Name: assessing tumor microenvironment of metastasis doorway-mediated vascular permeability associated with cancer cell dissemination using intravital imaging and fixed tissue analysis
Uploaded: 2019-06-26T14:00:00
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Nos gustaría agradecer al Analytical Imaging Facility (AIF) del Albert Einstein College of Medicine por su apoyo a las imágenes. Este trabajo fue apoyado por subvenciones del NCI (P30CA013330, CA150344, CA 100324 y CA216248), la SIG 1S10OD019961-01, el Centro de Biofotónica Gruss-Lipper y su Programa Integrado de Imágenes, y la Beca de Capacitación Ruth L. Kirschstein T32 de Montefiore para el Estudio del Microambiente Tumoral (CA200561).

GSK co-escribió el manuscrito, realizó imágenes para las figuras 1C y 3B, desarrolló un protocolo de análisis de tejido fijo y analizó e interpretó todos los datos; JMP co-escribió el manuscrito, y realizó la cirugía y la imagen intravital para las Figuras 1B,2C y 3A; LB & AC realizó la cirugía y la imagen intravital para la Figura 2B; RJ realizó la cirugía y la imagen intravital para la Figura 2A; JSC co-escribió el manuscrito y analizó e interpretó todos los datos; MHO co-escribió el manuscrito y analizó e interpretó todos los datos; y DE realizó la cirugía y la imagen intravital para la Figura 2D, co-escribió el manuscrito, desarrolló análisis de tejido fijo y protocolos de imágenes intravitales, y analizó e interpretó todos los datos.

Todos los experimentos con animales vivos deben llevarse a cabo de acuerdo con las pautas y regulaciones de uso y cuidado de los animales. Los procedimientos descritos en este estudio se llevaron a cabo de acuerdo con las regulaciones de los Institutos Nacionales de Salud sobre el cuidado y uso de animales experimentales y con la aprobación del Albert Einstein College of Medicine Animal Care and Use (IACUC).
1. Evaluación de la "permeabilidad de ráfaga" utilizando imágenes de animales vivos<...

Aquí, delineamos dos protocolos que se pueden aplicar para visualizar y cuantificar un tipo específico de permeabilidad vascular que está presente en las puertas de TMEM y se asocia con la interrupción de las uniones vasculares apretadas y adheridas. Este tipo de permeabilidad vascular es transitorio y controlado por el complejo de células TMEM tripartito, como se explicó anteriormente5. La capacidad de identificar y cuantificar la permeabilidad vascular asociada a TMEM es crucial para la ev...

Los avances recientes en nuestra comprensión de la metástasis oncológica han descubierto que la transición epitelial a mesenquimal (EMT) y la inducción de una subpoblación migratoria/invasiva de células cancerosas no son, por sí solas, suficientes para la diseminación hematogena 1. De hecho, anteriormente se pensaba que la metástasis de las células cancerosas se intravasa a través de la totalidad del endotelio asociado al cáncer, ya que la neovasculatura tumoral se caracteriza a menudo por una baja cobertura de pericita, y como tal, es altamente permeable y inestables2,3,4. Aunque son altamente sugestivas de funciones defectuosas dentro del tumor, las modificaciones vasculares durante la carcinogénesis no proporcionan evidencia según el se de que las células tumorales pueden penetrar los vasos sanguíneos fácilmente y de manera incontrolada. Las estadísticas de los estudios de imágenes intravitales (IVI), en los que las células tumorales están etiquetadas fluorescentemente y la vasculatura se etiqueta mediante la inyección intravenosa de sondas fluorescentes (como dextran o puntos cuánticos), muestran que, mientras que los vasos tumorales son uniformemente permeable a bajo peso molecular dextrans (por ejemplo, 70 kD), dextrans de alto peso molecular (155 kD) y células tumorales pueden cruzar el endotelio sólo en sitios especializados de intravasión que se encuentran preferentemente en el puntoderama vascular5, 6 , 7. Los análisis inmunohistoquímicos (IHC) utilizando modelos animales y material humano derivado del paciente han demostrado que estos sitios son "puertas" que se especializan en regular la permeabilidad vascular, local y transitoriamente, proporcionando una breve ventana de oportunidad de que las células cancerosas migratorias/invasivas entren en la circulación. Estas puertas se denominan "Microambiente tumoral de metástasis" o "TMEM", y, muy esperadamente, su densidad se correlaciona con un mayor riesgo de desarrollar enfermedad metastásica en pacientes con cáncer de mama8,9, 10.
Cada puerta TMEM consta de tres tipos distintos de células: un macrofaje perivascular, una célula tumoral que expresa excesivamente la proteína reguladora de actina mamífero habilitado (Mena), y una célula endotelial, todas en contacto físico directo entre sí1, 5,9,10,11,12,13. El evento clave para la función de TMEM como puerta de intravasión es la liberación localizada del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) en el vaso subyacente por el macroófago perivascular14. EL VEGF puede interrumpir las unión homotípica entre las células endoteliales15,16,17,18,19, un fenómeno que resulta en fugas vasculares transitorias, también conocida como permeabilidad "ráfaga" como se describe en los estudios IVI 5. Se ha demostrado que los macrófagos TMEM expresan el receptor de tirosina quinasa TIE2, que es necesario parala función TMEM mediada por VEGF y el acceso a estos macrófagos al nicho perivascular 5,20,21 , 22. Además de regular la diseminación y metástasis de las células cancerosas, se ha demostrado que los macrofagos TIE2+ son reguladores centrales de la angiogénesis tumoral21,22,23, 24,25,26,27,28,29,30,31. Como tal, los macrófagos TIE2+ representan un componente crítico del microambiente tumoral y el principal regulador de la cascada metastásica.
Para conceptualizar mejor la permeabilidad vascular mediada por TMEM (es decir, "bursting"), es muy importante distinguirla de otros modos de permeabilidad vascular que no están asociados con la disolución de las uniones celulares endoteliales. En un endotelio intacto (uno cuyas uniones apretadas y adheridas no se interrumpen), hay tres tipos principales de permeabilidad vascular: a) la pinocitosis, que puede, o no, acoplarse a la transcitosis del material ingerido; (b) transporte de material a través de fenestras endoteliales; y c) transporte de material a través de la vía paracelular, que está regulada por cruces herméticas endoteliales15,16,17,18,19,32 , 33 , 34. Aunque desregulados en muchos tumores, los modos antes mencionados de permeabilidad vascular se han descrito principalmente en el contexto de la fisiología normal del tejido y la homeostasis, cuyos extremos son tejidos con permeabilidad limitada ( por ejemplo, barrera hematoencefálica, barrera hematoencefálica) o permeabilidad abundante (p. ej., capilares fenestrados del aparato glomerular renal)34,35,36,37.
Utilizando imágenes intravitales multifotonas y microscopía de inmunofluorescencia multiplexada, somos capaces de distinguir entre la permeabilidad vascular mediada por TMEM ("ráfaga") y otros modos de permeabilidad vascular en tumores mamarios. Para lograresto, realizamos una sola inyección intravenosa de una sonda de alto peso molecular, etiqueta fluorescentemente en ratones. Los eventos de ráfaga espontánea pueden ser capturados usando imágenes intravitales en ratones vivos; o alternativamente, la extravasación de la sonda se puede cuantificar mediante estudios de colocalización con vasculatura de sangre (por ejemplo, CD31+ o Endomucin+) y puertas TMEM mediante microscopía de inmunofluorescencia. Los protocolos presentados aquí describen ambas técnicas, que podrían utilizarse de forma independiente o conjunta entre sí.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:681px;" width="682">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Anti-rabbit IgG (Alexa 488)</td>
			<td style="width:224px;">Life Technologies Corporation</td>
			<td style="width:155px;">A-11034</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-rat IgG (Alexa 647)</td>
			<td>Life Technologies Corporation</td>
			<td>A-21247</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1600-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Citrate</td>
			<td>Eng Scientific Inc</td>
			<td>9770</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cover Glass Slips</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72296-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cyanoacrylate Adhesive</td>
			<td>Henkel Adhesive</td>
			<td>1647358</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DAPI</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>FP1490</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dextran-Tetramethyl-Rhodamine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T1287</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM/F12</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11320-033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Endomucin (primary antibody)</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>sc-65495</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Enrofloxacin</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>84753076 v-06/2015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F2442</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fish Skin Gelatin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>G7765</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Insulin Syringe</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isofluorane</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>NDC 11695-6776-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Matrigel</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CB40234</td>
			<td>Artificial extracellular matrix</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Needle (30 G)</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>305128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphate Buffered Saline</td>
			<td>Life Technologies Corporation</td>
			<td>PBS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyethylene Tubing</td>
			<td>Scientific Commodities Inc</td>
			<td>BB31695-PE/1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pulse Oximeter</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>MouseOx</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Puralube Vet Ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>NDC 17033-211-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Quantum Dots</td>
			<td>Life Technologies Corporation</td>
			<td>Q21561MP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rubber</td>
			<td>McMaster Carr</td>
			<td>1310N14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TMR (primary antibody)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A6397</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tween-20</td>
			<td>MP Biologicals</td>
			<td>TWEEN201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Xylene</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>184835</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing tumor microenvironment of metastasis doorway-mediated vascular permeability associated with cancer cell dissemination using intravital imaging and fixed tissue analysis

La causa más común de mortalidad relacionada con el cáncer es la metástasis, un proceso que requiere la diseminación de las células cancerosas del tumor primario a los sitios secundarios. Recientemente, establecimos que la diseminación de células cancerosas en el cáncer de mama primario y en los sitios metastásicos en el pulmón ocurre sólo en las puertas llamadas Microambiente Tumoral de Metástasis (TMEM). El número de puerta tmEM es pronóstico para la recurrencia distante de la enfermedad metastásica en pacientes con cáncer de mama. Las puertas TMEM están compuestas por una célula cancerosa que expresa excesivamente la proteína reguladora de la actina Mena en contacto directo con un macrófago perivascular y proangiogénico que expresa altos niveles de TIE2 y VEGF, donde ambas células están estrechamente unidas a una sangre recipiente endotelial. Las células cancerosas pueden entrar en travas a través de las puertas de TMEM debido a la permeabilidad vascular transitoria orquestada por la actividad articular del macrófago asociado a TMEM y la célula cancerosa mena-expressing asociada a TMEM. En este manuscrito, describimos dos métodos para la evaluación de la permeabilidad vascular transitoria mediada por TMEM: imágenes intravitales e inmunofluorescencia de tejido fijo. Aunque ambos métodos tienen sus ventajas y desventajas, la combinación de los dos puede proporcionar los análisis más completos de la permeabilidad vascular mediada por TMEM, así como los requisitos previos microambientales para la función TMEM. Dado que el proceso metastásico en el cáncer de mama, y posiblemente otros tipos de cáncer, implica la diseminación de células cancerosas a través de las puertas TMEM, es esencial emplear métodos bien establecidos para el análisis de la actividad de las puertas TMEM. Los dos métodos descritos aquí proporcionan un enfoque integral para el análisis de la actividad de las puertas de TMEM, ya sea en animales ingenuos o tratados farmacológicamente, lo cual es de suma importancia para los ensayos preclínicos de agentes que previenen las células cancerosas difusión a través de TMEM.

Los procedimientos experimentales descritos en este artículo de protocolo se resumen e ilustran brevemente en la Figura 1A-C.
Para medir la permeabilidad vascular mediada por TMEM ("actividad de ráfaga") y para reducir el ruido experimental de otros modos de permeabilidad vascular (es decir, transcelular y paracelular, como se explica en la introducción), realizamos vía intravenosa (es decir, v.) inyección de sondas de alto peso molecular, co...

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Assessing Tumor Microenvironment of Metastasis Doorway-Mediated Vascular Permeability Associated with Cancer Cell Dissemination using Intravital Imaging and Fixed Tissue Analysis

Evaluación del microambiente tumoral de la permeabilidad vascular mediada por la puerta de la puerta asociada con la diseminación de células cancerosas mediante imágenes intravitales y análisis de tejido fijo

Describimos dos métodos para evaluar la permeabilidad vascular transitoria asociada con el microambiente tumoral de la función de la puerta de metástasis (TMEM) y la intravasación de células cancerosas mediante inyección intravenosa de dextran de alto peso molecular (155 kDa) en ratones. Los métodos incluyen imágenes intravitales en animales vivos y análisis de tejido fijo utilizando inmunofluorescencia.

The most common cause of cancer related mortality is metastasis, a process that requires dissemination of cancer cells from the primary tumor to secondary ...

Estas técnicas complementarias evalúan y miden la permeabilidad de la vasculatura tumoral utilizando Dextran de alto peso molecular. El protocolo de tejido fijo ofrece una mayor cobertura tumoral, es de alto rendimiento y no requiere equipos de imágenes multifotográfica. Por otro lado, el protocolo de imágenes intravital ofrece información en tiempo real sobre la cinética, la función y la interacción dinámica de las células en el microambiente tumoral de metástasis o TMEM.Así que los protocolos presentados aquí permiten la medición directa de la permeabilidad vascular dependiente de TMEM que se correlaciona fuertemente con la diseminación de células cancerosas, por lo tanto, estos protocolos se pueden utilizar para evaluar el potencial metastásico de los tumores. Para generar trozos de tejido tumoral adecuados para el trasplante, comience con la eutanasia de ratones portadores de tumores como se describe en el protocolo de texto. Coloque un plato de Petri con medio de cultivo celular DMEM/F12 sobre hielo en la campana de humo.Lleve el ratón a la campana de humo y desinfecte el abdomen del ratón con 70% de alcohol etílico. Usando guantes estériles y herramientas quirúrgicas, retire los tumores y colóquelos en el plato Petri. Corta el tumor en trozos pequeños, descartando las porciones necróticas mientras están en el plato Petri.Para trasplantar las piezas tumorales en huéspedes receptores, anestesia a los ratones que han sido criados con macrófagos modificados genéticamente y con etiqueta fluorescente, tal como se describe en el protocolo de texto. Reduzca la anestesia a aproximadamente 3%isofluorano y aplique pomada oftálmica a los ojos del ratón para evitar el secado. Retire el vello de la cuarta glándula mamaria del ratón.Después de limpiar la piel con antiséptico, utilice instrumentos esterilizados para hacer una pequeña incisión aproximadamente de dos a tres milímetros sólo inferior al cuarto pezón. Disecciona hasta que la almohadilla de grasa mamaria esté expuesta. Tome una pieza tumoral de la placa De Petri y cubra la matriz extracelular artificial.Tumores de trasplante debajo de la cuarta almohadilla de grasa mamaria. Cierre la incisión con adhesivo de cianoacrilato. Por último, añadir un mililitro de antibiótico enrofloxacino al agua potable de los animales.Anestesar el ratón e insertar un catéter de vena de cola como se describe en el protocolo de texto. Hacer una incisión longitudinal de línea media comenzando inmediatamente superior a los genitales y llevar la incisión hasta el nivel del aspecto superior de la cuarta glándula mamaria. Lleve la incisión transversal al aspecto superior de la cuarta glándula mamaria.Es fundamental evitar comprometer el suministro de sangre en este punto. Estabilice la solapa de la piel colocando un pequeño trozo de goma rígida que mide de dos por dos centímetros al lado de la piel de la solapa. Los tumores deben estar en el centro de la zona que está siendo estabilizada por el caucho.Aplique una pequeña película de cianoacrilato en el borde exterior del marco de la ventana de imágenes a medida. Ahora aplique una pequeña gota de PBS en el centro del vidrio de la cubierta. Evite el contacto entre el cianoacrilato en el marco de la ventana y el PBS en el vidrio para evitar la polimerización prematura del cianoacrilato.Seque el tejido de la solapa circundante con una toallita de laboratorio. Fije la pequeña ventana de imágenes a la solapa de tejido con el tumor en el centro de la abertura transparente. Transfiera el ratón anestesiado y el catéter de vena de cola a la etapa del microscopio.Tenga mucho cuidado para asegurarse de que el catéter de la vena de cola no se caiga. En este punto, realice imágenes intravitales a largo plazo como se describe en el protocolo de texto y en nuestra publicación anterior de JoVE. Para un análisis de mayor rendimiento y una mayor cobertura tumoral, utilice la inmunofluorescencia en el tejido fijo para evaluar la permeabilidad vascular mediada por TMEM.Para realizar la tinción de inmunofluorescencia, primero prepare las muestras como se describe en el protocolo de texto, luego realice la recuperación de antígenos calentando las secciones sumergidas en citrato cerca del punto de ebullición durante 20 minutos. Después de dejar que las muestras se enfríen a temperatura ambiente durante 15 a 20 minutos, lave las muestras en PBS tres veces durante dos minutos cada lavado. Bloquear durante 60 a 90 minutos en tampón de bloqueo, luego incubar muestras con una mezcla de rata primaria y anticuerpos rápidos que se dirigen a la endomucin y la tetrametilrhodamina respectivamente.Después de la incubación, lave las muestras tres veces en PBST durante dos minutos cada una. Incubar muestras con una mezcla de anticuerpos de burro secundarios contra La Rata IgG y IgG rápido, luego lavar las muestras tres veces en PBST durante dos minutos cada una. Realice una tinción DAPI de rutina y monte las diapositivas utilizando un medio de montaje duro sin glicerol.Guarde las muestras en un lugar oscuro hasta escanear. Para obtener resultados óptimos, escanee las diapositivas en un escáner digital de diapositivas completa. Para realizar análisis de imágenes, capture 10 campos de alta potencia por caso utilizando cualquier software adecuado para la patología digital.Guarde los canales endomucin y TMR por separado como TIFF. Con ImageJ, cargue los archivos TIFF y conviértalos en imágenes de 8 bits. Umbral las imágenes de 8 bits al nivel del control negativo y generar dos imágenes binarizadas que muestran las máscaras endomucin y TMR.En las herramientas Binarias, seleccione Rellenar taladros en la máscara de endomucin. Genere la imagen de Dextran con umbral y guárdela como ROI de Dextran. Además, genere la imagen de endomucin umbral y guárdela como ROI vascular y genere la imagen endomucin invertida y guárdela como ROI extravascular.A continuación, genere la imagen de ROI Extravascular intersectado y ROI Dextran y guárdela como ROI Extravascular Dextran. Finalmente guarde toda la imagen como Tumor ROI. Divida el área de ROI Extravascular Dextran por el área de ROI tumoral y multiplique por 100 para generar el área porcentual que cubre el Dextran Extravascular en todo el tumor.Repita el proceso para 10 a 20 campos de alta potencia por caso y genere un Dextran Extravascular promedio para cada caso. Aquí se muestra una imagen de una glándula mamaria sana y en desarrollo dentro de un animal transgénico. La vasculatura está etiquetada por TMR Dextran en rojo, epitelio dúctil mamario está etiquetado por la proteína fluorescente dendra2 en verde, y los macrófagos están etiquetados por una proteína fluorescente cian.Por el contrario, se muestra un carcinoma dúctil invasivo con etiqueta dendra2 trasplantado en un animal con macrófagos y vasos etiquetados. El tejido pulmonar sano se visualizó a través de una ventana de imágenes pulmonares dentro de un ratón con vasculatura etiquetada. Las metástasis pulmonares son evidentes después de la inyección de células tumorales en un animal transgénico con macrófagos etiquetados y vasculatura.Aquí se muestran imágenes fijas de una película de imágenes intravitales de alto nivel molecular de vasos neo-angiogénicos con etiqueta Dextran de alto peso molecular dentro de un carcinoma invasivo de la mama con etiqueta de dendra2 trasplantado. La línea amarilla punteada denota el contorno del área de fuga vascular transitoria antes, durante y después del evento de fuga. Una puerta TMEM se captura en imágenes en vivo.La inmunofluorescencia multicanal muestra endomucin, de alto peso molecular Dextran, su imagen combinada junto con DAPI, así como los vasos sanguíneos umbralados correspondientes y máscaras Dextran extravasculares. También se muestra la sección secuencial correspondiente de la inmunohistoquímica TMEM. El perfil vascular alejado de TMEM aparece como un perfil vascular no fugado, mientras que el perfil vascular asociado a TMEM aparece como un perfil vascular con fugas.Es muy importante evitar cortar los vasos sanguíneos que suministran el tumor durante la exposición quirúrgica del tumor. La metodología descrita aquí se puede combinar con el tratamiento farmacológico, lo mismo que inhibe la función TMEM, la prevención de la permeabilidad vascular, o incluso la normalización de la vasculatura tumoral para medir su impacto y eficacia. Con estos protocolos hemos demostrado previamente que la quimioterapia mejora la permeabilidad vascular y la diseminación de células cancerosas y, de hecho, que estos cambios pro-metastásicos pueden ser eludidos por la administración conjunta de inhibidores de la función TMEM.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

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los<em&gt; Drosophila</em&gt; Imaginal modelo de tumor de disco: visualización y cuantificación de la expresión génica y la invasividad tumoral Uso Genético Mosaicos

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

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Imagen intravital longitudinal del comportamiento de las células tumorales cerebrales en respuesta a una biopsia quirúrgica invasiva

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Micromanipulación de células tumorales circulantes para análisis molecular descendente y evaluación potencial metastásica

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Expanding the Comprehension of the Tumor Microenvironment using Mass Spectrometry Imaging of Formalin-Fixed and Paraffin-Embedded Tissue Samples

Ampliación de la comprensión del microambiente tumoral mediante imágenes de espectrometría de masas de muestras de tejido fijadas en formalina e incrustadas en parafina

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Larvas de pez cebra como modelo para evaluar posibles radiosensibilizadores o protectores

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Multiparametric Tumor Organoid Drug Screening Using Widefield Live-Cell Imaging for Bulk and Single-Organoid Analysis

Detección multiparamétrica de fármacos organoides tumorales mediante imágenes de células vivas de campo amplio para análisis a granel y de un solo organoide

Patient-derived tumor organoids (PDTOs) hold great promise for preclinical and translational research and predicting the patient therapy response from ex ...

Multiplex Immunofluorescence and Spatial Image Analysis of the Tumor Microenvironment

Multiplex Immunofluorescence Combined with Spatial Image Analysis for the Clinical and Biological Assessment of the Tumor Microenvironment

Multiplex Immunofluorescence Combined with Spatial Image Analysis for the Clinical and Biological Assessment of the Tumor Microenvironment (Video) | JoVE 

Inmunofluorescencia múltiple combinada con análisis de imágenes espaciales para la evaluación clínica y biológica del microambiente tumoral

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