Name: in vivo two-color 2-photon imaging of genetically-tagged reporter cells in the skin
Uploaded: 2019-07-11T13:30:00
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Este trabalho é suportado pela concessão NS096030 (MDB). Nós também gostaríamos de agradecer ao gerente de imagem central ved Prakash. Nós também gostaríamos de agradecer Olympus Discovery Center/Imaging Core facilidade em UT Dallas para fornecer equipamentos e suporte

Os procedimentos animais foram aprovados pela Universidade do Texas no Comitê institucional de cuidados e uso de animais de Dallas e estavam de acordo com as diretrizes dos institutos nacionais de saúde.  Todos os experimentos foram realizados com ratos machos e fêmeas 8-12-week-old criados em casa em um fundo C57BL/6. Camundongos transgênicos com CRE-recombinase impulsionados pelo promotor proteico-1 específico para fibroblastos foram adquiridos comercialmente (Jackson, 012641) (FSP1cre)+/- e c...

<ol>
	<li>Ulevitch, R. J., Tobias, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recognition+of+gram-negative+bacteria+and+endotoxin+by+the+innate+immune+system.">Recognition of gram-negative bacteria and endotoxin by the innate immune system.</a> Current Opinion in Immunology. 11 (1), 19-22 (1999).</li><li>Poltorak, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+LPS+signaling+in+C3H/HeJ+and+C57BL/10ScCr+mice:+mutations+in+Tlr4+gene.">Defective LPS signaling in C3H/HeJ and C57BL/10ScCr mice: mutations in Tlr4 gene.</a> Science. 282 (5396), 2085-2088 (1998).</li><li>Bhattacharyya, S., Midwood, K. 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D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Germinal+center+dynamics+revealed+by+multiphoton+microscopy+with+a+photoactivatable+fluorescent+reporter.">Germinal center dynamics revealed by multiphoton microscopy with a photoactivatable fluorescent reporter.</a> Cell. 143 (4), 592-605 (2010).</li><li>Duemani Reddy, G., Kelleher, K., Fink, R., Saggau, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+random+access+multiphoton+microscopy+for+functional+imaging+of+neuronal+activity.">Three-dimensional random access multiphoton microscopy for functional imaging of neuronal activity.</a> Nature Neuroscience. 11 (6), 713-720 (2008).</li><li>Kolesnikov, M., Farache, J., Shakhar, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+two-photon+imaging+of+the+gastrointestinal+tract.">Intravital two-photon imaging of the gastrointestinal tract.</a> Journal of Immunological Methods. 421, 73-80 (2015).</li><li>Ruthazer, E. S., Cline, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiphoton+imaging+of+neurons+in+living+tissue:+Acquisition+and+analysis+of+time-lapse+morphological+data.">Multiphoton imaging of neurons in living tissue: Acquisition and analysis of time-lapse morphological data.</a> Real-Time Imaging. 8 (3), 175-188 (2002).</li><li>Liu, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+Analysis+of+Dendritic+Cell+Development+and+Homeostasis.">In vivo Analysis of Dendritic Cell Development and Homeostasis.</a> Science. 324 (5925), 392-397 (2009).</li><li>Barber, P. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiphoton+time-domain+fluorescence+lifetime+imaging+microscopy:+practical+application+to+protein-protein+interactions+using+global+analysis.">Multiphoton time-domain fluorescence lifetime imaging microscopy: practical application to protein-protein interactions using global analysis.</a> Journal of the Royal Society Interface. 6, 93-105 (2009).</li><li>Dunn, K. W., Kamocka, M. M., McDonald, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+practical+guide+to+evaluating+colocalization+in+biological+microscopy.">A practical guide to evaluating colocalization in biological microscopy.</a> American Journal of Physiology-Cell Physiology. 300 (4), 723-742 (2011).</li><li>Gaigalas, A. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Development+of+Fluorescence+Intensity+Standards.">The Development of Fluorescence Intensity Standards.</a> Journal of Research of the National Institute of Standards and Technology. 106 (2), 381-389 (2001).</li><li>Tian, T., Wang, Y., Wang, H., Zhu, Z., Xiao, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualizing+of+the+cellular+uptake+and+intracellular+trafficking+of+exosomes+by+live-cell+microscopy.">Visualizing of the cellular uptake and intracellular trafficking of exosomes by live-cell microscopy.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 111 (2), 488-496 (2010).</li><li>Buckers, J., Wildanger, D., Vicidomini, G., Kastrup, L., Hell, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+multi-lifetime+multi-color+STED+imaging+for+colocalization+analyses.">Simultaneous multi-lifetime multi-color STED imaging for colocalization analyses.</a> Optics Express. 19 (4), 3130-3143 (2011).</li><li>Zheng, J. H., Walters, E. T., Song, X. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissociation+of+dorsal+root+ganglion+neurons+induces+hyperexcitability+that+is+maintained+by+increased+responsiveness+to+cAMP+and+cGMP.">Dissociation of dorsal root ganglion neurons induces hyperexcitability that is maintained by increased responsiveness to cAMP and cGMP.</a> Journal of Neurophysiology. 97 (1), 15-25 (2007).</li><li>Ingaramo, M., York, A. G., Andrade, E. J., Rainey, K., Patterson, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon-like+microscopy+with+orders-of-magnitude+lower+illumination+intensity+via+two-step+fluorescence.">Two-photon-like microscopy with orders-of-magnitude lower illumination intensity via two-step fluorescence.</a> Nature Communications. 6, 8184 (2015).</li><li>Makale, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extended-working-distance+multiphoton+micromanipulation+microscope+for+deep-penetration+imaging+in+live+mice+and+tissue.">Extended-working-distance multiphoton micromanipulation microscope for deep-penetration imaging in live mice and tissue.</a> Journal of Biomedical Optics. 14 (2), 024032 (2009).</li></ol>

Indiscutivelmente os passos mais importantes da in vivo 2-Photon Imaging são: 1) escolhendo o rato genético direito do repórter e a proteína fluorescently-etiquetada para a instalação e as necessidades experimentais do multi-Photon21,22; 2) imagem do plano focal correto para ter uma representação exata da população de células no tecido23; 3) minimizando o movimento devido a um animal imobilizado indevidamente24...

Lipopolissacarídeo (LPS) é uma endotoxina encontrada na membrana externa de bactérias Gram-negativas1. LPS tem uma afinidade de ligação elevada para o complexo do receptor do Toll-like 4 (TLR4)/CD14/MD2. TLR4 é um receptor de reconhecimento de padrão comumente encontrado na membrana externa de uma ampla gama de células imunes, células mesenquimais, e um subconjunto de neurônios sensoriais3,4,5. A ativação de TLR4 expressa em pilhas imunes conduz aos sistemas do mensageiro do segundo do MyD88-dependente e o independente, terminando com o translocação do beta do Kappa do nuclear-fator (NFκB) ao núcleo da pilha. Isso faz com que a célula imune protootípica produza e libere citocinas pró-inflamatórias, como interleucina (IL)-1 β, IL-6 e TNF-α6. No entanto, como outros tipos de células respondem à estimulação TLR4 não é tão claro. Os fibroblastos têm sido implicados em uma ampla gama de patologias, como cânceres e fibrose cística, e têm sido mostrados recentemente para desempenhar um papel de quimio-atração de monócitos e promovendo a inflamação7,8,9.  Nosso laboratório está interessado no papel dos fibroblastos no desenvolvimento da dor aguda e crônica, como evidências precoces sugerem que os fatores liberados pelos fibroblastos (metaloproteinases de matriz (MMPs), inibidor tecidual de metaloproteinases (TIMPs) e fibroblastos fatores de crescimento (FGFs)) estão envolvidos na dor neuropática10.
Os Estados de ativação das células podem ser determinados por uma variedade de fatores que incluem: indução de genes imediatos precoces, expressão protéica alterada, proliferação celular e alterações morfológicas11,12,13. Existem muitas técnicas que existem para responder a perguntas que podemos ter sobre como a ativação das células contribui para patologias, mas todos eles têm suas limitações. A imunohistoquímica prototípica usa anticorpos marcados cDNAs para rotular proteínas de interesse em tecido fixo, o que pode ser inespecífico e muitas vezes requer solução de problemas significativa antes de produzir resultados frutíferos14. A mancha ocidental é uma técnica útil ao comparar níveis de expressão da proteína no tecido post-mortem; Entretanto, o componente histológico está faltando nessa técnica e os pesquisadores não conseguem identificar alterações na morfologia15. O RNA-Seq nos permite quantificar a presença de RNA mensageiro em uma amostra que, em muitos casos, produz dados perspicazes; Entretanto, a lacuna entre transcrição e tradução dificulta a resolução temporal após um estímulo16. A imagem latente confocal é útil em determinar a expressão e a colocalização das proteínas que existem em uma seção transversal dos tecidos17. Muitas vezes, isso não é representativo da totalidade da amostra de tecido. Em contraste, microscópios multifótons permitem aos usuários imagem de aproximadamente 1 mm de profundidade em uma amostra, criando uma representação tridimensional abrangente18. Conseqüentemente, nós escolhemos centrar-se sobre in vivo, 2 Preps da imagem latente do fotão, porque os dados recolhidos destes experimentos são mais diretamente relacionable ao microambiente altamente plástico e interligado do tecido vivo.
Uma vantagem de estudar interações proteína-receptor in vivo é que podemos capturar claramente como as células respondem a um estímulo, em tempo real, em seu ambiente nativo sem a influência prejudicial e imprevisível da extração do tecido pós-morte19. Além disso, estudos longitudinais podem ser realizados para avaliar a plasticidade celular e a escorva que pode ocorrer por causa da ativação.  Usando a imagem latente do 2-Photon, nós preservamos a integridade do microambiente atual quando um estímulo externo é aplicado. Este protocolo fornece uma maneira de identificar a captação das moléculas nos fibroblasto que seguem a injeção periférica de LPs cDNAs etiquetados sobre o curso de diversas horas in vivo e o papel de TLR4 na ativação do fibroblasto.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1520px;" width="1520">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:1131px;">10x PBS, 4 L</td>
			<td style="width:185px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:116px;">BP3994</td>
			<td style="width:88px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">700 Series MICROLITER Syringes, Hamilton, Model 705 LT Syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>80501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BD Precision Glide Needle 30G</td>
			<td>VWR</td>
			<td>305106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Blue Pad</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>1420665</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Filter Cube: Green/Red (BP 495-540 DM570 BP 575-645)</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>FV30-FGR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isoflurane, USP 250 mL</td>
			<td>Vedco</td>
			<td>50989-150-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Lipopolysaccharides from Escherichia Coli O111:B4 - FITC conjugate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F3665-1MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Main scanner laser: Spectra Physics INSIGHT DS+ -OL pulsed IR LASER, tunable from 680 nm to 1300 nm, 120 fs pulse width at specimen plane</td>
			<td>Spectra Physics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro Centrifuge Tubes, 1.5 mL</td>
			<td>VWR</td>
			<td>20170-333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Multiphoton Microscope: Olympus MPE-RS TWIN</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>MPE-RS TWIN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Objective: Ultra 25x MPE water-immersion objective 1.05 NA, 2 mm WD</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>XLPLN25XWMP2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Personal Lubricant Jelly (Gel)</td>
			<td>equate</td>
			<td>ZH727 2E F1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SGM-4 Stereotaxic Apparatus</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>16030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SomnoSuite Low-Flow Anesthesia System</td>
			<td>Kent Scientific Corporation</td>
			<td>SS-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Stimulation laser: Olympus-specific SPECTRA PHYSICS MAI TAI HP DEEP SEE-OL pulsed IR LASER, tunable from 690 nm to 1040 nm, 100 fs pulse width at specimen plane</td>
			<td>Spectra Physics</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo two-color 2-photon imaging of genetically-tagged reporter cells in the skin

Os fibroblastos são células mesenquimais que alteram sua morfologia após a ativação, influenciando, em última análise, o microambiente do tecido em que estão localizados. Embora as técnicas tradicionais da imagem latente sejam úteis em identificar interações e morfologia da proteína no tecido fixo, não podem dar a introspecção a respeito de como rapidamente as pilhas podem ligar e proteínas da tomada, e uma vez que ativadas como sua morfologia muda no vivo. No presente estudo, pedimos 2 perguntas principais: 1) qual é o tempo-curso da ativação do fibroblasto através da interação Toll-like do receptor-4 (TLR4) e do lipopolissacarídeo (LPs) e 2) como essas células se comportam uma vez ativadas? Usando a imagem latente do 2-Photon, nós desenvolvemos uma técnica nova para avaliar a habilidade de LPs-FITC de ligar a seu receptor cognato, TLR4, expressado em fibroblastos periféricos na linha genética do rato do repórter; FSP1cre; TdtomateLOX-Stop-LOX in vivo. Esta abordagem única permite que os pesquisadores criem em profundidade, vídeos de lapso de tempo e/ou imagens de proteínas que interagem com células ao vivo que permite ter um nível aumentado de granularidade na compreensão de como as proteínas podem alterar o comportamento celular.

Inicialmente, injetamos LPS-FITC na pata traseira de camundongos do tipo selvagem, a fim de visualizar a captação de LPS-FITC em todos os tipos de células presentes na camada dérmica da pata. Tendo observado uma infinidade de células na camada dérmica da captação da pata traseira fluorescently-Tagged LPS em um rato tipo selvagem (vídeo Figura 1, 2), tentamos especificamente direcionar os fibroblastos como eles são um foco primário em nossa pesquisa. Antes da imagem as patas dos animais injetad...

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In Vivo Two-Color 2-Photon Imaging of Genetically-Tagged Reporter Cells in the Skin

As alterações morfológicas ocorrem em células de fibroblastos imunes responsivos após a ativação e promovem alterações no recrutamento celular. Utilizando a imagem latente do Photon 2 conjuntamente com uma proteína fibroblástica-específica geneticamente projetada 1 (FSP1)-CRE; tdtomato floxed-parar-floxed (TB/TB) linha do mouse e verde cDNAs Tagged lipopolissacarídeo-FITC, podemos ilustrar a captação altamente específica de lipopolissacaríno em fibroblastos dérmicos e alterações morfológicas in vivo.

In vivo duas cores 2-Photon Imaging de células de repórter geneticamente marcadas na pele

Fibroblasts are mesenchymal cells that change their morphology upon activation, ultimately influencing the microenvironment of the tissue they are located ...

Nosso protocolo nos permite visualizar como as células marcadas fluorescentes respondem a um estímulo periférico inflamatório em um animal vivo em tempo real. 2-A imagem de fóton permite a visualização profunda no tecido de um espécime vivo, preservando a integridade de suas células e seu microambiente e fornecendo uma representação precisa do sistema biológico. Respirar move a pata ao longo do tempo, causando embaçamento e perda do plano focal.Certifique-se de fixar firmemente a pata com fita adesiva em uma superfície estável antes da imagem. Neste, você deve ser capaz de encontrar plano de interesse apropriado, certificar-se de que o objetivo está perto da pata sem tocar e está diretamente acima do local de injeção. Antes de iniciar o procedimento, ligue o sistema multifóton e selecione o subjetivo 25X.Coloque um aparelho estereotaxo no palco do microscópio multifóton e conecte o aparelho a uma máquina de entrega de anestesia. Coloque um pedaço de papel preto fosco na superfície do aparelho como um ponto de conexão para a pata do rato. Defina o scanner de ressonância com uma área fixa de varredura de 512 por 512 micrômetros.Sintonize os lasers de excitação nos comprimentos de onda de excitação de 930 e 1.100 nanômetros para sinais de proteína fluorescente verde e vermelho, respectivamente. Use um espelhodicróico de 690 a 1.050 nanômetros para direcionar o caminho de luz de ambos os lasers de excitação para o único objetivo permitindo que o laser de excitação afinado de 930 nanômetros seja refletido no scanner principal e no laser de 1.100 nanômetros para passar diretamente para o scanner principal. Em seguida, defina a potência laser do FITC para 5% e a proteína fluorescente verde para 20% e desligue as luzes aéreas.Para imagens in vivo, anestesiar o mouse e delinear no protocolo de texto. Confirme a falta de resposta ao aperto do dedo do dedo no mouse anestesiado e coloque o mouse no aparelho estereotaxico com acesso a um cone de nariz. Use fita preta para fixar firmemente a pata traseira ao pedaço de papel preto em áreas proximais e distais à área de interesse, certificando-se de que a superfície plantar da pata está desobstruída e voltada para o objetivo.Coloque uma quantidade generosa de lubrificante à base de água na superfície plantar da pata. Toque o objetivo do lubrificante para criar uma coluna de líquido entre a pata e o objetivo. Use a luz de excitação FITC para se concentrar na camada dérmica da pata, confirmando que os fibroblastos de tomate marcados por tandem podem ser visualizados.Imagem a área de células localizada logo abaixo da superfície plantar da pata traseira com ambos os lasers. Adquira um lapso de tempo de 15 minutos de cerca de cinco a 10 fatias Z a aproximadamente um micrômetro por fatia para estabelecer uma representação de linha de base do ambiente. Quando a imagem da linha de base tiver sido obtida, carregue uma seringa Hamilton de vidro de 25 microlitrados com cinco microgramas de lipopólise conjugada FITC, ou LPS, por 20 microliters de PBS.Administre a solução por injeção intraplantar na pata traseira experimental sem perturbar a posição da pata. Em seguida, imagine uma área de células localizada logo abaixo da superfície plantar da pata traseira com ambos os lasers. Adquira um lapso de tempo de 60 a 120 minutos de cerca de cinco a 10 fatias Z a aproximadamente um micrômetro por fatia para identificar a absorção intraplantar mediada por célula do LPS FITC.Como não há fluorescência inerente pelas células dentro da camada dérmica, uma miríade de células na camada dérmica da pata traseira pode ser observada tomando LPS fluorescentemente marcado após injeção intraplantar em um rato tipo selvagem. Após a injeção de LPS FITC, apenas a proteína específica do fibroblasto um fibroblasto positivo expressando pedágio como receptor quatro liga e absorva a proteína injetada com um alto nível de co-localização com uma tag de tomate tandem dimer expressa por essas células. Em contraste, camundongos que têm pedágio como receptor quatro nocauteados fora de todo o corpo não se ligam e captam LPS após a injeção.De fato, as silhuetas celulares são visíveis após a injeção de LPS FITC indicando que a droga está se dispersando no fluido intersticial ao redor das células, mas não está realmente sendo vinculada por um receptor. A coisa mais importante a ser lembrada neste protocolo é garantir que a pata seja imobilizada para que não haja distorções no vídeo devido ao movimento ou respiração. Usando este procedimento, o recrutamento de células fluorescentes marcadas para uma área após lesão e as alterações morfológicas na resposta de uma célula a um estímulo ao longo do tempo podem ser rastreados.Assim, a imagem de 2-Fótons permite que os pesquisadores combinem ratos repórteres genéticos e compostos fluorescentes marcados para avaliar o que acontece em um animal vivo após uma injeção.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Three-dimensional Optical-resolution Photoacoustic Microscopy

Tridimensional Optical resolução Microscopia Fotoacústica

Optical microscopy, providing valuable insights at the cellular and organelle levels, has been widely recognized as an enabling biomedical technology. As ...

Bioengenharia

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Insufficient vascularization is considered to be one of the main factors limiting the clinical success of tissue-engineered constructs. In order to ...

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Quantificação da função global diastólica por análise baseada em Modelagem cinemática de transmitral fluxo através do formalismo de enchimento parametrizada diastólica

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In vitro models are a cost effective and ethical alternative to study cutaneous wound healing processes. Moreover, by using human cells, these models ...

Electrotaxis Studies of Lung Cancer Cells using a Multichannel Dual-electric-field Microfluidic Chip

Electrotaxis Estudos de pulmão células de câncer usando um Multichannel Dual-elétrico-campo Microfluidic Chip

The behavior of directional cell migration under a direct current electric-field (dcEF) is referred to as electrotaxis. The significant role of ...

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A<em&gt; In Vitro</em&gt; Modelo Cultura Órgão da Murino Intervertebral Disc

Intervertebral disc (IVD) degeneration is a significant contributor to low back pain. The IVD is a fibrocartilaginous joint that serves to transmit and ...

Rigid Embedding of Fixed and Stained, Whole, Millimeter-Scale Specimens for Section-free 3D Histology by Micro-Computed Tomography

Rígida incorporação de fixo e manchado, inteiro, espécimes de milímetro-escala para histologia seção livre 3D por Microtomografia computadorizada

For over a hundred years, the histological study of tissues has been the gold standard for medical diagnosis because histology allows all cell types in ...