュームをクリアしたライセートに加え、ピペット処理ですぐに混ぜます。形成した可能性のある沈殿物を含むサンプルの最大700マイクロリットルを2ミリリットルの採取チューブに配置されたスピンカラムに移す次のステップに直ちに進みます。8,000倍Gを超える時に15秒間のリセートを遠心分離し、スピンカラム膜を洗浄する。フローを破棄して、次の手順に進みます。350マイクロリットルのバッファーRW1をスピンカラムに追加します。遠心分離機は8,000回Gを超える15秒間、スピン柱膜を洗浄し、流れを通して廃棄する。次のステップに進む前に、バッファRW1の別の350マイクロリットルを使用してこのステップを繰り返します。500マイクロリットルのバッファRPEをスピンカラムに追加します。遠心分離機は8,000倍Gを超える場合に15秒間、スピンカラム膜を洗浄した。流れを破棄し、スピンカラムに500マイクロリットルのバッファRPEを追加してこのステップを繰り返します。このとき、遠心分離機を8.000倍Gより多くで2分間、スピンカラム膜を洗浄した。流れを破棄し、新しい2ミリリットルの回収チューブにスピンカラムを入れ、フルスピードで1分間遠心分離機に進み、スピンカラムに存在する残留バッファを取り除きます。流れを捨てて、スピンカラムを新しい1.5ミリリットルの回収チューブに入れます。スピンカラム膜にRNaseフリーウォーターの30〜50マイクロリットルを直接加えます。遠心分離機は8,000倍Gを超える1分間、スピンカラム膜からRNAを溶出させる。この時点で、あなたのRNAはRNaseの自由水に溶解し、1年までマイナス80°Cで貯えられるかもしれない。分光光度計を使用して、単離したRNAの純度を定量し、確認します。RNAを含む核酸である260ナノメートルのピークを探しています。量は、画像の右下の部分に、マイクロリットル当たりのナノグラムで描かれている。品質は、画面の右下の部分の数量の上に1項目を示している260 230比によって推測することができます。我々のアプローチは、特に心臓組織または以前に凍結した組織からmRNAを精製した場合、低いRNA収量を示した。したがって、我々は、収量を増加させるために条件を最適化する必要があります。しかし、EC特異的CD-36欠損マウスでは、肺および心臓内皮両方においてエフルリンB2およびDLL4のレベルが有意に増加し、対照と比較して観察した。これらの結果は、RNAの品質が下流の分析に十分であることを示唆する、我々の以前のin vitro研究と一致していた。私たちのワークスペースの厳しい条件のために収量は低かった。この制限を克服するためには、RNaseフリー作業ゾーンを設置し、RNaseに汚染され得る作業面や機器を除染し、品質のRNAを抽出して収量を増やすために手袋を頻繁に交換することが重要です。また、アフィニティーマトリックス中の適切なGFP抗体濃度を見つけ、組織のリシスバッファーに適切な濃度のRNase阻害剤を使用し、標的組織の内皮リボソームからのRNA抽出にRNaseフリーのプラスチック製品および試薬を使用することも重要です。

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Translating Ribosome Affinity Purification (TRAP) for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Isolation of Cognate RNA-protein Complexes from Cells Using Oligonucleotide-directed Elution

オリゴヌクレオチド指向溶出を用いて細胞から同族RNA-タンパク質複合体の単離

Ribonucleoprotein particles direct the biogenesis and post-transcriptional regulation of all mRNAs through distinct combinations of RNA binding proteins. ...

Protein Complex Affinity Capture from Cryomilled Mammalian Cells

Cryomilled哺乳動物細胞からのタンパク質複合体の親和性のキャプチャ

Affinity capture is an effective technique for isolating endogenous protein complexes for further study. When used in conjunction with an antibody, this ...

An Efficient Method for the Isolation of Highly Purified RNA from Seeds for Use in Quantitative Transcriptome Analysis

定量的トランスクリプトーム解析に使用するための種子から高度に精製されたRNAの単離のための効率的な方法

Plant seeds accumulate large amounts of storage reserves comprising biodegradable organic matter. Humans rely on seed storage reserves for food and as ...

Tandem Affinity Purification of Protein Complexes from Eukaryotic Cells

真核細胞からのタンパク質複合体のタンデムアフィニティー精製

The purification of active protein-protein and protein-nucleic acid complexes is crucial for the characterization of enzymatic activities and de novo ...

A G-quadruplex DNA-affinity Approach for Purification of Enzymatically Active G4 Resolvase1

酵素的に活性G4 Resolvase1の精製のためのG-四重鎖DNA親和性のアプローチ

Higher-order nucleic acid structures called G-quadruplexes (G4s, G4 structures) can form in guanine-rich regions of both DNA and RNA and are highly ...

Purification of Biotinylated Cell Surface Proteins from Rhipicephalus microplus Epithelial Gut Cells

Purification of Biotinylated Cell Surface Proteins from Rhipicephalus microplus Epithelial Gut Cells

ビオチン化細胞表面タンパク質の精製<em&gt; Rhipicephalus microplus</em&gt;上皮腸細胞

Rhipicephalus microplus &#8211; the cattle tick &#8211; is the most significant ectoparasite in terms of economic impact on livestock as a vector of ...

Purification of Hepatocytes and Sinusoidal Endothelial Cells from Mouse Liver Perfusion

精製マウス肝類洞内皮細胞と肝細胞の灌流

This protocol demonstrates a method for obtaining high yield and viability for mouse hepatocytes and sinusoidal endothelial cells (SECs) suitable for ...

MS2-Affinity Purification Coupled with RNA Sequencing in Gram-Positive Bacteria

グラム陽性菌におけるRNAシーケンシングと結合したMS2-アフィニティ精製

Although small regulatory RNAs (sRNAs) are widespread among the bacterial domain of life, the functions of many of them remain poorly characterized ...

Purification of Ubiquitinated p53 Proteins from Mammalian Cells

哺乳類細胞からのユビキチン化p53タンパク質の精製

Ubiquitination is a type of posttranslational modification that regulates not only the stability but also the localization and function of a substrate ...

Purifying a Fibrinolytic Enzyme from Sipunculus nudus via Affinity Chromatography

Affinity Purification of a Fibrinolytic Enzyme from Sipunculus nudus

Affinity Purification of a Fibrinolytic Enzyme from Sipunculus nudus (Video) | JoVE 

シプンクルスヌーダスからの線維素溶解酵素の親和性精製

The fibrinolytic enzyme from Sipunculus nudus (sFE) is a novel fibrinolytic agent that can both activate plasminogen into plasmin and degrade fibrin ...