Name: spatial and temporal control of murine melanoma initiation from mutant melanocyte stem cells
Uploaded: 2019-06-07T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Spatial and Temporal Control of Murine Melanoma Initiation from Mutant Melanocyte Stem Cells at JoVE.com

Questo lavoro è stato sostenuto dall'ufficio dell'assistente segretario della difesa per gli affari sanitari, attraverso il programma di ricerca sul cancro peer reviewed sotto il premio W81XWH-16-1-0272. Opinioni, interpretazioni, conclusioni e raccomandazioni sono quelle degli autori e non sono necessariamente approvate dal dipartimento della difesa. Questo lavoro è stato sostenuto anche da una sovvenzione di seme dal programma di cellule staminali Cornell a A.C. White. H. Moon è stato supportato dal Cornell Center for vertebrate Genomics Scholar Program.

Tutte le procedure degli animali sono eseguite in conformità con il Comitato istituzionale per l'assistenza e l'uso degli animali della Cornell University (IACUC).
1. la preparazione
<ol><li>
Raccogliere clip di coda da topi postnatali 12 giorni e digerire in 400 μL di 0,05 N NaOH a 95 ° c per 1 h. Vortex e aggiungere 32 μL di 1 M Tris-HCl, pH 7. I topi di genotipo secondo i protocolli PCR forniti attraverso il laboratorio Jackson e identificano i topi con genotipo di interesse<s...

<ol>
	<li>Wernli, K. J., Henrikson, N. B., Morrison, C. C., Nguyen, M., Pocobelli, G., Blasi, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+for+skin+cancer+in+adults:+updated+evidence+report+and+systematic+review+for+the+US+preventive+services+task+force.">Screening for skin cancer in adults: updated evidence report and systematic review for the US preventive services task force.</a> The Journal of the American Medical Association. 316 (4), 436-447 (2016).</li><li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics,+2018.">Cancer statistics, 2018.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 68 (1), 7-30 (2018).</li><li>White, A. C., Lowry, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Refining+the+role+for+adult+stem+cells+as+cancer+cells+of+origin.">Refining the role for adult stem cells as cancer cells of origin.</a> Trends in Cell Biology. 25 (1), 11-20 (2015).</li><li>Moon, H., Donahue, L. R., White, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+cancer+cells+of+origin+in+cutaneous+tumors.">Understanding cancer cells of origin in cutaneous tumors.</a> Cancer Stem Cells. , 263-284 (2016).</li><li>Blanpain, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracing+the+cellular+origin+of+cancer.">Tracing the cellular origin of cancer.</a> Nature Cell Biology. 15 (2), 126-134 (2013).</li><li>Moon, H., Donahue, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melanocyte+stem+cell+activation+and+translocation+initiate+cutaneous+melanoma+in+response+to+UV+exposure.">Melanocyte stem cell activation and translocation initiate cutaneous melanoma in response to UV exposure.</a> Cell Stem Cell. 21 (5), 665-678 (2017).</li><li>Moon, H., White, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+path+from+melanocyte+stem+cells+to+cutaneous+melanoma+illuminated+by+UVB.">A path from melanocyte stem cells to cutaneous melanoma illuminated by UVB.</a> Molecular &#38; Cellular Oncology. 5 (2), e1409864 (2018).</li><li>Rabbani, P., Takeo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coordinated+activation+of+Wnt+in+epithelial+and+melanocyte+stem+cells+initiates+pigmented+hair+regeneration.">Coordinated activation of Wnt in epithelial and melanocyte stem cells initiates pigmented hair regeneration.</a> Cell. 145 (6), 941-955 (2011).</li><li>Chou, W. C., Takeo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+migration+of+follicular+melanocyte+stem+cells+to+the+epidermis+after+wounding+or+UVB+irradiation+is+dependent+on+Mc1r+signaling.">Direct migration of follicular melanocyte stem cells to the epidermis after wounding or UVB irradiation is dependent on Mc1r signaling.</a> Nature Medicine. 19 (7), 924-929 (2013).</li><li>Keyes, B. E., Segal, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nfatc1+orchestrates+aging+in+hair+follicle+stem+cells.">Nfatc1 orchestrates aging in hair follicle stem cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (51), (2013).</li><li>M&#252;ller-R&#246;ver, S., Handjiski, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comprehensive+guide+for+the+accurate+classification+of+murine+hair+follicles+in+distinct+hair+cycle+stages.">A comprehensive guide for the accurate classification of murine hair follicles in distinct hair cycle stages.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 117 (1), 3-15 (2001).</li><li>Kastenmayer, R. J., Fain, M. A., Perdue, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+retrospective+study+of+idiopathic+ulcerative+dermatitis+in+mice+with+a+C57BL/6+background.">A retrospective study of idiopathic ulcerative dermatitis in mice with a C57BL/6 background.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science&#8239;: JAALAS. 45 (6), 8-12 (2006).</li><li>Vultur, A., Herlyn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SnapShot:+melanoma.">SnapShot: melanoma.</a> Cancer Cell. 23 (5), (2013).</li><li>Dankort, D., Curley, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Braf(V600E)+cooperates+with+Pten+loss+to+induce+metastatic+melanoma.">Braf(V600E) cooperates with Pten loss to induce metastatic melanoma.</a> Nature Genetics. 41 (5), 544-552 (2009).</li><li>Viros, A., Sanchez-Laorden, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultraviolet+radiation+accelerates+BRAF-driven+melanomagenesis+by+targeting+TP53.">Ultraviolet radiation accelerates BRAF-driven melanomagenesis by targeting TP53.</a> Nature. 511 (7510), 478-482 (2014).</li></ol>

Le alterazioni genetiche di Hallmark che si trovano frequentemente nei tumori del melanoma cutaneo sono state ben descritte13. La mutazione più dominante del conducente è BRAFV600E, e un modello di topo geneticamente modificato per il melanoma BRAFV600E-mediato è stato generato dal gruppo Bosenberg14 e depositato nel Jackson Laboratory. Utilizzando questo modello di topo, il nostro recente studio ha dimostrato il requisito dell'att...

Il melanoma, la forma maligna dei tumori melanocitici, è il tumore più aggressivo della pelle con melanoma cutaneo responsabile della maggior parte dei decessi per cancro della pelle1. Negli Stati Uniti, il melanoma è comunemente diagnosticato; si prevede di essere il 5° al 6° tipo di cancro più comune tra i nuovi casi di cancro stimato in 20182. Inoltre, mentre le incidenze tumorali complessive hanno evidenziato l'andamento della progressiva riduzione degli ultimi decenni, i tassi di incidenza del melanoma cutaneo negli ultimi decenni dimostrano un aumento continuo e rapido di entrambi i sessi2.
Per combattere il melanoma cutaneo in modo più efficiente, è importante comprendere chiaramente i primi eventi di sviluppo del melanoma dalle loro cellule di origine per identificare meglio i metodi preventivi clinicamente efficaci. Ora è noto che le cellule staminali adulte possono contribuire significativamente alla formazione tumorale come origine cellulare dei tumori in molti tipi diversi di organi, compresi i tessuti cutanei3,4,5. Analogamente, le cellule staminali melanocitarie adulte (MCSC) nella pelle dorsale murina possono funzionare come cellule di melanoma di origine all'attivazione aberrante dei pathway RAS/RAF e Akt 6. Tuttavia, queste mutazioni oncogeniche da sole non sono in grado di indurre efficacemente la formazione tumorale da MCSCs quiescenti. i tumori melanocitici si sviluppano quando MCSCs diventano attivi durante il ciclismo naturale dei capelli. Tuttavia, in questo protocollo, descriveremo i metodi per indurre artificialmente l'attivazione cellulare di MCSCS inclini al tumore, facilitando così un controllo preciso dell'inizio del melanoma6,7.
Attraverso i metodi qui descritti, il controllo spaziale e temporale dell'iniziazione cutanea del melanoma da MCSCs inclini al tumore che esprimono BRAFV600E oncogenico insieme alla perdita dell'espressione PTEN può essere eseguito con successo, come abbiamo hanno riferito in precedenza6. Questo metodo incorpora precedenti risultati che dimostrano l'attivazione delle cellule staminali follicolari dei capelli attraverso la depilazione, così come l'esposizione della pelle di murina a UV-B può facilitare l'attivazione di MCSCs residente al follicolo pilifero e la traslocazione di questo cellulare sottopopolazione all'epidermide interfollicolare6,8,9,10. Questi sistemi di modelli in vivo possono fornire informazioni preziose su come i cambiamenti fisiologici e ambientali possono alterare lo stato cellulare dei MCSC inclini al melanoma, che a loro volta possono indurre una significativa iniziazione del melanoma nella pelle.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Tamoxifen</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T5648-1G</td>
			<td>For systemic injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tamoxifen</td>
			<td>Cayman Chemical</td>
			<td>13258</td>
			<td>For systemic injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corn oil</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>45-C8267-2.5L-EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4OH-tamoxifen</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H7904-25MG</td>
			<td>For topical treatment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>26g 1/2&#34; needles</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td>Veterinary grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL syringe</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td>Veterinary grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pet hair trimmer</td>
			<td>Wahl</td>
			<td>09990-502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair removal cream</td>
			<td>Nair</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Available at most drug stores</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swabs</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultraviolet light bulb</td>
			<td>UVP</td>
			<td>95-0042-08</td>
			<td>model XX-15M midrange UV lamp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 proof ethanol</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td>pure ethanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoplast PE</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22900700</td>
			<td>paraffin pellets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral Buffered Formalin, 10%</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HT501128-4L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear-Rite 3</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>6901</td>
			<td>xylene substitute</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O.C.T. Compound</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>23730571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Cassette</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>89199-430</td>
			<td>for FFPE processing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryomolds</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4557</td>
			<td>25 x 20 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FFPE metal mold</td>
			<td>Leica</td>
			<td>3803082</td>
			<td>24 x 24 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td>Veterinary grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia inhalation system</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td>Veterinary grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine scissor</td>
			<td>FST</td>
			<td>14085-09</td>
			<td>Straight, sharp/sharp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine scissor</td>
			<td>FST</td>
			<td>14558-09</td>
			<td>Straight, sharp/sharp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metzenbaum</td>
			<td>FST</td>
			<td>14018-13</td>
			<td>Straight, blunt/blunt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>FST</td>
			<td>11252-00</td>
			<td>Dumont #5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>FST</td>
			<td>11018-12</td>
			<td>Micro-Adson</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tyr-CreER; LSL-BrafV600E; Pten-f/f</td>
			<td>Jackson Labs</td>
			<td>13590</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSL-tdTomato</td>
			<td>Jackson Labs</td>
			<td>007914</td>
			<td>ai14</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cre-1</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>GCATTACCGGTCGATGCAACGAGTGATGAG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cre-2</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>GAGTGAACGAACCTGGTCGAAATCAGTGCG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Braf-V600E-1</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>TGAGTATTTTTGTGGCAACTGC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Braf-V600E-2</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>CTCTGCTGGGAAAGCGGC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kras-G12D-1</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>AGCTAGCCACCATGGCTTGAGTAAGTCTGCA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kras-G12D-2</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>CCTTTACAAGCGCACGCAGACTGTAGA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pten-1</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>ACTCAAGGCAGGGATGAGC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pten-2</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>AATCTAGGGCCTCTTGTGCC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pten-3</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>GCTTGATATCGAATTCCTGCAGC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tdTomato-1</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>AAGGGAGCTGCAGTGGAGTA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tdTomato-2</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>CCGAAAATCTGTGGGAAGTC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tdTomato-3</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>GGCATTAAAGCAGCGTATCC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tdTomato-4</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>CTGTTCCTGTACGGCATGG</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

spatial and temporal control of murine melanoma initiation from mutant melanocyte stem cells

Il melanoma cutaneo è ben noto come il cancro della pelle più aggressivo. Sebbene i fattori di rischio e le principali alterazioni genetiche continuino a essere documentati con maggiore profondità, il tasso di incidenza del melanoma cutaneo ha mostrato un rapido e continuo aumento negli ultimi decenni. Al fine di trovare metodi preventivi efficaci, è importante comprendere i primi passi dell'iniziazione del melanoma nella pelle. I dati precedenti hanno dimostrato che le cellule staminali follicolari dei melanociti (MCSC) nei tessuti cutanei adulti possono fungere da cellule di melanoma di origine quando esprimono mutazioni oncogeniche e alterazioni genetiche. La tumorigenesi derivante da MCSCs inclini al melanoma può essere indotta quando MCSCs passa da uno stato quiescente a uno attivo. Questa transizione in MCSCs inclini al melanoma può essere promossa dalla modulazione dello stato di attività delle cellule staminali follicoli piliferi o da fattori ambientali estrinseci come l'ultravioletto-B (UV-B). Questi fattori possono essere manipolati artificialmente in laboratorio mediante depilazione chimica, che provoca la transizione delle cellule staminali follicoli piliferi e delle MCSC da una condizione di quiescenza a quella attiva, e dall'esposizione UV-B utilizzando una luce da banco. Questi metodi forniscono un controllo spaziale e temporale riuscito dell'iniziazione cutanea del melanoma nella pelle dorsale murina. Pertanto, questi sistemi di modelli in vivo saranno preziosi per definire i primi passi dell'inizio del melanoma cutaneo e potrebbero essere usati per testare i potenziali metodi per la prevenzione del tumore.

Inizio del melanoma cutaneo indotto dalla depilazione chimica
La procedura di depilazione chimica è raffigurata in Figura 2. Quando i topi sono 7 settimane dopo Natale, la loro pelle dorsale è in telogen. Durante telogen, cellule staminali follicoli piliferi e MCSCs sono noti per essere in uno stato quiescente, riposo. La pelle non dovrebbe mostrare alcuna crescita significativa d...

Watch this Scientific Journal Video about Spatial and Temporal Control of Murine Melanoma Initiation from Mutant Melanocyte Stem Cells at JoVE.com

Spatial and Temporal Control of Murine Melanoma Initiation from Mutant Melanocyte Stem Cells

Controllo spaziale e temporale dell'iniziazione del melanoma murino dalle cellule staminali di melanociti mutanti

La seguente procedura descrive un metodo per il controllo spaziale e temporale dell'iniziazione tumorale melanocitica nella pelle dorsali murina, utilizzando un modello di topo geneticamente modificato. Questo protocollo descrive l'iniziazione macroscopica e microscopica del melanoma cutaneo.

Cutaneous melanoma is well known as the most aggressive skin cancer. Although the risk factors and major genetic alterations continue to be documented ...

Il melanoma è ampiamente diagnosticato in tutto il mondo, con una crescente incidenza. Questi protocolli consentono di controllare attentamente le prime fasi dell'iniziazione del melanoma, facilitando lo studio del suo sviluppo. Controllando il tempo e la posizione dell'attivazione delle cellule staminali melanociti, abbiamo la capacità di discernere i cambiamenti all'interno della popolazione di cellule staminali e il suo nuovo ceppo di iniziazione al melanoma.A dimostrare la procedura saranno Dahihm Kim e Luye An, studenti laureati del laboratorio. Due o tre giorni prima di iniziare la procedura, utilizzare un trimmer elettrico per radere la pelle dorsale da ogni topo anestetizzato di sette settimane. Il giorno dell'esperimento, utilizzare un batuffolo di cotone per applicare un sottile strato di crema depilatoria sulla pelle esposta.Una volta che la crema è stata applicata uniformemente, utilizzare tamponi di cotone puliti per rimuovere la crema, seguiti da una pulizia delicata con un panno umido per rimuovere qualsiasi crema residua. Quindi riportare ogni topo nella sua gabbia di casa con monitoraggio fino al pieno recupero. Per l'irradiazione UV-B, coprire la pelle dorsale con materiale protettivo UV-B in modo che venga esposta solo la regione desiderata e coprire la camera UV con un coperchio resistente ai raggi UV.Quindi accendere la lampada UV-B per irradiare il mouse per l'appropriato periodo di tempo sperimentale prima di riportare il mouse in una gabbia vuota con monitoraggio fino al completo recupero. Per isolare i campioni della pelle, utilizzare un trimmer elettrico per rimuovere eventuali capelli dall'area della pelle dorsale dei topi irradiati eutanasiati e spazzolare leggermente la pelle esposta con un tessuto privo di pelucchi per liberare l'area. Fai una piccola incisione con forbici affilate appena sopra la base della coda e inserisci grandi forbici smussate nell'incisione per separare i tessuti connettivi subdermici.Utilizzando forbici affilate, tagliare con cura lungo il bordo della regione della pelle di interesse per isolare il campione di tessuto e posizionare il tessuto cutaneo asportato su un tovagliolo di carta pulito. Quindi utilizzare le forcep opache per allungare la pelle in modo che aderisca all'asciugamano ed è tesa. Una volta raccolti tutti i campioni, posizionare un campione di pelle e un tovagliolo di carta che si appoggiano in un pezzo di carta da filtro piegata immediatamente adiacente alla piega, facendo attenzione che il campione sia liscio e non piegato o accartocciato.Chiudere i lati della carta da filtro con graffette e tagliare la carta. Quindi immergere completamente i campioni in formalina tamponata al 10% neutra per tre o cinque ore a temperatura ambiente prima di lavare i tessuti con due lavaggi di cinque minuti in acqua deionizzata. Dopo il secondo lavaggio, rimuovere con cura qualsiasi materiale residuo dai tessuti della pelle e tagliare i bordi dei campioni in modo che non siano frastagliati.Successivamente, effettuare tre tagli sagittali in ogni campione in modo che la larghezza delle strisce non sia superiore a cinque millimetri e fare tagli trasversali in modo che i campioni non siano larghi più di 20 millimetri. Posizionare uno stampo crio contenente temperatura di taglio ottimale o mezzo OCT con orientamento verticale e posizionare da quattro a cinque pezzi di pelle sopra lo Strumento di personalizzazione di Office. Quando tutti i pezzi sono in posizione, utilizzare due paia di forcep fini per portare il bordo lungo di ogni pezzo di pelle sul fondo dello stampo criogenico in modo che i campioni siano verticali all'interno dello STRUMENTO di personalizzazione di Office e perpendicolari alla base dello stampo.Quindi riempire lo stampo con OCT aggiuntivo al secondo labbro e posizionare lo stampo su una superficie piana di un pezzo di ghiaccio secco, utilizzando le forcep per regolare eventuali pezzi di pelle che potrebbero aver spostato durante il trasferimento quando il blocco inizia a congelarsi se necessario. Quando i topi sono sette settimane post-natale, la loro pelle dorsale è in telogen. Durante il telogeno, il follicolo pilifero e le cellule staminali melanociti sono noti per essere in uno stato di riposo quiescente e la pelle non dovrebbe mostrare una crescita significativa dei capelli dopo la rasatura.La depilazione chimica, tuttavia, può indurre l'attivazione delle cellule staminali del follicolo pilifero, inducendo una significativa crescita dei capelli all'interno della regione di interesse. Poiché la depilazione chimica può indurre significativamente l'attivazione sia del follicolo pilifero che delle cellule staminali melanociti, le cellule staminali melanociti soggette a melanoma in uno stato attivo possono formare tumori e l'iniziazione microscopica del melanoma può essere osservata entro due settimane dalla depilazione chimica. L'irradiazione UV-B può anche indurre l'iniziazione tumorale da cellule staminali melanociti quiescenti e soggette a tumore.È importante sottolineare che UV-B induce la traslocazione diretta delle cellule staminali melanociti dalla loro nicchia di cellule staminali follicolari all'epidermide inter-follicolare. Inoltre, UV-B può indurre la formazione di melanociti di melanociti che originano il melanoma cutaneo in tutta l'epidermide interfollicolare. Simile alla pelle dorsale, l'iniziazione del melanoma indotta da UV-B può essere osservata in particolare in altre aree della pelle, come la pelle dell'orecchio.Infatti, rispetto al controllo della pelle dell'orecchio, coperto da un panno resistente ai raggi UV, la pelle dell'orecchio esposta a UV-B dimostra una maggiore pigmentazione a causa di un maggiore carico di iniziazione al melanoma. Diverse dosi di UV-B possono avere effetti diversi sulla pelle del topo e sull'attività dei melanociti. Pertanto, è importante determinare e ottimizzare la dose di irradiazione prima di iniziare l'esperimento.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

Un modello murino di fatica indotta da irradiazione Peripheral

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

Ricerca

Ricerca sul cancro

Harnessing the DNA Dye-triggered Side Population Phenotype to Detect and Purify Cancer Stem Cells from Biological Samples

Sfruttamento del fenotipo della popolazione laterale innescato dal DNA per rilevare e purificare le cellule staminali del cancro da campioni biologici

Cancer is a stem cell-driven disease and eradication of these cells has become a major therapeutic goal. Deciphering vulnerabilities of Cancer Stem Cells ...

Using CRISPR/Cas9 Gene Editing to Investigate the Oncogenic Activity of Mutant Calreticulin in Cytokine Dependent Hematopoietic Cells

Utilizzando CRISPR/Cas9 Gene Editing per studiare l'attività oncogena di calreticulina mutante in cellule ematopoietiche Cytokine dipendente

Clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR) is an adaptive immunity system in prokaryotes that has been repurposed by scientists to ...

Investigation of Genetic Dependencies Using CRISPR-Cas9-based Competition Assays

Indagine delle dipendenze genetiche utilizzando dosaggi di concorrenza basati su CRISPR-Cas9

Gene perturbation studies have been extensively used to investigate the role of individual genes in AML pathogenesis. For achieving complete gene ...

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

Isolamento di cellule staminali mesenchimali da tessuto della polpa e co-coltura con cellule tumorali per studiare le loro interazioni

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

Rapid Generation of Primary Murine Melanocyte and Fibroblast Cultures

Generazione rapida delle culture primarie di Murine Melanocite e Fibroblast

Defects in fibroblast or melanocyte function are associated with skin diseases, including poor barrier function, defective wound healing, pigmentation ...

Flow Cytometric Analysis of Mitochondrial Reactive Oxygen Species in Murine Hematopoietic Stem and Progenitor Cells and MLL-AF9 Driven Leukemia

Flusso Analisi citometrica delle specie di ossigeno reattivo mitocondriale nelle cellule staminali e semigeniche Murine Hematopoietic e MLL-AF9 Driven Leucemia

We present a flow cytometric approach for analyzing mitochondrial ROS in various live bone marrow (BM)-derived stem and progenitor cell populations from ...

Isolation of Exosome-Enriched Extracellular Vesicles Carrying Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor from Embryonic Stem Cells

Isolamento di vescicole extracellulari arricchite con esosomi che trasportano il fattore stimolante le colonie di granulociti-macrofagi da cellule staminali embrionali

Embryonic stem cells (ESCs) are pluripotent stem cells capable of self-renewal and differentiation into all types of embryonic cells. Like many other cell ...

Isolation of Stem-like Cells from 3-Dimensional Spheroid Cultures

Isolamento di cellule simili a stelo dalle colture speroidi a 3 dimensioni

Despite advances in adult stem cell research, identification and isolation of stem cells from tissue specimens remains a major challenge. While resident ...

Preparation of Mitochondria from Ovarian Cancer Tissues and Control Ovarian Tissues for Quantitative Proteomics Analysis

Preparazione dei mitocondri dai tessuti del cancro ovarico e dai tessuti ovarici di controllo per l'analisi quantitativa proteomica

Ovarian cancer is a common gynecologic cancer with high mortality but unclear molecular mechanism. Most ovarian cancers are diagnosed in the advanced ...