Name: assessing tumor microenvironment of metastasis doorway-mediated vascular permeability associated with cancer cell dissemination using intravital imaging and fixed tissue analysis
Uploaded: 2019-06-26T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing Tumor Microenvironment of Metastasis Doorway-Mediated Vascular Permeability Associated with Cancer Cell Dissemination using Intravital Imaging and F

We willen de analytische Imaging Facility (AIF) bedanken in het Albert Einstein College of Medicine voor Imaging support. Dit werk werd gesteund door subsidies van de NCI (P30CA013330, CA150344, CA 100324 en CA216248), de SIG 1S10OD019961-01, het Gruss-Lipper Biophotonics Center en zijn geïntegreerde beeldvormings programma, en Montefiore ' s Ruth L. Kirschstein T32 opleidings subsidie van chirurgen voor de studie van de tumor micro Environment (CA200561).

GSK schreef het manuscript samen, voerde Imaging uit voor figuur 1c en 3B, ontwikkelde een protocol voor de analyse van vaste weefsels en analyseerde en interpreteerde alle gegevens; Jmp schreef het manuscript samen en voerde de chirurgie en intravital Imaging uit voor figuur 1b, 2C en 3a; LB &AMP; AC voerde de operatie uit en intravital beeldvorming voor figuur 2b; RJ voerde de operatie uit en intravital beeldvorming voor Figuur 2a; JSC schreef het manuscript samen en analyseerde en interpreteerde alle gegevens; MHO schreef het manuscript samen en analyseerde en interpreteerde alle gegevens; en de voerde de operatie en intravital beeldvorming voor figuur 2D, co-schreef het manuscript, ontwikkelde vaste weefsel analyse en intravital Imaging protocollen, en geanalyseerd en geïnterpreteerd alle gegevens.

Alle experimenten met levende dieren moeten worden uitgevoerd in overeenstemming met de richtlijnen en verordeningen inzake dieren gebruik en-verzorging. De in deze studie beschreven procedures zijn uitgevoerd in overeenstemming met de nationale instituten voor gezondheidsvoorschriften met betrekking tot de verzorging en het gebruik van proefdieren en met de goedkeuring van het Albert Einstein College voor geneeskunde dierenverzorging en-gebruik Comité (IACUC).
1. evaluatie van "barsten permeab...

Hier schetsen we twee protocollen die kunnen worden toegepast om een specifiek type vasculaire permeabiliteit te visualiseren en te kwantificeren dat aanwezig is op TMEM-deuropeningen en wordt geassocieerd met de verstoring van vasculaire strakke en aanhekings knooppunten. Dit type vasculaire permeabiliteit is van voorbijgaande aard en wordt gecontroleerd door het tripartiete TMEM-celcomplex, zoals hierboven beschreven5. De mogelijkheid om TMEM-geassocieerde vasculaire permeabiliteit te identifice...

Recente vooruitgang in ons begrip van kanker metastasen hebben blootgelegd dat epitheliale-naar-mesenchymale overgang (EMT) en de inductie van een migratie/invasieve kankercel subpopulatie niet, op zichzelf, voldoende zijn voor hematogene verspreiding 1. inderdaad, er werd eerder gedacht dat metastaserende kankercellen intravasaat door het geheel van kanker-geassocieerde endotheel als de tumor neovasculature wordt vaak gekenmerkt door lage pericyte dekking, en als zodanig, is zeer permeabel en unstable2,3,4. Hoewel zeer suggestief van defecte functies binnen de tumor, vasculaire modificaties tijdens carcinogenese leveren geen bewijs per se dat tumorcellen kunnen doordringen van de bloedvaten gemakkelijk en op een ongecontroleerde manier. Inzichten van intravital Imaging (IVI) studies, waarin tumorcellen zijn fluorescerende-gelabeld en de vasculatuur wordt gelabeld via de intraveneuze injectie van fluorescerende sondes (zoals dextran of Quantum dots), tonen aan dat, terwijl de tumor vaten zijn uniform permeabel tot laag moleculair gewicht dextranen (bv. 70 KD), hoog moleculair gewicht dextranen (155 KD) en tumorcellen kunnen alleen het endotheel oversteken op gespecialiseerde plaatsen van intravasatie die bij voorkeur op vasculaire tak punt5zijn gelegen, 6 , 7. Immunohistochemical (IHC) analyses met behulp van dierlijke modellen en menselijke patiënt afgeleide materialen hebben aangetoond dat deze sites zijn "deuropeningen" die gespecialiseerd zijn in het reguleren van vasculaire permeabiliteit, lokaal en transitief, het verstrekken van een kort venster van kans op migratie/invasieve kankercellen om de circulatie te betreden. Deze deuropeningen worden "tumor micro-omgeving van metastasen" of "tmem" genoemd, en, heel expectedly, de dichtheid correleert met een verhoogd risico op het ontwikkelen van gemetastaseerde ziekte bij borstkankerpatiënten8,9, 10.
Elke tmem deuropening bestaat uit drie verschillende soorten cellen: een perivasculaire macrofaag, een tumor cel die de actin-regulatoire proteïne zoogdier ingeschakeld (Mena) en een endotheelcel in direct fysiek contact met elkaar uitdrukt 5,9,10,11,12,13. De belangrijkste gebeurtenis voor de functie van tmem als een intravasatie deuropening is de gelokaliseerde afgifte van vasculaire endotheliale groeifactor (VEGF) op het onderliggende vat door de perivasculaire macrofaag14. VEGF kan homotypische kruisingen tussen endotheel cellen15,16,17,18,19, een fenomeen dat resulteert in voorbijgaande vasculaire lekkage verstoren, ook bekend als "barsten" permeabiliteit zoals beschreven in IVI studies 5. Tmem macrofagen is aangetoond dat de tyrosine kinase receptor TIE2 uitdrukken, die nodig is voor VEGF-gemedieerde tmem functie en homing van deze macrofagen aan de perivasculaire niche5,20,21 , 22. naast het reguleren van de verspreiding van kankercellen en metastase zijn TIE2+ macrofagen centrale regulatoren van tumor angiogenese21,22,23, 24,25,26,27,28,29,30,31. Als zodanig, TIE2+ macrofagen vertegenwoordigen een kritische bestanddeel van de tumor micro omgeving en de belangrijkste regulator van de gemetastaseerde Cascade.
Om de TMEM-gemedieerde vasculaire permeabiliteit beter te kunnen conceptualiseren (d.w.z. "barsten"), is het zeer belangrijk om het te onderscheiden van andere vormen van vasculaire permeabiliteit die niet zijn geassocieerd met het oplossen van endotheliale celcelknooppunten. In een intact endotheel (waarvan de nauwe en aanhankings knooppunten niet verstoord zijn), zijn er drie hoofdtypen van vasculaire permeabiliteit: (a) Pinocytose, die kan, of kan niet, worden gekoppeld aan transcytose van het ingezoomde materiaal; b) vervoer van materiaal via endotheel fenestrae; en (c) transport van materiaal via de paracellulaire route, die wordt gereguleerd door endotheliale strakke knooppunten15,16,17,18,19,32 , 33 , 34. Hoewel gedereguleerd in veel tumoren, zijn de bovengenoemde vormen van vasculaire permeabiliteit meestal beschreven in de context van normale weefsel fysiologie en homeostase, waarvan de uitersten weefsels zijn met ofwel beperkte permeabiliteit ( bijvoorbeeld, bloed-hersen barrière, bloed-testis barrière), of overvloedige permeabiliteit (bijvoorbeeld, fenestrated capillairen van het nierglomerulaire apparaat)34,35,36,37.
Met behulp van multiphoton intravital beeldvorming en Multiplexed immunofluorescentie microscopie, we zijn in staat om onderscheid te maken tussen TMEM-gemedieerde vasculaire permeabiliteit ("barsten") en andere vormen van vasculaire permeabiliteit in borsttumoren. Om dit te bereiken, voeren we een enkelvoudige intraveneuze injectie van een hoog-moleculair gewicht, fluorescently-gelabelde sonde in muizen. Spontane uitbarstende gebeurtenissen kunnen vervolgens worden vastgelegd met intravital imaging in levende muizen; of als alternatief kan extravasatie van de sonde worden gekwantificeerd door co-lokalisatie studies met bloedvasculatuur (bijv. CD31+ of Endomucin+) en tmem-deuropeningen met behulp van immunofluorescentie microscopie. De hier gepresenteerde protocollen beschrijven beide technieken, die zelfstandig of in combinatie met elkaar kunnen worden gebruikt.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:681px;" width="682">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Anti-rabbit IgG (Alexa 488)</td>
			<td style="width:224px;">Life Technologies Corporation</td>
			<td style="width:155px;">A-11034</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-rat IgG (Alexa 647)</td>
			<td>Life Technologies Corporation</td>
			<td>A-21247</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1600-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Citrate</td>
			<td>Eng Scientific Inc</td>
			<td>9770</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cover Glass Slips</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72296-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cyanoacrylate Adhesive</td>
			<td>Henkel Adhesive</td>
			<td>1647358</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DAPI</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>FP1490</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dextran-Tetramethyl-Rhodamine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T1287</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM/F12</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11320-033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Endomucin (primary antibody)</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>sc-65495</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Enrofloxacin</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>84753076 v-06/2015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F2442</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fish Skin Gelatin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>G7765</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Insulin Syringe</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isofluorane</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>NDC 11695-6776-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Matrigel</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CB40234</td>
			<td>Artificial extracellular matrix</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Needle (30 G)</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>305128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphate Buffered Saline</td>
			<td>Life Technologies Corporation</td>
			<td>PBS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyethylene Tubing</td>
			<td>Scientific Commodities Inc</td>
			<td>BB31695-PE/1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pulse Oximeter</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>MouseOx</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Puralube Vet Ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>NDC 17033-211-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Quantum Dots</td>
			<td>Life Technologies Corporation</td>
			<td>Q21561MP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rubber</td>
			<td>McMaster Carr</td>
			<td>1310N14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TMR (primary antibody)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A6397</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tween-20</td>
			<td>MP Biologicals</td>
			<td>TWEEN201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Xylene</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>184835</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing tumor microenvironment of metastasis doorway-mediated vascular permeability associated with cancer cell dissemination using intravital imaging and fixed tissue analysis

De meest voorkomende oorzaak van kanker gerelateerde sterfte is metastase, een proces dat de verspreiding van kankercellen van de primaire tumor naar secundaire sites vereist. Onlangs hebben we vastgesteld dat kankercel verspreiding in primaire borstkanker en bij gemetastaseerde plaatsen in de longen alleen bij deuropeningen wordt genoemd tumor micro omgeving van metastasen (TMEM). Tmem deuropening nummer is prognostisch voor verre herhaling van gemetastaseerde ziekte bij borstkankerpatiënten. TMEM-deuropeningen bestaan uit een kankercel die het actine-regulerend eiwit Mena in direct contact met een perivasculaire, proangiogene macrofaag, dat een hoog gehalte aan TIE2 en VEGF uitdrukt, waarbij beide cellen strak gebonden zijn aan een bloed het schip endotheliale cel. Kankercellen kunnen intravaseren door middel van tmem doorgangen als gevolg van voorbijgaande vasculaire permeabiliteit georkestreerd door de gezamenlijke activiteit van de tmem-geassocieerde macrofaag en de tmem-geassocieerde Mena-uitdrukken kanker cel. In dit manuscript beschrijven we twee methoden voor de beoordeling van TMEM-gemedieerde voorbijgaande vasculaire permeabiliteit: intravital Imaging en vaste weefsel immunofluorescentie. Hoewel beide methoden hun voor-en nadelen hebben, kan het combineren van de twee de meest complete analyses van TMEM-gemedieerde vasculaire permeabiliteit en micromilieuvereisten voor TMEM-functie bieden. Aangezien het metastatische proces bij borstkanker, en mogelijk andere vormen van kanker, de verspreiding van kankercellen via tmem deuropeningen impliceert, is het essentieel om goed gevestigde methoden te gebruiken voor de analyse van de tmem deuropening activiteit. De twee methoden die hier worden beschreven, bieden een alomvattende benadering van de analyse van tmem deuropening-activiteit, hetzij bij naïeve of farmacologisch behandelde dieren, wat van het allergrootste belang is voor preklinische onderzoeken van agenten die kankercellen voorkomen verspreiding via TMEM.

De in dit protocol beschreven experimentele procedures worden kort samengevat en geïllustreerd in Figuur 1A-C.
Om de TMEM-gemedieerde vasculaire permeabiliteit ("barsten activiteit") te meten en om experimenteel geluid te verminderen van andere vormen van vasculaire permeabiliteit (d.w.z. transcellulaire en paracellulaire, zoals uitgelegd in de inleiding), voerden we intraveneuze (i.v.) injectie van hoogmoleculair gewichts voelers, zoals 155 kDa ...

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Tumor Microenvironment of Metastasis Doorway-Mediated Vascular Permeability Associated with Cancer Cell Dissemination using Intravital Imaging and F

Assessing Tumor Microenvironment of Metastasis Doorway-Mediated Vascular Permeability Associated with Cancer Cell Dissemination using Intravital Imaging and Fixed Tissue Analysis

Beoordeling van tumor Microenvironment van metastasen doorway-gemedieerde vasculaire permeabiliteit geassocieerd met kanker cel verspreiding met behulp van Intravital beeldvorming en vaste weefsel analyse

We beschrijven twee methoden voor het beoordelen van voorbijgaande vasculaire permeabiliteit geassocieerd met tumor micro omgeving van metastasen (tmem) deuropening functie en kankercel intravasatie met behulp van intraveneuze injectie van hoog-moleculair gewicht (155 kDa) dextran bij muizen. De methoden omvatten intravital beeldvorming in levende dieren en vaste weefsel analyse met behulp van immunofluorescentie.

The most common cause of cancer related mortality is metastasis, a process that requires dissemination of cancer cells from the primary tumor to secondary ...

Deze complementaire technieken evalueren en meten de doorlaatbaarheid van tumorvaatculatuur met behulp van hoog moleculair gewicht Dextran. Het vaste weefsel protocol biedt een grotere tumor dekking, is een hoge doorvoer, en vereist geen multiphoton imaging apparatuur. Aan de andere kant biedt het intravital imaging protocol real-time informatie over de kinetiek, functie en dynamisch samenspel van de cellen in de tumormicro-omgeving van metastase of TMEM.Dus de hier gepresenteerde protocollen maken de directe meting van TMEM-afhankelijke vasculaire doorlaatbaarheid mogelijk die sterk correleert met de verspreiding van kankercellen, daarom kunnen deze protocollen worden gebruikt om het uitgezaaide potentieel van de tumoren te beoordelen. Om stukjes tumorweefsel te genereren dat geschikt is voor transplantatie, begint u met euthanasie op tumordragende muizen zoals beschreven in het tekstprotocol. Plaats een petrischaaltje met DMEM/F12 celkweekmedium op ijs in de rookkap.Breng de muis naar de rookkap en ontsmet de buik van de muis met 70% ethylalcohol. Met behulp van steriele handschoenen en chirurgische hulpmiddelen, verwijder de tumoren en plaats ze in de petrischaal. Snijd de tumor in kleine stukjes, het weggooien van necrotische porties terwijl ze in de petrischaal.Om de tumorstukken in ontvangende gastheren te transplanteren, verdoes muizen die zijn opgeheven met genetisch gemanipuleerd, fluorescerend gelabeld macrofagen zoals beschreven in het tekstprotocol. Verminder de anesthesie tot ongeveer 3% isofluoraan en breng oogheelkundige zalf aan op de ogen van de muis om drogen te voorkomen. Verwijder het haar van over de vierde borstklier van de muis.Na het reinigen van de huid met antiseptische, gebruik gesteriliseerde instrumenten om een kleine incisie ongeveer twee tot drie millimeter net inferieur aan de vierde tepel. Ontleden tot het borstvetkussen wordt blootgesteld. Neem een tumor stuk uit de Petri schotel en jas in kunstmatige extracellulaire matrix.Transplantatie tumoren onder de vierde borst vet pad. Sluit de incisie met cyanoacrylaatlijm. Voeg ten slotte een milliliter enrofloxakozijnantibioticum toe aan het drinkwater van de dieren.Verdoven de muis en plaats een staartaderkatheter zoals beschreven in het tekstprotocol. Maak een longitudinale middellijn incisie die onmiddellijk superieur begint aan de genitaliën en draag de incisie tot het niveau van het superieure aspect van de vierde borstklier. Draag de incisie dwars naar het superieure aspect van de vierde borstklier.Het is van cruciaal belang om te voorkomen dat afbreuk te doen aan de bloedtoevoer op dit punt. Stabiliseer de huidflap door een klein stukje stijf rubber van twee bij twee centimeter op de huidzijde van de flap aan te brengen. De tumoren moeten in het midden van het gebied worden gestabiliseerd door het rubber.Breng een kleine film van cyanoacrylaat aan op de buitenste rand van het op maat gemaakte beeldraamkozijn. Breng nu een kleine druppel PBS aan op het midden van het afdekglas. Vermijd contact tussen de cyanoacrylaat op het raamkozijn en de PBS op het glas om voortijdige polymerisatie van de cyanoacrylaat te voorkomen.Droog het omliggende flapweefsel met een laboratoriumdoek. Breng de kleine beeldvorming venster op het weefsel flap met de tumor in het midden van de duidelijke diafragma. Breng de verdoofde muis- en staartaderkatheter over naar het microscoopstadium.Wees uiterst voorzichtig om ervoor te zorgen dat de staartaderkatheter niet uitvalt. Voer op dit punt intravital imaging op lange termijn uit zoals beschreven in het tekstprotocol en in onze vorige JoVE-publicatie. Voor een hogere doorvoeranalyse en grotere tumordekking gebruikt u immunofluorescentie in vast weefsel om de door TMEM gemedieerde vasculaire doorlaatbaarheid te beoordelen.Om immunofluorescentie kleuring uit te voeren, eerst de monsters zoals beschreven in het tekstprotocol, dan uit te voeren antigeen ophalen door het verwarmen van de secties ondergedompeld in citraat dicht bij het kookpunt gedurende 20 minuten. Nadat u de monsters gedurende 15 tot 20 minuten tot kamertemperatuur hebt laten afkoelen, wast u de monsters in PBS drie keer gedurende twee minuten per wasbeurt. Blok gedurende 60 tot 90 minuten in het blokkeren van buffer, dan incubeer monsters met een mengsel van primaire rat en snelle antilichamen die zich richten op endomucin en tetramethylrhodamine respectievelijk.Na incubatie, was de monsters drie keer in PBST gedurende twee minuten per stuk. Incubeer monsters met een mengsel van secundaire ezel antilichamen tegen Rat IgG en snelle IgG, dan was de monsters drie keer in PBST gedurende twee minuten per stuk. Voer een routinematige DAPI-kleuring uit en monteer de dia's met behulp van een glycerolvrij hard montagemedium.Bewaar de monsters op een donkere plaats tot het scannen. Voor optimale resultaten u de dia's scannen op een digitale hele diascanner. Voor het uitvoeren van beeldanalyse, leg 10 high-power velden per case met behulp van alle software geschikt voor digitale pathologie.Sla de endomucin- en TMR-kanalen afzonderlijk op als TIFF. Upload met ImageJ de TIFF-bestanden en zet ze om in 8-bits afbeeldingen. Drempel de 8-bits afbeeldingen tot het niveau van het negatieve besturingselement en genereer twee binarized afbeeldingen met de endomucin- en TMR-maskers.Selecteer in de binaire gereedschappen de optie Gaten vullen op het endomucin-masker. Genereer de drempels voor Dextran-afbeelding en sla deze op als Dextran ROI. Genereer ook het drempelbeeld endomucin en sla het op als vasculaire ROI en genereer het omgekeerde endomucin-beeld en sla het op als Extravasculaire ROI.Vervolgens genereren de doorsneden Extravasculaire ROI en Dextran ROI beeld en sla het als Extravascular Dextran ROI. Tot slot sla het hele beeld als Tumor ROI. Verdeel het Extravasculaire Dextran ROI-gebied door het Tumor ROI-gebied en vermenigvuldig met 100 om het procentuele gebied te genereren dat de Extravasculaire Dextran in de hele tumor bedekt.Herhaal het proces voor 10 tot 20 high-power velden per geval en het genereren van een gemiddelde Extravascular Dextran voor elk geval. Hier is een beeld te zien van een gezonde, zich ontwikkelende borstklier in een transgeen dier. De vasculatuur wordt gelabeld door TMR Dextran in rood, borstpitrale epitheel wordt gelabeld door het fluorescerende eiwit dendra2 in het groen, en macrofagen worden gelabeld door een cyaan fluorescerend eiwit.Daarentegen wordt een getransplanteerd invasief ductiel carcinoom met getransplanteerde dendra2-gelabeld bij een dier met gelabelde macrofagen en bloedvaten. Gezond longweefsel werd gevisualiseerd door middel van een long-imaging venster in een muis met gelabelde vasculatuur. Longmetastasen zijn duidelijk na injectie van tumorcellen in een transgeen dier met gelabelde macrofagen en vasculatuur.Hier getoond zijn foto's van een time-lapsed intravital imaging film van hoog-moleculair gewicht Dextran-gelabelde neo-angiogene vaten binnen een getransplanteerde dendra2-gelabeld invasief carcinoom van de borst. De gestippelde gele lijn geeft de omtrek van de voorbijgaande vasculaire lekkage gebied voor, tijdens en na de lekkage gebeurtenis. Een TMEM deuropening wordt vastgelegd in live beeldvorming.Multichannel immunofluorescentie toont endomucin, hoog-moleculair gewicht Dextran, hun samengevoegde beeld samen met DAPI, evenals de overeenkomstige drempel bloedvat en Extravascular Dextran maskers. De overeenkomstige sequentiële sectie van TMEM immunohistochemie wordt ook getoond. Het vasculaire profiel uit de buurt van TMEM verschijnt als een niet-lekkend vasculair profiel, terwijl het TMEM-geassocieerde vasculaire profiel verschijnt als een lekkend vasculair profiel.Het is zeer belangrijk om te voorkomen dat het snijden van de bloedvaten die de tumor tijdens de chirurgische blootstelling van de tumor. De hier beschreven methodologie kan worden gecombineerd met medicamenteuze behandeling, hetzelfde dat remmende TMEM-functie, het voorkomen van vasculaire doorlaatbaarheid, of zelfs het normaliseren van tumor vasculatuur om hun impact en werkzaamheid te meten. Met deze protocollen hebben we eerder aangetoond dat chemotherapie vasculaire doorlaatbaarheid en kankercelverspreiding verbetert en eigenlijk dat deze pro-gemetastaseerde veranderingen kunnen worden omzeild door co-toediening van remmers van TMEM-functie.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

De<em&gt; Drosophila</em&gt; Imaginal Disc Tumor Model: visualisatie en kwantificering van genexpressie en Tumor Invasiviteit met behulp van genetische Mozaïeken

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

Longitudinal Intravital Imaging of Brain Tumor Cell Behavior in Response to an Invasive Surgical Biopsy

Longitudinale Intravital beeldvorming van hersen tumor Celgedrag in reactie op een invasieve chirurgische biopsie

Biopsies are standard of care for cancer treatment and are clinically beneficial as they allow solid tumor diagnosis, prognosis, and personalized ...

Micromanipulation of Circulating Tumor Cells for Downstream Molecular Analysis and Metastatic Potential Assessment

Micromanipulatie van circulerende tumor cellen voor downstream moleculaire analyse en gemetastaseerde potentiële beoordeling

Blood-borne metastasis accounts for&#160;most cancer-related deaths and involves circulating tumor cells (CTCs) that are successful in establishing new ...

Analysis of Side Population in Solid Tumor Cell Lines

Analyse van zijpopulatie in vaste tumorcellijnen

Cancer stem cells (CSCs) are an important cause of tumor growth, metastasis, and recurrence. Isolation and identification of CSCs are of great ...

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

Pathologische analyse van longmetastase na laterale staartaderinjectie van tumorcellen

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

A Label-Free Segmentation Approach for Intravital Imaging of Mammary Tumor Microenvironment

Een labelvrije segmentatiebenadering voor intravitale beeldvorming van de micro-omgeving van borsttumoren

The ability to visualize complex and dynamic physiological interactions between numerous cell types and the extracellular matrix (ECM) within a live tumor ...

Expanding the Comprehension of the Tumor Microenvironment using Mass Spectrometry Imaging of Formalin-Fixed and Paraffin-Embedded Tissue Samples

Uitbreiding van het begrip van de tumormicro-omgeving met behulp van massaspectrometrie Beeldvorming van formaline-vaste en paraffine-ingebedde weefselmonsters

Advances in immune-based therapies have revolutionized cancer treatment and research. This has triggered growing demand for the characterization of the ...

Zebrafish Larvae as a Model to Evaluate Potential Radiosensitizers or Protectors

Zebravislarven als model om potentiële radiosensibilisatoren of beschermers te evalueren

Zebrafish are extensively used in several kinds of research because they are one of the easily maintained vertebrate models and exhibit several features ...

Multiparametric Tumor Organoid Drug Screening Using Widefield Live-Cell Imaging for Bulk and Single-Organoid Analysis

Multiparametrische tumor organoïde drug screening met behulp van Widefield Live-Cell Imaging voor bulk en single-organoïde analyse

Patient-derived tumor organoids (PDTOs) hold great promise for preclinical and translational research and predicting the patient therapy response from ex ...

Multiplex Immunofluorescence and Spatial Image Analysis of the Tumor Microenvironment

Multiplex Immunofluorescence Combined with Spatial Image Analysis for the Clinical and Biological Assessment of the Tumor Microenvironment

Multiplex Immunofluorescence Combined with Spatial Image Analysis for the Clinical and Biological Assessment of the Tumor Microenvironment (Video) | JoVE 

Multiplex immunofluorescentie gecombineerd met ruimtelijke beeldanalyse voor de klinische en biologische beoordeling van de micro-omgeving van de tumor

The tumor microenvironment (TME) is composed of a plethora of different cell types, such as cytotoxic immune cells and immunomodulatory cells. Depending ...