Name: human blastocyst biopsy and vitrification
Uploaded: 2019-07-26T12:30:00
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AG와 RM은 데이터를 수집하고 원고를 작성했습니다. DC는 데이터를 분석하고, 대표 결과를 작성하고, 통계를 수행하고, 원고를 수정했습니다. FMU와 LR은 결과와 전체 원고에 대한 비판적 인 토론을 제공했습니다.

인간 배반세포 생검을 위한 프로토콜은, 여기에서 기술한, G.EN.E.R.A. 인간 연구 윤리 위원회의 지침을 따릅니다.
참고: 필요한 재료는 재료 표를 참조하십시오. 추가 필요한 재료는 실험실 신발과 의상, 수술 안면 마스크, 헤어 커버, 수술 장갑, 영구 무독성 마커, 집게 및 소독제를 수반한다. 외과 용 가운, 일회용 수술 장갑, 안면 마스크, 헤어 커버의 ?...

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	<li>Glujovsky, D., Farquhar, C., Quinteiro Retamar, A. M., Alvarez Sedo, C. R., Blake, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cleavage+stage+versus+blastocyst+stage+embryo+transfer+in+assisted+reproductive+technology.">Cleavage stage versus blastocyst stage embryo transfer in assisted reproductive technology.</a> Cochrane Database of Systematic Reviews. (6), CD002118 (2016).</li><li>Dahdouh, E. M., Balayla, J., Garcia-Velasco, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+chromosome+screening+improves+embryo+selection:+a+meta-analysis.">Comprehensive chromosome screening improves embryo selection: a meta-analysis.</a> Fertility and Sterility. 104 (6), 1503-1512 (2015).</li><li>Cimadomo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Impact+of+Biopsy+on+Human+Embryo+Developmental+Potential+during+Preimplantation+Genetic+Diagnosis.">The Impact of Biopsy on Human Embryo Developmental Potential during Preimplantation Genetic Diagnosis.</a> Biomedical Research International. 2016, 7193075 (2016).</li><li>Capalbo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+between+standard+blastocyst+morphology,+euploidy+and+implantation:+an+observational+study+in+two+centers+involving+956+screened+blastocysts.">Correlation between standard blastocyst morphology, euploidy and implantation: an observational study in two centers involving 956 screened blastocysts.</a> Human Reproduction. 29 (6), 1173-1181 (2014).</li><li>Capalbo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implementing+PGD/PGD-A+in+IVF+clinics:+considerations+for+the+best+laboratory+approach+and+management.">Implementing PGD/PGD-A in IVF clinics: considerations for the best laboratory approach and management.</a> Journal of Assisted Reproduction and Genetics. , (2016).</li><li>McArthur, S. J., Leigh, D., Marshall, J. T., de Boer, K. A., Jansen, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pregnancies+and+live+births+after+trophectoderm+biopsy+and+preimplantation+genetic+testing+of+human+blastocysts.">Pregnancies and live births after trophectoderm biopsy and preimplantation genetic testing of human blastocysts.</a> Fertility and Sterility. 84 (6), 1628-1636 (2005).</li><li>Kokkali, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Birth+of+a+healthy+infant+following+trophectoderm+biopsy+from+blastocysts+for+PGD+of+beta-thalassaemia+major.">Birth of a healthy infant following trophectoderm biopsy from blastocysts for PGD of beta-thalassaemia major.</a> Human Reproduction. 20 (7), 1855-1859 (2005).</li><li>Rienzi, L., Ubaldi, F., Anniballo, R., Cerulo, G., Greco, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preincubation+of+human+oocytes+may+improve+fertilization+and+embryo+quality+after+intracytoplasmic+sperm+injection.">Preincubation of human oocytes may improve fertilization and embryo quality after intracytoplasmic sperm injection.</a> Human Reproduction. 13 (4), 1014-1019 (1998).</li><li>Wale, P. L., Gardner, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+chemical+and+physical+factors+on+mammalian+embryo+culture+and+their+importance+for+the+practice+of+assisted+human+reproduction.">The effects of chemical and physical factors on mammalian embryo culture and their importance for the practice of assisted human reproduction.</a> Human Reproduction Update. 22 (1), 2-22 (2016).</li><li>Rienzi, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oocyte,+embryo+and+blastocyst+cryopreservation+in+ART:+systematic+review+and+meta-analysis+comparing+slow-freezing+versus+vitrification+to+produce+evidence+for+the+development+of+global+guidance.">Oocyte, embryo and blastocyst cryopreservation in ART: systematic review and meta-analysis comparing slow-freezing versus vitrification to produce evidence for the development of global guidance.</a> Human Reproduction Update. 23 (2), 139-155 (2017).</li><li>Cimadomo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Associations+of+blastocyst+features,+trophectoderm+biopsy+and+other+laboratory+practice+with+post-warming+behavior+and+implantation.">Associations of blastocyst features, trophectoderm biopsy and other laboratory practice with post-warming behavior and implantation.</a> Human Reproduction. , (2018).</li><li>Evans, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fresh+versus+frozen+embryo+transfer:+backing+clinical+decisions+with+scientific+and+clinical+evidence.">Fresh versus frozen embryo transfer: backing clinical decisions with scientific and clinical evidence.</a> Human Reproduction Update. 20 (6), 808-821 (2014).</li><li>Capalbo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consistent+and+reproducible+outcomes+of+blastocyst+biopsy+and+aneuploidy+screening+across+different+biopsy+practitioners:+a+multicentre+study+involving+2586+embryo+biopsies.">Consistent and reproducible outcomes of blastocyst biopsy and aneuploidy screening across different biopsy practitioners: a multicentre study involving 2586 embryo biopsies.</a> Human Reproduction. 31 (1), 199-208 (2016).</li><li>Cimadomo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Failure+mode+and+effects+analysis+of+witnessing+protocols+for+ensuring+traceability+during+PGD/PGS+cycles.">Failure mode and effects analysis of witnessing protocols for ensuring traceability during PGD/PGS cycles.</a> Reproductive Biomedicine Online. 33 (3), 360-369 (2016).</li><li>Gardner, D. K., Schoolcraft, B., Jansen, R., Mortimer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Towards Reproductive Certainty: Infertility and Genetics Beyond 1999. , 377-388 (1999).</li><li>Cimadomo, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inconclusive+chromosomal+assessment+after+blastocyst+biopsy:+prevalence,+causative+factors+and+outcomes+after+re-biopsy+and+re-vitrification.+A+multicenter+experience.">Inconclusive chromosomal assessment after blastocyst biopsy: prevalence, causative factors and outcomes after re-biopsy and re-vitrification. A multicenter experience.</a> Human Reproduction. , (2018).</li><li>de Boer, K. A., Catt, J. W., Jansen, R. P., Leigh, D., McArthur, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moving+to+blastocyst+biopsy+for+preimplantation+genetic+diagnosis+and+single+embryo+transfer+at+Sydney+IVF.">Moving to blastocyst biopsy for preimplantation genetic diagnosis and single embryo transfer at Sydney IVF.</a> Fertility and Sterility. 82 (2), 295-298 (2004).</li><li>Capalbo, A., Rienzi, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosaicism+between+trophectoderm+and+inner+cell+mass.">Mosaicism between trophectoderm and inner cell mass.</a> Fertility and Sterility. 107 (5), 1098-1106 (2017).</li><li>McCoy, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+of+Selection+against+Complex+Mitotic-Origin+Aneuploidy+during+Preimplantation+Development.">Evidence of Selection against Complex Mitotic-Origin Aneuploidy during Preimplantation Development.</a> PLoS Genetics. 11 (10), e1005601 (2015).</li><li>Scott, R. T., Upham, K. M., Forman, E. J., Zhao, T., Treff, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cleavage-stage+biopsy+significantly+impairs+human+embryonic+implantation+potential+while+blastocyst+biopsy+does+not:+a+randomized+and+paired+clinical+trial.">Cleavage-stage biopsy significantly impairs human embryonic implantation potential while blastocyst biopsy does not: a randomized and paired clinical trial.</a> Fertility and Sterility. 100 (3), 624-630 (2013).</li><li>Lee, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+births+after+transfer+of+rebiopsy+and+revitrification+of+blastocyst+that+had+&#8220;no+diagnosis&#8221;+following+trophectoderm+biopsy.">Live births after transfer of rebiopsy and revitrification of blastocyst that had &#8220;no diagnosis&#8221; following trophectoderm biopsy.</a> Fertility and Sterility. 106 (3), e164 (2016).</li><li>Capalbo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+efficacy+of+blastocoel+fluid+and+spent+media+as+sources+of+DNA+for+preimplantation+genetic+testing+in+standard+clinical+conditions.">Diagnostic efficacy of blastocoel fluid and spent media as sources of DNA for preimplantation genetic testing in standard clinical conditions.</a> Fertility and Sterility. 110 (5), 870-879 (2018).</li><li>Hammond, E. R., Shelling, A. N., Cree, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+and+mitochondrial+DNA+in+blastocoele+fluid+and+embryo+culture+medium:+evidence+and+potential+clinical+use.">Nuclear and mitochondrial DNA in blastocoele fluid and embryo culture medium: evidence and potential clinical use.</a> Human Reproduction. 31 (8), 1653-1661 (2016).</li><li>Vera-Rodriguez, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+and+composition+of+cell-free+DNA+in+spent+medium+from+human+embryo+culture+during+preimplantation+development.">Origin and composition of cell-free DNA in spent medium from human embryo culture during preimplantation development.</a> Human Reproduction. 33 (4), 745-756 (2018).</li></ol>

훈련 기간을 마친 숙련된 숙련된 배아학자만이 TE 생검과 배반포 유리화를 모두 수행해야 합니다. 또한, 생검 접시에서 생검 된 배반포의 움직임을 시술 을 모니터링하고 효율적인 추적성을 보장하기 위해 증인이 필요합니다 (보충그림1) 생검 후 접시에 (보충그림 1) ), 다음 유리화 판(보충 도1) 및 마지막으로 유리화 지지체 (보조도1); ii) 생검접시...

현대 인간 발생학의 주요 목표는 자극된 주기 당 출생 수를 최대화하고 임신을 달성하기 위하여 비용, 시간 및 노력을 감소시키는 것입니다. 이 목표를 달성하기 위하여는, 태아 선택을 위한 검증된 접근은 IVF 주기 도중 장악된 코호트 내의 생식 유능한 태아를 확인하기 위하여 이용되어야 합니다. 최신 증거에 따르면, blastocyst 배양 1은 포괄적인 염색체 검사 및 유리화 온난화 된 유엽태아 전달 (ET)과 결합되어 IVF 효율을 높이는 가장 효율적인 프레임 워크2이다. 분명히, 이수성 검사는 현재 주로 trophectoderm (TE)에서 검색 된 몇 가지 세포에서 표현되는 배아 표본을 필요로, 즉, 임신 중 배아 부속서 (예를 들어, 태반)에 기원을 제공하는 배반포의 섹션 . karyotype 분석을 넘어, 또한 단 하나 유전자 돌연변이는 착상 전 유전 시험으로 알려져 있는 임상 전략의 한 부분으로 TE 생검에서 평가될 수 있습니다 (PGT; -A 는 이수화에 대한, 구조 염색체 재배열을 위한 -SR, 단조로운 질병을 위한 -M). 그밖 난모세포/배아 생검 방법은 지난 십년간, 즉 극성 바디 생검 및 blastomere 생검을 통해 임상으로 이론화되고 채택되었습니다. 그러나, 그들의 사용은 그들의 절차적 단점 (예를 들어, 더 높은 워크로드 및 생식 영향에 대한 위험) 및 진단 한계 (예를 들어, 단일 세포 분석 문제)가 암시적으로 비용, 위험 및 및 사이의 충분한 균형을 방해하기 때문에 요즘 감소됩니다. (리뷰는3참조).
이 백서에서 TE 생검을 위한 주요 프로토콜 중 하나는 필요한 후속 유리화, 온난화 및 전달 절차와 함께 철저히 설명됩니다. 여기에 설명된 워크플로는 바쁜 PGT 장치에 이상적입니다.
이미 우리 그룹4,5에의해 이전에 설명한 바와 같이, 절차는 완전히 확장 된 배반포의 조나 펠루시다의 순차적 개방과 몇 가지 TE 세포의 제거를 포함한다 (평균 7-8). 3 일 레이저 보조 부화 기반 배반 포동 생검 방법6에비해,이 절차는 배반 세포 생검 및 유리화와 같은 섬세한 절차가 적시에 수행되어야하는 IVF 장치의 일일 일정을 완화 할 수 있습니다. 배반포가 완전한 확장에 도달하자마자, 생검은 제거하는 TE 세포를 선택하여 수행될 수 있고, 따라서 그렇지 않으면 절차를 도전하게 하는 내부 세포 질량 (ICM)의 탈장의 리스크를 방지합니다. 문헌에서, 배반포 생검의 제 3 프로토콜은 또한 설명되었습니다, 이는 배아가 이미 배반포 단계에 도달하면 수행되는 레이저보조 부화포함, 절차 5,7전에 몇 시간. 그러나, 이 접근법은 시간이 더 많이 소요되며 주로 제한된 숙련된 운영자의 손에 TE 생검을 구현하는 IVF 단위에 적합하며, 이는 보통 낮음의 일일 워크로드를 고려할 때 입니다.
Intracytoplasmatic 정액 주입 (ICSI)8 는 IVF에 있는 유전 분석을 실행하기 위하여 겨냥하는 경우에 통합한 기술이어야 합니다. 유사하게, 배아를 배반포 단계로 안전하게 수확하는 적절한 배양 시스템은 TE 생검 전략의 구현에 매우 중요하다. 적절한 수의 인큐베이터뿐만 아니라 낮은 산소 장력의 사용은 배반포 속도 9를 손상시키지 않는이 단원의 주요 전제 조건입니다. 동시에 PGT 주기를 안전하게 관리하기 위해서는 효율적인 냉동 보존 프로그램이 필요합니다. 지난 10 년간, 유리화의 구현은 배아 극저온 생존율을 >99%10,11까지증폭시켰습니다. 이것은 유전자 검사를 수행하고 다음 생리주기로 배아 전달을 연기하기에 충분한 시간을 제공, 비 자극 아마 더 수용 자궁 내막에12.
TE 생검과 유리화 는 엄격한 기술을 요구하는 작업을 요구하고 있으며 그 효과는 경험이없는 운영자에 따라 다를 수 있습니다. 따라서 각 작업자가 이러한 절차를 임상적으로 수행할 수 있도록 하기 전에 특정 교육 기간이 주어지며, 또한, 냉동 보존 및 생검 절차에 대한 핵심 성과 지표(KPI)를 모니터링하여 운영자의 기술 유지를 주기적으로 평가해야 합니다. 각 IVF 클리닉은 내부 KPI를 이를 위해 설정해야 하며, 이는 국제 컨소시엄이 발표한 KPI 및/또는 참조 실험실에서 발표한 결과를 근사화해야 합니다.
TE 생검, 유리화 온난화 및 목격 절차는 3개의 이전 간행물11,13,14에 보고된 대로 관련된 모든 사업자에 걸쳐 표준화된 우리의 단위에 있는 기술을 검증됩니다 .

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cold tube rack</td>
			<td>Biocision</td>
			<td>XTPCR96</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic pipette controller</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>710931</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>66003</td>
			<td>p20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF Electronic Witness System</td>
			<td>CooperSurgical Fertility &#38; Genomic Solutions</td>
			<td></td>
			<td>RI Witness ART Management System</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inverted microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Eclipse TE2000-U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser objective</td>
			<td>RI</td>
			<td>Saturn 5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microinjectors</td>
			<td>Nikon Narishige</td>
			<td>NT-88-V3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini centrifuge for PCR tubes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>CSLQSPIN</td>
			<td>for 0.2ml PCR tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermostat</td>
			<td>Panasonic</td>
			<td>MCO-5AC-PE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tri-gas incubator</td>
			<td>Panasonic</td>
			<td>MCO-5M-PE</td>
			<td>02/CO2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopsy pipette</td>
			<td>RI</td>
			<td>7-71-30FB35720</td>
			<td>30&#181;m ID, flat 35&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryolock</td>
			<td>Cryolock</td>
			<td>CL-R-CT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSCM complete</td>
			<td>Irvine Scientific</td>
			<td>90165</td>
			<td>IVF culture medium supplemented with HSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embryo Transfer Catheter</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G17934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet pipette</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G26712</td>
			<td>140&#181;m stripping pipette tip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet pipette</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G46020</td>
			<td>300&#181;m stripping pipette tips</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Holding pipette</td>
			<td>RI</td>
			<td>7-71-IH35/20</td>
			<td>30&#181;m ID, flat 35&#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin</td>
			<td>Irvine Scientific</td>
			<td>9988</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF One well dish</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified HTF Medium</td>
			<td>Irvine Scientific</td>
			<td>90126</td>
			<td>Hepes-Buffered medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuclon Delta Surface</td>
			<td>Thermofisher scientific</td>
			<td>176740</td>
			<td>IVF dish 4-well plate with sliding lid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primaria Cell culture dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>60x15mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reproplate</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td>83016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Serological pipette</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>357551</td>
			<td>10ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile disposable Gilson tips</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>0030 075.021</td>
			<td>200&#181;l</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing Kit</td>
			<td>Provided by the genetic lab</td>
			<td></td>
			<td>PCR tubes (0.2mL), loading solution, biopsy washing solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification media</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td>VT801</td>
			<td>Equilibration and vitrification solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warming media</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td>VT802</td>
			<td>Thawing and dilution solutions</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

human blastocyst biopsy and vitrification

Blastocyst 생검은 착상 전 유전 시험을 가진 IVF 주기 도중 믿을 수 있는 유전 진단을 얻기 위하여 실행됩니다. 그런 다음, 이상적인 워크플로우에는 진단 기술의 처리 시간으로 인해 안전하고 효율적인 유리화 프로토콜이 수반되고, 선택된 배아를 다음과 같은 자연 주기에서 생리적 자궁 내막상으로 이송한다. 조나 펠루시다의 순차적 개방과 5-10 개의 영양 토내 세포 (이상적으로 7-8)의 검색을 포괄하는 생검 접근법은 필요한 조작 횟수와 배아의 노출을 최적 환경 조건에 모두 제한합니다. 적절한 훈련 후, 이 기술은 생검의 타이밍 (~8 분, 접시 당 생검에 대한 배아의 수에 따라 3-22 분 범위), 최종 진단을 얻은 (~ 97.5 %)에 걸쳐 다른 운영자에 걸쳐 재현 가능했다 그리고 생생한 출산율은 유혈모세포 전이(>40%)입니다. 생검, 유리화 및 온난화 후 생존율은 99.8%로 높았다. 온난화에서 1.5 h에서 재 팽창 속도 는 97%로 높았다, 주로 생검과 유리화 사이의 타이밍에 의존 (이상적으로 ≤30 분), 배반 세포 형태학적 품질과 생검의 날. 일반적으로 붕괴 된 배반포를 vitrify하는 것이 좋습니다. 따라서, 비 PGT 주기에서, 레이저 지원 인공 수축 은 동결 보존 전에 배아 붕괴를 유도하기 위해 수행 될 수있다. 가장 유망한 미래 관점은 배아 DNA의 가증한 근원으로서 배반포 배양 후 IVF 배양 배지의 비침습적 분석이다. 그러나 이 잠재적아방가르드는 아직 조사 중이며 신뢰할 수 있는 프로토콜을 정의하고 검증해야 합니다.

도 6은 프로토콜을 표준화하고 각 작업자의 성능을 모니터링하기 위해 채택될 수 있는 생검 절차의 모든 결과의 체계를 나타낸다. 주요 절차 결과는 생검 / 생검을 완료하는 타이밍입니다; 주요 기술적 인 결과는 결정적 이거나 결정적인 진단을 초래할 수있는 유전자 검사 후 생성 된 플롯의 품질이며, 후자는 진단되지 않은 배반포의 재생검을 필요?...

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Human Blastocyst Biopsy and Vitrification

배반포 생검 및 유리화는 착상 전 유전자 검사를 효율적으로 수행하기 위해 필요합니다. 조나 펠루시다의 순차적 개방및 5-7일째에 7-8개의 트로페토더세포를 회수하는 접근법은 필요한 조작 횟수와 배아의 노출을 최적 이하의 환경 조건으로 제한한다.

인간 배반포 생검 및 유리화

Blastocyst biopsy is performed to obtain a reliable genetic diagnosis during IVF cycles with preimplantation genetic testing. Then, the ideal workflow ...

배아세포 생검과 병신은 IVF의 혁명이었으며, 체외 수정은 전 세계의 배아학자들이 태아에 대한 최소한의 위험으로 인간 배아에 대한 사전 이식 유전자 검사를 수행할 수 있게 해 주었으며, 이는 전 세계의 배아학자들이 태아에 대한 최소한의 위험으로 인간 배아에 대한 사전 이식 유전자 검사를 수행할 수 있게 해주였습니다. 트로페토더럼 생검은 완전히 자란 배아에서 약 7개의 세포를 회수할 수 있게 하여 강력한 다운스트림 유전 분석을 가능하게 합니다. 또한, 이 접근 방식에 대한 영향은 현재까지 표시되지 않았습니다.이 워크플로우의 임상 효율성을 통해 단조로운 상태와 발동구 내 의 염색체 이상이 발생할 위험이 증가한 모든 환자가 이식 전 유전자 검사의 혜택을 누릴 수 있습니다. 배아 선택의 현재 전략을 개선하기위한 여지가 여전히있다. 예를 들면, miRNomic 및 proteomic 프로파일링은 단 하나 trophectoderm 생검에 전 이식 유전자 시험을 보완하기 위하여 흥미로운 선택권을 나타냅니다.경험이 없는 운영자는 종종 조나 펠루치다를 열고 관통하는 데 어려움을 겪습니다. 그것은 단지 초점의 문제입니다. 배반체, 레이저 목표 및 파이펫은 동일한 초점 평면에 있어야합니다.생검 접시를 환자의 세부 사항으로 표시한 후, 영구, 무독성 마커로, 배아와 사이클 ID를 가진 HEPES 완충 배지의 각 10 마이크로리터 드롭을 배아 및 사이클 ID로 번호.300 마이크로미터 스트리핑 파이펫을 사용하여, 생검 접시의 첫 번째 드롭으로 실행 가능하고 완전히 확장된 blastocyst를 생검 접시의 첫 번째 드롭으로 옮기고, 제2의 배설물을 제거하기 전에 배수를 제거하는 데 사용할 수 있다. 반전 된 현미경 아래에 접시를 놓고 생검 접시의 세 번째 방울에서 배지로 생검 파이펫을 프라임합니다. 배율의 20배 하에서, 7시에 내세포 질량의 명확한 시야를 얻고, 지주 파이펫상 배아를 고정시키기 위해 배반제를 지향한다.피펫과 배반구가 모두 같은 초점 평면에 있도록 조나 펠루치다에 초점을 맞춥니다. 레이저 목표로 전환하고, 내부 세포 질량의 반대쪽에 조나 펠루시다에 레이저 포인터를 배치합니다. 조나 펠루치다를 2~3개의 레이저 펄스로 드릴링하고, 조나 펠루시다에 대한 생검 파이펫을 부드럽게 눌러 내부 표면에서 트로페토데름 세포를 분리하는 위반을 통해 배지를 날려버릴 수 있도록 합니다.트로페토더름이 분리되면 구멍을 통해 들어가 7-8개의 트로페토데름 세포를 부드러운 흡입으로 생검 파이펫으로 흡인시합니다. 적당한 흡입기를 적용하여 표적 세포를 스트레칭하는 동안 생검 파이펫을 뒤로 이동하고 레이저를 흡인 세포의 가장 얇은 부분을 향해 지시합니다. 태아의 몸에서 표적 세포를 분리하기 위하여 세포 사이 접합에 2 5 개의 레이저 펄스를 발사합니다.트로페토더럼 파편이 배반세포에서 분리되었을 때, 파편이 생검 파이펫으로 다시 빨려 들어가는 것을 방지하기 위해 발아세포에서 멀리 떨어진 동일한 생검 드롭으로 조각을 방출하십시오. 포스팅 파이펫에서 배반구를 풀어주면 즉시 두 파이펫을 올려 조각이 파이펫에 달라붙지 않도록 합니다. 그런 다음 품질 관리 목적으로 생검 조각을 이미지화하십시오.모든 배반체가 방금 입증된 대로 생검을 생검할 때 생검 접시를 라미나르 흐름 후드로 옮기고 생검 후 문화 요리를 부부 ID로 표시하고 배아및 주기 ID로 각 방울을 표시합니다. 증인이있는 경우 깨끗한 IVF 배지에서 배반구를 헹구고 배반구를 생검 후 접시에 해당하는 드롭으로 옮습니다. 그런 다음 생검 후 접시를 섭씨 37도, 이산화탄소 6%, 산소 인큐베이터 5%에 놓습니다.상온에서 증인이 있고 라미나르 유동 후드 내부에 는 PCR 튜브에 영구적이고 독성이 없는 마커로 라벨을 붙입니다. 생검 배아 아이디와 함께 60 x 15mm 튜브 배양 접시의 뚜껑을 라벨, 접시에 생검 세척 용액의 두 방울을 추가합니다. 스테레오 현미경 아래 튜브 접시의 두 번째 드롭에서 생검 세척 솔루션으로 140 마이크로 미터 스트리핑 파이펫을 프라임 트로페토데름 조각을 시각화합니다.트류페토데름 조각에 일부 생검 세척 용액을 부드럽게 방출하고 조각을 스트리핑 파이펫에 적재합니다. 생검 세척 용액의 두 번째 방울로 조각을 이동하고 조심스럽게 조직을 2 ~ 3 번 헹. 트로페토데름 조각을 로딩 용액으로 적절하게 표지된 PCR 튜브의 바닥으로 옮기고, 스트리핑 파이펫 끝으로 튜브의 벽을 만지지 않도록 주의하십시오.모든 조각이 튜브에 추가되면, 조각을 퇴적시키기 위해 몇 초 동안 작은 원심분리기에서 모든 튜브를 회전시. 그런 다음 시험을 위해 참조 유전 실험실로 배송 될 때까지 샘플을 영하 20도에서 저장합니다. 트로페토더럼 생검의 30 분 이내에, 환자의 세부 사항과 유리화되어야 하는 배반신낭의 아이디와 함께 유리화 판을 라벨.특수 한 온도 방지 냉동 라벨을 사용 하 여, 유리화 는 환자의 이름과 성, 커플 ID, 그것에 로드 될 태아의 ID, 그리고 절차의 날짜와 함께 지원 레이블. 실온에서, 각 blastocyst에 대한 평형 솔루션300 마이크로리터를 분배하고, 증인이 있을 때, 300 마이크로미터 스트리핑 파이펫을 사용하여 발아구를 한 부피액으로 이동시합니다. 13~15분 동안 포스팅제를 평형 용액에 둡니다.볼륨의 초기 축소 후, 점진적 재확장이 관찰될 것입니다. 평형의 끝에서, 진동 판의 두 번째 우물에 300 마이크로 리터의 유리화 용액을 추가하고 1 분 동안 유리화 용액에 완전히 다시 확장 된 blastocyst를 전송합니다. 인큐베이션의 끝에서, 포다이스트를 헹구어 평형 용액을 희석시키고, 증인이 있는 경우, 발아제를 유리화 지지에 적재한다.바이트로피케이션 의 과잉을 제거합니다. 미묘한 용액 필름은 배반물을 둘러싸고 있어야합니다. 유리화 지지체를 액체 질소로 급락시키고, 시편에 가까운 기포 형성위험을 줄이기 위해 지지체를 적극적으로 이동한다.그런 다음 유리화 지지체가 여전히 액체 질소에 잠긴 상태에서 보호 캡을 지지에 놓습니다. 1의, 544 trophectoderm 생검 절차는 이 대표적인 2 년 기간 동안, 1 에서 4 개의 blastocysts 사이 절차 당 3 에서 22 분 사이 생검했다. 이 플롯에서, 연구 삼보격을 따라 각 연산자의 생검의 평균 타이밍이 8.24 분의 평균 전체 값으로 표시됩니다.결정적 진단의 원인이 단편의 치수 및/또는 품질, 튜브, 또는 유전 실험실에서 샘플의 처리에 있는 몇몇 문제점에 부과되는지 평가하기 위하여 품질 관리를 위한 각 생검 단편의 심상을 취득하는 것이 도움이 됩니다. 이 연구에서는, 572 유스포이드 블라토사이클리스트는 유청증의 진단 후 배아 이식을 받기 위해 따뜻해졌다. 모든 배반구는 30분 이내에 진동했으며, 배반구의 2.4%는 31분에서 90분 사이로 다시 확장되지 않고 4.9%는 재동에서 90분을 넘어 다시 확장되지 않았습니다.특히 품질이 좋지 않거나 7일째에 생검과 병용성 사이의 타이밍이 온난화 후 재확장을 달성하는 데 매우 중요한 것으로 보입니다. 트로페토데름 세포와 발사 사이의 접합부를 노출할 때 조나 펠루치다를 열기 전에 초점을 맞추고, 또한 발아세포재확장을 방지하여 진동하기 전에 주의를 기울인다. 두 개의 다른 배반성 생검 접근이 존재, 모두 조나 펠루치다 개방을 수반하고 트로페토데름 세포의 자발적인 아치를 기다리고.이러한 접근 방식은 더 쉽지만 더 많은 조작이 필요하며 시간이 많이 걸립니다. 이 워크플로우의 효능은 배아 전이 전에 이식할 가능성이 가장 높은 배반구를 선택하기 위해 IVF에서 분자 기술의 구현을 가능하게 합니다. 배아에 독성이 있을 수 있는 장치나 용액을 사용하지 말고 DNA가 없는 물질을 사용하여 DNA 오염을 방지하십시오.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Isolation and Quantitative Immunocytochemical Characterization of Primary Myogenic Cells and Fibroblasts from Human Skeletal Muscle

인간의 골격근에서 기본 근육 조직 세포와 섬유 아 세포의 분리 및 정량 면역 세포 화학 특성

The repair and regeneration of skeletal muscle requires the action of satellite cells, which are the resident muscle stem cells. These can be isolated ...

연구

발생학

Three-dimensional Quantification of Dendritic Spines from Pyramidal Neurons Derived from Human Induced Pluripotent Stem Cells

인간 유도 만능 줄기 세포에서 파생 된 피라미드 뉴런에서 돌기 쪽의 3 차원 정량화

Dendritic spines are small protrusions that correspond to the post-synaptic compartments of excitatory synapses in the central nervous system. They are ...

Culturing Human Pluripotent and Neural Stem Cells in an Enclosed Cell Culture System for Basic and Preclinical Research

기본 및 전임상 연구 밀폐 세포 배양 시스템에서 인간 다 능성 및 신경 줄기 세포를 배양

This paper describes how to use a custom manufactured, commercially available enclosed cell culture system for basic and preclinical research. Biosafety ...

Modified MicroSecure Vitrification: A Safe, Simple and Highly Effective Cryopreservation Procedure for Human Blastocysts

수정 MicroSecure의 유리화 : 인간 배반포를위한 안전 간단하고 매우 효과적인 냉동 보존 절차

Clinical embryo vitrification evolved with the development of unique vitrification devices in the 21st century and with the misconception that ultra-rapid ...

Cell Aggregation Assays to Evaluate the Binding of the Drosophila Notch with Trans-Ligands and its Inhibition by Cis-Ligands

Cell Aggregation Assays to Evaluate the Binding of the Drosophila Notch with Trans-Ligands and its Inhibition by Cis-Ligands

트랜스와 초파리 노치의 바인딩을 평가를 집계 분석 셀-Ligands 및 Cis에 의해 그것의 억제-Ligands

Notch signaling is an evolutionarily conserved cell-cell communication system used broadly in animal development and adult maintenance. Interaction of the ...

Minimally Invasive Embryo Transfer and Embryo Vitrification at the Optimal Embryo Stage in Rabbit Model

토끼 모형에 있는 최적 배아 단계에서 최소 침 습 배아 이식 및 배아 확산

Assisted reproductive techniques (ARTs), such as in vitro embryo culture or embryo cryopreservation, affect natural development patterns with perinatal ...

Isolation, Culture, Characterization, and Differentiation of Human Muscle Progenitor Cells from the Skeletal Muscle Biopsy Procedure

골격 근 생검 절차에서 인간 근육 선조 세포의 격리, 배양, 특성화 및 분화

The use of primary human tissue and cells is ideal for the investigation of biological and physiological processes such as the skeletal muscle ...

Determining Bile Duct Density in the Mouse Liver

마우스 간에서 담관 밀도 결정

Mouse is broadly used as a model organism to study biliary diseases. To evaluate the development and function of the biliary system, various techniques ...

Human Egg Maturity Assessment and Its Clinical Application

인간 계란 성숙도 평가 및 임상 적용

The optimal timing of intracytoplasmic sperm injection (ICSI) is of a serious concern for fertility programs because untimely sperm entry diminishes the ...

Generation of Multicellular Human Primary Endometrial Organoids

다세포 인간 1 차 자궁 내막 오르가노이드의 생성

The human endometrium is one of the most hormonally responsive tissues in the body and is essential for the establishment of pregnancy. This tissue can ...