Bygging av CRISPR Plasmids og påvisning av Knockout effektivitet i pattedyrceller gjennom en Dual Luciferase Reporter System

Her presenterer vi en protokoll som beskriver en strømlinjeformet metode for effektiv generering av plasmider som uttrykker både CRISPR-enzymet og tilhørende enkeltguide RNA (sgRNAs). Samtidig transfection av pattedyrceller med denne sgRNA / CRISPR vektor og en dobbel luciferase reporter vektor som undersøker dobbel-strand pause reparasjon tillater evaluering av knockout effektivitet.