Name: spatial and temporal control of murine melanoma initiation from mutant melanocyte stem cells
Uploaded: 2019-06-07T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Spatial and Temporal Control of Murine Melanoma Initiation from Mutant Melanocyte Stem Cells at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door het Bureau van de adjunct-minister van defensie voor gezondheidszaken, via de peer reviewed kankeronderzoek programma onder gunning W81XWH-16-1-0272. Adviezen, interpretaties, conclusies en aanbevelingen zijn die van de auteurs en zijn niet noodzakelijkerwijs onderschreven door het ministerie van defensie. Dit werk werd ook gesteund door een zaad toelage van het Cornell programma van de stam cel aan A.C. wit. H. de maan werd gesteund door het Cornell centrum voor geleerden van het gewervelde Genomics programma.

Alle dierlijke procedures worden uitgevoerd in overeenstemming met de Cornell University Institutional Animal Care en use Committee (DEC).
1. voorbereiding
<ol><li>
Verzamel de staart clips van 12 dagen postnatale muizen en Digest in 400 µ L van 0,05 N NaOH bij 95 °C voor 1 h. Vortex en voeg 32 µ L van 1 M Tris-HCl, pH 7. Genotype muizen volgens PCR protocollen die via het Jackson laboratorium en identificeren muizen met genotype van belang6. - Tyr-creer...

<ol>
	<li>Wernli, K. J., Henrikson, N. B., Morrison, C. C., Nguyen, M., Pocobelli, G., Blasi, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+for+skin+cancer+in+adults:+updated+evidence+report+and+systematic+review+for+the+US+preventive+services+task+force.">Screening for skin cancer in adults: updated evidence report and systematic review for the US preventive services task force.</a> The Journal of the American Medical Association. 316 (4), 436-447 (2016).</li><li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics,+2018.">Cancer statistics, 2018.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 68 (1), 7-30 (2018).</li><li>White, A. C., Lowry, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Refining+the+role+for+adult+stem+cells+as+cancer+cells+of+origin.">Refining the role for adult stem cells as cancer cells of origin.</a> Trends in Cell Biology. 25 (1), 11-20 (2015).</li><li>Moon, H., Donahue, L. R., White, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+cancer+cells+of+origin+in+cutaneous+tumors.">Understanding cancer cells of origin in cutaneous tumors.</a> Cancer Stem Cells. , 263-284 (2016).</li><li>Blanpain, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracing+the+cellular+origin+of+cancer.">Tracing the cellular origin of cancer.</a> Nature Cell Biology. 15 (2), 126-134 (2013).</li><li>Moon, H., Donahue, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melanocyte+stem+cell+activation+and+translocation+initiate+cutaneous+melanoma+in+response+to+UV+exposure.">Melanocyte stem cell activation and translocation initiate cutaneous melanoma in response to UV exposure.</a> Cell Stem Cell. 21 (5), 665-678 (2017).</li><li>Moon, H., White, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+path+from+melanocyte+stem+cells+to+cutaneous+melanoma+illuminated+by+UVB.">A path from melanocyte stem cells to cutaneous melanoma illuminated by UVB.</a> Molecular &#38; Cellular Oncology. 5 (2), e1409864 (2018).</li><li>Rabbani, P., Takeo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coordinated+activation+of+Wnt+in+epithelial+and+melanocyte+stem+cells+initiates+pigmented+hair+regeneration.">Coordinated activation of Wnt in epithelial and melanocyte stem cells initiates pigmented hair regeneration.</a> Cell. 145 (6), 941-955 (2011).</li><li>Chou, W. C., Takeo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+migration+of+follicular+melanocyte+stem+cells+to+the+epidermis+after+wounding+or+UVB+irradiation+is+dependent+on+Mc1r+signaling.">Direct migration of follicular melanocyte stem cells to the epidermis after wounding or UVB irradiation is dependent on Mc1r signaling.</a> Nature Medicine. 19 (7), 924-929 (2013).</li><li>Keyes, B. E., Segal, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nfatc1+orchestrates+aging+in+hair+follicle+stem+cells.">Nfatc1 orchestrates aging in hair follicle stem cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (51), (2013).</li><li>M&#252;ller-R&#246;ver, S., Handjiski, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comprehensive+guide+for+the+accurate+classification+of+murine+hair+follicles+in+distinct+hair+cycle+stages.">A comprehensive guide for the accurate classification of murine hair follicles in distinct hair cycle stages.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 117 (1), 3-15 (2001).</li><li>Kastenmayer, R. J., Fain, M. A., Perdue, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+retrospective+study+of+idiopathic+ulcerative+dermatitis+in+mice+with+a+C57BL/6+background.">A retrospective study of idiopathic ulcerative dermatitis in mice with a C57BL/6 background.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science&#8239;: JAALAS. 45 (6), 8-12 (2006).</li><li>Vultur, A., Herlyn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SnapShot:+melanoma.">SnapShot: melanoma.</a> Cancer Cell. 23 (5), (2013).</li><li>Dankort, D., Curley, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Braf(V600E)+cooperates+with+Pten+loss+to+induce+metastatic+melanoma.">Braf(V600E) cooperates with Pten loss to induce metastatic melanoma.</a> Nature Genetics. 41 (5), 544-552 (2009).</li><li>Viros, A., Sanchez-Laorden, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultraviolet+radiation+accelerates+BRAF-driven+melanomagenesis+by+targeting+TP53.">Ultraviolet radiation accelerates BRAF-driven melanomagenesis by targeting TP53.</a> Nature. 511 (7510), 478-482 (2014).</li></ol>

Hallmark genetische veranderingen vaak gevonden in cutane melanoom tumoren zijn goed beschreven13. De meest dominante driver mutatie is BrafV600E, en een genetisch gemanipuleerde muismodel voor BrafV600E-gemedieerde melanoom werd gegenereerd door de Bosenberg groep14 en neergelegd in het Jackson Laboratory. Met behulp van deze muismodel, onze recente studie aangetoond dat de eis van cellulaire activering van tumor-gevoelige MCSCs voor...

Melanoom, de kwaadaardige vorm van melanocytische tumoren, is de meest agressieve kanker in de huid met cutane melanoom verantwoordelijk voor de meerderheid van de huidkanker sterfgevallen1. In de Verenigde Staten, melanoom wordt vaak gediagnosticeerd; het is naar verwachting de 5th tot 6e meest voorkomende vorm van kanker onder de geschatte nieuwe kankergevallen in 20182. Bovendien, terwijl de algehele incidentie van kanker hebben aangetoond dat de trend van geleidelijke vermindering van de afgelopen decennia, cutane melanoom incidentie percentages in de afgelopen decennia tonen een continue en snelle toename van beide geslachten2.
Om cutane melanoom efficiënter te bestrijden, is het belangrijk om de vroege gebeurtenissen van melanoom ontwikkeling van hun cellen van herkomst duidelijk te begrijpen om klinisch effectieve preventieve methoden beter te kunnen identificeren. Het is nu bekend dat volwassen stamcellen aanzienlijk kunnen bijdragen aan de vorming van tumoren als de cellulaire oorsprong van kanker in veel verschillende soorten organen, waaronder huid weefsels3,4,5. Evenzo, volwassen melanocyt stamcellen (MCSCs) in de muizen dorsale huid kan werken als melanoomcellen van herkomst bij afwijkende activering van de RAS/RAF en Akt paden6. Echter, deze oncogene mutaties alleen niet in staat zijn om efficiënt te induceren tumorvorming van rustige MCSCs. melanocytische tumoren ontwikkelen zich uiteindelijk wanneer MCSCs actief worden tijdens natuurlijk haar fietsen. Echter, in dit protocol, zullen we beschrijven methoden om kunstmatig induceren cellulaire activering van tumor-gevoelige MCSCs, waardoor de precieze controle van melanoom initiatie6,7.
Door middel van de hier beschreven methoden, ruimtelijke en temporele controle van cutane melanoom initiatie van tumor-gevoelige MCSCs uiten oncogene BrafV600E samen met het verlies van Pten expressie kan met succes worden uitgevoerd, zoals we hebben eerder gemeld6. Deze methode bevat eerdere bevindingen die aantonen haarfollikel stamcel activering door ontharing, alsmede hoe de blootstelling van muizen huid aan UV-B kan vergemakkelijken activering van MCSCs inwoner van de haarfollikel en de verplaatsing van deze cellulaire subpopulatie aan interfollicular epidermis6,8,9,10. Deze in vivo modelsystemen kunnen waardevolle informatie verschaffen over hoe fysiologische en milieuveranderingen de cellulaire status van melanoom-gevoelige MCSCs kunnen veranderen, wat op zijn beurt een significante initiatie van melanoom in de huid kan veroorzaken.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Tamoxifen</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T5648-1G</td>
			<td>For systemic injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tamoxifen</td>
			<td>Cayman Chemical</td>
			<td>13258</td>
			<td>For systemic injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corn oil</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>45-C8267-2.5L-EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4OH-tamoxifen</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H7904-25MG</td>
			<td>For topical treatment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>26g 1/2&#34; needles</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td>Veterinary grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL syringe</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td>Veterinary grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pet hair trimmer</td>
			<td>Wahl</td>
			<td>09990-502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair removal cream</td>
			<td>Nair</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Available at most drug stores</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swabs</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultraviolet light bulb</td>
			<td>UVP</td>
			<td>95-0042-08</td>
			<td>model XX-15M midrange UV lamp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 proof ethanol</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td>pure ethanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoplast PE</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22900700</td>
			<td>paraffin pellets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral Buffered Formalin, 10%</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HT501128-4L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear-Rite 3</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>6901</td>
			<td>xylene substitute</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O.C.T. Compound</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>23730571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Cassette</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>89199-430</td>
			<td>for FFPE processing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryomolds</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4557</td>
			<td>25 x 20 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FFPE metal mold</td>
			<td>Leica</td>
			<td>3803082</td>
			<td>24 x 24 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td>Veterinary grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia inhalation system</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td>Veterinary grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine scissor</td>
			<td>FST</td>
			<td>14085-09</td>
			<td>Straight, sharp/sharp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine scissor</td>
			<td>FST</td>
			<td>14558-09</td>
			<td>Straight, sharp/sharp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metzenbaum</td>
			<td>FST</td>
			<td>14018-13</td>
			<td>Straight, blunt/blunt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>FST</td>
			<td>11252-00</td>
			<td>Dumont #5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>FST</td>
			<td>11018-12</td>
			<td>Micro-Adson</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tyr-CreER; LSL-BrafV600E; Pten-f/f</td>
			<td>Jackson Labs</td>
			<td>13590</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSL-tdTomato</td>
			<td>Jackson Labs</td>
			<td>007914</td>
			<td>ai14</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cre-1</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>GCATTACCGGTCGATGCAACGAGTGATGAG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cre-2</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>GAGTGAACGAACCTGGTCGAAATCAGTGCG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Braf-V600E-1</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>TGAGTATTTTTGTGGCAACTGC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Braf-V600E-2</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>CTCTGCTGGGAAAGCGGC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kras-G12D-1</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>AGCTAGCCACCATGGCTTGAGTAAGTCTGCA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kras-G12D-2</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>CCTTTACAAGCGCACGCAGACTGTAGA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pten-1</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>ACTCAAGGCAGGGATGAGC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pten-2</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>AATCTAGGGCCTCTTGTGCC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pten-3</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>GCTTGATATCGAATTCCTGCAGC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tdTomato-1</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>AAGGGAGCTGCAGTGGAGTA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tdTomato-2</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>CCGAAAATCTGTGGGAAGTC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tdTomato-3</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>GGCATTAAAGCAGCGTATCC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tdTomato-4</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>CTGTTCCTGTACGGCATGG</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

spatial and temporal control of murine melanoma initiation from mutant melanocyte stem cells

Cutane melanoom is bekend als de meest agressieve huidkanker. Hoewel de risicofactoren en belangrijke genetische veranderingen nog steeds worden gedocumenteerd met toenemende diepte, de incidentie van cutane melanoom heeft aangetoond een snelle en continue toename in de afgelopen decennia. Met het oog op effectieve preventieve methoden te vinden, is het belangrijk om de vroege stappen van melanoom initiatie in de huid te begrijpen. Eerdere gegevens heeft aangetoond dat folliculaire melanocyt stamcellen (MCSCs) in de volwassen huid weefsels kunnen fungeren als melanoomcellen van herkomst bij het uitdrukken van oncogene mutaties en genetische veranderingen. Tumorigenesis die voortvloeien uit melanoom-gevoelige MCSCs kan worden geïnduceerd wanneer MCSCs overgang van een rustige naar actieve staat. Deze overgang in melanoom-gevoelige MCSCs kan worden bevorderd door de modulatie van ofwel haarfollikel stamcellen ' activiteit staat of door middel van Extrinsieke omgevingsfactoren zoals ultraviolet-B (UV-B). Deze factoren kunnen kunstmatig worden gemanipuleerd in het laboratorium door chemische ontharing, die de overgang van de haarfollikel stamcellen oorzaken en MCSCs van een rustige naar actieve toestand, en door UV-B blootstelling met behulp van een benchtop licht. Deze methoden bieden een succesvolle ruimtelijke en temporele controle van cutane melanoom initiatie in de muizen dorsale huid. Daarom, deze in vivo modelsystemen zal waardevol zijn om de vroege stappen van cutane melanoom initiatie te definiëren en kan worden gebruikt om mogelijke methoden voor de preventie van tumoren te testen.

Cutane melanoom initiatie geïnduceerd door chemische ontharing
De procedure van chemische ontharing is afgebeeld in Figuur 2. Wanneer muizen zijn 7-weken postnatale, hun dorsale huid is in telogene. Tijdens telogene, haarfollikel stamcellen en MCSCs staan bekend om in een rustige, rusttoestand. De huid moet tonen geen significante haargroei na het scheren. Aan de andere kant, chemi...

Watch this Scientific Journal Video about Spatial and Temporal Control of Murine Melanoma Initiation from Mutant Melanocyte Stem Cells at JoVE.com

Spatial and Temporal Control of Murine Melanoma Initiation from Mutant Melanocyte Stem Cells

Ruimtelijke en temporele controle van muizen melanoom initiatie van mutant melanocyt stamcellen

De volgende procedure beschrijft een methode voor ruimtelijke en temporele controle van melanocytische tumor initiatie in muizen dorsale huid, met behulp van een genetisch gemanipuleerde muismodel. Dit protocol beschrijft macroscopische en microscopische cutane melanoom initiatie.

Cutaneous melanoma is well known as the most aggressive skin cancer. Although the risk factors and major genetic alterations continue to be documented ...

Melanoom wordt wereldwijd op grote schaal gediagnosticeerd, met toenemende incidentie. Deze protocollen maken het mogelijk de vroege stadia van melanoom initiatie zorgvuldig worden gecontroleerd, het vergemakkelijken van de studie van de ontwikkeling ervan. Door de tijd en locatie van melanocyten stamcelactivering te controleren, hebben we de mogelijkheid om de veranderingen binnen de stamcelpopulatie en de nieuwe stammelanoominitiatie te onderscheiden.Het aantonen van de procedure zal Dahihm Kim en Luye An, afgestudeerde studenten van het laboratorium. Twee tot drie dagen voor het begin van de procedure, gebruik maken van een elektrische trimmer om de rughuid scheren van elke verdoofde zeven weken oude muis. Gebruik op de dag van het experiment een wattenstaafje om een dun laagje ontharingscrème op de blootgestelde huid aan te brengen.Zodra de crème gelijkmatig is aangebracht, gebruik maken van schone wattenstaafjes om de crème te verwijderen, gevolgd door zachte afvegen met een vochtige doek om eventuele resterende crème te verwijderen. Dan terug elke muis naar zijn huis kooi met controle tot volledig herstel. Bedek voor UV-B bestraling de rughuid met UV-B-beschermend materiaal, zodat alleen het gewenste gebied wordt blootgesteld en bedek de UV-kamer met een UV-bestendig deksel.Zet vervolgens de UV-B-lamp aan om de muis gedurende de juiste experimentele periode te bestralen voordat u de muis terugzet naar een lege kooi met controle tot volledig herstel. Om de huidmonsters te isoleren, gebruik een elektrische trimmer om elk haar te verwijderen uit het dorsale huidgebied van de geëuthanaseerde bestraalde muizen en de blootgestelde huid licht te borstelen met een pluisvrij weefsel om het gebied te verwijderen. Maak een kleine incisie met een scherpe schaar net boven de basis van de staart en steek grote, stompe schaar in de incisie om de onderhuidse bindweefsels te scheiden.Met behulp van een scherpe schaar, zorgvuldig gesneden langs de rand van het huidgebied van belang om het weefsel monster te isoleren en plaats het uitgesneden huidweefsel op een schone papieren handdoek. Gebruik dan doffe tangen om de huid te strekken, zodat het hecht aan de handdoek en is strak. Wanneer alle monsters zijn geoogst, plaats een huidmonster en papieren handdoek backing in een stuk gevouwen filter papier direct naast de vouw, oppassen dat het monster glad is en niet gevouwen of verfrommeld.Sluit de zijkanten van het filterpapier met nietjes en snijd het papier bij. Dompelen de monsters vervolgens gedurende drie tot vijf uur bij kamertemperatuur volledig onder in 10% neutraal gebufferd formaline voordat ze de weefsels met twee wasbeurten van vijf minuten in gedeïmiseerd water waste. Verwijder na de tweede wasbeurt zorgvuldig het resterende materiaal uit de huidweefsels en snijd de randen van de monsters zo dat ze niet gekarteld zijn.Maak vervolgens drie sagittale sneden in elk monster, zodat de breedte van de strips niet meer dan vijf millimeter is, en maak transversale sneden, zodat de monsters niet meer dan 20 millimeter breed zijn. Plaats een cryo-mal met een optimale snijtemperatuur of OCT-medium in een staande oriëntatie en plaats vier tot vijf stukken huid bovenop de OKT. Wanneer alle stukken op hun plaats zijn, gebruik maken van twee paar fijne tangen om de lange rand van elk stuk van de huid te brengen naar de bodem van de cryo schimmel, zodat de monsters zijn verticaal binnen de OCT en loodrecht op de basis van de mal.Vul vervolgens de mal met extra OCT naar de tweede lip en plaats de mal op een vlakke ondergrond van een stuk droog ijs, met behulp van tangen om eventuele huidstukken die kunnen zijn verschoven tijdens de overdracht aan te passen als het blok begint te bevriezen als dat nodig is. Wanneer muizen zeven weken na de natale zijn, is hun rughuid in telogen. Tijdens de tiener, haarfollikel en melanocyten stamcellen zijn bekend dat in een rustige rusttoestand, en de huid mag geen significante haargroei vertonen na het scheren.Chemische ontharing, echter, kan leiden tot haarzakje stamcel activering, het induceren van aanzienlijke haargroei binnen de regio van belang. Aangezien chemische ontharing de activering van zowel haarfollikel- als melanocytenstamcellen aanzienlijk kan veroorzaken, kunnen melanoomgevoelige melanocytenstamcellen in een actieve toestand tumoren vormen en kan microscopisch melanoom initiatie binnen twee weken na chemische ontharing worden waargenomen. UV-B bestraling kan ook tumor initiatie veroorzaken van rustige, tumor-gevoelige melanocyten stamcellen.Belangrijk is dat UV-B de directe translocatie van melanocytenstamcellen van hun folliculaire stamcelnis naar de interfoliculaire opperhuid induceert. Bovendien kan UV-B melanocytenstamcel-oorsprong cutane melanoomvorming gedurende de interfolliculaire opperhuid veroorzaken. Net als bij de huid van de rug, UV-B-geïnduceerde melanoom initiatie kan met name worden waargenomen in andere huidgebieden, zoals de oorhuid.Sterker nog, in vergelijking met de controle oor huid, bedekt met UV-resistente doek, oor huid blootgesteld aan UV-B toont een hogere pigmentatie als gevolg van een hogere last van melanoom initiatie. Verschillende doses UV-B kunnen verschillende effecten hebben op de huid van de muis en de activiteit van melanocyten. Daarom is het belangrijk om de bestralingsdosis te bepalen en te optimaliseren voordat u met uw experiment begint.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

Een muismodel van vermoeidheid geïnduceerd door Peripheral Bestraling

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

Harnessing the DNA Dye-triggered Side Population Phenotype to Detect and Purify Cancer Stem Cells from Biological Samples

De DNA-kleurstof geactiveerde zijbevolkingsfenotype gebruiken om de kankerstamcellen van biologische monsters te detecteren en te zuiveren

Cancer is a stem cell-driven disease and eradication of these cells has become a major therapeutic goal. Deciphering vulnerabilities of Cancer Stem Cells ...

Using CRISPR/Cas9 Gene Editing to Investigate the Oncogenic Activity of Mutant Calreticulin in Cytokine Dependent Hematopoietic Cells

Met behulp van CRISPR/Cas9 Gene bewerken om te onderzoeken de oncogene activiteit van Mutant Calreticulin in Cytokine afhankelijke hematopoietische cellen

Clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR) is an adaptive immunity system in prokaryotes that has been repurposed by scientists to ...

Investigation of Genetic Dependencies Using CRISPR-Cas9-based Competition Assays

Onderzoek naar genetische afhankelijkheden met behulp van CRISPR-Cas9-concurrentie op basis van testen

Gene perturbation studies have been extensively used to investigate the role of individual genes in AML pathogenesis. For achieving complete gene ...

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

Mesenchymale stamcellen isolatie uit Pulp weefsel en co cultuur met kankercellen te bestuderen van hun interacties

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

Rapid Generation of Primary Murine Melanocyte and Fibroblast Cultures

Snelle aanmaak van primaire Murine melanocyten en fibroblast-culturen

Defects in fibroblast or melanocyte function are associated with skin diseases, including poor barrier function, defective wound healing, pigmentation ...

Flow Cytometric Analysis of Mitochondrial Reactive Oxygen Species in Murine Hematopoietic Stem and Progenitor Cells and MLL-AF9 Driven Leukemia

Flow cytometrische analyse van mitochondriale reactieve zuurstof soorten in Muriene hematopoietische stam en voorlopercellen en MLL-AF9 gedreven leukemie

We present a flow cytometric approach for analyzing mitochondrial ROS in various live bone marrow (BM)-derived stem and progenitor cell populations from ...

Isolation of Exosome-Enriched Extracellular Vesicles Carrying Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor from Embryonic Stem Cells

Isolatie van exosoom-verrijkte extracellulaire blaasjes met granulocyt-macrofaag koloniestimulerende factor uit embryonale stamcellen

Embryonic stem cells (ESCs) are pluripotent stem cells capable of self-renewal and differentiation into all types of embryonic cells. Like many other cell ...

Isolation of Stem-like Cells from 3-Dimensional Spheroid Cultures

Isolatie van stam-achtige cellen uit 3-dimensionale Spheroid-culturen

Despite advances in adult stem cell research, identification and isolation of stem cells from tissue specimens remains a major challenge. While resident ...

Preparation of Mitochondria from Ovarian Cancer Tissues and Control Ovarian Tissues for Quantitative Proteomics Analysis

Bereiding van mitochondriën van ovariële kanker weefsels en controle ovariële weefsels voor kwantitatieve Proteomics analyse

Ovarian cancer is a common gynecologic cancer with high mortality but unclear molecular mechanism. Most ovarian cancers are diagnosed in the advanced ...