Name: assessing tumor microenvironment of metastasis doorway-mediated vascular permeability associated with cancer cell dissemination using intravital imaging and fixed tissue analysis
Uploaded: 2019-06-26T14:00:00
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우리는 화상 진찰 지원을 위한 알버트 아인슈타인 의과 대학에 있는 분석 화상 진찰 시설 (AIF)에게 감사하고 싶습니다. 이 작품은 NCI (P30CA013330, CA150344, CA150324, CA216248), SIG 1S10OD019961-01, 그루스 -리퍼 바이오 포토닉스 센터 및 통합 이미징 프로그램, 몬테피오레의 루스 L Kirsch 2 의 교육에서 보조금에 의해 지원되었다. 종양 미세 환경 연구 (CA200561).

GSK는 원고를 공동 작성하고, 도 면 1C 및 3B에 대한 이미징을 수행하고, 고정 조직 분석 프로토콜을 개발하고, 모든 데이터를 분석하고 해석합니다. JMP는 원고를 공동 작성하고, 도 1B,2C 및 3A에 대한 수술 및 사내 영상을 수행; LB & AC는 도 2B에 대한 수술 및 인바이탈 이미징을 수행; RJ는 도 2A에 대한 수술 및 활력 내 이미징을 수행; JSC는 원고를 공동 작성하여 모든 데이터를 분석하고 해석했습니다. MHO는 원고를 공동 작성하여 모든 데이터를 분석하고 해석했습니다. DE는 도 2D를 위한 수술 및 활력 내 이미징을 수행하고, 원고를 공동 작성하고, 고정 조직 분석 및 활력 내 이미징 프로토콜을 개발하고, 모든 데이터를 분석하고 해석했다.

살아있는 동물을 사용하는 모든 실험은 동물 사용 및 관리 지침 및 규정에 따라 수행되어야합니다. 이 연구에서 설명한 절차는 실험 동물의 관리 및 사용에 관한 국립 보건원 규정에 따라 수행되었으며 알버트 아인슈타인 의과 대학동물 관리 및 사용의 승인을 받았습니다. 위원회 (IACUC).
1. 살아있는 동물 화상 진찰을 이용한 "파열 투과성" 평가
<ol><li>형광 대식 세포와 ...

여기에서는 TMEM 출입구에 존재하고 혈관 이체의 중단과 연관된 특정 유형의 혈관 투과성을 시각화하고 정량화하기 위해 적용할 수 있는 두 가지 프로토콜을 간략하게 설명합니다. 혈관 투과성의 이 모형은5위에 설명된 것과 같이 삼자 TMEM 세포 복합체에 의해 일시적이고 통제됩니다. TMEM 관련 혈관 투과성을 확인하고 정량화하는 능력은 종양에 대한 기존의 세포 독성 요법의 효?...

암 전이에 대한 우리의 이해에 있는 최근 어드밴스는 상피-중간엽 전이 (EMT) 및 철새/침략적인 암 세포 소집단의 유도가, 그 자체로, 혈류 보급을 위해 충분하지 않다는 것을 발견했습니다 1. 실제로, 종양 관절이 종종 낮은 pericyte 커버리지를 특징으로하기 때문에 암 관련 내피의 전체를 통해 암 세포를 전이하는 것은 매우 투과성이 고도로 투과성이 있다고 생각되었다. 불안정한2,3,4. 종양 내의 불완전한 기능의 높게 암시하더라도, 발암 도중 혈관 수정은 종양 세포가 통제되지 않는 방식으로 혈관을 쉽게 관통할 수 있다는 것을 se 당 증거를 제공하지 않습니다. 종양 세포가 형광 태그가 부착되고 혈관 구조가 형광 프로브의 정맥 주사를 통해 표지되는 Intravital 이미징 (IVI) 연구에서 얻은 통찰력은 종양 혈관이 균일하게 진행되는 동안 형광 프로브 (예 : dextran 또는 양자점)의 정맥 주사를 통해 표지됩니다. 낮은 분자량 덱스 트랜스 (예를 들어 70 kD), 고분자 덱스 트랜스 (155 kD) 및 종양 세포에 투과성 혈관 분기 점에 우선적으로 위치한 내화의 전문 부위에서만 내피를 교차 할 수 있습니다5, 6개 , 7.동물 모델과 인간 환자 유래 물질을 사용한 면역성 화학 (IHC) 분석은 이러한 사이트가 혈관 투과성을 국부적으로 및 일시적으로 조절하는 "출입구"임을 보여주었습니다. 순환을 입력 하는 철새/침략적인 암 세포에 대 한 기회. 이러한 출입구는 "전이의 종양 미세 환경"또는 "TMEM"이라고하며, 예상대로, 그들의 밀도는 유방암 환자에서 전이성 질환을 개발할위험이 증가와 상관 관계 8,9, 10.
각 TMEM 출입구는 세 가지 유형의 세포로 구성되어 있습니다: 시막 대식세포, 액틴 조절 단백질 포유류 를 과도하게 발현하는 종양 세포(Mena), 및 내피 세포, 모두 서로 직접 적인접촉1, 5,9,10,11,12,13. TMEM이 내막통로로서의 기능을 위한 주요 이벤트는 혈관 내피 성장 인자(VEGF)를 근간 대식세포(14)에 의해 기본 혈관상에국지화방출하는 것이다. VEGF는 내피 세포15,16,17,18,19,일시적인 혈관 누설을 초래하는 현상, 또한 사이의 상모 접합을 방해 할 수 있습니다. IVI 연구에 설명 된 대로 "파열"투과성으로 알려진 5. TMEM 대식세포는 VEGF 매개 TMEM 기능 및 이러한 대식세포의 호밍에 필요한 티로신 키나아제 수용체 TIE2를 경측틈새 시장5,20,21로 발현하는 것으로 나타났다. , 22. 암 세포 보급 및 전이를 조절하는 것 외에도 TIE2+ 대식세포는 종양 혈관 신생의 중심 조절자로 나타났습니다21,22,23, 24,25,26,27,28,29,30,31. 이와 같이, TIE2+ 대식세포는 종양 미세환경 및 전이성 캐스케이드의 주요 조절제의 중요한 성분을 나타낸다.
TMEM 매개 혈관 투과성 (즉, "파열")을 더 잘 개념화하려면 내피 세포 - 세포 접합의 용해와 관련이없는 다른 혈관 투과성 모드와 구별하는 것이 매우 중요합니다. 손상되지 않은 내피 (단단하고 접합 접합이 중단되지 않는 혈관 투과성)의 세 가지 주요 유형이 있습니다 : (a) 섭취 된 물질의 트랜스 시토시스에 결합 될 수도 있고 그렇지 않을 수도 있습니다. (b) 내피페네스트라를 통한 물질의 수송; (c) 내피 단단한 접합부15,16,17,18,19,32에 의해 조절되는 파라셀룰러 통로를 통한 물질의 수송 , 33세 , 34. 비록 많은 종양에서 조절되었지만, 앞서 언급한 혈관 투과성 모드는 정상 조직 생리학 및 항상성의 맥락에서 주로 기술되어 왔으며, 그 중 극단은 제한된 투과성을 가진 조직이다. 예를 들어, 혈액-뇌 장벽, 혈액-고환 장벽), 또는 풍부한 투과성(예를 들어, 신장 사구체 장치의 페네스티드 모세혈관)34,35,36,37.
다광체 내 화상 진찰 및 다중면역형 광형 현미경 검사법을 사용하여, 우리는 유방 종양에 있는 TMEM 중재한 관 투과성 ("파열") 및 유방 종양에 있는 관 투과성의 그밖 모드 사이에서 구별할 수 있습니다. 이를 달성하기 위해, 우리는 마우스에서 고분자, 형광 표지 프로브의 단일 정맥 주입을 수행합니다. 자발적인 파열 이벤트는 다음 라이브 마우스에서 활력 내 이미징을 사용하여 캡처 할 수 있습니다; 또는 대안적으로, 프로브의 외삽은 혈액 혈관 구조 (예를 들어 CD31+ 또는 Endomucin +) 및 면역형광 현미경 검사법을 사용하여 TMEM 출입구와 공동 국소화 연구에 의해 정량화 될 수있다. 여기에 제시된 프로토콜은 독립적으로 또는 서로 함께 사용할 수 있는 이러한 기술을 모두 설명합니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:681px;" width="682">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Anti-rabbit IgG (Alexa 488)</td>
			<td style="width:224px;">Life Technologies Corporation</td>
			<td style="width:155px;">A-11034</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-rat IgG (Alexa 647)</td>
			<td>Life Technologies Corporation</td>
			<td>A-21247</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1600-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Citrate</td>
			<td>Eng Scientific Inc</td>
			<td>9770</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cover Glass Slips</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72296-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cyanoacrylate Adhesive</td>
			<td>Henkel Adhesive</td>
			<td>1647358</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DAPI</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>FP1490</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dextran-Tetramethyl-Rhodamine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T1287</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM/F12</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11320-033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Endomucin (primary antibody)</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>sc-65495</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Enrofloxacin</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>84753076 v-06/2015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F2442</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fish Skin Gelatin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>G7765</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Insulin Syringe</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isofluorane</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>NDC 11695-6776-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Matrigel</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CB40234</td>
			<td>Artificial extracellular matrix</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Needle (30 G)</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>305128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphate Buffered Saline</td>
			<td>Life Technologies Corporation</td>
			<td>PBS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyethylene Tubing</td>
			<td>Scientific Commodities Inc</td>
			<td>BB31695-PE/1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pulse Oximeter</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>MouseOx</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Puralube Vet Ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>NDC 17033-211-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Quantum Dots</td>
			<td>Life Technologies Corporation</td>
			<td>Q21561MP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rubber</td>
			<td>McMaster Carr</td>
			<td>1310N14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TMR (primary antibody)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A6397</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tween-20</td>
			<td>MP Biologicals</td>
			<td>TWEEN201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Xylene</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>184835</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing tumor microenvironment of metastasis doorway-mediated vascular permeability associated with cancer cell dissemination using intravital imaging and fixed tissue analysis

암 관련 사망의 가장 흔한 원인은 전이이며, 1 차 종양에서 이차 부위로 암세포를 보급해야하는 과정입니다. 최근에, 우리는 1 차적인 유방암에 있는 암 세포 보급이 폐에 있는 전이성 사이트에 전이의 종양 MicroEnvironment에게 불린 출입구에서만 발생한다는 것을 설치했습니다 (TMEM). TMEM 출입구 번호는 유방암 환자에서 전이성 질환의 먼 재발에 대한 예후입니다. TMEM 출입구는 이 두 세포가 혈액에 단단히 결합되어 있는 TIE2및 VEGF의 상부를 발현하는 경막, proangiogenic 대식세포와 직접 접촉하여 액틴 조절 단백질 Mena를 과발현하는 암세포로 구성됩니다. 혈관 내피 세포. 암세포는 TMEM 관련 대식세포 및 TMEM 관련 메나 발현 암 세포의 관절 활성에 의해 조율된 일시적인 혈관 투과성으로 인해 TMEM 출입구를 통해 인트라스타시화할 수 있다. 이 원고에서, 우리는 TMEM 중재한 과도 혈관 투과성의 평가를 위한 2개의 방법을 기술합니다: 활력 화상 진찰 및 고정된 조직 면역 형광. 두 방법 모두 장점과 단점을 가지고 있지만, 두 가지를 결합하면 TMEM 기능을위한 미세 환경 전제 조건뿐만 아니라 TMEM 매개 혈관 투과성의 가장 완벽한 분석을 제공 할 수 있습니다. 유방암에 있는 전이성 프로세스, 및 가능하게 그밖 모형암때문에, TMEM 출입구를 통해암세포 보급을 관련시키기 때문에, TMEM 출입구 활동의 분석을 위한 잘 확립된 방법을 채택하는 것이 필수적입니다. 여기에 설명된 두 가지 방법은 암세포를 예방하는 제제의 전임상 시험에서 가장 중요한 순진한 동물또는 약리학적으로 처리된 동물에서 TMEM 출입구 활성 분석에 대한 포괄적인 접근법을 제공합니다. TMEM을 통해 보급될 수 있습니다.

이 프로토콜 문서에 설명된 실험 절차는 그림 1 A-C에간략하게 요약되고 설명되어 있습니다.
TMEM 매개 혈관 투과성("파열 활성")을 측정하고 다른 혈관 투과성 모드(즉, 소개에서 설명한 대로 세포 간 및 파라셀룰러)의 실험 소음을 줄이기 위해 정맥 내(i.v.) 155 kDa Dextran과 같은 고분자량 프로브를 테트라메틸 로다민에 공액화합니다. 낮은 분자?...

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Assessing Tumor Microenvironment of Metastasis Doorway-Mediated Vascular Permeability Associated with Cancer Cell Dissemination using Intravital Imaging and Fixed Tissue Analysis

세포 내 이미징 및 고정 조직 분석을 사용하여 암 세포 보급과 관련된 전이 의 종양 미세 환경 평가

우리는 쥐에 있는 고분자량 (155 kDa) dextran의 정맥 주입을 사용하여 전이 (TMEM) 출입구 기능 및 암 세포 intravasation의 종양 미세 환경과 관련되었던 과도 혈관 투과성을 평가하기 위한 2개의 방법을 기술합니다. 방법은 살아있는 동물에 있는 활력 화상 진찰 및 면역 형광을 사용하여 고정된 조직 분석을 포함합니다.

The most common cause of cancer related mortality is metastasis, a process that requires dissemination of cancer cells from the primary tumor to secondary ...

이러한 보완 기술은 고분자 체중 Dextran을 사용하여 종양 혈관의 투과성을 평가하고 측정합니다. 고정 조직 프로토콜은 더 큰 종양 엄호를 제안하고, 높은 처리량이고, 다중 광자 화상 진찰 장비를 요구하지 않습니다. 한편, 인트라베이티 이미징 프로토콜은 전이 또는 TMEM의 종양 미세 환경에서 세포의 운동, 기능 및 동적 상호 작용에 대한 실시간 정보를 제공한다.따라서 여기에 제시된 프로토콜은 암 세포 보급과 강하게 상관관계가 있는 TMEM 의존혈관 투과성의 직접적인 측정을 가능하게 하기 때문에, 따라서 이러한 프로토콜은 종양의 전이성 전위를 평가하기 위하여 이용될 수 있다. 이식에 적합한 종양 조직의 조각을 생성하려면 텍스트 프로토콜에 설명된 바와 같이 종양 을 베어링 마우스의 안락사로 시작합니다. 연기 후드에 얼음에 DMEM / F12 세포 배양 배지와 페트리 접시를 배치합니다.연기 후드에 마우스를 가지고 70 %에틸 알코올마우스의 복부를 살균. 멸균 장갑과 수술 도구를 사용하여 종양을 제거하고 페트리 접시에 넣습니다. 작은 조각으로 종양을 잘라, 그들은 페트리 접시에있는 동안 어떤 괴사 부분을 폐기.종양 조각을 받는 호스트로 이식하려면 텍스트 프로토콜에 설명된 바와 같이 유전자 조작된 형광표 대식세포로 자란 마우스를 마취시킵니다. 마취를 약 3%로 줄이고 건조를 방지하기 위해 마우스의 눈에 안과 연고를 적용합니다. 마우스의 네 번째 유방 선 이상에서 머리를 제거합니다.살균으로 피부를 청소 한 후 살균 된 계측기를 사용하여 네 번째 젖꼭지보다 약 2 ~ 3 밀리미터 작은 절개를하십시오. 매머 지방 패드가 노출 될 때까지 해부. 페트리 접시에서 종양 조각을 가지고 인공 세포 외 매트릭스에 코트.네 번째 유방 지방 패드 아래에 종양을 이식. 시아노아크릴레이트 접착제를 사용하여 절개를 닫습니다. 마지막으로, 동물의 식수에 enrofloxacin 항생제의 1 밀리리터를 추가합니다.마우스를 마취하고 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 꼬리 정맥 카테터를 삽입합니다. 성기보다 즉각적으로 발간되는 세로 중형 절개를 만들고 네 번째 유방 선의 우수한 측면의 수준으로 절개를 수행하십시오. 네 번째 유방 선의 우수한 측면에 절개 횡단을 수행.이 시점에서 혈액 공급을 손상시키지 않도록하는 것이 중요합니다. 플랩의 피부 쪽에 2센티미터 크기의 단단한 고무조각을 부착하여 피부 플랩을 안정화시하십시오. 종양은 고무에 의해 안정화되는 영역의 중심에 있어야합니다.사용자 정의 이미징 창 프레임의 외부 테두리에 시아노아크릴레이트의 작은 필름을 적용합니다. 이제 커버 유리의 중앙에 PBS의 작은 액적을 적용합니다. 시아노아크릴레이트의 조기 중합을 피하기 위해 창틀의 시아노아크릴레이트와 유리의 PBS 사이의 접촉을 피하십시오.실험실 닦아 주변 플랩 조직을 건조. 명확한 조리개 중심에 있는 종양으로 조직 플랩에 작은 화상 진찰 창을 부착합니다. 마취 된 마우스와 꼬리 정맥 카테터를 현미경 단계로 옮기.꼬리 정맥 카테터가 빠지지 않도록 주의하십시오. 이 시점에서 텍스트 프로토콜및 이전 JoVE 간행물에 설명된 대로 장기적인 인트라베이시브 이미징을 수행합니다. 더 높은 처리량 분석 및 더 큰 종양 엄호를 위해, TMEM 매개 혈관 투과성을 평가하기 위하여 고정된 조직에 있는 면역 형광을 이용하십시오.면역형 염색을 수행하기 위해 먼저 텍스트 프로토콜에 설명된 바와 같이 샘플을 준비한 다음, 20분 동안 끓는 점에 가까운 구연산에 잠긴 부분을 가열하여 항원 검색을 수행한다. 샘플을 실온으로 15-20분 간 식힌 후, PBS에서 매 세척 할 때마다 3 회 세척하십시오. 버퍼를 차단하는 데 60~90분 동안 차단한 다음, 엔도무신과 테트라메틸lrhodamine을 각각 대상으로 하는 1차 쥐와 신속한 항체의 혼합물로 시료를 배양한다.인큐베이션에 따라 PBST에서 샘플을 각각 2분 동안 세 번 세척합니다. 쥐 IgG및 급속 한 IgG에 대 한 이차 당나귀 항체의 혼합물으로 샘플을 인큐베이션, 다음 2 분 동안 PBST에서 샘플을 세 번 세척. 글리세롤이 없는 하드 마운팅 배지를 사용하여 일상적인 DAPI 염색을 수행하고 슬라이드를 장착합니다.샘플을 스캔할 때까지 어두운 곳에 보관합니다. 최적의 결과를 얻으려면 디지털 전체 슬라이드 스캐너에서 슬라이드를 스캔합니다. 이미지 분석을 수행하려면 디지털 병리학에 적합한 소프트웨어를 사용하여 사례당 10개의 고출력 필드를 캡처합니다.엔도무신 및 TMR 채널을 TIFF로 별도로 저장합니다. ImageJ를 사용하여 TIFF 파일을 업로드하고 8비트 이미지로 변환합니다. 8비트 이미지를 음수 제어 수준으로 임계값을 조정하고 엔도무신 및 TMR 마스크를 보여주는 두 개의 바이너드 이미지를 생성합니다.바이너리 도구에서 엔도무신 마스크의 채우기 구멍을 선택합니다. 임계값에 따라 Dextran 이미지를 생성하고 Dextran ROI로 저장합니다. 또한 임계값에 따라 엔도무신 이미지를 생성하고 혈관 ROI로 저장하여 반전된 엔도무신 이미지를 생성하고 외반 ROI로 저장합니다.다음으로 교차된 외외 ROI 및 Dextran ROI 이미지를 생성하고 엑스트라안 ROI로 저장합니다. 마지막으로 종양 ROI로 전체 이미지를 저장합니다. 외식 Dextran ROI 영역을 종양 ROI 영역으로 나누고 100을 곱하여 전체 종양에서 엑스트라칸이 커버하는 백분율 영역을 생성합니다.케이스당 10~20개의 고출력 필드에 대한 프로세스를 반복하고 각 케이스에 대해 평균 엑스트라큘러 Dextran을 생성합니다. 여기에 표시 된 형질 전환 동물 내에서 건강 한 개발 유방 선의 이미지. 혈관은 TMR Dextran에 의해 빨간색, 유방 연성 상피에 의해 표지되고, 녹색에 있는 형광 단백질 dendra2에 의해 표지되고, 대식세포는 시안 형광 단백질 에 의해 표지됩니다.대조적으로, 이식된 dendra2 표지된 침략적인 성성 암종은 표지된 대식세포 및 혈관을 가진 동물에서 표시됩니다. 건강한 폐 조직은 표지된 혈관과 마우스 내의 폐 화상 진찰 창을 통해 시각화되었습니다. 폐 전이는 표지된 대식세포와 혈관을 가진 형질세포로 종양 세포를 주입한 다음 분명합니다.여기에 는 유방의 이식 된 dendra2 표지 침습성 암내 고분자 체중 Dextran 라벨 신 혈관 형성 혈관의 시간 경과 인트라비탈 이미징 영화에서 스틸이 표시됩니다. 점선 노란색 선은 누설 이벤트 전, 도중 및 이후에 일시적인 혈관 누설 영역의 윤곽을 나타냅니다. TMEM 출입구는 라이브 이미징에서 캡처됩니다.다중 채널 면역 불면은 엔도무신, 고분자 체중 Dextran, DAPI와 함께 병합 된 이미지뿐만 아니라 해당 임계 혈관 및 외반 Dextran 마스크를 보여줍니다. TMEM 면역히스토케의 상응하는 순차적 부분도 도시된다. TMEM에서 멀리 떨어진 혈관 프로파일은 비 새는 혈관 프로파일로 나타나며 TMEM 관련 혈관 프로파일은 새는 혈관 프로파일로 나타납니다.종양의 외과 적 노출 동안 종양을 공급하는 혈관을 절단하지 않도록하는 것이 매우 중요합니다. 여기서 설명된 방법론은 TMEM 기능을 억제하거나, 혈관 투과성을 방지하거나, 심지어 종양 혈관을 정상화하여 충격과 효능을 측정하는 약물 치료와 결합될 수 있다. 이 프로토콜을 통해 우리는 화학요법이 혈관 투과성 및 암세포 보급을 향상시키고 실제로 이러한 전이성 변화가 TMEM 기능억제제의 공동 투여에 의해 우회될 수 있음을 입증했습니다.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

그만큼<em&gt; 초파리</em&gt; 가상적인 디스크 종양 모델 : 유전 모자이크를 사용하여 유전자 발현 및 종양 침윤의 시각화 및 정량화

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

연구

암 연구학

Longitudinal Intravital Imaging of Brain Tumor Cell Behavior in Response to an Invasive Surgical Biopsy

침략적인 외과 생검에 응하여 뇌종양 세포 행동의 경도 내 활력 화상 진찰

Biopsies are standard of care for cancer treatment and are clinically beneficial as they allow solid tumor diagnosis, prognosis, and personalized ...

Micromanipulation of Circulating Tumor Cells for Downstream Molecular Analysis and Metastatic Potential Assessment

하류 분자 분석 및 전이성 전위 평가를 위한 순환 종양 세포의 미세 조작

Blood-borne metastasis accounts for&#160;most cancer-related deaths and involves circulating tumor cells (CTCs) that are successful in establishing new ...

Analysis of Side Population in Solid Tumor Cell Lines

고형 종양 세포주에서 측면 인구의 분석

Cancer stem cells (CSCs) are an important cause of tumor growth, metastasis, and recurrence. Isolation and identification of CSCs are of great ...

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

종양 세포의 측면 꼬리 정맥 주입 다음 폐 전이의 병리학 적 분석

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

A Label-Free Segmentation Approach for Intravital Imaging of Mammary Tumor Microenvironment

유방 종양 미세환경의 생체 내 이미징을 위한 라벨 없는 세분화 접근법

The ability to visualize complex and dynamic physiological interactions between numerous cell types and the extracellular matrix (ECM) within a live tumor ...

Expanding the Comprehension of the Tumor Microenvironment using Mass Spectrometry Imaging of Formalin-Fixed and Paraffin-Embedded Tissue Samples

포르말린 고정 및 파라핀 임베디드 조직 샘플의 질량 분광법 이미징을 사용하여 종양 미세 환경에 대한 이해 확대

Advances in immune-based therapies have revolutionized cancer treatment and research. This has triggered growing demand for the characterization of the ...

Zebrafish Larvae as a Model to Evaluate Potential Radiosensitizers or Protectors

잠재적인 방사능 감작제 또는 보호제를 평가하기 위한 모델로서의 제브라피시 유충

Zebrafish are extensively used in several kinds of research because they are one of the easily maintained vertebrate models and exhibit several features ...

Multiparametric Tumor Organoid Drug Screening Using Widefield Live-Cell Imaging for Bulk and Single-Organoid Analysis

벌크 및 단일 오가노이드 분석을 위한 광시야 라이브 셀 이미징을 사용한 다중 파라미터 종양 오가노이드 약물 스크리닝

Patient-derived tumor organoids (PDTOs) hold great promise for preclinical and translational research and predicting the patient therapy response from ex ...

Multiplex Immunofluorescence and Spatial Image Analysis of the Tumor Microenvironment

Multiplex Immunofluorescence Combined with Spatial Image Analysis for the Clinical and Biological Assessment of the Tumor Microenvironment

Multiplex Immunofluorescence Combined with Spatial Image Analysis for the Clinical and Biological Assessment of the Tumor Microenvironment (Video) | JoVE 

종양 미세 환경의 임상 및 생물학적 평가를 위한 공간 이미지 분석과 결합된 Multiplex Immunofluorescence

The tumor microenvironment (TME) is composed of a plethora of different cell types, such as cytotoxic immune cells and immunomodulatory cells. Depending ...