Name: assessing tumor microenvironment of metastasis doorway-mediated vascular permeability associated with cancer cell dissemination using intravital imaging and fixed tissue analysis
Uploaded: 2019-06-26T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessing Tumor Microenvironment of Metastasis Doorway-Mediated Vascular Permeability Associated with Cancer Cell Dissemination using Intravital Imaging and F

Biz görüntüleme desteği için Albert Einstein Tıp Koleji 'nde analitik görüntüleme tesisi (AıF) teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma NCı (P30CA013330, CA150344, CA 100324 ve CA216248), SIG 1S10OD019961-01, Gruss-Lipper Biophotonics merkezi ve entegre görüntüleme programı ve Montefiore 's Ruth L. Kirschstein T32 cerrahlar eğitim hibe tarafından destekleniyordu Tümör mikroçevre çalışması için (CA200561).

GSK el yazması, şekil 1C ve 3B için görüntüleme gerçekleştirilen, sabit doku analizi protokolü geliştirdi ve analiz ve tüm verileri yorumlanan; JMP el yazması yazdı ve Şekil 1B, 2C ve 3A için cerrahi ve intravital görüntüleme yapıldı; LB &AMP; AC , şekil 2B için cerrahi ve intravital görüntüleme işlemi gerçekleştirdi; RJ , Şekil 2A için cerrahi ve intravital görüntüleme işlemi gerçekleştirdi; JSC Co-el yazması yazdı ve analiz ve tüm verileri yorumlanan; Mho Co-el yazması yazdı ve analiz ve tüm verileri yorumlanan; ve de şekil 2D için cerrahi ve intravital görüntüleme gerçekleştirilen, el yazması ortak yazdı, sabit doku analizi ve intravital görüntüleme protokolleri geliştirdi, ve analiz ve tüm verileri yorumlanan.

Canlı hayvanları kullanan tüm deneyler hayvan kullanımı ve bakım kuralları ve yönetmeliklerine uygun olarak yapılmalıdır. Bu çalışmada açıklanan prosedürler, deneysel hayvanların bakımı ve kullanımı ile ilgili Ulusal Sağlık Enstitüleri yönetmeliklerine uygun olarak ve Albert Einstein Tıp Koleji hayvan bakımı ve kullanımı onayı ile yürütülmüştür. Komitesi (ıESUC).
1. canlı hayvan görüntüleme kullanarak "patlama geçirgenliği" değerlendirilmesi
<ol>...

Burada, TMEM kapılardan mevcut olan belirli bir vasküler geçirgenlik tipini görselleştirmeye ve ölçmek için uygulanabilir iki protokol özetlemektedir ve damar geçirmez ve yapışan kavşaların bozulması ile ilişkilidir. Vasküler geçirgenlik bu tür geçici ve üçlü TMEM hücre kompleksi tarafından kontrol edilir, yukarıda açıklandığı gibi5. TMEM-Associated vasküler geçirgenliği belirlemek ve ölçmek yeteneği, bir yanlısı metastatik kanser hücresi mikroortamının de...

Kanser metastani anlayışımızın son gelişmeler epitelyal-mezenkimal geçiş (EMT) ve bir göç/invazif kanser hücresi alt nüfus indüksiyonu, kendileri tarafından, Hematojen yayma için yeterli olmadığını ortaya çıkardı 1. Nitekim, daha önce tümör neovasküle genellikle düşük perikayt kapsamı ile karakterize olduğu gibi kanser ilişkili endotelyum bütünlüğü ile metasürleme kanser hücrelerinin intravasate düşünülmektedir, ve bu şekilde, çok geçirgen ve kararsız2,3,4. Tümör içindeki kusurlu fonksiyonların son derece düşündürmesine karşın, karsinogenez sırasında vasküler değişiklikler, tümör hücrelerinin kan damarlarını kolayca ve kontrollü olmayan bir şekilde nüfuz edebileceğine dair kanıt sağlamaz. Tümör hücrelerinin floresan olarak etiketlendiği intravital görüntüleme (IVI) çalışmalarından gelen Öngörüler (dekstrus veya kuantum noktaları gibi), damarsal flüoresan probların (örneğin dekstran veya Quantum dots), intravenöz enjeksiyonu ile etiketlenmiştir, tümör damarlarının eşit olduğu düşük molekül ağırlığı çözeltilerini (örneğin 70 KD), yüksek molekül ağırlığı çözeltilerini (155 KD) ve tümör hücrelerinin geçirgen endotelyum sadece, bir vasküler şube noktasında tercihen bulunan konvülsyon özel sitelerde çapraz olabilir5, 6 , 7. immunohistokimyasal (IHC) analiz hayvan modelleri ve insan hasta türevi malzeme kullanarak bu sitelerin "kapı" olduğunu göstermiştir vasküler geçirgenlik düzenleyen uzmanlaşmak, yerel ve geçmeli, kısa bir pencere sağlayarak göç/invazif kanser hücreleri için fırsat dolaşım girmek için. Bu kapılar "metastaz tümör mikroçevre" veya "tmem" olarak adlandırılır, ve, oldukça expectedly, onların yoğunluğu meme kanseri hastalarda metastatik hastalık gelişimi riski ile ilişkilidir8,9, 10' a kadar.
Her tmem kapı hücreleri üç farklı türde oluşur: bir perivasküler makrophage, bir tümör hücresi üzerinde akin-düzenleyici protein memeli etkin (Mena) ifade, ve bir endotel hücre, hepsi birbirleriyle doğrudan fiziksel temas1, 5,9,10,11,12,13. Bir konvülsyon kapı olarak tmem işlevi için önemli olay vasküler endotel büyüme faktörü (VEGF) perivasküler makrophage14tarafından altta yatan gemi üzerinde lokalize salınım olduğunu. VEGF, endotel hücreleri arasındaki homotipik kavşakları bozabilir15, 16,17,18,19, geçici vasküler kaçak sonuçları bir fenomen, ayrıca "patlama" geçirgenliği olarak bilinen IVI çalışmaları 5' te açıklanmıştır. Tmem macrofajlar, VEGF-aracılı tmem fonksiyonu için gerekli olan Tirozin kinaz reseptörü TIE2, perivasküler niş için bu makrofajların homing ifade gösterilmiştir5,20,21 , 22. kanser hücresi yayılması ve metastezinin düzenlenmesi ek olarak, TIE2+ makrofajlar tümör anjiyogenezi merkezi regülatörleri olarak gösterildi21,22,23, 24, 25,26,27,28,29,30,31. Bu nedenle, TIE2+ macrofajlar tümör mikroortamının önemli bir bileşeni ve metastatik basamakların ana regülatörü temsil eder.
Daha iyi TMEM-aracılı vasküler geçirgenliği (yani "patlama") kavramsallaştırmak için, endotel hücre-hücre kavşak kesilmesi ile ilişkili olmayan vasküler geçirgenlik diğer modlarından ayırt etmek çok önemlidir. Bozulmamış bir endotelium (sıkı ve yapışan kavşakların bozulmamış olduğu), vasküler geçirgenlik üç ana türü vardır: (a) pinsitoz, hangi olabilir, ya da olmayabilir, yutulan malzemenin transkyumuna birleşebilir; (b) malzemenin endotel Fenestrae ile taşınması; ve (c) endotel sıkı kavşak15,16,17,18,19,32 tarafından düzenlenmiş paracellular yolu ile malzemenin taşınması, , 33 , 34. birçok tümörde tanımlanmasına karşın, yukarıda bahsedilen vasküler geçirgenlik modları çoğunlukla normal doku fizyolojisi ve homeostaz bağlamında tanımlanmıştır, bu da aşırı olan dokuları sınırlı geçirgenlik ( Örneğin, kan-beyin bariyeri, kan-testis bariyer), ya da bol geçirgenlik (örneğin, böbrek glomerüler cihaz Fenestre kapillaries)34,35,36,37.
Multifoton intravital görüntüleme ve Multiplexed immünofluorescence mikroskopi kullanarak, meme tümörlerinde TMEM-aracılı vasküler geçirgenlik ("patlama") ve diğer vasküler geçirgenlik modları arasında ayrım yapabiliriz. Bunu başarmak için, yüksek molekül ağırlığı, farelerde floresan etiketli prob tek bir İntravenöz enjeksiyon gerçekleştiriyoruz. Daha sonra spontan patlama olayları canlı farelerde intravital görüntüleme kullanılarak yakalanabilir; veya alternatif olarak, probun ekstrasitasyonu kan damarıyla (örn. CD31+ veya endomucin+) ortak lokalizasyon çalışmaları ve immünofluoresesans mikroskopisi kullanılarak tmem kapı ile nicelik olabilir. Burada sunulan protokoller, bağımsız olarak ya da birbirleriyle birlikte kullanılabilecek bu tekniklerin her ikisini de tarif eder.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:681px;" width="682">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:239px;">Anti-rabbit IgG (Alexa 488)</td>
			<td style="width:224px;">Life Technologies Corporation</td>
			<td style="width:155px;">A-11034</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-rat IgG (Alexa 647)</td>
			<td>Life Technologies Corporation</td>
			<td>A-21247</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1600-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Citrate</td>
			<td>Eng Scientific Inc</td>
			<td>9770</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cover Glass Slips</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72296-08</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cyanoacrylate Adhesive</td>
			<td>Henkel Adhesive</td>
			<td>1647358</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DAPI</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>FP1490</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dextran-Tetramethyl-Rhodamine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T1287</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM/F12</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11320-033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Endomucin (primary antibody)</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>sc-65495</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Enrofloxacin</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>84753076 v-06/2015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F2442</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Fish Skin Gelatin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>G7765</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Insulin Syringe</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isofluorane</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>NDC 11695-6776-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Matrigel</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CB40234</td>
			<td>Artificial extracellular matrix</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Needle (30 G)</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>305128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphate Buffered Saline</td>
			<td>Life Technologies Corporation</td>
			<td>PBS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyethylene Tubing</td>
			<td>Scientific Commodities Inc</td>
			<td>BB31695-PE/1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pulse Oximeter</td>
			<td>Kent Scientific</td>
			<td>MouseOx</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Puralube Vet Ointment</td>
			<td>Dechra</td>
			<td>NDC 17033-211-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Quantum Dots</td>
			<td>Life Technologies Corporation</td>
			<td>Q21561MP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Rubber</td>
			<td>McMaster Carr</td>
			<td>1310N14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TMR (primary antibody)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A6397</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tween-20</td>
			<td>MP Biologicals</td>
			<td>TWEEN201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Xylene</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>184835</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessing tumor microenvironment of metastasis doorway-mediated vascular permeability associated with cancer cell dissemination using intravital imaging and fixed tissue analysis

Kanserle ilgili mortalite en yaygın nedeni metastaşı, primer tümörden ikincil sitelere kanser hücrelerinin yayılması gerektiren bir süreçtir. Son zamanlarda, primer meme kanserinde kanser hücresi yaygınlaştırılması ve akciğerde metastaz yapan ortamlarda sadece metastatik tümör mikroçevre (TMEM) denilen kapılardan oluşur. Meme kanserinde metastatik hastalığın uzak nüksü için TMEM kapı numarası prognostiktir. Tmem kapılar, bir perivasküler ile doğrudan temas içinde aktin düzenleyici protein Mena aşırı ifade eden bir kanser hücresinden oluşur, TIE2 ve VEGF yüksek düzeyde ifade eden proanjiyojenik makrophaj, bu hücrelerin her ikisi de sıkıca bir kan bağlı olduğu damar endotel hücresi. Kanser hücreleri tmem-ilişkili makrophage ve TMEM-ilişkili Mena-ifade kanser hücresi ortak aktivite tarafından düzenlenmiş geçici vasküler geçirgenlik nedeniyle t kapı yoluyla intravasate olabilir. Bu yazıda, TMEM-aracılı geçici vasküler geçirgenliğin değerlendirilmesi için iki yöntem açıklanmaktadır: intravital görüntüleme ve sabit doku immunofluorescence. Her iki yöntem de avantajları ve dezavantajları olmasına rağmen, iki birleştirerek tmem-mediated vasküler geçirgenlik ve TMEM işlevi için mikroçevresel önkoşulların en eksiksiz analizleri sağlayabilir. Meme kanserinde metastatik süreç ve muhtemelen diğer kanser türleri, TMEM kapı yoluyla kanser hücresi yayma içerir, bu TMEM kapı aktivitesinin analizi için iyi kurulan Yöntemler istihdam esastır. Burada açıklanan iki yöntem, kanser hücresini engelleyen ajanların klinik öncesi denemeleri için önemli olan saf veya farmakolojik olarak tedavi edilen hayvanlarda TMEM kapı aktivitesinin analizine kapsamlı bir yaklaşım sağlar. TMEM ile yaygınlaştırılması.

Bu Protokol makalesinde açıklanan deneysel yordamlar kısaca özetlenmiştir ve Şekil 1A-C' d e gösterilmektedir.
TMEM-aracılı vasküler geçirgenliği ölçmek ("patlama aktivitesi") ve vasküler geçirgenlik diğer modlarından deneysel gürültüyü azaltmak için (örneğin, tanıtımlarda açıklandığı gibi, transselüler ve paracellular), intravenöz (serum) yüksek moleküler ağırlık probları enjeksiyon, 155 gibi kDa dextran, t...

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Tumor Microenvironment of Metastasis Doorway-Mediated Vascular Permeability Associated with Cancer Cell Dissemination using Intravital Imaging and F

Assessing Tumor Microenvironment of Metastasis Doorway-Mediated Vascular Permeability Associated with Cancer Cell Dissemination using Intravital Imaging and Fixed Tissue Analysis

Intravital görüntüleme ve sabit doku analizi kullanılarak kanserli hücre yaygınlaştırılması ile Ilişkili Metasküler kapı-aracılı vasküler geçirgenlik tümör Mikroortamının değerlendirilmesi

Biz metastazın tümör mikroortamı ile ilişkili geçici vasküler geçirgenliği değerlendirmek için iki yöntem tarif (tmem) kapı fonksiyonu ve kanser hücresi konvülsyon yüksek molekül ağırlığı İntravenöz enjeksiyon kullanarak (155 kDa) farelerde dekstran. Yöntemleri, canlı hayvanların intravital görüntüleme ve immünofluorescence kullanarak sabit doku analizi içerir.

The most common cause of cancer related mortality is metastasis, a process that requires dissemination of cancer cells from the primary tumor to secondary ...

Bu tamamlayıcı teknikler, yüksek molekül ağırlıklı Dekstran kullanarak tümör vaskülatür geçirgenliğini değerlendirir ve ölçer. Sabit doku protokolü daha büyük tümör kapsama alanı sunar, yüksek iş artışı dır ve multifoton görüntüleme ekipmanı gerektirmez. Öte yandan, intravital görüntüleme protokolü metastaz veya TMEM tümör mikroortamında hücrelerin kinetik, fonksiyon ve dinamik etkileşim hakkında gerçek zamanlı bilgi sunuyor.Yani burada sunulan protokoller, kanser hücresi yaygınlaşması ile güçlü bir şekilde ilişkili olan TMEM'e bağlı vasküler geçirgenliğin doğrudan ölçülmesini sağlar, bu nedenle bu protokoller tümörlerin metastatik potansiyelini değerlendirmek için kullanılabilir. Transplantasyona uygun tümör dokusu parçaları üretmek için metin protokolünde açıklandığı gibi tümör taşıyan farelerin ötanazisi ile başlar. DMEM/F12 hücre kültürü ortamına sahip petri kabını duman kaputundaki buzüzerine yerleştirin.Fareyi duman kaputuna getirin ve farenin karnını %70 etil alkolle dezenfekte edin. Steril eldiven ler ve cerrahi aletler kullanarak, tümörleri çıkarın ve Petri kabına yerleştirin. Onlar Petri çanak iken herhangi bir nekrotik porsiyon atarak, küçük parçalar halinde tümör kesin.Tümör parçalarını alıcı konaklara nakletmek için, metin protokolünde açıklandığı gibi genetiği değiştirilmiş, floresan olarak etiketlenmiş makrofajlarla yetiştirilen fareleri anesteziye alın. Anesteziyi yaklaşık %3 izofluorane düşürün ve kurumasını önlemek için farenin gözlerine oftalmik merhem uygulayın. Farenin dördüncü meme bezi üzerinde saç çıkarın.Antiseptik ile cilt temizledikten sonra, sadece dördüncü meme aşağı yaklaşık 2-3 milimetre küçük bir kesi yapmak için sterilize aletleri kullanın. Meme yağ yastığı açığa çıkana kadar inceleyin. Petri kabından bir tümör parçası alın ve yapay hücre dışı matris ceket.Dördüncü meme yağ yastığının altında nakil tümörleri. Kesiyi siyanoakrilat yapıştırıcıkullanarak kapatın. Son olarak, hayvanların içme suyuna bir mililitre enrofloksasin antibiyotik ekleyin.Fareyi anesthetize edin ve metin protokolünde açıklandığı gibi bir kuyruk ven kateteri takın. Genital yönden hemen üstün başlayan uzunlamasına bir orta hat kesisi yapın ve kesiyi dördüncü meme bezinin üstün yönü seviyesine kadar taşıyın. Dördüncü meme bezinin üstün yönü için kesi enine taşıyın.Bu noktada kan akımı ödün önlemek için önemlidir. Flepin deri tarafına iki şer santimetre ölçen küçük bir sert kauçuk parçasını yapıştırarak cilt kapağını stabilize edin. Tümörler kauçuk tarafından stabilize edilen alanın merkezinde olmalıdır.Özel yapım görüntüleme pencere çerçevesinin dış kenarına küçük bir siyanoakrilat filmi uygulayın. Şimdi kapak cam ortasına PBS küçük bir damlacık uygulayın. Siyanoakrilin erken polimerizasyonunu önlemek için pencere çerçevesi üzerindeki siyanoakrilat ile camüzerindeki PBS arasındaki temastan kaçının.Bir laboratuvar mendil ile çevreleyen flep dokusu kuru. Berrak diyafram ın merkezindeki tümörle doku flebi için küçük görüntüleme penceresi yapıştırın. Anestezili fare ve kuyruk damar kateterini mikroskop aşamasına aktarın.Kuyruk ven kateterinin düşmemesini sağlamak için çok dikkatli olun. Bu noktada, metin protokolünde ve önceki JoVE yayınımızda açıklandığı gibi uzun süreli intravital görüntüleme gerçekleştirin. Daha yüksek iş analizi ve daha büyük tümör kapsamı için, TMEM aracılı vasküler geçirgenliği değerlendirmek için sabit dokuda immünoresans kullanın.İmmünofloresan boyama gerçekleştirmek için, önce metin protokolünde açıklandığı gibi örnekleri hazırlayın, ardından kaynama noktasına yakın bir yerde sitrata batırılmış bölümleri 20 dakika ısıtarak antijen alımı yapın. Numunelerin oda sıcaklığına kadar 15-20 dakika soğumasını bekleyin, numuneleri pbs'de her yıkamada iki dakika boyunca üç kez yıkayın. Tampon engelleme 60 ila 90 dakika için blok, daha sonra sırasıyla endomucin ve tetrametethylrhodamine hedef birincil sıçan ve hızlı antikorların bir karışımı ile örnekleri kuluçka.Kuluçkadan sonra, örnekleri PBST'de üçer kez ikişer dakika yıkayın. Rat IgG ve hızlı IgG karşı ikincil eşek antikorları karışımı ile inkübün örnekleri, daha sonra iki dakika her iki dakika PBST üç kez yıkama. Rutin bir DAPI boyama gerçekleştirin ve gliserol içermeyen sert montaj ortamı kullanarak slaytlar monte.Örnekleri tarayana kadar karanlık bir yerde saklayın. En iyi sonuçlar için, slaytları dijital tüm slayt tarayıcıda tarayın. Görüntü analizi yapmak için, dijital patolojiye uygun herhangi bir yazılımı kullanarak her durumda 10 yüksek güç alanı yakalayın.Endomucin ve TMR kanallarını TIFF olarak ayrı ayrı kaydedin. ImageJ'i kullanarak, TIFF dosyalarını yükleyin ve 8 bit lik görüntülere dönüştürün. 8 bitlik görüntüleri negatif denetim düzeyine getirin ve endomucin ve TMR maskelerini gösteren iki binarized görüntü oluşturun.İkili araçlardan, endomucin maskesiüzerindeki Boşlukları Doldurun'u seçin. Eşikli Dextran görüntüsünü oluşturun ve Dextran Yatırım Getirisi olarak kaydedin. Ayrıca, eşikli endomucin görüntü oluşturmak ve Vasküler Yatırım Getirisi olarak kaydetmek ve ters endomucin görüntü oluşturmak ve Ekstravasküler Yatırım Getirisi olarak kaydedin.Sonra kesişen Ekstravasküler RoI ve Dextran ROI görüntü oluşturmak ve Ekstravasküler Dextran ROI olarak kaydedin. Son olarak Tümör Yatırım Getirisi olarak tüm görüntü kaydedin. Ekstravasküler Dekstran Yatırım Getirisi alanını Tümör Yatırım Getirisi alanına bölün ve Ekstravasküler Dekstran'ın tüm tümörde kapladığı yüzde alanı oluşturmak için 100 ile çarpın.Her vaka için 10 ila 20 yüksek güç alanı için işlemi tekrarlayın ve her durum için ortalama bir Ekstravasküler Dekstran oluşturun. Burada gösterilen bir transgenik hayvan içinde sağlıklı, gelişmekte olan meme bezi bir görüntüdür. Vaskülatür Kırmızı TMR Dextran tarafından etiketlenir, meme sünek epitel yeşil floresan protein dendra2 ile etiketlenir, ve makrofajlar bir siyan floresan protein ile etiketlenir.Buna karşılık, nakledilen dendra2 etiketli invaziv sünek karsinom etiketli makrofajlar ve damarlar ile bir hayvan gösterilir. Sağlıklı akciğer dokusu, fare içinde bir akciğer görüntüleme penceresinden, etiketli vaskülatür ile görselleştirildi. Akciğer metastazları, tümör hücrelerinin makrofaj ve vaskülatür etiketli transgenik bir hayvana enjekte edilmesinden sonra belirgindir.Burada gösterilen bir nakledilen dendra2 etiketli invaziv karsinom içinde yüksek molekül ağırlıklı Dekstran etiketli neo-anjiyojenik damarların zaman aşımına geçmiş intravital görüntüleme filmi fotoğraf vardır. Noktalı sarı çizgi, sızıntı olayından önce, sırasında ve sonrasında geçici vasküler sızıntı alanının ana hatlarını gösterir. Canlı görüntülemede Bir TMEM kapısı yakalanır.Çok kanallı immünoreskence endomucin gösterir, yüksek molekül ağırlıklı Dextran, DAPI ile birlikte onların birleştirilmiş görüntü, yanı sıra karşılık gelen eşikli kan damarı ve Ekstravasküler Dextran maskeleri. TMEM immünohistokimyasının sıralı bölümü de gösterilmiştir. TMEM'den uzak vasküler profil sızdırmaz vasküler profil olarak görünürken, TMEM ilişkili vasküler profil sızıntılı vasküler profil olarak görünür.Tümörün cerrahi maruziyeti sırasında tümörü sağlayan kan damarlarının kesilmesinden kaçınmak çok önemlidir. Burada açıklanan metodoloji ilaç tedavisi ile kombine edilebilir, Aynı TMEM fonksiyonu inhibe, vasküler geçirgenliği önleme, hatta etkilerini ve etkinliğini ölçmek için tümör vaskülatür normalleştirilmesi. Bu protokollerle daha önce kemoterapinin vasküler geçirgenliği ve kanser hücresi yayılmasını artırdığını ve aslında bu pro-metastatik değişikliklerin TMEM fonksiyonunun inhibitörlerinin birlikte uygulanması yla atlatılabildiği gösterilmiştir.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

The Drosophila Imaginal Disc Tumor Model: Visualization and Quantification of Gene Expression and Tumor Invasiveness Using Genetic Mosaics

<em&gt; Drosophila</em&gt; Hayali Disk Tümör Modeli: Genetik Mozaikler kullanma Gen İfade ve Tümör invazivliğinin Görselleştirme ve

Drosophila melanogaster has emerged as a powerful experimental system for functional and mechanistic studies of tumor development and progression in the ...

Longitudinal Intravital Imaging of Brain Tumor Cell Behavior in Response to an Invasive Surgical Biopsy

Invaziv cerrahi biyopsiye yanıt olarak beyin tümörü hücre davranışının boyuna Intravital görüntüleme

Biopsies are standard of care for cancer treatment and are clinically beneficial as they allow solid tumor diagnosis, prognosis, and personalized ...

Micromanipulation of Circulating Tumor Cells for Downstream Molecular Analysis and Metastatic Potential Assessment

Akım moleküler Analizi ve metastatik potansiyel değerlendirme için sirkülasyon tümör hücrelerinin mikromanipülasyon

Blood-borne metastasis accounts for&#160;most cancer-related deaths and involves circulating tumor cells (CTCs) that are successful in establishing new ...

Analysis of Side Population in Solid Tumor Cell Lines

Solid Tümör Hücre Hatlarında Yan Popülasyon analizi

Cancer stem cells (CSCs) are an important cause of tumor growth, metastasis, and recurrence. Isolation and identification of CSCs are of great ...

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

Tümör Hücrelerinin Lateral Kuyruk-Damar Enjeksiyonu Sonrasında Akciğer Metastazının Patolojik Analizi

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...

A Label-Free Segmentation Approach for Intravital Imaging of Mammary Tumor Microenvironment

Meme Tümörü Mikroçevresinin İntravital Görüntülemesi için Etiketsiz Bir Segmentasyon Yaklaşımı

The ability to visualize complex and dynamic physiological interactions between numerous cell types and the extracellular matrix (ECM) within a live tumor ...

Expanding the Comprehension of the Tumor Microenvironment using Mass Spectrometry Imaging of Formalin-Fixed and Paraffin-Embedded Tissue Samples

Formalin-Sabit ve Parafin-Gömülü Doku Örneklerinin Kütle Spektrometrisi Görüntülemesini Kullanarak Tümör Mikroçevresinin Kavranmasının Genişletilmesi

Advances in immune-based therapies have revolutionized cancer treatment and research. This has triggered growing demand for the characterization of the ...

Zebrafish Larvae as a Model to Evaluate Potential Radiosensitizers or Protectors

Potansiyel Radyosensitizörleri veya Koruyucuları Değerlendirmek için Bir Model Olarak Zebra Balığı Larvaları

Zebrafish are extensively used in several kinds of research because they are one of the easily maintained vertebrate models and exhibit several features ...

Multiparametric Tumor Organoid Drug Screening Using Widefield Live-Cell Imaging for Bulk and Single-Organoid Analysis

Toplu ve Tek-Organoid Analizi için Geniş Alan Canlı Hücre Görüntüleme Kullanılarak Multiparametrik Tümör Organoid İlaç Taraması

Patient-derived tumor organoids (PDTOs) hold great promise for preclinical and translational research and predicting the patient therapy response from ex ...

Multiplex Immunofluorescence and Spatial Image Analysis of the Tumor Microenvironment

Multiplex Immunofluorescence Combined with Spatial Image Analysis for the Clinical and Biological Assessment of the Tumor Microenvironment

Multiplex Immunofluorescence Combined with Spatial Image Analysis for the Clinical and Biological Assessment of the Tumor Microenvironment (Video) | JoVE 

Multipleks İmmünofloresan, Tümör Mikroçevresinin Klinik ve Biyolojik Değerlendirmesi için Uzamsal Görüntü Analizi ile Kombine Edildi

The tumor microenvironment (TME) is composed of a plethora of different cell types, such as cytotoxic immune cells and immunomodulatory cells. Depending ...