Name: translating ribosome affinity purification (trap) for rna isolation from endothelial cells in vivo
Uploaded: 2019-05-25T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Translating Ribosome Affinity Purification TRAP for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo at JoVE.com

Работа д-ра Рена поддерживается Американской ассоциацией сердца (13SDG148800019; BR), Фонд Надежды Анны (FP00011709; BR), Американское онкологическое общество (86-004-26; MCW онкологический центр в БР), и Национальный институт здравоохранения (HL136423; BR); Джордан Палмер поддерживается 2018 MCW CTSI 500 Звезды стажировки программы; . Моран поддерживается институциональным исследовательским грантом от NHLBI (5T35 HL072483-34).

Для экспериментов на животных, все методы, описанные здесь, были одобрены Институциональным Комитетом по уходу за животными и использованию Медицинского колледжа Висконсина.
1. Подготовка реагентов
<ol><li>Приготовьте буфер лизиса к концентрациям 10 мМ HEPES, pH 7.4, 150 mM KCl, 5 мМ MgC...

<ol>
	<li>Heiman, M., Kulicke, R., Fenster, R. J., Greengard, P., Heintz, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+type-specific+mRNA+purification+by+translating+ribosome+affinity+purification+(TRAP).">Cell type-specific mRNA purification by translating ribosome affinity purification (TRAP).</a> Nature Protocols. 9, 1282-1291 (2014).</li><li>Zhou, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interrogating+translational+efficiency+and+lineage-specific+transcriptomes+using+ribosome+affinity+purification.">Interrogating translational efficiency and lineage-specific transcriptomes using ribosome affinity purification.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110, 15395-15400 (2013).</li><li>Best, B., Moran, P., Ren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF/PKD-1+signaling+mediates+arteriogenic+gene+expression+and+angiogenic+responses+in+reversible+human+microvascular+endothelial+cells+with+extended+lifespan.">VEGF/PKD-1 signaling mediates arteriogenic gene expression and angiogenic responses in reversible human microvascular endothelial cells with extended lifespan.</a> Molecular and Cellular Biochemistry. 446, 199-207 (2018).</li><li>Ren, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LPA/PKD-1-FoxO1+Signaling+Axis+Mediates+Endothelial+Cell+CD36+Transcriptional+Repression+and+Proangiogenic+and+Proarteriogenic+Reprogramming.">LPA/PKD-1-FoxO1 Signaling Axis Mediates Endothelial Cell CD36 Transcriptional Repression and Proangiogenic and Proarteriogenic Reprogramming.</a> Arteriosclerosclerosis Thrombosis, Vascular Biology. 36, 1197-1208 (2016).</li><li>Ren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+Kinase+D1+Signaling+in+Angiogenic+Gene+Expression+and+VEGF-Mediated+Angiogenesis.">Protein Kinase D1 Signaling in Angiogenic Gene Expression and VEGF-Mediated Angiogenesis.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 4, 37 (2016).</li><li>Ren, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FoxO1+transcriptional+activities+in+VEGF+expression+and+beyond:+a+key+regulator+in+functional+angiogenesis?.">FoxO1 transcriptional activities in VEGF expression and beyond: a key regulator in functional angiogenesis?.</a> Journal of Pathology. 245, 255-257 (2018).</li><li>Hupe, M., Li, M. X., Gertow Gillner, K., Adams, R. H., Stenman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+TRAP-sequencing+technology+with+a+versatile+conditional+mouse+model.">Evaluation of TRAP-sequencing technology with a versatile conditional mouse model.</a> Nucleic Acids Research. 42, e14 (2014).</li><li>Dong, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diet-induced+obesity+links+to+ER+positive+breast+cancer+progression+via+LPA/PKD-1-CD36+signaling-mediated+microvascular+remodeling.">Diet-induced obesity links to ER positive breast cancer progression via LPA/PKD-1-CD36 signaling-mediated microvascular remodeling.</a> Oncotarget. 8, 22550-22562 (2017).</li><li>Ren, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ERK1/2-Akt1+crosstalk+regulates+arteriogenesis+in+mice+and+zebrafish.">ERK1/2-Akt1 crosstalk regulates arteriogenesis in mice and zebrafish.</a> Journal of Clinical Investigation. 120, 1217-1228 (2010).</li><li>Skuli, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+HIF-2alpha+regulates+murine+pathological+angiogenesis+and+revascularization+processes.">Endothelial HIF-2alpha regulates murine pathological angiogenesis and revascularization processes.</a> Journal of Clinical Investigation. 122, 1427-1443 (2012).</li></ol>

Ангиогенез представляет собой сложный многоступенчатый процесс, в котором EC-специфической ангиогенной транскрипции генов и экспрессии играют важную роль в дифференциации ЕС и ангиогенного перепрограммирования3,4. Чтобы преодолеть барьеры от клеточног...

В сложных тканях, таких как мозг млекопитающих, сердце и легкие, высокий уровень клеточной неоднородности усложняет анализ данных экспрессии генов, полученных из образцов целых тканей. Для наблюдения за профилями экспрессии генов в определенном типе клеток in vivo недавно была разработана новая методология, которая позволяет дополнить весь переведенный мРНК любого генетически определенного типа клеток. Эта методология известна как перевод рибосомы сродства очистки (TRAP) техника1,2. Это полезный инструмент для изучения эндотелиальной клеточной биологии и ангиогенеза в сочетании с генетически манипулирования другими ангиогенез-связанных генов у животных.
Мы показали, что ангиогенные PKD-1 сигнализации и транскрипции ангиогенного гена CD36 имеют решающее значение для эндотелиальной клеточной (EC) дифференциации и функционального ангиогенеза3,4,5,6. Для определения молекулярных механизмов ангиогенной и метаболической сигнализации в транскрипции генов и трансдифференцации ЕС мы создали генетически модифицированных тэктмы с специально удаленными ангиогенными генами на основе метода TRAP1 , 2. Кроме того, у наших животных TRAP, не только они имеют pkd-1 или cd36 дефицит генов в сосудистой эндактелии или глобального удаления гена CD36, но расширенный зеленый белок флуоресценции (EGFP) также генетически помечены на ЕК переводит рибосомы. TRAP позволяет очистки сродства рибосомы связаны мРНК непосредственно из сосудистой эндофелии целевых тканей, что позволяет анализ экспрессии генов и идентификации новых транскриптомов, которые связаны с дифференциацией ЕС и ангиогенез непосредственно под in vivo условиях. Мы успешно выделили рибосомную РНК из эндотелии у этих генетически модифицированных животных. Очищенная РНК может быть использована для дальнейшей характеристики ангиогенных или артериогенных генов в регуляции дифференциации и функций ЕС. Этот протокол представляет собой пошаговое руководство по внедрению подхода TRAP для изоляции мРНК в ECs непосредственно in vivo.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:591px;" width="589">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">2100 Electrophoresis Bioanalyzer with Nanochips and Picochips</td>
			<td style="width:73px;">Agilent</td>
			<td style="width:123px;">G2939AA, 5067-1511 &#38; 5067-1513</td>
			<td style="width:172px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Cell scrapers</td>
			<td style="width:73px;">Sarstedt</td>
			<td align="right" style="width:123px;">83.1832</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Homogenizers</td>
			<td style="width:73px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:123px;">K8855100020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Magnet (Dynamag-2)</td>
			<td style="width:73px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:123px;">123-21D</td>
			<td>Will depend on purification scale; samples in 1.5-mL tubes can be concentrated on a DynaMag-2</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Minicentrifuge</td>
			<td style="width:73px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:123px;">05-090-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">NanoDrop 2000C spectrophotometer</td>
			<td style="width:73px;">Thermo Scientific&#160;</td>
			<td style="width:123px;">ND-2000C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Refrigerated centrifuge</td>
			<td style="width:73px;">Eppendorf</td>
			<td style="width:123px;">5430R</td>
			<td>with rotor for 1.5-mL microcentrifuge tubes</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">RNase-free 1.5mL microcentrifuge tubes</td>
			<td style="width:73px;">Applied Biosystems&#160;</td>
			<td style="width:123px;">AM12450</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Rnase-free 50-mL conical tubes</td>
			<td style="width:73px;">Applied Biosystems&#160;</td>
			<td style="width:123px;">AM12501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">RNase-free 1000-&#956;l filter tips</td>
			<td style="width:73px;">Rainin</td>
			<td style="width:123px;">RT-1000F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">RNase-free 200-&#956;l filter tips</td>
			<td style="width:73px;">Rainin&#160;</td>
			<td style="width:123px;">RT-200F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">RNase-free 20-&#956;l filter tips</td>
			<td style="width:73px;">Rainin&#160;</td>
			<td style="width:123px;">RT-20F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Rotor for homogenizers</td>
			<td style="width:73px;">Yamato&#160;</td>
			<td style="width:123px;">LT-400D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Tube rotator, Labquake brand</td>
			<td style="width:73px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:123px;">13-687-12Q</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

translating ribosome affinity purification (trap) for rna isolation from endothelial cells in vivo

Многие исследования были ограничены использованием in vitro клеточных анализов и целых тканей или изоляции конкретных типов клеток от животных для анализа в пробирке транскриптома и экспрессии генов qPCR и секвенирования РНК. Всеобъемлющий анализ транскриптома и экспрессии генов конкретных типов клеток в сложных тканях и органах будет иметь решающее значение для понимания клеточных и молекулярных механизмов, с помощью которых регулируются гены, и их связь с гомеостазом тканей и органов Функции. В этой статье мы демонстрируем методологию изоляции рибосомной РНК непосредственно в виво в сосудистой эндофилии легких животных в качестве примера. Будут описаны конкретные материалы и процедуры для обработки тканей и очистки РНК, включая оценку качества и урожайности РНК, а также в режиме реального времени qPCR для атериогенных анализов генов. Этот подход, известный как перевод рибосомы сродства очистки (TRAP) техники, могут быть использованы для характеристики экспрессии генов и транскриптома анализа некоторых типов клеток непосредственно in vivo в любом конкретном типе в сложных тканях.

Наши предыдущиеисследования 4,7 предполагают, что CD36 может функционировать как переключатель для артериолярной дифференциации и капиллярной артериализации через LPA/PKD-1 сигнальный путь. Чтобы изучить, является ли LPA/PKD-1-CD36 сигнальной осью имеет важное зна?...

Watch this Scientific Journal Video about Translating Ribosome Affinity Purification TRAP for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo at JoVE.com

Translating Ribosome Affinity Purification TRAP for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Мы представляем подход к очищению рибосомы связанных мРНК от сосудистых эндотелиальных клеток (ECs) непосредственно в мозге мыши, легких и тканей сердца через EC-специфический генетический тег расширенного зеленого белка флуоресценции (EGFP) в рибосомы в сочетании с РНК очистки .

Перевод Рибосома Сроднистого Очищения (TRAP) для изоляции РНК от эндотелиальных клеток In vivo

Many studies have been limited to using in vitro cellular assays and whole tissues or isolating of specific cell types from animals for in vitro analysis ...

Привет, я бин Рен, я адъюнкт-профессор хирургии и биомедицинской инженерии в Университете Алабамы Бирмингемской школы медицины. Наша лаборатория заинтересована в эндотелиальной клеточной биологии функции ангиогенеза акуогенеза в контексте этих распространенных сердечно-сосудистых заболеваний и рака. Одно из наших исследований сосредоточено на эпигенетической и транскрипционные регуляции трансдифференцирования эндотелиальных клеток и ангиогенеза.Чтобы понять транскрипционные механизмы ангиогенеза, мы установили трансгенные инженерные линии мыши, в которых мы не только удалили специфические гены, связанные с ангиогенезом в эндотелиальных клетках, но и расширенный зонд GFP будет генетически помечен на рибосоме родных эндотелиальных клеток. Таким образом, мы можем изолировать и очистить петли связанных РНК-мессенджера от эндотелиальных клеток в различных органах тканей непосредственно у трансгенных животных. Затем мы можем использовать очищенную РНК посланника для анализа стенограмм и транскриптома ниже по течению.По РНК секвенирования и в режиме реального времени холод ПЦР. В этом видео, мои студенты Патрик Моран и Джордан Палмер и научно-исследовательских техников Николас Барнеков и Rong Yuan покажет вам подход генотипирования трансгенных мышей и аспирирующих посланник РНК непосредственно из эндотелиальных в трансгенных животных. Генотипирование является важным предварительным в этом протоколе, чтобы убедиться, что лед имеет тег GFP на рибосомы эндотелиальных клеток.Поскольку все этапы изоляции РНК вниз по течению зависят от наличия рибосом GFP с тегами, необходимо определить генотип до начала эксперимента. До начала изоляции РНК необходимо завершить несколько подготовительных шагов. К ним относятся буфер подготовки и связывания анти-GFP антитела к белку G дина бисера.Буферы могут длиться до одного месяца при четырех градусах по Цельсию, а шарики, связанные антителами, могут длиться до одной недели при четырех градусах Цельсия. Поэтому при планировании эксперимента учитывайте эти ограничения. Использование молярного гомогенизатора является отличным способом повышения урожайности РНК.Не забудьте использовать более низкие частоты и продолжительности для того, чтобы уменьшить деградацию РНК. Как упоминалось ранее, генотипирование является важным предварительным шагом в протоколе судебного разбирательства. Обеспечение того, чтобы мыши, чья РНК должна быть изолирована с помощью метода TRAP являются положительными для гена TRAP, по крайней мере heterozygotes, но в идеале однородным для гена TRAP является важным шагом, потому что обеспечение GFP тег на рибосоме имеет важное значение для того, чтобы съехать с помощью антигенной реакции антитела и анти-GFP бусы вы подготовили до начала эксперимента.Изолировать желаемые ткани от мыши и поместить его сразу в ледяной PBS со 100 микрограмм на миллилитр циклохексамид раствора. Это гарантирует, что перевод будет остановлен и что транскриптом будет точное изображение мыши до эвтаназии. Используйте двигательный гомогенизатор для гомогенизации ткани в клеточной подвеске.Идеальные настройки синхронизации и частоты должны быть определены отдельной лабораторией на основе конкретного моторного гомогенизатора, который вы будете использовать. Использование слишком высокой частоты может привести к деградации РНК и нарушить остальную часть протокола. Приостановить ячейку гранулы в буфере лиза вы должны были подготовить до начала эксперимента.Не забудьте гомогенизировать эту смесь дальше, с тем чтобы обеспечить адекватную гомогенизацию до начала с остальной частью протокола. Центрифуга гомогената в течение 10 минут при 2000 раз G в четыре градуса Цельсия центрифуги. Это будет гранулы ядер и крупных клеточных мусора, которые могут вмешиваться в реакцию иммунопреципиентации вниз по течению.Добавьте липиды DHPC и CA-630 к супернатанту с предыдущего шага центробежки. Эти липиды помогут отделить фазы белка от других внутриклеточных компонентов. Поместите подвеску на лед на пять минут и дайте ей посидеть.Центрифуга лисировать в течение 10 минут при 13000 раз G гранулировать любой растворимый материал. Держите 15% от четкой лисации для будущих шагов. Добавить анти-GFP антитела связаны бусы к клетке лизировать супернатант и инкубировать смесь при четырех градусах по Цельсию с конца над концом вращения в течение 30 минут.Это где анти-GFP антитела будут связывать GFP помечены рибосомы, что позволяет нам еще больше изолировать РНК от этих рибосом. Соберите бисер на магнитной стойке и мыть бисер пять раз с помощью высокой соли полисом мыть буфер, который вы подготовили до начала изоляции. Немедленно перейти к следующему шагу, в котором вы поместите бисер в буфер RLT.Центрифуга лизатить в течение трех минут на полной скорости и тщательно удалить супернатант и передать его в новую трубку микрофуга. Добавьте один том 70% этанола в очищенный лисат и немедленно перемешайте с помощью пипетки. Немедленно перейти к следующему шагу, в котором вы будете передавать до 700 микролитров образца, в том числе любой осадок, который, возможно, сформировались, в спин колонке помещены в две миллилитровые трубки сбора.Центрифуга лисировать в течение 15 секунд при более чем 8000 раз G для мытья мембраны спиновой колонки. Отбросьте поток и перейдите к следующему шагу. Добавьте 350 микролитров буфера RW1 в спиновую колонку.Центрифуга в течение 15 секунд при более чем 8000 раз G, чтобы вымыть мембрану спиновой колонки и отбросить поток до конца. Повторите этот шаг, используя еще 350 микролитров буфера RW1, прежде чем приступить к следующему шагу. Добавьте 500 микролитров буферного RPE в столбец спина.Центрифуга в течение 15 секунд при более чем 8000 раз G для мытья мембраны спиновой колонки. Отбросьте поток и повторите этот шаг, добавив еще 500 микролитров буфера RPE в спиновую колонку. На этот раз центрифуга в течение двух минут при более чем 8.000 раз G для мытья мембраны спиновой колонки.Отбросьте поток и поместите колонку спина в новую двухмилитровую трубку сбора и перейдите к центрифуге на полной скорости в течение одной минуты, чтобы удалить любой остаточный буфер, который может присутствовать на столбце спина. Отбросьте поток и поместите колонку спина в новую трубку сбора 1,5 миллилитров. Продолжить добавить от 30 до 50 микролитров RNase свободной воды непосредственно к мембране позвоночника.Центрифуга в течение одной минуты при более чем 8000 раз G, чтобы утехать РНК от мембраны спиновой колонки. На данный момент, ваша РНК растворяется в RNase свободной воды и может храниться при температуре минус 80 градусов по Цельсию на срок до одного года. Приступить к количественной оценке и проверить чистоту РНК вы изолировали с помощью спектрофотометра.Вы ищете пик на 260 нанометров, который является нуклеиновой кислоты, в том числе РНК, поглощается максимально. Количество изображено в нижней правой части изображения в нанограммах на микролитер. Качество может быть выведено по соотношению 260 230, которое отображается на один элемент выше количества в нижней правой части экрана.Наш подход показал низкую урожайность РНК, особенно когда мы очищали мРНК от тканей сердца или из ранее замороженных тканей. Таким образом, мы должны оптимизировать условия для увеличения урожайности. Тем не менее, мы наблюдали в ЕС конкретных CD-36 дефицитных мышей, уровень эфрина B2 и DLL4 были значительно увеличены в легких и сердца эндотелии, по сравнению с контролем.Эти результаты соответствовали нашим предыдущим исследованиям in vitro, что говорит о том, что качество РНК достаточно для анализа ниже по течению. Доходность была низкой из-за жестких условий в нашем рабочем пространстве. Чтобы преодолеть это ограничение, крайне важно создать свободную рабочую зону RNase и обеззараживать рабочие поверхности и оборудование, которые могут быть загрязнены RNase и часто менять перчатки, чтобы извлечь качественную РНК и повысить урожайность.Важно также найти подходящие концентрации антител GFP в матрице сродства и использовать соответствующие концентрации ингибитора RNase в буфере лиза ткани и использовать RNase бесплатную пластиковую посуду и реагенты для извлечения РНК из эндотелиальных рибосом целевых тканей.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Translating Ribosome Affinity Purification (TRAP) for RNA Isolation from Endothelial Cells In Vivo

Isolation of Cognate RNA-protein Complexes from Cells Using Oligonucleotide-directed Elution

Выделение родственным РНК-белковых комплексов из клеток с использованием направленного на олигонуклеотиды элюция

Ribonucleoprotein particles direct the biogenesis and post-transcriptional regulation of all mRNAs through distinct combinations of RNA binding proteins. ...

Protein Complex Affinity Capture from Cryomilled Mammalian Cells

Белковый комплекс Affinity Capture от Cryomilled клеток млекопитающих

Affinity capture is an effective technique for isolating endogenous protein complexes for further study. When used in conjunction with an antibody, this ...

An Efficient Method for the Isolation of Highly Purified RNA from Seeds for Use in Quantitative Transcriptome Analysis

Эффективный метод для выделения высокоочищенного РНК из семян для использования в количественном анализе Транскриптом

Plant seeds accumulate large amounts of storage reserves comprising biodegradable organic matter. Humans rely on seed storage reserves for food and as ...

Tandem Affinity Purification of Protein Complexes from Eukaryotic Cells

Тандем аффинной очистки белковых комплексов из эукариотические клетки

The purification of active protein-protein and protein-nucleic acid complexes is crucial for the characterization of enzymatic activities and de novo ...

A G-quadruplex DNA-affinity Approach for Purification of Enzymatically Active G4 Resolvase1

G-квадруплекс ДНК-сродства подход для очистки ферментативно активной G4 Resolvase1

Higher-order nucleic acid structures called G-quadruplexes (G4s, G4 structures) can form in guanine-rich regions of both DNA and RNA and are highly ...

Purification of Biotinylated Cell Surface Proteins from Rhipicephalus microplus Epithelial Gut Cells

Purification of Biotinylated Cell Surface Proteins from Rhipicephalus microplus Epithelial Gut Cells

Очистка биотинилированных клеточных поверхностных белков от<em&gt; Ripicephalus microplus</em&gt; Эпителиальные кишечные клетки

Rhipicephalus microplus &#8211; the cattle tick &#8211; is the most significant ectoparasite in terms of economic impact on livestock as a vector of ...

Purification of Hepatocytes and Sinusoidal Endothelial Cells from Mouse Liver Perfusion

Очистка гепатоцитов и синусоидальных эндотелиальных клеток от мыши печени перфузии

This protocol demonstrates a method for obtaining high yield and viability for mouse hepatocytes and sinusoidal endothelial cells (SECs) suitable for ...

MS2-Affinity Purification Coupled with RNA Sequencing in Gram-Positive Bacteria

MS2-аффинная очистка в сочетании с секвенированием РНК у грамположительных бактерий

Although small regulatory RNAs (sRNAs) are widespread among the bacterial domain of life, the functions of many of them remain poorly characterized ...

Purification of Ubiquitinated p53 Proteins from Mammalian Cells

Очистка убиквитинированных белков p53 из клеток млекопитающих

Ubiquitination is a type of posttranslational modification that regulates not only the stability but also the localization and function of a substrate ...

Purifying a Fibrinolytic Enzyme from Sipunculus nudus via Affinity Chromatography

Affinity Purification of a Fibrinolytic Enzyme from Sipunculus nudus

Affinity Purification of a Fibrinolytic Enzyme from Sipunculus nudus (Video) | JoVE 

Аффинная очистка фибринолитического фермента из Sipunculus nudus

The fibrinolytic enzyme from Sipunculus nudus (sFE) is a novel fibrinolytic agent that can both activate plasminogen into plasmin and degrade fibrin ...