Name: construction of crispr plasmids and detection of knockout efficiency in mammalian cells through a dual luciferase reporter system
Uploaded: 2020-12-05T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Construction of CRISPR Plasmids and Detection of Knockout Efficiency in Mammalian Cells through a Dual Luciferase Reporter System at JoVE.com

このプロジェクトは、中国国立自然科学財団(31301936)山東省のファーストクラスの草原科学規律プログラムによって資金提供されました。 31572383)、公益に関する農業科学研究特別基金(201403071)、牛乳製品の品質と安全性に関する国家リスク評価の主要な特別プロジェクト(GJFP201800804)、青島人民生活科学技術プロジェクト(19-6-1-68-nsh、 14-2-3-45-nsh, 13-1-3-88-nsh).

1. sgRNAオリゴヌクレオチド設計
<ol><li>Cas-Designer オンライン ツール (http://www.rgenome.net/cas-designer/) などのオンライン ツールを使用して sgRNA を設計します。PAM シーケンスは、使用されている Cas9 に基づいて重要です。xCas9 の場合、関連する PAM シーケンスは NG であり、以前に参照されていた Cas-Designer オンライン ツールは、xCas9 関連の sgRNA を生成できます。<ol>
<li>オンターゲット予測とオフ?...

<ol>
	<li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+surrogate+reporter+system+for+multiplexable+evaluation+of+CRISPR/Cas9+in+targeted+mutagenesis.">A surrogate reporter system for multiplexable evaluation of CRISPR/Cas9 in targeted mutagenesis.</a> Scientific Reports. 8 (1), 1042 (2018).</li><li>Nageshwaran, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR+Guide+RNA+Cloning+for+Mammalian+Systems.">CRISPR Guide RNA Cloning for Mammalian Systems.</a> Journal of Visualized Experiments. (140), (2018).</li><li>Dang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+sgRNA+structure+to+improve+CRISPR-Cas9+knockout+efficiency.">Optimizing sgRNA structure to improve CRISPR-Cas9 knockout efficiency.</a> Genome Biology. 16, 280 (2015).</li><li>Doench, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+sgRNA+design+to+maximize+activity+and+minimize+off-target+effects+of+CRISPR-Cas9.">Optimized sgRNA design to maximize activity and minimize off-target effects of CRISPR-Cas9.</a> Nature Biotechnology. 34 (2), 184-191 (2016).</li><li>Moreno-Mateos, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPRscan:+designing+highly+efficient+sgRNAs+for+CRISPR-Cas9+targeting+in+vivo.">CRISPRscan: designing highly efficient sgRNAs for CRISPR-Cas9 targeting in vivo.</a> Nature Methods. 12 (10), 982-988 (2015).</li><li>Joung, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-scale+CRISPR-Cas9+knockout+and+transcriptional+activation+screening.">Genome-scale CRISPR-Cas9 knockout and transcriptional activation screening.</a> Nature Protocols. 12 (4), 828-863 (2017).</li><li>Yang, L., Yang, J. L., Byrne, S., Pan, J., Church, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR/Cas9-Directed+Genome+Editing+of+Cultured+Cells.">CRISPR/Cas9-Directed Genome Editing of Cultured Cells.</a> Current Protocols in Molecular Biology. 107, 1-17 (2014).</li><li>Yang, L., Mali, P., Kim-Kiselak, C., Church, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR-Cas-mediated+targeted+genome+editing+in+human+cells.">CRISPR-Cas-mediated targeted genome editing in human cells.</a> Methods in Molecular Biology. 1114, 245-267 (2014).</li><li>Vidigal, J. A., Ventura, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+and+efficient+one-step+generation+of+paired+gRNA+CRISPR-Cas9+libraries.">Rapid and efficient one-step generation of paired gRNA CRISPR-Cas9 libraries.</a> Nature Communications. 6, 8083 (2015).</li><li>Mazon, G., Mimitou, E. P., Symington, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SnapShot:+Homologous+recombination+in+DNA+double-strand+break+repair.">SnapShot: Homologous recombination in DNA double-strand break repair.</a> Cell. 142 (4), 646 (2010).</li><li>Doench, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rational+design+of+highly+active+sgRNAs+for+CRISPR-Cas9-mediated+gene+inactivation.">Rational design of highly active sgRNAs for CRISPR-Cas9-mediated gene inactivation.</a> Nature Biotechnology. 32 (12), 1262-1267 (2014).</li><li>Lee, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+evolution+of+CRISPR-Cas9+to+increase+its+specificity.">Directed evolution of CRISPR-Cas9 to increase its specificity.</a> Nature Communications. 9 (1), 3048 (2018).</li><li>Sung, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient+gene+knockout+in+mice+and+zebrafish+with+RNA-guided+endonucleases.">Highly efficient gene knockout in mice and zebrafish with RNA-guided endonucleases.</a> Genome Research. 24 (1), 125-131 (2014).</li><li>Ran, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Double+nicking+by+RNA-guided+CRISPR+Cas9+for+enhanced+genome+editing+specificity.">Double nicking by RNA-guided CRISPR Cas9 for enhanced genome editing specificity.</a> Cell. 154 (6), 1380-1389 (2013).</li><li>Sanger, F., Nicklen, S., Coulson, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+sequencing+with+chain-terminating+inhibitors.">DNA sequencing with chain-terminating inhibitors.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 74 (12), 5463-5467 (1977).</li><li>Ruan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient+CRISPR/Cas9-mediated+transgene+knockin+at+the+H11+locus+in+pigs.">Highly efficient CRISPR/Cas9-mediated transgene knockin at the H11 locus in pigs.</a> Scientific Reports. 5, 14253 (2015).</li><li>Li, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+plasmid+with+double+fluorescent+groups+and+its+application+as+standard+substance.">An plasmid with double fluorescent groups and its application as standard substance.</a> China patent. , (2012).</li><li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+porcine+p65+subunit+of+NF-kappaB+and+its+association+with+virus+antibody+levels.">Characterization of the porcine p65 subunit of NF-kappaB and its association with virus antibody levels.</a> Molecular Immunology. 48 (6-7), 914-923 (2011).</li><li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pair+of+sgRNAs+targeting+porcine+RELA+gene.">A pair of sgRNAs targeting porcine RELA gene.</a> China patent. , (2015).</li></ol>

ここで説明したsgRNAベクタークローニング手順は、オリゴヌクレオチドの順序付けおよびベクターシーケンシングに由来するコストの大部分を伴うsgRNAの効率的な生産を促進する。概略的な方法はユーザーがCRISPR/Cas9で使用するためのsgRNAを生成できるように設計されているが、プロトコルはCas9オルソローグまたはCpf1のような他のRNA誘導エンドヌクレアーゼで使用するために容易に適応するこ...

CRISPR sgRNAは、ゲノム標的配列1,2と相補的である20-塩基配列(プロトスパサー)を含む。高効率ではあるが、CRISPR/Casシステムが所定のゲノム部位を改変する能力は、標的部位に特有の効率的なsgRNAを担うベクターの生成を必要とする2。本論文では、そのsgRNAベクターの生成における重要なステップについて述べている。
CRISPR/Casシステムを用いたゲノム編集を成功させるためには、高効率sgRNAを使用することが重要な前提条件3、4、5である。ゲノム編集で用いられる操作用ヌクレアーゼは、異なる標的遺伝子1において多様な効率を示すため、時間と労力を節約するために候補sgRNA標的の事前選択が必要である6、7、8、9。二重ルシファーゼレポーターシステムは、一本鎖アニール3、10を介して二本鎖破断修復を調べることによってノックアウト効率を評価するために開発されました。ここでは、このレポーターシステムを使用して、特定の遺伝子編集用に設計された異なる候補sgRNAベクターから好ましいCRISPR sgRNA標的を選択します。ここで述べられているプロトコルは、CRISPR sgRNAを生成し、評価するために、ここ数年、当社のグループと共同研究所で実施されています。
次のプロトコルは、ネットワークソフトウェアを介して適切なsgRNAを設計する方法を要約します。適切なsgRNAが選択されたら、必要なオリゴヌクレオチドを得るための異なるステップと、ペア化オリゴヌクレオチドをpX330-xCas9発現ベクターに挿入するアプローチについて説明する。また、これらの配列のライゲーションに基づくsgRNA発現およびデュアルルシファーゼレポーターベクターを前消化発現ベクターに組み立てる方法を提示する(ステップ2-10、 図1A)。最後に、各sgRNAのDNA切断効率を解析する方法について説明する(ステップ11〜12)。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>A new generation of full touch screen gradient PCR instrument</td>
			<td>LongGene</td>
			<td>A200</td>
			<td>Target gene amplification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AscI restriction enzymes</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>R0558V</td>
			<td>Cutting target vectors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BbsI restriction enzyme</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>R0539S</td>
			<td>Cutting target vectors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clean workbench</td>
			<td>AIRTECH</td>
			<td>SW-CJ-2FD/VS-1300L-U</td>
			<td>A partial purification device in the form of a vertical laminar flow, which creates a local high clean air environment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DH5&#945; Competent Cells</td>
			<td>TaKaRa</td>
			<td>K613</td>
			<td>Plasmid vector transformation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual-Luciferas Reporter Assay System</td>
			<td>Promega</td>
			<td>E1910</td>
			<td>Dual-luciferas reporter assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric thermostatic water bath</td>
			<td>Sanfa Scientific Instruments</td>
			<td>DK-S24</td>
			<td>Heating reagent by constant temperature in water bath</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrophoresis</td>
			<td>Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>DYY-6C</td>
			<td>Control voltage, current, etc.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Reference 2</td>
			<td>Eppendorf China Ltd.</td>
			<td>Reference 2</td>
			<td>Accurately draw and transfer traces of liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel imaging analyzer</td>
			<td>Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>WD-9413B</td>
			<td>For the analysis of electrophoresis gel images</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GloMax 20/20 Luminometer</td>
			<td>Promega</td>
			<td>E5311</td>
			<td>Detect dual luciferase activity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High speed refrigerated centrifuge</td>
			<td>BMH</td>
			<td>sigma 3K15</td>
			<td>Nucleic acid extraction and purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intelligent biochemical incubator</td>
			<td>Sanfa Scientific Instruments</td>
			<td>SHP-160</td>
			<td>Provide a suitable temperature environment for the enzyme digestion experiment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB Broth Agar</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A507003-0250</td>
			<td>For the cultivation of E.coli</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 3000 Transfection Reagent Kit</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>L3000015</td>
			<td>DNA Transfection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SalI restriction enzymes</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>R3138V</td>
			<td>Cutting target vectors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SanPrep Column DNA Gel Extraction Kit</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>B518131-0050</td>
			<td>Recycling DNA fragments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SanPrep Column Plasmid Mini-Preps Kit</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>B518191-0100</td>
			<td>Extraction of plasmid DNA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4 DNA Ligase</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0202V</td>
			<td>Link DNA fragment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaKaRa MiniBEST DNA Fragment Purification Kit Ver.4.0</td>
			<td>TaKaRa</td>
			<td>9761</td>
			<td>DNA purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vertical pressure steam sterilizer</td>
			<td>JIBIMED</td>
			<td>LS-50LD</td>
			<td>High temperature and autoclave to kill bacteria, fungi and other microorganisms in laboratory equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath thermostat</td>
			<td>Changzhou Guoyu Instrument Manufacturing Co., Ltd.</td>
			<td>SHZ-82</td>
			<td>Let the bacteria keep shaking, which is good for contact with air.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

construction of crispr plasmids and detection of knockout efficiency in mammalian cells through a dual luciferase reporter system

非常に効率的ですが、CRISPR酵素によるゲノム部位の改変には、標的部位に特有のsgRNAの生成が事前に必要です。本研究は、DNAシーケンシング前にPCRによる正のコロニーの効率的な検出を可能にする戦略を用いて、効率的なsgRNAベクターの構築につながる重要なステップを説明する。CRISPRシステムを用いた効率的なゲノム編集には高効率なsgRNAが必要なため、時間と労力を節約するために候補sgRNAターゲットの事前選択が必要です。二重ルシファーゼレポーターシステムは、一本鎖アニールによる二本鎖破断修復を調べることにより、ノックアウト効率を評価するために開発されました。ここでは、このレポーターシステムを使用して、特定の遺伝子編集のための候補sgRNAベクターから好ましいxCas9/sgRNA標的をピックアップする。概説されたプロトコルは、好ましいsgRNA/CRISPR酵素ベクターを10日間で提供する(適切に設計されたオリゴヌクレオチドから始まる)。

このプロトコルで概説されている方法は、sgRNAおよびxCas9発現ベクターの構築と、比較的高い遺伝子標的化効率を有するsgRNAオリゴの最適化スクリーニングのためのものである。ここでは、ヒツジ DKK2 エキソン1に3sgRNA標的の代表例を示す。SgRNAおよびxCas9発現ベクターは、ベクター骨格(図2)を前消化し、続いてアニーリングオリゴ対を介して一連の短い二本鎖DNA断?...

Watch this Scientific Journal Video about Construction of CRISPR Plasmids and Detection of Knockout Efficiency in Mammalian Cells through a Dual Luciferase Reporter System at JoVE.com

Construction of CRISPR Plasmids and Detection of Knockout Efficiency in Mammalian Cells through a Dual Luciferase Reporter System

ここでは、CRISPR酵素と関連する単一ガイドRNA(sgRNA)の両方を発現するプラスミドの効率的な生成のための合理化された方法を説明するプロトコルを提示する。このsgRNA/CRISPRベクターと二本鎖破断修復を調べる二重ルシファーゼレポーターベクターを用いた哺乳動物細胞の共トランスフェクションにより、ノックアウト効率の評価が可能です。

二重ルシファーゼレポーターシステムによるCRISPRプラスミドの構築と哺乳動物細胞におけるノックアウト効率の検出

Although highly efficient, modification of a genomic site by the CRISPR enzyme requires the generation of a sgRNA unique to the target site(s) beforehand. ...

このプロトコルは、効率的なsgRNAベクターの生成および最適化における重要なステップを説明する。候補sgRNAの先行加速は、相対的な時間と推論をターゲットにしています。このプロトコルの主な利点は、内因性遺伝子を編集することなく、各sgRNAのDNAコードインプレッションを分析することができるということです。この事前選択方法は、二本鎖破断を通じて他の遺伝子編集手段にも適用することができる。まず、凍結乾燥したオリゴヌクレオチドを、二重蒸留水中の10ミクロモルの最終濃度に希釈します。余分なバッファーを追加せずに、薄層 PCR チューブ内の前方オリゴヌクレオチドとリバース オリゴヌクレオチドを 1 対 1 の比率で混合します。95°Cで5分間インキュベートし、温度を摂氏72度まで10分間下げます。PCRマシンからオリゴヌクレオチドミックスを取り出し、室温で冷却させます。pX330-xCas9ベクターを消化するには、Bbs1で、ベクター、酵素、および消化バッファーを50マイクロリットルの体積で組み合わせ、反応を摂氏37度で2時間インキュベートします。細胞変換を行った後、LBプレートから5〜10個の細菌コロニーを選択し、それぞれを使用して1.5ミリリットルチューブに60ミリグラムのアンピシリンを含むLB培地1ミリリットルを接種します。その後、2〜3時間ロータリーシェーカーにチューブをインキュベートします。テキスト原稿に記載されているように、組み換えプラスミドをスクリーニングするPCRを実行し、10ボルト/センチメートルの下で2%アガロースゲルで製品を実行します。陽性プラスミドを同定した後、それらを使用して、レポーターベクターと共に、適切な細胞株を共にトランスフェクトする。細胞をライゼするには、培養細胞から増殖培地を除去する。PBSで培養容器の表面を静かに洗浄し、各培養ウェルにPLBの100マイクロリットルを分配し、細胞モノ層を完全に覆う。プレートを室温で20分間インキュベートし、その後、さらなる取り扱いまたは保管のためにチューブまたはバイアルにリゼートを移します。二重ルシファーゼアッセイを実行するには、2秒の予読遅延を提供し、その後10秒の測定期間を提供するようにルミノメーターをプログラムします。次いで、100マイクロリットルのルシファーゼアッセイ試薬を適当な数のルミノメーターチューブに分配する。20マイクロリットルの細胞ライセートをルミノメーターチューブに慎重に加え、2~3回ピペットで混合します。チューブをルミノメーターに入れ、読み取りを開始します。サンプルチューブをルミノメーターから取り外します。100マイクロリットルのストップ試薬と渦を短時間加え、混合します。サンプルをルミノメーターに戻し、読み取りを開始します。レニラルシファーゼ活性を記録し、ホタルルシファーゼ活性、具体的には画面に表示される比率の逆数に正規化した。終了したら、反応管を捨てます。この方法は、ヒツジDKK2エソン1用の3つのsgRNAベクターを生成するために使用した。sgRNAおよびxCas9発現ベクターは、ベクター骨格を事前に消化し、続いてアニールオリゴペアを介して一連の短い二本鎖DNA断片を連結することによって構築された。7つの細菌コロニーを特異的プライマーペア誘導PCRでスクリーニングし、陽性コロニーを検出した。pX330-xCas9 T1、T2、およびT3の遺伝子標的容量を、デュアルルシファーゼアッセイで同時に検出した。最後のsgRNAベクターは、最も高い検出シグナルを表示し、その後、羊の遺伝子編集研究に使用されました。このプロトコルに従って、T7EIアッセイまたはリボヌクレアーゼアッセイを行うことができる。これらの追加措置は、内因性遺伝子編集のより正確な印象を与える。

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Detection and Isolation of Circulating Melanoma Cells using Photoacoustic Flowmetry

光音響流量測定法を用いて循環メラノーマ細胞の検出と分離

Circulating tumor cells (CTCs) are those cells that have separated from a macroscopic tumor and spread through the blood and lymph systems to seed ...

Bacterial Detection &amp; Identification Using Electrochemical Sensors

Bacterial Detection & Identification Using Electrochemical Sensors

電気化学センサを用いた細菌検出＆識別

Electrochemical  sensors are widely used for rapid and accurate measurement of blood glucose and  can be adapted for detection of a wide variety of ...

Construction and Characterization of a Novel Vocal Fold Bioreactor

新規声帯バイオリアクターの構築とキャラクタリゼーション

In vitro engineering of mechanically active tissues requires the presentation of physiologically relevant mechanical conditions to cultured cells. To ...

Cultivation of Mammalian Cells Using a Single-use Pneumatic Bioreactor System

使い捨て空気圧バイオリアクターシステムを使用して、哺乳動物細胞の培養

Recent advances in mammalian, insect, and stem cell cultivation and scale-up have created tremendous opportunities for new therapeutics and personalized ...

Electrotaxis Studies of Lung Cancer Cells using a Multichannel Dual-electric-field Microfluidic Chip

マルチチャンネルデュアル電界マイクロ流体チップを用いて、肺癌細胞の走電性の研究

The behavior of directional cell migration under a direct current electric-field (dcEF) is referred to as electrotaxis. The significant role of ...

A Protocol for Multiple Gene Knockout in Mouse Small Intestinal Organoids Using a CRISPR-concatemer

CRISPRコンカテマーを用いたマウス小腸オルガノイドにおける複数の遺伝子ノックアウトのためのプロトコル

CRISPR/Cas9 technology has greatly improved the feasibility and speed of loss-of-function studies that are essential in understanding gene function. In ...

Efficient Generation and Editing of Feeder-free IPSCs from Human Pancreatic Cells Using the CRISPR-Cas9 System

効率的な生成および CRISPR Cas9 システムを用いた人間の膵臓細胞から Ips をフィーダー フリーの編集

Embryonic and induced pluripotent stem cells can self-renew and differentiate into multiple cell types of the body. The pluripotent cells are thus coveted ...

An Orbital Shaking Culture of Mammalian Cells in O-shaped Vessels to Produce Uniform Aggregates

哺乳類細胞培養を均一な骨材を生産する O の形をした船で揺れ、軌道

Suspension cultures of mammalian cell aggregates are required for various applications in medical and biotechnological fields. The disposable bag-based ...

Scalable Fabrication of Stretchable, Dual Channel, Microfluidic Organ Chips

伸縮性、デュアル チャネル、オルガン マイクロ流体チップのスケーラブルな作製

A significant number of lead compounds fail in the pharmaceutical pipeline because animal studies often fail to predict clinical responses in human ...

Construction of a Multilayered Mesenchymal Stem Cell Sheet with a 3D Dynamic Culture System

3 D ダイナミック文化システムの多層間葉系幹細胞シートの構築

Stem cell therapy shows a promising future in regenerating injured organ and tissues, and the cell sheet technique has been developed to improve the low ...