Name: spatial and temporal control of murine melanoma initiation from mutant melanocyte stem cells
Uploaded: 2019-06-07T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Spatial and Temporal Control of Murine Melanoma Initiation from Mutant Melanocyte Stem Cells at JoVE.com

وقد دعم هذا العمل مكتب مساعد وزير الدفاع للشؤون الصحية ، من خلال برنامج أبحاث السرطان الذي استعرضه النظراء تحت الجائزة W81XWH-16-1-0272. الآراء والتفسيرات والاستنتاجات والتوصيات هي تلك التي لدي المؤلفين ولا تحظي بالضرورة بتاييد وزاره الدفاع. وكان هذا العمل مدعوما أيضا بمنحه البذور من برنامج الخلايا الجذعية كورنيل إلى الأبيض. وقد دعمت h. القمر من قبل مركز كورنيل لفقاري الجينوم الباحث عن البرنامج.

يتم تنفيذ جميع الإجراءات الحيوانية وفقا للجنة الرعاية الحيوانية المؤسسية جامعه كورنيل والاستخدام (IACUC).
1-الاعداد
<ol><li>
جمع مقاطع الذيل من 12 يوما بعد الولادة الفئران وهضم في 400 μL من 0.05 N NaOH في 95 درجه مئوية ل 1 ح. دوامه وأضافه 32 μL من 1 M تريس-HCl ، pH 7. الفئران النمط الجيني وفقا ل?...

<ol>
	<li>Wernli, K. J., Henrikson, N. B., Morrison, C. C., Nguyen, M., Pocobelli, G., Blasi, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+for+skin+cancer+in+adults:+updated+evidence+report+and+systematic+review+for+the+US+preventive+services+task+force.">Screening for skin cancer in adults: updated evidence report and systematic review for the US preventive services task force.</a> The Journal of the American Medical Association. 316 (4), 436-447 (2016).</li><li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics,+2018.">Cancer statistics, 2018.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 68 (1), 7-30 (2018).</li><li>White, A. C., Lowry, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Refining+the+role+for+adult+stem+cells+as+cancer+cells+of+origin.">Refining the role for adult stem cells as cancer cells of origin.</a> Trends in Cell Biology. 25 (1), 11-20 (2015).</li><li>Moon, H., Donahue, L. R., White, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+cancer+cells+of+origin+in+cutaneous+tumors.">Understanding cancer cells of origin in cutaneous tumors.</a> Cancer Stem Cells. , 263-284 (2016).</li><li>Blanpain, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracing+the+cellular+origin+of+cancer.">Tracing the cellular origin of cancer.</a> Nature Cell Biology. 15 (2), 126-134 (2013).</li><li>Moon, H., Donahue, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melanocyte+stem+cell+activation+and+translocation+initiate+cutaneous+melanoma+in+response+to+UV+exposure.">Melanocyte stem cell activation and translocation initiate cutaneous melanoma in response to UV exposure.</a> Cell Stem Cell. 21 (5), 665-678 (2017).</li><li>Moon, H., White, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+path+from+melanocyte+stem+cells+to+cutaneous+melanoma+illuminated+by+UVB.">A path from melanocyte stem cells to cutaneous melanoma illuminated by UVB.</a> Molecular &#38; Cellular Oncology. 5 (2), e1409864 (2018).</li><li>Rabbani, P., Takeo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coordinated+activation+of+Wnt+in+epithelial+and+melanocyte+stem+cells+initiates+pigmented+hair+regeneration.">Coordinated activation of Wnt in epithelial and melanocyte stem cells initiates pigmented hair regeneration.</a> Cell. 145 (6), 941-955 (2011).</li><li>Chou, W. C., Takeo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+migration+of+follicular+melanocyte+stem+cells+to+the+epidermis+after+wounding+or+UVB+irradiation+is+dependent+on+Mc1r+signaling.">Direct migration of follicular melanocyte stem cells to the epidermis after wounding or UVB irradiation is dependent on Mc1r signaling.</a> Nature Medicine. 19 (7), 924-929 (2013).</li><li>Keyes, B. E., Segal, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nfatc1+orchestrates+aging+in+hair+follicle+stem+cells.">Nfatc1 orchestrates aging in hair follicle stem cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (51), (2013).</li><li>M&#252;ller-R&#246;ver, S., Handjiski, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comprehensive+guide+for+the+accurate+classification+of+murine+hair+follicles+in+distinct+hair+cycle+stages.">A comprehensive guide for the accurate classification of murine hair follicles in distinct hair cycle stages.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 117 (1), 3-15 (2001).</li><li>Kastenmayer, R. J., Fain, M. A., Perdue, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+retrospective+study+of+idiopathic+ulcerative+dermatitis+in+mice+with+a+C57BL/6+background.">A retrospective study of idiopathic ulcerative dermatitis in mice with a C57BL/6 background.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science&#8239;: JAALAS. 45 (6), 8-12 (2006).</li><li>Vultur, A., Herlyn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SnapShot:+melanoma.">SnapShot: melanoma.</a> Cancer Cell. 23 (5), (2013).</li><li>Dankort, D., Curley, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Braf(V600E)+cooperates+with+Pten+loss+to+induce+metastatic+melanoma.">Braf(V600E) cooperates with Pten loss to induce metastatic melanoma.</a> Nature Genetics. 41 (5), 544-552 (2009).</li><li>Viros, A., Sanchez-Laorden, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultraviolet+radiation+accelerates+BRAF-driven+melanomagenesis+by+targeting+TP53.">Ultraviolet radiation accelerates BRAF-driven melanomagenesis by targeting TP53.</a> Nature. 511 (7510), 478-482 (2014).</li></ol>

التغييرات الوراثية المميزة التي كثيرا ما وجدت في أورام سرطان الجلد الجلدي وصفت جيدا13. طفرة السائق الأكثر هيمنة هو BrafV600E، وتم إنشاء نموذج الماوس المهندسة وراثيا لسرطان الجلد brafV600Eبوساطة مجموعه Bosenberg14 وأودعت في مختبر جاكسون. باستخدام هذا النم...

الميلانوما ، الشكل الخبيث للأورام الصباغية ، هو السرطان الأكثر عدوانيه في الجلد مع الميلانوما الجلدية المسؤولة عن معظم وفيات سرطان الجلد1. في الولايات المتحدة ، يتم تشخيص سرطان الجلد عاده ؛ ومن المتوقع ان يكون نوع السرطان الأكثر شيوعا من 5 إلى 6 من بين حالات السرطان الجديدة المقدرة في 20182. وعلاوة علي ذلك ، ففي حين أظهرت حالات السرطان العامة اتجاه الانخفاض التدريجي في العقود الاخيره ، فان معدلات الاصابهبالورم الميلانيني الجلدي خلال العقود القليلة الماضية تدل علي زيادة مستمرة وسريعة في كلا الجنسين.
لمكافحه الميلانوما الجلدية بشكل أكثر كفاءه ، من المهم ان نفهم بوضوح الاحداث المبكرة لنمو سرطان الجلد من خلايا المنشا الخاصة بهم للتعرف بشكل أفضل علي الطرق الوقائية الفعالة سريريا. ومن المعروف الآن ان الخلايا الجذعية الكبار يمكن ان تسهم بشكل كبير في تكوين الورم والأصول الخلوية للسرطان في العديد من أنواع مختلفه من الأعضاء بما في ذلك انسجه الجلد3,4,5. المثل ، يمكن للخلايا الجذعية البالغة الخلايا الصباغية (MCSCs) في الجلد الظهري المريد ان تعمل كخلايا من أصل الميلانوما عند التنشيط الشاذ للراس/Raf و akt مسارات6. ومع ذلك ، فان هذه الطفرات اونكوغينيك وحدها ليست قادره علي تحفيز تكوين الورم بكفاءة من MCSCs هادئه. أورام الخلايا الصباغية تتطور في نهاية المطاف عندما تصبح MCSCs نشطه اثناء ركوب الشعر الطبيعي. ومع ذلك ، في هذا البروتوكول ، فاننا سوف تصف أساليب للحث بشكل مصطنع تنشيط الخلوية من mcscs المعرضة للورم ، التالي تسهيل التحكم الدقيق في بدء الورم الميلاني6،7.
من خلال الطرق الموصوفة هنا ، والسيطرة المكانية والزمانيه من سرطان الجلد الشروع الجلدية من MCSCs المعرضة للورم التعبير عن الV600E braf بالاضافه إلى فقدان التعابير pten يمكن ان يؤديها بنجاح ، ونحن سبق ان أبلغت عن6. هذا الأسلوب يدمج النتائج السابقة التي تثبت الخلايا الجذعية الشعرية التنشيط من خلال أزاله الشعر ، فضلا عن كيفيه التعرض للجلد murine إلى الاشعه فوق البنفسجية-B يمكن ان تسهل تفعيل MCSCs المقيمين في بصيلات الشعر ونقل هذه الخلوية السكان الفرعيين إلى البشرة البينية6،8،9،10. ويمكن لهذه النظم في نموذج الجسم الفيزيائي توفير معلومات قيمه فيما يتعلق بكيفية تغيير الفسيولوجية والبيئية يمكن ان تغير الوضع الخلوي لل MCSCs المعرضة للميلانوما ، والتي بدورها يمكن ان تحفز البدء الكبير من سرطان الجلد في البشرة.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Tamoxifen</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T5648-1G</td>
			<td>For systemic injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tamoxifen</td>
			<td>Cayman Chemical</td>
			<td>13258</td>
			<td>For systemic injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corn oil</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>45-C8267-2.5L-EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4OH-tamoxifen</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H7904-25MG</td>
			<td>For topical treatment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>26g 1/2&#34; needles</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td>Veterinary grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL syringe</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td>Veterinary grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pet hair trimmer</td>
			<td>Wahl</td>
			<td>09990-502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair removal cream</td>
			<td>Nair</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Available at most drug stores</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swabs</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultraviolet light bulb</td>
			<td>UVP</td>
			<td>95-0042-08</td>
			<td>model XX-15M midrange UV lamp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 proof ethanol</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td>pure ethanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoplast PE</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22900700</td>
			<td>paraffin pellets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral Buffered Formalin, 10%</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HT501128-4L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear-Rite 3</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>6901</td>
			<td>xylene substitute</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O.C.T. Compound</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>23730571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Cassette</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>89199-430</td>
			<td>for FFPE processing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryomolds</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4557</td>
			<td>25 x 20 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FFPE metal mold</td>
			<td>Leica</td>
			<td>3803082</td>
			<td>24 x 24 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td>Veterinary grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia inhalation system</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td>Veterinary grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine scissor</td>
			<td>FST</td>
			<td>14085-09</td>
			<td>Straight, sharp/sharp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine scissor</td>
			<td>FST</td>
			<td>14558-09</td>
			<td>Straight, sharp/sharp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metzenbaum</td>
			<td>FST</td>
			<td>14018-13</td>
			<td>Straight, blunt/blunt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>FST</td>
			<td>11252-00</td>
			<td>Dumont #5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>FST</td>
			<td>11018-12</td>
			<td>Micro-Adson</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tyr-CreER; LSL-BrafV600E; Pten-f/f</td>
			<td>Jackson Labs</td>
			<td>13590</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSL-tdTomato</td>
			<td>Jackson Labs</td>
			<td>007914</td>
			<td>ai14</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cre-1</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>GCATTACCGGTCGATGCAACGAGTGATGAG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cre-2</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>GAGTGAACGAACCTGGTCGAAATCAGTGCG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Braf-V600E-1</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>TGAGTATTTTTGTGGCAACTGC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Braf-V600E-2</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>CTCTGCTGGGAAAGCGGC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kras-G12D-1</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>AGCTAGCCACCATGGCTTGAGTAAGTCTGCA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kras-G12D-2</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>CCTTTACAAGCGCACGCAGACTGTAGA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pten-1</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>ACTCAAGGCAGGGATGAGC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pten-2</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>AATCTAGGGCCTCTTGTGCC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pten-3</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>GCTTGATATCGAATTCCTGCAGC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tdTomato-1</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>AAGGGAGCTGCAGTGGAGTA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tdTomato-2</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>CCGAAAATCTGTGGGAAGTC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tdTomato-3</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>GGCATTAAAGCAGCGTATCC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tdTomato-4</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>CTGTTCCTGTACGGCATGG</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

spatial and temporal control of murine melanoma initiation from mutant melanocyte stem cells

الورم الميلاني الجلدي معروف جيدا بسرطان الجلد الأكثر عدوانيه. وعلي الرغم من استمرار توثيق عوامل الخطر والتغيرات الجينية الرئيسية بعمق متزايد ، فقد اظهر معدل الاصابه بسرطان الجلد الجلدي زيادة سريعة ومستمرة خلال العقود الاخيره. من أجل العثور علي أساليب وقائية فعاله ، من المهم ان نفهم الخطوات المبكرة من البدء في سرطان الجلد. أظهرت البيانات السابقة ان الخلايا الجذعية للخلايا الميلانينيه (MCSCs) في انسجه البشرة البالغة يمكن ان تكون خلايا المنشا الميلانوما عند التعبير عن الطفرات الجينية والتعديلات الوراثية. ويمكن ان يسببه الورم الناجم عن الأورام السرطانية المعرضة للاصابه بسرطان الجلد عند انتقال MCSCs من السكون إلى الحالة النشطة. ويمكن الترويج لهذا الانتقال في MCSCs المعرضة لسرطان الجلد من خلال تحوير اما الخلايا الجذعية بصيلات الشعر ' الدولة النشاط أو من خلال العوامل البيئية الخارجية مثل الاشعه فوق البنفسجية-B (الاشعه فوق البنفسجية-B). يمكن التلاعب بهذه العوامل بشكل مصطنع في المختبر عن طريق أزاله الشعر الكيميائي ، والذي يسبب انتقال الخلايا الجذعية بصيلات الشعرة و MCSCs من الهدوء إلى الحالة النشطة ، والتعرض للاشعه فوق البنفسجية-B باستخدام ضوء السطح. توفر هذه الطرق التحكم المكاني والزماني الناجح لبدء الجلد الميلاني الجلدي في البشرة الظهرية المرجينه. ولذلك ، فان هذه النظم في نموذج الجسم الفيفو تكون ذات قيمه لتحديد الخطوات المبكرة للبدء الجلدية الميلانوما ويمكن استخدامها لاختبار الطرق المحتملة للوقاية من الأورام.

الجلدية التي يسببها أزاله الجلد بواسطة الكيميائية
ويرد في الشكل 2الاجراء الخاص بازاله المزيلات الكيميائية. عندما الفئران هي 7 أسابيع بعد الولادة ، والجلد الظهري في telogen. خلال telogen, الخلايا الجذعية بصيلات الشعر و MC...

Watch this Scientific Journal Video about Spatial and Temporal Control of Murine Melanoma Initiation from Mutant Melanocyte Stem Cells at JoVE.com

Spatial and Temporal Control of Murine Melanoma Initiation from Mutant Melanocyte Stem Cells

التحكم المكاني والزماني للبدء من الميلانوما من الخلايا الجذعية المتحولة للخلايا الصباغية

يصف الاجراء التالي طريقه للسيطرة المكانية والزمانيه لبدء ورم الخلايا الصباغية في الجلد الظهري المريد ، وذلك باستخدام نموذج الماوس المهندسة وراثيا. يصف هذا البروتوكول المجهرية بالاضافه إلى بدء الورم الميلاني الجلدي.

Cutaneous melanoma is well known as the most aggressive skin cancer. Although the risk factors and major genetic alterations continue to be documented ...

يتم تشخيص سرطان الجلد على نطاق واسع في جميع أنحاء العالم ، مع زيادة في الإصابة. تسمح هذه البروتوكولات بالمراحل المبكرة من بدء الورم الميلانيني إلى التحكم فيها بعناية ، مما يسهل دراسة تطوره. من خلال التحكم في وقت وموقع تنشيط الخلايا الجذعية الصباغية ، لدينا القدرة على تمييز التغيرات داخل مجموعة الخلايا الجذعية وإقهار الورم الميلانيني الجديد.ومن خلال هذا الإجراء، سيكون دهاهم كيم ولوي أن، طالبان خريجان من المختبر. قبل يومين إلى ثلاثة أيام من بدء العملية، استخدم أداة تشذيب كهربائية لحلاقة الجلد الظهري من كل فأر عمره سبعة أسابيع. في يوم التجربة ، استخدم مسحة قطنية لتطبيق طبقة رقيقة من كريم إزالة الشعر على الجلد المكشوف.مرة واحدة وقد تم تطبيقها بالتساوي كريم، واستخدام مسحات القطن نظيفة لإزالة كريم، تليها مسح لطيف مع قطعة قماش مبللة لإزالة أي كريم المتبقية. ثم العودة كل الماوس إلى قفصها المنزل مع رصد حتى الشفاء الكامل. للإشعاع فوق البنفسجية-B، تغطية الجلد الظهري مع المواد الواقية UV-B بحيث سيتم كشف المنطقة المطلوبة فقط، وتغطية غرفة الأشعة فوق البنفسجية مع غطاء مقاومة للأشعة فوق البنفسجية.ثم تشغيل مصباح الأشعة فوق البنفسجية-B لتشعيع الماوس لفترة زمنية تجريبية مناسبة قبل العودة الماوس إلى قفص فارغ مع رصد حتى الشفاء الكامل. لعزل عينات الجلد، استخدم أداة تشذيب كهربائية لإزالة أي شعر من منطقة الجلد الظهرية للفئران المشعة، وفرشاة طفيفة الجلد المكشوف مع الأنسجة الخالية من الوبر لمسح المنطقة. جعل شق صغير مع مقص حاد فقط فوق قاعدة الذيل وإدراج مقص كبير، حادة في شق لفصل الأنسجة الضامة تحت الجلد.باستخدام مقص حاد، وقطع بعناية على طول حافة منطقة الجلد من الفائدة لعزل عينة الأنسجة ووضع أنسجة الجلد استئصالها على منشفة ورقية نظيفة. ثم استخدام ملقط مملة لتمتد الجلد بحيث يلتصق المنشفة ومشدود. عندما تم حصاد جميع العينات، ضع عينة جلدية ومنشفة ورقية تدعم في قطعة من ورق التصفية المطوية المجاورة مباشرة للتجعد، مع الحرص على أن العينة ناعمة وغير مطوية أو متكومة.أغلق جانبي ورق التصفية باستخدام الدبابيس، ثم اقطع الورق. ثم تغمر تماما العينات في 10٪ محايد buffered formalin لمدة ثلاث إلى خمس ساعات في درجة حرارة الغرفة قبل غسل الأنسجة مع اثنين من يغسل لمدة خمس دقائق في المياه الأيونية. بعد الغسيل الثاني، قم بإزالة أي مادة متبقية من أنسجة الجلد بعناية، وتقليم حواف العينات بحيث لا تكون خشنة.المقبل، وجعل ثلاثة قطع القوس في كل عينة بحيث عرض الشرائط لا يزيد عن خمسة ملليمترات، وجعل التخفيضات عرضية بحيث العينات ليست أكثر من 20 ملليمتر واسعة. ضع قالبًا كريو يحتوي على درجة حرارة قطع مثالية أو متوسطة في اتجاه عمودي ، ووضع أربع إلى خمس قطع من الجلد على قمة أكتوبر. عندما تكون جميع القطع في مكانها ، استخدم زوجين من ملقط غرامة لجلب حافة طويلة من كل قطعة من الجلد إلى الجزء السفلي من قالب التبريد بحيث تكون العينات عمودية داخل OCT وتعامد على قاعدة القالب.ثم ملء القالب مع أوكت إضافية إلى الشفة الثانية ووضع القالب على سطح مستو من قطعة من الجليد الجاف، وذلك باستخدام ملقط لضبط أي قطع الجلد التي قد تحولت أثناء النقل كما كتلة يبدأ في تجميد حسب الضرورة. عندما تكون الفئران سبعة أسابيع بعد الولادة، بشرتهم الظهرية في telogen. خلال telogen، ومن المعروف أن الخلايا الجذعية بصيلات الشعر والميلانوسيت تكون في حالة راحة هادئة، والجلد يجب أن تظهر أي نمو الشعر كبيرة بعد الحلاقة.ومع ذلك، يمكن أن تحفز إزالة الشعر الكيميائي تنشيط الخلايا الجذعية بصيلات الشعر، مما يؤدي إلى نمو كبير للشعر داخل المنطقة ذات الاهتمام. كما إزالة كيميائي يمكن أن تحفز بشكل كبير على تنشيط كل من جريب الشعر والخلايا الجذعية الميلانوسييت, الخلايا الجذعية الميلانوسيت المعرضة للورما في حالة نشطة يمكن أن تشكل الأورام ويمكن ملاحظة بدء سرطان الجلد المجهرية في غضون أسبوعين من إزالة الشعر الكيميائي. يمكن للإشعاع الأشعة فوق البنفسجية-B أيضا الحث على بدء الورم من الخلايا الجذعية الصباغية سيرس، عرضة للورم.الأهم من ذلك، الأشعة فوق البنفسجية-B يحفز النقل المباشر للخلايا الجذعية الميلانوسيت من تخصص الخلايا الجذعية الجريب إلى البشرة بين الجريبات. وعلاوة على ذلك، يمكن أن تحفز الأشعة فوق البنفسجية-B الخلايا الجذعية الخلايا الجذعية المنشأ تكوين الورم الميلانيني في جميع أنحاء البشرة بين الدواخل. على غرار الجلد الظهري، يمكن ملاحظة بدء الورم الميلانيني الناجم عن الأشعة فوق البنفسجية-B بشكل ملحوظ في مناطق الجلد الأخرى، مثل جلد الأذن.في الواقع، بالمقارنة مع السيطرة على جلد الأذن، التي تغطيها القماش المقاوم للأشعة فوق البنفسجية، جلد الأذن المعرض للأشعة فوق البنفسجية-B يدل على تصبغ أعلى بسبب ارتفاع عبء بدء الورم الميلانيني. جرعات مختلفة من الأشعة فوق البنفسجية-B قد يكون لها آثار مختلفة على جلد الماوس ونشاط الصباغ. لذلك، من المهم تحديد وتحسين جرعة التشعيع قبل بدء التجربة.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

نموذج الفأر من التعب المستحث بواسطة الطرفية تشعيع

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

Harnessing the DNA Dye-triggered Side Population Phenotype to Detect and Purify Cancer Stem Cells from Biological Samples

تسخير الحمض النووي صبغ أثار الجانب السكان النمط الظاهري للكشف عن وتنقية الخلايا الجذعية للسرطان من العينات البيولوجية

Cancer is a stem cell-driven disease and eradication of these cells has become a major therapeutic goal. Deciphering vulnerabilities of Cancer Stem Cells ...

Using CRISPR/Cas9 Gene Editing to Investigate the Oncogenic Activity of Mutant Calreticulin in Cytokine Dependent Hematopoietic Cells

كريسبر/Cas9 باستخدام الجينات للتحقيق في نشاط النمطان Calreticulin المسخ في الخلايا المكونة للدم سيتوكين تعتمد على تحرير

Clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR) is an adaptive immunity system in prokaryotes that has been repurposed by scientists to ...

Investigation of Genetic Dependencies Using CRISPR-Cas9-based Competition Assays

تحقيق تبعيات الجينية باستخدام فحوصات كريسبر-Cas9-تعتمد المنافسة

Gene perturbation studies have been extensively used to investigate the role of individual genes in AML pathogenesis. For achieving complete gene ...

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

عزل الخلايا الجذعية الوسيطة من أنسجة اللب والثقافة المشتركة مع الخلايا السرطانية لدراسة التفاعلات الخاصة بها

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

Rapid Generation of Primary Murine Melanocyte and Fibroblast Cultures

الجيل السريع من الخلايا الصباغية الأولية Murine والثقافات الليفية

Defects in fibroblast or melanocyte function are associated with skin diseases, including poor barrier function, defective wound healing, pigmentation ...

Flow Cytometric Analysis of Mitochondrial Reactive Oxygen Species in Murine Hematopoietic Stem and Progenitor Cells and MLL-AF9 Driven Leukemia

تحليل مقياس التدفق لأنواع الأكسجين التفاعلي الميتوكوندريا في الجذعية المكونة للدم وخلايا البروجينوتريو وابيضاض الدم المدفوع MLL-AF9

We present a flow cytometric approach for analyzing mitochondrial ROS in various live bone marrow (BM)-derived stem and progenitor cell populations from ...

Isolation of Exosome-Enriched Extracellular Vesicles Carrying Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor from Embryonic Stem Cells

عزل الحويصلات خارج الخلية المخصبة Exosome تحمل عامل تحفيز مستعمرة الحبيبية-الضامة من الخلايا الجذعية الجنينية

Embryonic stem cells (ESCs) are pluripotent stem cells capable of self-renewal and differentiation into all types of embryonic cells. Like many other cell ...

Isolation of Stem-like Cells from 3-Dimensional Spheroid Cultures

عزل خلايا شبيهه بالجذعية من ثقافات كروي ثلاثية الابعاد

Despite advances in adult stem cell research, identification and isolation of stem cells from tissue specimens remains a major challenge. While resident ...

Preparation of Mitochondria from Ovarian Cancer Tissues and Control Ovarian Tissues for Quantitative Proteomics Analysis

اعداد الميتوكوندريا من انسجه سرطان المبيض والتحكم في انسجه المبيض للتحليل الكمي للبروبروتيميكس

Ovarian cancer is a common gynecologic cancer with high mortality but unclear molecular mechanism. Most ovarian cancers are diagnosed in the advanced ...