Name: assessing tumor microenvironment of metastasis doorway-mediated vascular permeability associated with cancer cell dissemination using intravital imaging and fixed tissue analysis
Uploaded: 2019-06-26T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing Tumor Microenvironment of Metastasis Doorway-Mediated Vascular Permeability Associated with Cancer Cell Dissemination using Intravital Imaging and F

ברצוני להודות למתקן הדימות האנליטי (AIF) במכללת אלברט איינשטיין לרפואה לתמיכה בהדמיה. עבודה זו נתמכת על ידי מענקים של NCI (P30CA013330, CA150344, CA 100324 ו CA216248), את מרכז הביופוטוניקה של מלון גרואס-ליפר ותוכנית ההדמיה המשולבת שלה, ורות ל' קירששטיין T32 הכשרה של המנתחים לחקר מיקרואקולוגיה הגידול (CA200561).

Gsk משותף כתב את כתב היד, ביצע הדמיה עבור איור 1c ו-3b, פיתח פרוטוקול ניתוח רקמות קבוע, וניתח ופירש את כל הנתונים; Jmp שיתוף כתב את כתב היד, וביצע את הניתוח ואת ההדמיה האינטרטל עבור איור 1B, 2c ו-3a; LB &AMP; AC ביצע את הניתוח והדמיה הדמיית עבור איור 2b; אר. ג'י ביצע את הניתוח והדמיה ממוחשבת לאיור 2 א; JSC co-כתב את כתב היד וניתח ופירש את כל הנתונים; Mho כתב את כתב היד וניתח ופירש את כל הנתונים; דה ביצע את הניתוח והדמיה של ההדמיה לאיור 2d, כתב את כתב היד, פיתח ניתוח רקמות קבועות ופרוטוקולי דימות, וניתח ופירש את כל הנתונים.

כל הניסויים המשתמשים בבעלי חיים חיים חייבים להתבצע בהתאם לשימוש בבעלי חיים ולהנחיות ולתקנות. ההליכים המתוארים במחקר זה בוצעו בהתאם לתקנות הלאומיות של המכון לבריאות הנוגעות לטיפול ולשימוש בבעלי חיים ניסיוניים ובאישור מכללת אלברט איינשטיין לרפואה ושימוש בבעלי חיים ועדה (IACUC).
<p class="jove_tit...

כאן, אנו מתווה שני פרוטוקולים שניתן להחיל כדי להמחיש ולכמת סוג מסוים של חדירות כלי הדם אשר נוכח בדלתות TMEM והוא קשור לשיבוש של צמתים הדוקים ומלא כלי דם. סוג זה של חדירות כלי הדם הוא ארעי ונשלט על ידי מתחם התאים התלת-ממדי של TMEM, כפי שהוסבר מעל5. היכולת לזהות ולכמת הקשורים לחדירות כ?...

ההתפתחויות האחרונות ההבנה שלנו של גרורות סרטן חשפו כי המעבר אפיתל-to-mesenchal (צוות החירום) ואת אינדוקציה של מעבר לסרטן הנדידה/פולשנית של תאים לא, בעצמם, מספיק עבור הפצת המטדוגני 1. אכן, בעבר חשבו כי מתפשט בתאי הסרטן באמצעות מכלול של סרטן משויך אנדותל כמו הגידול neovasculature מאופיין לעתים קרובות על ידי כיסוי כריתת קרום נמוך, וככזה, הוא חדיר מאוד . לא יציב2,3,4 למרות מאוד מרמזת על פונקציות פגומות בתוך הגידול, שינויים כלי דם במהלך סרטן לא לספק ראיות כשלעצמו כי תאים סרטניים יכולים לחדור כלי דם בקלות בצורה בלתי מבוקרת. תובנות מפני הדמיית הדמיה (ivi) לימודים, שבו תאים סרטניים הם fluorescently אופן-מתויג ואת vascuלטורה מתויג באמצעות הזרקה ורידי של בדיקה פלואורסצנט (כגון נקודות תוספי או הקוונטים), להראות כי, בעוד כלי הגידול הם אחיד חדירות משקל מולקולרי נמוך דקטרנס (g. 70 kD), משקל מולקולרי גבוה דקטרנס (155 kD) ותאי הגידול יכולים לחצות את האנדותל רק באתרים מיוחדים של in, הנמצאים במיקום מוגדר בנקודת הסתעפות כלי דם5, מיכל בן 6 , 7. מנתח אימונוהיסטוכימיה (ihc) באמצעות דגמי בעלי חיים וחומר מטופל-האדם הראו כי אתרים אלה הם "פתחים" המתמחים בוויסות חדירות כלי הדם, באופן מקומי ובארעיות, ומספק חלון קצר של הזדמנות עבור תאים נודדים/פולשנית סרטן כדי להיכנס למחזור הדם. דלתות אלה נקראות "מיקרוסביבה הגידול של גרורות" או "tmem", ו, די צפוי, צפיפות שלהם מתואם עם סיכון מוגבר לפתח מחלה גרורתית בחולי סרטן השד8,9, . בסדר, עשר
כל פתח TMEM מורכב משלושה סוגים שונים של תאים: מקרופאג הפריסקולרית, תא הגידול על-ידי הבעת ביטוי היונקים חלבון actin-רגולטוריות מאופשר (מנה), תא אנדותל, כל במגע פיזי ישיר אחד עם השני1, . חמש,תשע,10,11,12,13 האירוע העיקרי לתפקיד TMEM כדלת הכניסה הוא השחרור המותאם לשפות אחרות של גורמי הצמיחה של כלי הדם ("מקרופאג") אל הכלי המשמש כבסיס על ידי הperivascular דם14. הוא יכול לשבש את הצמתים הומוטיפקס בין התאים האנדותל15,16,17,18,19, תופעה שתוצאתה דליפת כלי דם ארעית, גם המכונה חדירות "מתפרצת" כפי שמתואר בלימודי IVI 5. מקרופאגים מסוימים הוכחו לבטא את הקולטן טירולך קינאז TIE2, אשר נדרש עבור הפונקציה של ומתווכת מתווך והביות של מקרופאגים אלה לנישה perivascular5,20,21 , 22. בנוסף ויסות תא סרטן הפצת גרורות, TIE2+ מקרופאגים הוכחו להיות הרגולטורים המרכזיים של אנגיוגנזה הגידול21,22,23, 24,25,26,27,28,29,30,31. ככזה, TIE2+ מקרופאגים מייצגים המרכיבים הקריטיים של מיקרוסביבה הגידול ואת הרגולטור העיקרי של המפל גרורתי.
כדי לשפר טוב יותר את היכולת של חדירות כלי הדם (כלומר "התפוצצות"), חשוב מאוד להבדיל ביניהם ממצבים אחרים של חדירות כלי הדם שאינם משויכים לפירוק הצמתים של תאי התא האנדותל. באנדותל ללא שינוי (אחד שהצמתים הצמודים והחסיד שלו אינם מכווצים), קיימים שלושה סוגים עיקריים של חדירות כלי הדם: (א) פינוציטוזה, אשר עשויים, או לא יכולים, להיות מצמידים לטראנטוטוטיות של החומר הבלוע; (ב) הובלת חומר באמצעות שורש הרכב; ו (ג) הובלה של חומר דרך המסלול הפרתאי, אשר מוסדר על ידי הצמתים הדוקים האנדותל15,16,17,18,19,32 , 33 , 34. למרות שהוא הוטלה בגידולים רבים, המצבים הנ ל של חדירות כלי הדם תוארו בעיקר בהקשר של פיזיולוגיה רקמות נורמלי הומאוסטזיס, הקיצוניויות של אשר הם רקמות עם חדירות מוגבלות ( לדוגמה, מחסום דם-מוח, בדיקת דם מחסום), או חדירות שופע (למשל, מדורג נימים של המנגנון הכליות של הכליה)34,35,36,37.
באמצעות הדמיה מרובת פוטון ומיקרוסקופ מיקרואוטרלוסקופיה, אנו מסוגלים להבחין בין חדירות לכלי דם ("התפוצצות") ומצבים אחרים של חדירות כלי הדם בגידולים בשד. כדי להשיג זאת, אנו מבצעים הזרקה אחת ורידית של משקל מולקולרי גבוה, fluorescently שכותרתו בדיקה בעכברים. אירועי התפוצצות ספונטנית לאחר מכן ניתן ללכוד באמצעות הדמיה intravital בעכברים חיים; או לחילופין, ניתן לכמת את המכשיר באמצעות לימודי לוקליזציה עם דם (לדוגמה, CD31+ או Endomucin+) ולהשתמש בכלי הרכב של מיקרוסקופ מאימונולופלנציה. הפרוטוקולים המוצגים כאן מתארים את שתי הטכניקות הללו, שניתן להשתמש בהן באופן עצמאי או בשיתוף אחד עם השני.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:681px;" width="682">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Anti-rabbit IgG (Alexa 488)</td>
			<td style="width:224px;">Life Technologies Corporation</td>
			<td style="width:155px;">A-11034</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-rat IgG (Alexa 647)</td>
			<td>Life Technologies Corporation</td>
			<td>A-21247</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1600-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Citrate</td>
			<td>Eng Scientific Inc</td>
			<td>9770</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cover Glass Slips</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72296-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cyanoacrylate Adhesive</td>
			<td>Henkel Adhesive</td>
			<td>1647358</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DAPI</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>FP1490</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dextran-Tetramethyl-Rhodamine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T1287</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM/F12</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11320-033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Endomucin (primary antibody)</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>sc-65495</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Enrofloxacin</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>84753076 v-06/2015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F2442</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fish Skin Gelatin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>G7765</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Insulin Syringe</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isofluorane</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>NDC 11695-6776-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Matrigel</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CB40234</td>
			<td>Artificial extracellular matrix</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Needle (30 G)</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>305128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphate Buffered Saline</td>
			<td>Life Technologies Corporation</td>
			<td>PBS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyethylene Tubing</td>
			<td>Scientific Commodities Inc</td>
			<td>BB31695-PE/1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pulse Oximeter</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>MouseOx</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Puralube Vet Ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>NDC 17033-211-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Quantum Dots</td>
			<td>Life Technologies Corporation</td>
			<td>Q21561MP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rubber</td>
			<td>McMaster Carr</td>
			<td>1310N14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TMR (primary antibody)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A6397</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tween-20</td>
			<td>MP Biologicals</td>
			<td>TWEEN201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Xylene</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>184835</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing tumor microenvironment of metastasis doorway-mediated vascular permeability associated with cancer cell dissemination using intravital imaging and fixed tissue analysis

הגורם השכיח ביותר של התמותה הקשורות לסרטן היא גרורות, תהליך המחייב הפצת תאים סרטניים מהגידול העיקרי לאתרים משניים. לאחרונה, הקמנו כי הפצת התאים הסרטניים בסרטן השד הראשוני באתרים גרורתי בריאות מתרחשת רק על הפתחים הנקראים מיקרוסביבה הגידול של גרורות (TMEM). מספר הדלת של TMEM הוא תחזיות עבור הישנות רחוקות של מחלה גרורתית בחולי סרטן השד. הפתחים tmem מורכבים תא סרטן אשר מבטא את החלבון אקטין הרגולציה ממנה במגע ישיר עם perivascular, proangiogenic המבטא רמות גבוהות של TIE2 ו-, היכן שני תאים אלה מאוגדים בחוזקה לדם . תא אנדותל תאים סרטניים יכולים לעבור באמצעות הפתחים TMEM עקב חדירות כלי דם ארעי שאורגן על ידי פעילות משותפת של מקרופאג הקשורים TMEM ו-TMEM-לבטא את תא סרטן. בכתב יד זה, אנו מתארים שתי שיטות להערכת היכולת הארעית של הגברת המתווכת בכלי הדם: הדמיה של הדמייה ומערכת חיסונית של רקמה קבועה. למרות שלכל השיטות יש יתרונות וחסרונות, השילוב בין השניים עשוי לספק את הניתוחים המשלימים ביותר של חדירות כלי דם, כמו גם תנאים מוקדמים מיקרו-סביבתיים עבור הפונקציה tmem מאז התהליך גרורתי בסרטן השד, ואולי סוגים אחרים של סרטן, כרוך הפצת תאים סרטניים באמצעות הפתחים TMEM זה חיוני להעסיק שיטות מבוססות היטב ניתוח של פעילות הדלת TMEM. שתי השיטות המתוארות כאן מספקות גישה מקיפה לניתוח של פעילות הדלת של TMEM או בבעלי חיים תמימים או בעלי טיפול תרופתי, שהוא בעל חשיבות עליונה לניסויים פרה-קליניים של סוכנים המונעים תא סרטן הפצה באמצעות TMEM.

ההליכים הניסיוניים המתוארים במאמר פרוטוקול זה מסוכמים בקצרה ומומחשים באיור 1א-ג.
כדי למדוד את החדירות לכלי דם ("פעילות מתפרצת") ולהפחית את הרעש הניסיוני ממצבים אחרים של חדירות כלי הדם (כלומר, הפרתאי והפרתאי, כפי שהוסבר במבוא), אנו מתבצעים בעירוי (עירו...

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Tumor Microenvironment of Metastasis Doorway-Mediated Vascular Permeability Associated with Cancer Cell Dissemination using Intravital Imaging and F

Assessing Tumor Microenvironment of Metastasis Doorway-Mediated Vascular Permeability Associated with Cancer Cell Dissemination using Intravital Imaging and Fixed Tissue Analysis

הערכת מיקרוסביבה הגידול של גרורה בתיווך החדירות כלי דם הקשורים להפצת תאים סרטניים באמצעות הדמיה Intravital וניתוח רקמות קבוע

אנו מתארים שתי שיטות להערכת חדירות בכלי הדם ארעי הקשורים עם מיקרוסביבה הגידול של גרורות (tmem) הדלת הפתח ואת התא סרטן in, באמצעות הזרקה ורידית של משקל גבוה-מולקולרי (155 kda) תוספי בעכברים. השיטות כוללות הדמיה של האינטרטל בבעלי חיים חיים וניתוח רקמות קבועות באמצעות מאימונולובורנציה.

The most common cause of cancer related mortality is metastasis, a process that requires dissemination of cancer cells from the primary tumor to secondary ...

טכניקות משלימות אלה להעריך ולמדוד את חדירה של כלי דם הגידול באמצעות משקל מולקולרי גבוה Dextran. פרוטוקול הרקמה הקבועה מציע כיסוי גידול גדול יותר, הוא תפוקה גבוהה, ואינו דורש ציוד הדמיה מולטיפוטונים. מצד שני, פרוטוקול ההדמיה הבין-ויטמינים מציע מידע בזמן אמת על הקינטיקה, הפונקציה והגומלין הדינמי של התאים במיקרו-וירוס הגידולי של גרורות או TMEM.אז הפרוטוקולים המוצגים כאן מאפשרים מדידה ישירה של חמת כלי דם תלויי TMEM אשר מאוד בקורלציה עם הפצת תאים סרטניים, ולכן פרוטוקולים אלה יכולים לשמש כדי להעריך את הפוטנציאל גרורתי של הגידולים. כדי ליצור חתיכות של רקמת הגידול מתאים להשתלה, להתחיל עם המתת חסד של עכברים נושאי גידול כמתואר בפרוטוקול הטקסט. מניחים צלחת פטרי עם DMEM / F12 תא תרבות בינוני על קרח במכסה המנוע אדים.הביאו את העכבר למכסה המנוע של האדים וחטאו את בטן העכבר באלכוהול אתיל של 70%. בעזרת כפפות סטריליות וכלים כירורגיים, מוציאים את הגידולים ומ מניחים אותם בצלחת פטרי. חותכים את הגידול לחתיכות קטנות, להשליך את כל מנות נמק בזמן שהם בצלחת פטרי.כדי להשתיל את חלקי הגידול למארחים הנמענים, הרדימו עכברים שגדלו עם מקרופאגים מהונדסים גנטית, המסומנים באופן פלואורסצנטי כמתואר בפרוטוקול הטקסט. להפחית את ההרדמה כ 3%isofluorane ולהחיל משחה עיניים על העיניים של העכבר כדי למנוע ייבוש. הסר שיער מעל בלוטת החלב הרביעית של העכבר.לאחר ניקוי העור עם חיטוי, להשתמש במכשירים מעוקרים כדי להפוך חתך קטן בערך שניים עד שלושה מילימטרים רק נחות הפטמה הרביעית. לנתח עד כרית שומן חלבי נחשף. קח חתיכת גידול מהצלחת פטרי ומעיל במטריצה חוץ תאית מלאכותית.גידולים בהשתלה מתחת ל כרית השומן הרביעית. סגור את החתך באמצעות דבק ציאנואקרילאט. לבסוף, להוסיף מיליליטר אחד של אנטיביוטיות enrofloxacin למי השתייה של בעלי החיים.הרדמה של העכבר והכנסת קטטר וריד זנב כמתואר בפרוטוקול הטקסט. הפוך חתך קו האמצע האורך החל מיד מעולה על איברי המין לשאת את החתך עד לרמה של ההיבט העליון של בלוטת החלב הרביעית. לשאת את החתך רוחבי להיבט מעולה של בלוטת החלב הרביעית.זה קריטי כדי למנוע פגיעה באספקת הדם בשלב זה. לייצב את דש העור על ידי הדבקת חתיכה קטנה של גומי נוקשה מדידה שני על שני סנטימטרים לצד העור של הדש. הגידולים צריכים להיות במרכז האזור להיות מיוצב על ידי הגומי.החל סרט קטן של cyanoacrylate על השפה החיצונית של מסגרת חלון הדמיה בהתאמה אישית. עכשיו להחיל טיפה קטנה של PBS למרכז זכוכית הכיסוי. הימנע ממגע בין cyanoacrylate על מסגרת החלון PBS על הזכוכית, כדי למנוע פילמיזציה מוקדמת של cyanoacrylate.יבש את רקמת הדש שמסביב עם ניגוב מעבדה. מדביקים את חלון ההדמיה הקטן לדש הרקמה עם הגידול במרכז הצמצם הצלול. מעבירים את קטטר העכבר ווריד הזנב הרדמה לשלב המיקרוסקופ.נקוט זהירות רבה כדי להבטיח קטטר וריד הזנב לא לנשור. בשלב זה, לבצע הדמיה תוך ואטרונית ארוכת יותר כמתואר בפרוטוקול הטקסט ובפרסום הקודם שלנו JoVE. לניתוח תפוקה גבוה יותר וכיסוי גידולים גדול יותר, השתמשו בכשל חיסוני ברקמה קבועה כדי להעריך את חמת כלי הדם בניווך TMEM.כדי לבצע כתמי immunofluorescence, תחילה להכין את הדגימות כמתואר בפרוטוקול הטקסט, ולאחר מכן לבצע אחזור אנטיגן על ידי חימום החלקים שקועים ציטראט קרוב לנקודת הרתיחה במשך 20 דקות. לאחר מתן הדגימות להתקרר לטמפרטורת החדר במשך 15 עד 20 דקות, לשטוף את הדגימות PBS שלוש פעמים במשך שתי דקות כל לשטוף. לחסום במשך 60 עד 90 דקות בחוצץ חסימה, ולאחר מכן דגירה דגימות עם תערובת של חולדה ראשונית נוגדנים מהירים אשר היעד אנדומקין ו tetramethylrhodamine בהתאמה.לאחר הדגירה, לשטוף את הדגימות שלוש פעמים PBST במשך שתי דקות כל אחד. דגימות דגירה עם תערובת של נוגדני חמור משני נגד IgG עכברוש ו IgG מהירה, ולאחר מכן לשטוף את הדגימות שלוש פעמים PBST במשך שתי דקות כל אחד. בצע הכתמת DAPI שגרתית והתקע את השקופיות באמצעות מדיום הרכבה קשיח ללא גליצרול.אחסן את הדגימות במקום חשוך עד לסריקה. לקבלת תוצאות מיטביות, סרוק את השקופיות בסורק דיגיטלי שלם של שקופיות. כדי לבצע ניתוח תמונה, לכוד 10 שדות בה הספק גבוה בכל מקרה באמצעות כל תוכנה המתאימה לפתולוגיה דיגיטלית.שמור את ערוצי אנדומווצין ו- TMR בנפרד כמו TIFF. באמצעות ImageJ, להעלות את קבצי TIFF ולהמיר אותם לתמונות 8 סיביות. סם את תמונות 8 הסיביות לרמת הפקד השלילי והפיק שתי תמונות בינאריות המציגות את מסיכות האנדומוקין וה- TMR.מתוך הכלים הבינאריים, בחר מלא חורים על מסיכת האנדומוקין. צור את התמונה Dextran סף ולשמור אותו כמו Dextran ROI. כמו כן, ליצור את התמונה אנדומוצין סף ולשמור אותו כמו ROI כלי דם וליצור את התמונה אנדומוצין הפוך ולשמור אותו כמו ROI בזבזני.הבא ליצור את ROI בזבזני מצטלבים ותדמית Dextran ROI ולשמור אותו כמו ROI Dextran בזבזני. לבסוף לשמור את התמונה כולה כמו גידול ROI. חלק את אזור Dextran ROI בזבזני על ידי אזור ROI הגידול לרבים על ידי 100 כדי ליצור את האזור אחוז כי Dextran בזבזני מכסה את הגידול כולו.חזור על התהליך עבור 10 עד 20 שדות בה הספק גבוה לכל מקרה וליצור Dextran בזבזני ממוצע עבור כל מקרה. מוצגת כאן תמונה של בלוטת החלב בריאה ומתפתחת בתוך חיה מהומרת. כלי הדם מסומנים על ידי TMR Dextran באפיתל אדום, מחך רקיע מסומן על ידי חלבון פלואורסצנטי dendra2 בירוק, מקרופאגים מסומנים על ידי חלבון פלואורסצנטי ציאן.לעומת זאת, קרצינומה פולשנית מושתלת עם תווית דנדרה2 מוצגת בבעל חיים עם מקרופאגים וכלי שיט מסומנים. רקמת ריאה בריאה הודמיה דרך חלון הדמיית ריאות בתוך עכבר עם כלי דם מסומנים. גרורות ריאות ניכרות בעקבות הזרקה של תאים סרטניים לתוך חיה מהודקת עם מקרופאגים מסומנים וסקולטורה.מוצגים כאן תמונות סטילס מסרט הדמיה תוך-גולגולתי שפג הזמן של כלי ניאו-אנגיוגניים בעלי משקל מולקולרי גבוה, המסומן על-ידי Dextran, בתוך קרצינומה פולשנית מושתלת של השד. הקו הצהוב המקווקו מציין את קווי המתאר של אזור דליפת כלי הדם הזורמים לפני, במהלך ואחרי אירוע הדליפה. פתח TMEM נלכד בהדמיה חיה.immunofluorescence רב ערוצי מראה אנדומוצין, משקל מולקולרי גבוה Dextran, התמונה הממוזגת שלהם יחד עם DAPI, כמו גם את כלי הדם סף המתאים מסכות דקסטרן בזבזני. החלק הרציף המתאים של אימונוהיסטוכימיה TMEM מוצג גם. פרופיל כלי הדם הרחק TMEM מופיע כפרופיל כלי דם שאינו דולף, ואילו פרופיל כלי הדם הקשורים TMEM מופיע כפרופיל כלי דם דולף.חשוב מאוד להימנע מחיתוך כלי הדם המספקים את הגידול במהלך החשיפה הכירורגית של הגידול. המתודולוגיה המתוארת כאן יכולה להיות משולבת עם טיפול תרופתי, אותו דבר כי עיכוב תפקוד TMEM, מניעת חבירה כלי דם, או אפילו נרמול כלי דם הגידול כדי למדוד את השפעתם ויעילותם. עם פרוטוקולים אלה הוכחנו בעבר כי כימותרפיה משפרת את חבירה כלי הדם והפצת תאים סרטניים ולמעשה כי שינויים פרו גרורתיים אלה ניתן לעקוף על ידי ניהול שותף של מעכבי תפקוד TMEM.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

ה<em&gt; תסיסנית</em&gt; דגם גידול דיסק דמותי: ויזואליזציה וכימות של ביטוי גנים סרטניים הפולשנות שימוש פסיפסים גנטי

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

Longitudinal Intravital Imaging of Brain Tumor Cell Behavior in Response to an Invasive Surgical Biopsy

האורך הדמיה של התנהגות המוח תאים סרטניים בתגובה ביופסיה פולשנית כירורגית

Biopsies are standard of care for cancer treatment and are clinically beneficial as they allow solid tumor diagnosis, prognosis, and personalized ...

Micromanipulation of Circulating Tumor Cells for Downstream Molecular Analysis and Metastatic Potential Assessment

מיקרומניפולציה של במחזור תאים סרטניים לניתוח מולקולרי במורד הזרם והערכה פוטנציאלית גרורתית

Blood-borne metastasis accounts for&#160;most cancer-related deaths and involves circulating tumor cells (CTCs) that are successful in establishing new ...

Analysis of Side Population in Solid Tumor Cell Lines

ניתוח אוכלוסיית הצד בקווי תאים סרטניים מלאים

Cancer stem cells (CSCs) are an important cause of tumor growth, metastasis, and recurrence. Isolation and identification of CSCs are of great ...

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

ניתוח פתולוגי של גרורות ריאות בעקבות הזרקת וריד זנב לרוחב של תאים סרטניים

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

A Label-Free Segmentation Approach for Intravital Imaging of Mammary Tumor Microenvironment

גישת סגמנטציה ללא תווית להדמיה תוך-ורידית של מיקרו-סביבה של גידולי יונקים

The ability to visualize complex and dynamic physiological interactions between numerous cell types and the extracellular matrix (ECM) within a live tumor ...

Expanding the Comprehension of the Tumor Microenvironment using Mass Spectrometry Imaging of Formalin-Fixed and Paraffin-Embedded Tissue Samples

הרחבת ההבנה של המיקרו-סביבה של הגידול באמצעות הדמיית ספקטרומטריית מסה של דגימות רקמה קבועות פורמלין ומשובצות פרפין

Advances in immune-based therapies have revolutionized cancer treatment and research. This has triggered growing demand for the characterization of the ...

Zebrafish Larvae as a Model to Evaluate Potential Radiosensitizers or Protectors

זחלי דגי זברה כמודל להערכת רדיוסנסיטיזרים או מגינים פוטנציאליים

Zebrafish are extensively used in several kinds of research because they are one of the easily maintained vertebrate models and exhibit several features ...

Multiparametric Tumor Organoid Drug Screening Using Widefield Live-Cell Imaging for Bulk and Single-Organoid Analysis

בדיקת תרופות אורגנואידיות של גידולים רב-פרמטריים באמצעות הדמיית תאים חיים של Widefield לניתוח בתפזורת ואורגנואיד יחיד

Patient-derived tumor organoids (PDTOs) hold great promise for preclinical and translational research and predicting the patient therapy response from ex ...

Multiplex Immunofluorescence and Spatial Image Analysis of the Tumor Microenvironment

Multiplex Immunofluorescence Combined with Spatial Image Analysis for the Clinical and Biological Assessment of the Tumor Microenvironment

Multiplex Immunofluorescence Combined with Spatial Image Analysis for the Clinical and Biological Assessment of the Tumor Microenvironment (Video) | JoVE 

מולטיפלקס אימונופלואורסנציה בשילוב עם ניתוח תמונה מרחבית להערכה קלינית וביולוגית של מיקרו-סביבה של הגידול

The tumor microenvironment (TME) is composed of a plethora of different cell types, such as cytotoxic immune cells and immunomodulatory cells. Depending ...