Name: construction of crispr plasmids and detection of knockout efficiency in mammalian cells through a dual luciferase reporter system
Uploaded: 2020-12-05T12:30:00
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이 프로젝트는 중국 국립 자연과학 재단(31301936)의 중국 산둥성 일류 초원 과학 징계 프로그램에 의해 지원되었습니다. 31572383), 공익농업과학연구특별기금(201403071), 우유 제품 품질 및 안전의 국가 위험 평가 주요 특별 프로젝트(GJFP201800804) 및 칭다오 인민생계과학기술 프로젝트(19-6-1-68-nsh, 14-45-25-25-25-45-25-25-45-25-25-25-45-25-45-25-45-25-45-45-45-25-45-25-45-25-45-25-25-45-25-45-45-25-45-25-25-45-25-45-25-25-25-25-45-25-25-45-25-45-25-45-25-45-25-25-45-25-45-45-45-25-25-25-25-45-25-25-25-45-45-45-25-25-25-45-25 13-1-3-88-nsh).

1. sgRNA 올리고뉴클레오티드 설계
<ol><li>Cas-Designer 온라인 도구(http://www.rgenome.net/cas-designer/)와 같은 온라인 도구를 사용하여 sgRNAs를 디자인합니다. PAM 시퀀스는 사용되는 Cas9을 기반으로 중요합니다. xCas9의 경우 관련 PAM 시퀀스는 NG이며 이전 참조된 Cas-Designer 온라인 도구는 xCas9 관련 sgRNA를 생성할 수 있습니다.<ol>
<li>온/오프 타겟 예측(http://www.broadinstitute.org/rnai/public/analysis-tools/sgrna-design)<sup class=...

<ol>
	<li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+surrogate+reporter+system+for+multiplexable+evaluation+of+CRISPR/Cas9+in+targeted+mutagenesis.">A surrogate reporter system for multiplexable evaluation of CRISPR/Cas9 in targeted mutagenesis.</a> Scientific Reports. 8 (1), 1042 (2018).</li><li>Nageshwaran, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR+Guide+RNA+Cloning+for+Mammalian+Systems.">CRISPR Guide RNA Cloning for Mammalian Systems.</a> Journal of Visualized Experiments. (140), (2018).</li><li>Dang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+sgRNA+structure+to+improve+CRISPR-Cas9+knockout+efficiency.">Optimizing sgRNA structure to improve CRISPR-Cas9 knockout efficiency.</a> Genome Biology. 16, 280 (2015).</li><li>Doench, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+sgRNA+design+to+maximize+activity+and+minimize+off-target+effects+of+CRISPR-Cas9.">Optimized sgRNA design to maximize activity and minimize off-target effects of CRISPR-Cas9.</a> Nature Biotechnology. 34 (2), 184-191 (2016).</li><li>Moreno-Mateos, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPRscan:+designing+highly+efficient+sgRNAs+for+CRISPR-Cas9+targeting+in+vivo.">CRISPRscan: designing highly efficient sgRNAs for CRISPR-Cas9 targeting in vivo.</a> Nature Methods. 12 (10), 982-988 (2015).</li><li>Joung, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-scale+CRISPR-Cas9+knockout+and+transcriptional+activation+screening.">Genome-scale CRISPR-Cas9 knockout and transcriptional activation screening.</a> Nature Protocols. 12 (4), 828-863 (2017).</li><li>Yang, L., Yang, J. L., Byrne, S., Pan, J., Church, G. 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A., Ventura, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+and+efficient+one-step+generation+of+paired+gRNA+CRISPR-Cas9+libraries.">Rapid and efficient one-step generation of paired gRNA CRISPR-Cas9 libraries.</a> Nature Communications. 6, 8083 (2015).</li><li>Mazon, G., Mimitou, E. P., Symington, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SnapShot:+Homologous+recombination+in+DNA+double-strand+break+repair.">SnapShot: Homologous recombination in DNA double-strand break repair.</a> Cell. 142 (4), 646 (2010).</li><li>Doench, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rational+design+of+highly+active+sgRNAs+for+CRISPR-Cas9-mediated+gene+inactivation.">Rational design of highly active sgRNAs for CRISPR-Cas9-mediated gene inactivation.</a> Nature Biotechnology. 32 (12), 1262-1267 (2014).</li><li>Lee, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+evolution+of+CRISPR-Cas9+to+increase+its+specificity.">Directed evolution of CRISPR-Cas9 to increase its specificity.</a> Nature Communications. 9 (1), 3048 (2018).</li><li>Sung, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient+gene+knockout+in+mice+and+zebrafish+with+RNA-guided+endonucleases.">Highly efficient gene knockout in mice and zebrafish with RNA-guided endonucleases.</a> Genome Research. 24 (1), 125-131 (2014).</li><li>Ran, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Double+nicking+by+RNA-guided+CRISPR+Cas9+for+enhanced+genome+editing+specificity.">Double nicking by RNA-guided CRISPR Cas9 for enhanced genome editing specificity.</a> Cell. 154 (6), 1380-1389 (2013).</li><li>Sanger, F., Nicklen, S., Coulson, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+sequencing+with+chain-terminating+inhibitors.">DNA sequencing with chain-terminating inhibitors.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 74 (12), 5463-5467 (1977).</li><li>Ruan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient+CRISPR/Cas9-mediated+transgene+knockin+at+the+H11+locus+in+pigs.">Highly efficient CRISPR/Cas9-mediated transgene knockin at the H11 locus in pigs.</a> Scientific Reports. 5, 14253 (2015).</li><li>Li, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+plasmid+with+double+fluorescent+groups+and+its+application+as+standard+substance.">An plasmid with double fluorescent groups and its application as standard substance.</a> China patent. , (2012).</li><li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+porcine+p65+subunit+of+NF-kappaB+and+its+association+with+virus+antibody+levels.">Characterization of the porcine p65 subunit of NF-kappaB and its association with virus antibody levels.</a> Molecular Immunology. 48 (6-7), 914-923 (2011).</li><li>Li, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pair+of+sgRNAs+targeting+porcine+RELA+gene.">A pair of sgRNAs targeting porcine RELA gene.</a> China patent. , (2015).</li></ol>

우리가 여기서 설명한 sgRNA 벡터 복제 절차는 올리고뉴클레오티드 주문 및 벡터 시퀀싱에서 파생된 대부분의 비용으로 sgRNAs의 효율적인 생산을 용이하게 합니다. 설명된 방법은 사용자가 CRISPR/Cas9와 함께 사용하기 위해 sgRNA를 생성할 수 있도록 설계되었지만, 프로토콜은 Cas9 정형소또는 Cpf1과 같은 다른 RNA 유도 엔도넬리스와 함께 사용하기 위해 쉽게 적응할 수 있으며 벡터 백본 및 올리고뉴클레...

CRISPR sgRNA는 게놈 표적 서열1,2에상보적인 20-뉴클레오티드 서열(protospacer)을 포함한다. 매우 효율적이지만, CRISPR/Cas 시스템이 주어진 게놈 부위를 수정할 수 있는 능력은 대상 부위(들)에 고유한 효율적인 sgRNA를 운반하는 벡터의 생성을 필요로한다 2. 이 백서는 sgRNA 벡터 생성의 주요 단계를 설명합니다.
CRISPR/Cas 시스템을 사용하여 성공적인 게놈 편집을 위해 고효율 sgRNAs를 사용하는 것은 중요한 전제 조건3,4,5입니다. 게놈 편집에 사용되는 엔지니어링 뉴클레아제는 상이한 표적 로시1에서다양한 효율성을 나타내기 때문에, 시간과 노력을 절약하기 위해 후보 sgRNA 표적의 사전 선택이 필요하다6,7,8,9. 이중 루시파라제 기자 시스템은 단일 가닥 어닐링3,10을통해 이중 가닥 브레이크 수리를 검사하여 녹아웃 효율을 평가하기 위해 개발되었습니다. 여기서 우리는 특정 유전자 편집을 위해 설계된 상이한 후보 sgRNA 벡터로부터 선호하는 CRISPR sgRNA 표적을 선택하기 위해 이 리포터 시스템을 사용합니다. 여기에 명시된 프로토콜은 CRISPR sgRNA를 생성하고 평가하기 위해 지난 몇 년 동안 우리 그룹과 협력 실험실에서 구현되었습니다.
다음 프로토콜은 네트워크 소프트웨어를 통해 적합한 sgRNA를 설계하는 방법을 요약합니다. 적합한 sgRNA가 선택되면, 우리는 pX330-xCas9 발현 벡터에 쌍을 이루는 올리고뉴클레오티드를 삽입하기 위한 접근법뿐만 아니라 필요한 올리고뉴클레오티드를 얻기 위한 상이한 단계를 설명한다. 또한 이러한 시퀀스의 결찰에 기초하여 sgRNA-표현 및 이중 루시파제 리포터 벡터를 조립하는 방법을 미리 소화된 발현 벡터로 조합한다(단계 2-10, 도 1A). 마지막으로 각 sgRNAs(11-12단계)에 대한 DNA 절단 효율을 분석하는 방법을 설명합니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>A new generation of full touch screen gradient PCR instrument</td>
			<td>LongGene</td>
			<td>A200</td>
			<td>Target gene amplification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AscI restriction enzymes</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>R0558V</td>
			<td>Cutting target vectors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BbsI restriction enzyme</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>R0539S</td>
			<td>Cutting target vectors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clean workbench</td>
			<td>AIRTECH</td>
			<td>SW-CJ-2FD/VS-1300L-U</td>
			<td>A partial purification device in the form of a vertical laminar flow, which creates a local high clean air environment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DH5&#945; Competent Cells</td>
			<td>TaKaRa</td>
			<td>K613</td>
			<td>Plasmid vector transformation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual-Luciferas Reporter Assay System</td>
			<td>Promega</td>
			<td>E1910</td>
			<td>Dual-luciferas reporter assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric thermostatic water bath</td>
			<td>Sanfa Scientific Instruments</td>
			<td>DK-S24</td>
			<td>Heating reagent by constant temperature in water bath</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrophoresis</td>
			<td>Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>DYY-6C</td>
			<td>Control voltage, current, etc.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Reference 2</td>
			<td>Eppendorf China Ltd.</td>
			<td>Reference 2</td>
			<td>Accurately draw and transfer traces of liquid</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel imaging analyzer</td>
			<td>Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td>WD-9413B</td>
			<td>For the analysis of electrophoresis gel images</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GloMax 20/20 Luminometer</td>
			<td>Promega</td>
			<td>E5311</td>
			<td>Detect dual luciferase activity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High speed refrigerated centrifuge</td>
			<td>BMH</td>
			<td>sigma 3K15</td>
			<td>Nucleic acid extraction and purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intelligent biochemical incubator</td>
			<td>Sanfa Scientific Instruments</td>
			<td>SHP-160</td>
			<td>Provide a suitable temperature environment for the enzyme digestion experiment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB Broth Agar</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>A507003-0250</td>
			<td>For the cultivation of E.coli</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 3000 Transfection Reagent Kit</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>L3000015</td>
			<td>DNA Transfection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SalI restriction enzymes</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>R3138V</td>
			<td>Cutting target vectors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SanPrep Column DNA Gel Extraction Kit</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>B518131-0050</td>
			<td>Recycling DNA fragments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SanPrep Column Plasmid Mini-Preps Kit</td>
			<td>Sangon Biotech</td>
			<td>B518191-0100</td>
			<td>Extraction of plasmid DNA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T4 DNA Ligase</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0202V</td>
			<td>Link DNA fragment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaKaRa MiniBEST DNA Fragment Purification Kit Ver.4.0</td>
			<td>TaKaRa</td>
			<td>9761</td>
			<td>DNA purification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vertical pressure steam sterilizer</td>
			<td>JIBIMED</td>
			<td>LS-50LD</td>
			<td>High temperature and autoclave to kill bacteria, fungi and other microorganisms in laboratory equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath thermostat</td>
			<td>Changzhou Guoyu Instrument Manufacturing Co., Ltd.</td>
			<td>SHZ-82</td>
			<td>Let the bacteria keep shaking, which is good for contact with air.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

construction of crispr plasmids and detection of knockout efficiency in mammalian cells through a dual luciferase reporter system

비록 매우 효율적이지만 CRISPR 효소에 의한 게놈 부위를 수정하려면 표적 부위에 고유한 sgRNA 생성이 사전에 필요합니다. 이 작업은 DNA 염기서열 분석 전에 PCR에 의한 양성 식민지를 효율적으로 검출할 수 있는 전략을 사용하여 효율적인 sgRNA 벡터의 시공으로 이어지는 주요 단계를 설명합니다. CRISPR 시스템을 이용한 효율적인 게놈 편집에는 매우 효율적인 sgRNA가 필요하기 때문에 시간과 노력을 절약하기 위해 후보 sgRNA 표적을 사전 선택해야 합니다. 이중 루시파라제 기자 시스템은 단일 가닥 어닐링을 통해 이중 가닥 브레이크 수리를 검토하여 녹아웃 효율성을 평가하기 위해 개발되었습니다. 여기서, 우리는 특정 유전자 편집을 위한 후보 sgRNA 벡터로부터 선호하는 xCas9/sgRNA 표적을 픽업하기 위하여 이 리포터 시스템을 이용합니다. 설명된 프로토콜은 10일 안에 바람직한 sgRNA/CRISPR 효소 벡터를 제공할 것이다(적절하게 설계된 올리고뉴클레오티드로 시작).

이 프로토콜에 설명된 방법은 sgRNA 및 xCas9 발현 벡터의 시공을 위한 다음 상대적으로 높은 유전자 표적화 효율을 가진 sgRNA 올리고스의 최적화 스크리닝을 위한 것이다. 여기서 는 양 DKK2 엑슨 1에 대한 3sgRNA 표적의 대표적인 예를 표시합니다. SgRNA 및 xCas9 발현 벡터는 벡터 백본(그림2)을예소화한 다음, 어닐링 올리고 쌍을 통해 짧은 이중 가닥 DNA 단편을 연이어 계게 함...

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Construction of CRISPR Plasmids and Detection of Knockout Efficiency in Mammalian Cells through a Dual Luciferase Reporter System

여기서, CRISPR 효소와 관련 단일 가이드 RNA(sgRNAs)를 모두 발현하는 플라스미드의 효율적인 생성을 위한 간소화된 방법을 설명하는 프로토콜을 제시한다. 이 sgRNA/CRISPR 벡터와 이중 루시파라제 리포터 벡터를 결합하여 포유류 세포의 공동 배빙을 통해 녹아웃 효율을 평가할 수 있습니다.

이중 루시파라제 기자 시스템을 통해 포유류 세포에서 CRISPR 플라스미드 의 건설 및 녹아웃 효율 검출

Although highly efficient, modification of a genomic site by the CRISPR enzyme requires the generation of a sgRNA unique to the target site(s) beforehand. ...

이 프로토콜은 효율적인 sgRNA 벡터의 생성 및 최적화의 주요 단계를 설명합니다. 후보 sgRNA의 사전 가속은 상대적인 시간과 추론을 대상으로 합니다. 이 프로토콜의 주요 장점은 내인성 유전자를 편집하지 않고 각 sgRNAs에 대한 DNA 코딩 노출을 분석할 수 있게 한다는 것입니다.이 사전 선택 방법은 또한 이중 좌초 된 휴식을 통해 다른 유전자 편집 측정에 적용 될 수있다. 리옹화된 올리고뉴클레오티드를 이중 증류수에 10마이크로몰라의 최종 농도로 희석하는 것으로 시작합니다. 추가 버퍼를 추가하지 않고 1 대 1 비율로 얇은 벽PCR 튜브에서 앞뒤로 올리고뉴클레오티드를 혼합합니다.혼합물을 섭씨 95도에서 5분간 배양한 다음 온도를 섭씨 72도까지 10분간 내려갑니다. PCR 기계에서 올리고뉴클레오티드 믹스를 제거하고 실온에서 냉각할 수 있습니다. pX330-xCas9 벡터를 Bbs1과 소화하려면 벡터, 효소 및 소화 버퍼를 50 마이크로리터 부피로 결합하고 2시간 동안 섭씨 37도에서 반응을 배양합니다.세포 변환을 수행 한 후, LB 플레이트에서 5 ~ 10 세균 성 식민지를 선택하고 1.5 밀리리터 튜브에 60 밀리그램 암피실린으로 LB 미디어의 1 밀리리터를 접종하기 위해 각각을 사용합니다. 그런 다음 회전 셰이커에 튜브를 2~3시간 동안 배양합니다. 텍스트 원고에 설명된 대로 재조합 플라스미드를 검사하기 위해 PCR을 수행한 다음 10볼트%에서 2%의 아가로즈 젤로 제품을 실행합니다.양성 플라스미드를 식별한 후, 기자 벡터와 함께 적절한 세포줄을 공동 트랜스펙트하기 위해 이를 사용하십시오. 세포를 lyse하려면 배양 된 세포에서 성장 배지를 제거하십시오. PBS로 배양 용기의 표면을 부드럽게 세척하고 각 배양에 PLB 100 마이크로리터를 분배하여 세포 모노 층을 완전히 덮습니다.플레이트가 실온에서 20분 동안 배양한 다음, 용하를 튜브 또는 바이알로 옮겨 추가 처리 또는 보관을 합니다. 이중 루시파라제 분석기를 수행하려면 발광계를 프로그래밍하여 2초 사전 판독 지연을 제공하고 10초 측정 기간을 입력합니다. 그런 다음, 100 마이크로리터의 루시파라제 분석 시약을 적절한 수의 광미계 튜브에 분배합니다.조심스럽게 20 마이크로 리터의 셀 리세이터를 발광계 튜브에 넣고 2 ~ 3 번 파이프를 섞습니다. 튜브를 발광계에 놓고 판독을 시작합니다. 광노미터에서 샘플 튜브를 제거합니다.100 마이크로리터의 스톱 시약과 소용돌이를 짧게 추가하여 섞어보세요. 샘플을 발광계로 반환하고 읽기를 시작합니다. 반딧불 루시파아제 활동, 특히 화면에 표시되는 비율의 상호 작용으로 정규화된 Renilla Luciferase 활동을 기록합니다.완료되면 반응 튜브를 폐기하십시오. 이 방법은 양 DKK2 엑슨 1에 대한 3개의 sgRNA 벡터를 생성하는 데 사용되었다. sgRNA 및 xCas9 발현 벡터는 벡터 백본을 미리 소화한 다음, 어닐링 올리고 쌍을 통해 일련의 짧은 이중 가닥 DNA 단편으로 리칭하여 제작되었다.7개의 세균성 식민지는 특정 프라이머 쌍 유도 PCR로 검열되었고 양성 식민지가 검출되었다. pX330-xCas9 T1, T2 및 T3의 유전자 표적화 용량은 이중 루시파아제 분석으로 동시에 검출되었다. 마지막 sgRNA 벡터는 가장 높은 검출 신호를 표시하고 그 후에 양 유전자 편집 연구를 위해 이용되었습니다.이 프로토콜에 따라 T7EI 분석또는 리보누클리스 분석이 수행될 수 있습니다. 이 추가 측정은 내인성 유전자 편집의 더 정확한 인상을 줍니다.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Detection and Isolation of Circulating Melanoma Cells using Photoacoustic Flowmetry

Photoacoustic Flowmetry를 사용하여 순환 흑색증 전지의 탐지 및 격리

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연구

생체공학

Bacterial Detection &amp; Identification Using Electrochemical Sensors

Bacterial Detection & Identification Using Electrochemical Sensors

전기 화학 센서를 사용하여 세균의 검출 및 식별

Electrochemical  sensors are widely used for rapid and accurate measurement of blood glucose and  can be adapted for detection of a wide variety of ...

Construction and Characterization of a Novel Vocal Fold Bioreactor

소설 보컬 폴드 생물 반응기의 구조 및 특성

In vitro engineering of mechanically active tissues requires the presentation of physiologically relevant mechanical conditions to cultured cells. To ...

Cultivation of Mammalian Cells Using a Single-use Pneumatic Bioreactor System

단일 사용 공압 생물 반응기 시스템을 사용하여 포유 동물 세포의 배양

Recent advances in mammalian, insect, and stem cell cultivation and scale-up have created tremendous opportunities for new therapeutics and personalized ...

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멀티 채널 듀얼 전기장 미세 유체 칩을 이용하여 폐암 세포의 Electrotaxis 연구

The behavior of directional cell migration under a direct current electric-field (dcEF) is referred to as electrotaxis. The significant role of ...

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3 차원 동적 문화 시스템과 다층된 중간 엽 줄기 세포 시트의 건설

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