Name: translating ribosome affinity purification (trap) for rna isolation from endothelial cells in vivo
Uploaded: 2019-05-25T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Translating Ribosome Affinity Purification TRAP for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo at JoVE.com

Dr. ren arbeid er støttet av American Heart Association (13SDG14800019; BR), Ann ' s Hope Foundation (FP00011709; BR), American Cancer Society (86-004-26, den MCW Cancer Center til BR), og National Institute of Health (HL136423; BR); Jordan palmer er støttet av 2018 MCW CTSI 500 Stars internship program; P. Moran er støttet av en institusjonell Research Training Grant fra NHLBI (5T35 HL072483-34).

For dyr eksperimenter, har alle metoder som er beskrevet her blitt godkjent av institusjonelle Animal Care og bruk Committee av Medical College of Wisconsin.
1. klargjøre reagenser
<ol><li>Klargjør lyseringsbuffer til konsentrasjoner på 10 mM HEPES, pH 7,4, 150 mM KCl, 5 mM MgCl2, 0,5 mm DTT, 100 mg/ml cycloheximide, protease hemmere og rekombinant RNase-hemmere til konsentrasjoner som beskrevet nedenfor.<ol>
<li>Tilsett følgende reagenser til 500 mL RNase deionisert vann: 1,1...

<ol>
	<li>Heiman, M., Kulicke, R., Fenster, R. J., Greengard, P., Heintz, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+type-specific+mRNA+purification+by+translating+ribosome+affinity+purification+(TRAP).">Cell type-specific mRNA purification by translating ribosome affinity purification (TRAP).</a> Nature Protocols. 9, 1282-1291 (2014).</li><li>Zhou, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interrogating+translational+efficiency+and+lineage-specific+transcriptomes+using+ribosome+affinity+purification.">Interrogating translational efficiency and lineage-specific transcriptomes using ribosome affinity purification.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110, 15395-15400 (2013).</li><li>Best, B., Moran, P., Ren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF/PKD-1+signaling+mediates+arteriogenic+gene+expression+and+angiogenic+responses+in+reversible+human+microvascular+endothelial+cells+with+extended+lifespan.">VEGF/PKD-1 signaling mediates arteriogenic gene expression and angiogenic responses in reversible human microvascular endothelial cells with extended lifespan.</a> Molecular and Cellular Biochemistry. 446, 199-207 (2018).</li><li>Ren, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LPA/PKD-1-FoxO1+Signaling+Axis+Mediates+Endothelial+Cell+CD36+Transcriptional+Repression+and+Proangiogenic+and+Proarteriogenic+Reprogramming.">LPA/PKD-1-FoxO1 Signaling Axis Mediates Endothelial Cell CD36 Transcriptional Repression and Proangiogenic and Proarteriogenic Reprogramming.</a> Arteriosclerosclerosis Thrombosis, Vascular Biology. 36, 1197-1208 (2016).</li><li>Ren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+Kinase+D1+Signaling+in+Angiogenic+Gene+Expression+and+VEGF-Mediated+Angiogenesis.">Protein Kinase D1 Signaling in Angiogenic Gene Expression and VEGF-Mediated Angiogenesis.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 4, 37 (2016).</li><li>Ren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FoxO1+transcriptional+activities+in+VEGF+expression+and+beyond:+a+key+regulator+in+functional+angiogenesis?.">FoxO1 transcriptional activities in VEGF expression and beyond: a key regulator in functional angiogenesis?.</a> Journal of Pathology. 245, 255-257 (2018).</li><li>Hupe, M., Li, M. X., Gertow Gillner, K., Adams, R. H., Stenman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+TRAP-sequencing+technology+with+a+versatile+conditional+mouse+model.">Evaluation of TRAP-sequencing technology with a versatile conditional mouse model.</a> Nucleic Acids Research. 42, e14 (2014).</li><li>Dong, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diet-induced+obesity+links+to+ER+positive+breast+cancer+progression+via+LPA/PKD-1-CD36+signaling-mediated+microvascular+remodeling.">Diet-induced obesity links to ER positive breast cancer progression via LPA/PKD-1-CD36 signaling-mediated microvascular remodeling.</a> Oncotarget. 8, 22550-22562 (2017).</li><li>Ren, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ERK1/2-Akt1+crosstalk+regulates+arteriogenesis+in+mice+and+zebrafish.">ERK1/2-Akt1 crosstalk regulates arteriogenesis in mice and zebrafish.</a> Journal of Clinical Investigation. 120, 1217-1228 (2010).</li><li>Skuli, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+HIF-2alpha+regulates+murine+pathological+angiogenesis+and+revascularization+processes.">Endothelial HIF-2alpha regulates murine pathological angiogenesis and revascularization processes.</a> Journal of Clinical Investigation. 122, 1427-1443 (2012).</li></ol>

Angiogenese er en kompleks flertrinnsprosess, der EC-spesifikke angiogenic genet transkripsjon og uttrykk spiller en viktig rolle i EC differensiering og angiogenic omprogrammering3,4. For å overkomme barrierene fra det cellulære mangfoldet og arkitektoniske kompleksiteten for bedre å forstå funksjonen til pattedyr vaskulære system på et molekylnivå i Vivo, har vi opprettet EC-spesifikke FELLE mus, ledsaget av EC-spesifikke cd36 , EC-spesifikk <em...

I komplekse vev som pattedyr hjernen, hjerte og lunge, de høye nivåene av cellulære heterogenitet komplisere analyse av genuttrykk data avledet fra hele vevsprøver. For å observere gen uttrykks profiler i en bestemt celle type in vivo, har en ny metodikk blitt utviklet nylig, noe som gjør at avhør av hele oversatte mRNA komplement av genetisk definert celle type. Denne metodikken er kjent som oversette ribosom affinitet rensing (Trap) teknikk1,2. Det er et nyttig redskap for å studere endothelial cellebiologi og angiogenese kombinert med genetisk manipulering av andre angiogenese gener hos dyr.
Vi har vist at angiogenic PKD-1 signalering og transkripsjon av angiogenic Gene CD36 er avgjørende for endothelial celle (EC) differensiering og funksjonell angiogenese3,4,5,6. For å bestemme molekylære mekanismer for angiogenic og metabolske signalering i gen transkripsjon og EC transdifferentiation, har vi skapt genetisk konstruert TRAP mus med spesielt slettet angiogenic gener på grunnlag av TRAP teknikk1 , 2. videre, i våre Trap dyr, ikke bare har de PKD-1 eller cd36 gen mangel i vaskulær endothelia eller global sletting av cd36 Gene, men en forbedret grønn fluorescens protein (EGFP) er også genetisk tagget på EC ' s oversette ribosomer. TRAP tillater affinitet rensing av ribosom-bundet mRNA direkte fra vaskulær endothelia av målrettede vev, slik at analyse av genuttrykk og identifisering av nye transcriptomes som er forbundet med EC differensiering og angiogenese direkte under in vivo-forhold. Vi har med hell isolert ribosom-bundet RNA fra endothelia i disse genetisk konstruerte dyrene. Den renset RNA kan brukes for ytterligere karakterisering av angiogenic eller arteriogenic gener i regulering av EC differensiering og funksjoner. Denne protokollen gir en trinnvis veiledning for å implementere TRAP-tilnærmingen for isolering av mRNA i ECs direkte in vivo.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:591px;" width="589">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">2100 Electrophoresis Bioanalyzer with Nanochips and Picochips</td>
			<td style="width:73px;">Agilent</td>
			<td style="width:123px;">G2939AA, 5067-1511 &#38; 5067-1513</td>
			<td style="width:172px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Cell scrapers</td>
			<td style="width:73px;">Sarstedt</td>
			<td align="right" style="width:123px;">83.1832</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Homogenizers</td>
			<td style="width:73px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:123px;">K8855100020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Magnet (Dynamag-2)</td>
			<td style="width:73px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:123px;">123-21D</td>
			<td>Will depend on purification scale; samples in 1.5-mL tubes can be concentrated on a DynaMag-2</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Minicentrifuge</td>
			<td style="width:73px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:123px;">05-090-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">NanoDrop 2000C spectrophotometer</td>
			<td style="width:73px;">Thermo Scientific&#160;</td>
			<td style="width:123px;">ND-2000C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Refrigerated centrifuge</td>
			<td style="width:73px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:123px;">5430R</td>
			<td>with rotor for 1.5-mL microcentrifuge tubes</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">RNase-free 1.5mL microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:73px;">Applied Biosystems&#160;</td>
			<td style="width:123px;">AM12450</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Rnase-free 50-mL conical tubes</td>
			<td style="width:73px;">Applied Biosystems&#160;</td>
			<td style="width:123px;">AM12501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">RNase-free 1000-&#956;l filter tips</td>
			<td style="width:73px;">Rainin</td>
			<td style="width:123px;">RT-1000F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">RNase-free 200-&#956;l filter tips</td>
			<td style="width:73px;">Rainin&#160;</td>
			<td style="width:123px;">RT-200F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">RNase-free 20-&#956;l filter tips</td>
			<td style="width:73px;">Rainin&#160;</td>
			<td style="width:123px;">RT-20F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Rotor for homogenizers</td>
			<td style="width:73px;">Yamato&#160;</td>
			<td style="width:123px;">LT-400D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Tube rotator, Labquake brand</td>
			<td style="width:73px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:123px;">13-687-12Q</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

translating ribosome affinity purification (trap) for rna isolation from endothelial cells in vivo

Mange studier har vært begrenset til å bruke in vitro cellulære analyser og hele vev eller isolere bestemte celletyper fra dyr for in vitro analyse av transcriptome og genuttrykk ved qPCR og RNA sekvensering. Omfattende transcriptome og genuttrykk analyse av bestemte celletyper i komplekse vev og organer vil være avgjørende for å forstå cellulære og molekylære mekanismer som gener er regulert og deres tilknytning til vev homeostase og organ Funksjoner. I denne artikkelen viser vi metodikken for isolering av ribosom RNA direkte in vivo i vaskulær endothelia av animalsk lunger som et eksempel. De spesifikke materialene og prosedyrene for vevs behandling og RNA-rensing vil bli beskrevet, inkludert vurderingen av RNA-kvalitet og-utbytte i tillegg til sanntids qPCR for arteriogenic genanalyser. Denne tilnærmingen, kjent som å oversette ribosom affinitet rensing (TRAP) teknikk, kan benyttes for karakterisering av genuttrykk og transcriptome analyse av enkelte celletyper direkte i vivo i en bestemt type i komplekse vev.

Våre tidligere studier4,7 tyder på at CD36 kan fungere som en bryter for arterioler differensiering og kapillær arterialization via LPA/PKD-1 signalveien. For å studere om LPA/PKD-1-CD36 er essensielt for arteriogenesis in vivo, har vi etablert romanen TRAP-linjer som ikke bare har global CD36-mangel eller endothelial-spesifikk-CD36-eller PKD-1-mangel, men som også tillater selektiv isolering av ribosom-bundet RNA fra grobunn-merket cellelinjene av GFP, og e...

Watch this Scientific Journal Video about Translating Ribosome Affinity Purification TRAP for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo at JoVE.com

Translating Ribosome Affinity Purification TRAP for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Vi presenterer en tilnærming for å rense ribosom-bundet mRNA fra vaskulær endothelial celler (ECs) direkte i mus hjernen, lunge og hjerte vev via EC-spesifikk genetisk kode av forbedret grønt fluorescens protein (EGFP) i ribosomer i kombinasjon med RNA rensing .

Oversette ribosom affinitet rensing (TRAP) for RNA Isolation fra endothelial celler in vivo

Many studies have been limited to using in vitro cellular assays and whole tissues or isolating of specific cell types from animals for in vitro analysis ...

Hei, jeg er Bin Ren, jeg er førsteamanuensis i kirurgi og biomedisinsk teknikk ved University of Alabama the Birmingham School of Medicine. Vårt laboratorium er interessert i endotelcellebiologi funksjon angiogenese akuogenese i sammenheng med disse vanlige hjerte-og karsykdommer og kreft. En av våre forskningsfokus er på epigenetisk og transkripsjon regulering av endotelcelletransdifferentiation og angiogenese.For å forstå transkripsjonsmekanismene for angiogenese, har vi etablert transgene konstruerte muselinjer, der vi ikke bare har slettet et bestemt gener forbundet med angiogenese i endotelcellene, men en forbedret GFP-sonde vil bli genetisk merket på en ribosom av innfødte endotelceller. På denne måten kan vi isolere og rense løkker av tilhørende messenger RNA fra endotelceller i forskjellige vevsorganer direkte hos transgene dyr. Vi kan deretter bruke renset messenger RNA for nedstrøms analyse av transkripsjoner og transkripsjon.Ved RNA sekvensering og sanntid chill PCR. I denne videoen vil mine studenter Patrick Moran og Jordan Palmer og forskningsteknikerne Nicholas Barnekow og Rong Yuan vise deg en tilnærming genotyping transgene mus og aspirerende budbringer RNA direkte fra endotelet i transgene dyr. Genotyping er en viktig foreløpig i denne protokollen for å sikre at isen har GFP-koden på ribosomene til endotelceller.Siden alle nedstrøms RNAi isolasjonstrinn er avhengige av tilstedeværelsen av GFP-merkede ribosomer, er det viktig å bestemme genotypen før eksperimentet begynner. Før RNA-isolasjonen begynner, må flere forberedende trinn fullføres. Disse inkluderer buffer forberedelse og binding anti-GFP antistoff til protein G dina perler.Bufferne kan vare opptil en måned ved fire grader Celsius og antistoffbundne perler kan vare opptil en uke ved fire grader Celsius. Så ta hensyn til disse begrensningene når du planlegger eksperimentet. Ved hjelp av en molardrevet homogenisator er en utmerket måte å øke RNA-utbyttet på.Pass på at du bruker lavere frekvensinnstillinger og varigheter for å redusere RNA-nedbrytning. Som nevnt tidligere, genotyping er et viktig foreløpig skritt i prøveprotokollen. Å sikre at mus hvis RNA skal isoleres ved hjelp av TRAP-teknikken er positive for TRAP-genet, er i det minste heterozygotes, men ideelt homozygogous for TRAP-genet er et viktig skritt fordi det å sikre at GFP-taggen er på ribosomet er viktig for å trekke ned ved hjelp av antistoffreaksjonen og anti-GFPs du vil ha forberedt før du begynner eksperimentet.Isoler ønsket vev fra musen og legg det umiddelbart i en iskald PBS med 100 mikrogram per milliliter cyklohekamidløsning. Dette sikrer at oversettelsen vil bli stoppet og at transkripsjonen vil være en nøyaktig skildring av musen før eutanasi. Bruk en motordrevet homogenisator til å homogenisere vevet til en cellefjæring.Ideelle timing- og frekvensinnstillinger må bestemmes av det enkelte laboratoriet basert på den bestemte motordrevne homogenisatoren du skal bruke. Bruk av for høy frekvensinnstilling kan føre til RNA-nedbrytning og forstyrre resten av protokollen. Suspender cellepelleten i lysisbufferen du burde ha forberedt før eksperimentet startet.Sørg for å homogenisere denne blandingen ytterligere for å sikre tilstrekkelig homogenisering før du fortsetter med resten av protokollen. Sentrifuger homogenatet i 10 minutter ved 2000 ganger G i en fire grader Celsius sentrifuge. Dette vil pellet kjernene og store cellulære rusk som kan forstyrre nedstrøms immunprecipitation reaksjon.Legg DHPC og CA-630 lipider til supernatant fra forrige sentrifugalisering trinn. Disse lipidene vil bidra til å skille proteinfasene ut fra de andre intracellulære komponentene. Plasser fjæringen på isen i fem minutter og la den sitte.Sentrifuger lysatet i 10 minutter ved 13 000 ganger G for å pellet noe oppløselig materiale. Hold 15% av klar lysate for fremtidige trinn. Tilsett anti-GFP antistoffbundne perler til cellelylat supernatant og inkuber blandingen ved fire grader Celsius med ende over enderotasjon i 30 minutter.Det er her anti-GFP antistoffer vil binde GFP merkede ribosomer, slik at vi kan ytterligere isolere RNA fra disse ribosomene. Samle perlene på magnetstativet og vask perlene fem ganger ved hjelp av din høye saltpolysomvaskbuffer som du vil ha forberedt før du begynner isolasjonen. Fortsett umiddelbart til neste trinn der du vil plassere perlene i RLT-bufferen.Sentrifuger lysatet i tre minutter med full hastighet og fjern forsiktig supernatanten og overfør det til et nytt mikrodrivstoffrør. Tilsett ett volum på 70% etanol til det ryddet lysate og bland umiddelbart ved pipettering. Fortsett umiddelbart til neste trinn der du vil overføre opptil 700 mikroliter av prøven, inkludert eventuelle bunnsplitt som kan ha dannet seg, til en spin-kolonne plassert i et to milliliter oppsamlingsrør.Sentrifuger lysatet i 15 sekunder på mer enn 8000 ganger G for å vaske spin kolonnemembranen. Kast flyten gjennom og gå videre til neste trinn. Legg til 350 mikroliter buffer RW1 i spin-kolonnen.Sentrifuge i 15 sekunder på mer enn 8000 ganger G for å vaske spin kolonnemembranen og kaste strømmen gjennom. Gjenta dette trinnet ved hjelp av ytterligere 350 mikroliter buffer RW1 før du går videre til neste trinn. Legg til 500 mikroliter buffer-RPE i spin-kolonnen.Sentrifuge i 15 sekunder på mer enn 8000 ganger G for å vaske spin kolonne membran. Kast flyten gjennom og fortsett å gjenta dette trinnet ved å legge til ytterligere 500 mikroliter buffer RPE i spin-kolonnen. Denne gangen, sentrifuge i to minutter på mer enn 8.000 ganger G å vaske spin kolonne membran.Kast strømmen gjennom og plasser spin-kolonnen i et nytt to milliliter oppsamlingsrør og fortsett til sentrifuge med full hastighet i ett minutt for å fjerne eventuelle restbuffer som kan være til stede på spin-kolonnen. Kast strømmen gjennom og plasser spin-kolonnen i et nytt 1,5 milliliter oppsamlingsrør. Fortsett å legge til 30 til 50 mikroliter RNase fritt vann direkte til spin-kolonnemembranen.Sentrifuge i ett minutt på mer enn 8000 ganger G for å elute RNA fra spin kolonne membran. På dette punktet er RNA oppløst i RNase fritt vann og kan lagres på minus 80 grader Celsius i opptil ett år. Fortsett å kvantifisere og kontrollere renheten til RNA du har isolert ved hjelp av et spektrofotometer.Du leter etter en topp på 260 nanometer, som er nukleinsyre, inkludert RNA, absorberer maksimalt. Mengden er avbildet i nedre høyre del av bildet i nanograms per mikroliter. Kvalitet kan utledes av 260 230-forholdet som vises ett element over antallet i nedre høyre del av skjermen.Vår tilnærming viste lave RNA-avlinger, spesielt når vi renset mRNA fra hjertevevet eller fra tidligere frosne vev. Vi må dermed velge betingelsene for å øke utbyttet. Vi observerte imidlertid i EC-spesifikke CD-36 mangelfulle mus, nivået av efrin B2 og DLL4 ble betydelig økt i både lunge- og hjerteendothelia, sammenlignet med kontrollen.Disse resultatene var konsistente med våre tidligere in vitro-studier, noe som tyder på at RNA-kvaliteten er tilstrekkelig for nedstrømsanalyse. Avkastningen var lav på grunn av de strenge forholdene i vårt arbeidsområde. For å overvinne denne begrensningen er det viktig å sette opp en RNase fri arbeidssone og dekontaminere arbeidsflater og utstyr som kan bli forurenset med RNase og bytte hansker ofte for å trekke ut kvalitet RNA og øke utbyttet.Det er også viktig å finne egnede konsentrasjoner av GFP-antistoffer i affinitetsmatrisen og bruke passende konsentrasjoner av RNase-hemmer i vevslysbufferen og bruke RNase-fri plastppati og reagenser for RNA-ekstraksjon fra endotel ribosomer av de målrettede vevene.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Translating Ribosome Affinity Purification (TRAP) for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Isolation of Cognate RNA-protein Complexes from Cells Using Oligonucleotide-directed Elution

Isolering av beslektede RNA-proteinkomplekser fra celler under anvendelse av oligonukleotid-rettet Eluering

Ribonucleoprotein particles direct the biogenesis and post-transcriptional regulation of all mRNAs through distinct combinations of RNA binding proteins. ...

Protein Complex Affinity Capture from Cryomilled Mammalian Cells

Protein Complex Affinity Capture fra Cryomilled pattedyrceller

Affinity capture is an effective technique for isolating endogenous protein complexes for further study. When used in conjunction with an antibody, this ...

An Efficient Method for the Isolation of Highly Purified RNA from Seeds for Use in Quantitative Transcriptome Analysis

En effektiv metode for Isolering av høyt renset RNA fra frø for bruk i Quantitative Analysis transcriptome

Plant seeds accumulate large amounts of storage reserves comprising biodegradable organic matter. Humans rely on seed storage reserves for food and as ...

Tandem Affinity Purification of Protein Complexes from Eukaryotic Cells

Tandem Affinity Rensing av protein komplekser fra eukaryote celler

The purification of active protein-protein and protein-nucleic acid complexes is crucial for the characterization of enzymatic activities and de novo ...

A G-quadruplex DNA-affinity Approach for Purification of Enzymatically Active G4 Resolvase1

En G-quadruplex DNA-affinitet tilnærming for rensing av enzymatisk aktivt G4 Resolvase1

Higher-order nucleic acid structures called G-quadruplexes (G4s, G4 structures) can form in guanine-rich regions of both DNA and RNA and are highly ...

Purification of Biotinylated Cell Surface Proteins from Rhipicephalus microplus Epithelial Gut Cells

Purification of Biotinylated Cell Surface Proteins from Rhipicephalus microplus Epithelial Gut Cells

Rensing av biotinylerte celleoverflateproteiner fra<em&gt; Rhipicephalus microplus</em&gt; Epiteliale gutceller

Rhipicephalus microplus &#8211; the cattle tick &#8211; is the most significant ectoparasite in terms of economic impact on livestock as a vector of ...

Purification of Hepatocytes and Sinusoidal Endothelial Cells from Mouse Liver Perfusion

Rensing av hepatocytter og sinusformet endotelceller fra musen leveren perfusjon

This protocol demonstrates a method for obtaining high yield and viability for mouse hepatocytes and sinusoidal endothelial cells (SECs) suitable for ...

MS2-Affinity Purification Coupled with RNA Sequencing in Gram-Positive Bacteria

MS2-affinitetsrensing kombinert med RNA-sekvensering i Gram-positive bakterier

Although small regulatory RNAs (sRNAs) are widespread among the bacterial domain of life, the functions of many of them remain poorly characterized ...

Purification of Ubiquitinated p53 Proteins from Mammalian Cells

Rensing av allestedsnærværende p53-proteiner fra pattedyrceller

Ubiquitination is a type of posttranslational modification that regulates not only the stability but also the localization and function of a substrate ...

Purifying a Fibrinolytic Enzyme from Sipunculus nudus via Affinity Chromatography

Affinity Purification of a Fibrinolytic Enzyme from Sipunculus nudus

Affinity Purification of a Fibrinolytic Enzyme from Sipunculus nudus (Video) | JoVE 

Affinitetsrensing av et fibrinolytisk enzym fra Sipunculus nudus

The fibrinolytic enzyme from Sipunculus nudus (sFE) is a novel fibrinolytic agent that can both activate plasminogen into plasmin and degrade fibrin ...