Name: spatial and temporal control of murine melanoma initiation from mutant melanocyte stem cells
Uploaded: 2019-06-07T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Spatial and Temporal Control of Murine Melanoma Initiation from Mutant Melanocyte Stem Cells at JoVE.com

Este trabalho foi apoiado pelo gabinete do secretário adjunto de defesa para os assuntos da saúde, através do programa de pesquisa de câncer de peer revisado o prêmio W81XWH-16-1-0272. As opiniões, interpretações, conclusões e recomendações são as dos autores e não são necessariamente endossadas pelo departamento de defesa. Este trabalho também foi apoiado por uma concessão de sementes do programa de células-tronco de Cornell para A.C. White. H. Moon foi apoiado pelo Cornell Center for vertebrate Genomics Scholar Program.

Todos os procedimentos animais são realizados de acordo com o Comitê institucional de cuidados e uso de animais da Universidade Cornell (IACUC).
1. preparação
<ol><li>
Colete clipes de cauda de 12 dias de camundongos pós-natal e digerir em 400 μL de 0, 5 N NaOH a 95 ° c por 1 h. Vortex e adicionar 32 μL de 1 M de Tris-HCl, pH 7. Camundongos genótipos de acordo com protocolos de PCR fornecidos pelo laboratório Jackson e identificam camundongos com genótipo de interesse...

<ol>
	<li>Wernli, K. J., Henrikson, N. B., Morrison, C. C., Nguyen, M., Pocobelli, G., Blasi, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+for+skin+cancer+in+adults:+updated+evidence+report+and+systematic+review+for+the+US+preventive+services+task+force.">Screening for skin cancer in adults: updated evidence report and systematic review for the US preventive services task force.</a> The Journal of the American Medical Association. 316 (4), 436-447 (2016).</li><li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics,+2018.">Cancer statistics, 2018.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 68 (1), 7-30 (2018).</li><li>White, A. C., Lowry, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Refining+the+role+for+adult+stem+cells+as+cancer+cells+of+origin.">Refining the role for adult stem cells as cancer cells of origin.</a> Trends in Cell Biology. 25 (1), 11-20 (2015).</li><li>Moon, H., Donahue, L. R., White, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+cancer+cells+of+origin+in+cutaneous+tumors.">Understanding cancer cells of origin in cutaneous tumors.</a> Cancer Stem Cells. , 263-284 (2016).</li><li>Blanpain, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracing+the+cellular+origin+of+cancer.">Tracing the cellular origin of cancer.</a> Nature Cell Biology. 15 (2), 126-134 (2013).</li><li>Moon, H., Donahue, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melanocyte+stem+cell+activation+and+translocation+initiate+cutaneous+melanoma+in+response+to+UV+exposure.">Melanocyte stem cell activation and translocation initiate cutaneous melanoma in response to UV exposure.</a> Cell Stem Cell. 21 (5), 665-678 (2017).</li><li>Moon, H., White, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+path+from+melanocyte+stem+cells+to+cutaneous+melanoma+illuminated+by+UVB.">A path from melanocyte stem cells to cutaneous melanoma illuminated by UVB.</a> Molecular &#38; Cellular Oncology. 5 (2), e1409864 (2018).</li><li>Rabbani, P., Takeo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coordinated+activation+of+Wnt+in+epithelial+and+melanocyte+stem+cells+initiates+pigmented+hair+regeneration.">Coordinated activation of Wnt in epithelial and melanocyte stem cells initiates pigmented hair regeneration.</a> Cell. 145 (6), 941-955 (2011).</li><li>Chou, W. C., Takeo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+migration+of+follicular+melanocyte+stem+cells+to+the+epidermis+after+wounding+or+UVB+irradiation+is+dependent+on+Mc1r+signaling.">Direct migration of follicular melanocyte stem cells to the epidermis after wounding or UVB irradiation is dependent on Mc1r signaling.</a> Nature Medicine. 19 (7), 924-929 (2013).</li><li>Keyes, B. E., Segal, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nfatc1+orchestrates+aging+in+hair+follicle+stem+cells.">Nfatc1 orchestrates aging in hair follicle stem cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (51), (2013).</li><li>M&#252;ller-R&#246;ver, S., Handjiski, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comprehensive+guide+for+the+accurate+classification+of+murine+hair+follicles+in+distinct+hair+cycle+stages.">A comprehensive guide for the accurate classification of murine hair follicles in distinct hair cycle stages.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 117 (1), 3-15 (2001).</li><li>Kastenmayer, R. J., Fain, M. A., Perdue, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+retrospective+study+of+idiopathic+ulcerative+dermatitis+in+mice+with+a+C57BL/6+background.">A retrospective study of idiopathic ulcerative dermatitis in mice with a C57BL/6 background.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science&#8239;: JAALAS. 45 (6), 8-12 (2006).</li><li>Vultur, A., Herlyn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SnapShot:+melanoma.">SnapShot: melanoma.</a> Cancer Cell. 23 (5), (2013).</li><li>Dankort, D., Curley, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Braf(V600E)+cooperates+with+Pten+loss+to+induce+metastatic+melanoma.">Braf(V600E) cooperates with Pten loss to induce metastatic melanoma.</a> Nature Genetics. 41 (5), 544-552 (2009).</li><li>Viros, A., Sanchez-Laorden, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultraviolet+radiation+accelerates+BRAF-driven+melanomagenesis+by+targeting+TP53.">Ultraviolet radiation accelerates BRAF-driven melanomagenesis by targeting TP53.</a> Nature. 511 (7510), 478-482 (2014).</li></ol>

As alterações genéticas do Hallmark freqüentemente encontradas em tumores Cutaneous da melanoma foram descritas bem13. A mutação de condutor mais dominante é o BRAFV600E, e um modelo de rato geneticamente concebido para o melanoma mediado por BRAFV600Efoi gerado pelo grupo Bosenberg14 e depositado no laboratório Jackson. Usando este modelo do rato, nosso estudo recente demonstrou a exigência da ativação celular de MCSCs tum...

O melanoma, a forma maligna dos tumores melanocíticos, é o câncer mais agressivo na pele com melanoma cutâneo responsável pela maioria das mortes por câncer de pele1. Nos Estados Unidos, o melanoma é comumente diagnosticado; prevê-se que seja o 5º a 6º tipo de cancro mais comum entre os novos casos de cancro estimados em 20182. Além disso, embora as incidências globais de câncer tenham demonstrado a tendência de redução gradual nas últimas décadas, as taxas de incidência de melanoma cutâneo nas últimas décadas demonstram um aumento contínuo e rápido em ambos os sexos2.
Para combater o melanoma cutâneo de forma mais eficiente, é importante entender claramente os primeiros acontecimentos do desenvolvimento de melanoma de suas células de origem para melhor identificar métodos preventivos clinicamente efetivos. É sabido agora que as pilhas de haste adultas podem significativamente contribuir à formação do tumor como as origens celulares dos cancros em muitos tipos diferentes de órgãos que incluem os tecidos da pele3,4,5. Similarmente, as pilhas de haste adultas do melanócito (mcscs) na pele dorsal murino podem trabalhar como pilhas da melanoma da origem em cima da ativação aberrante das vias Ras/Raf e de Akt 6. Entretanto, estas mutações oncogênico sozinho não são capazes de induzir eficientemente a formação do tumor dos mcscs quiescentes. os tumores melanocíticos eventualmente desenvolvem-se quando mcscs se torna ativo durante a ciclagem natural do cabelo. No entanto, neste protocolo, descreveremos métodos para induzir artificialmente a ativação celular de mcscs propenso a tumores, facilitando assim o controle preciso do início do melanoma6,7.
Através dos métodos descritos aqui, o controle espacial e temporal da iniciação cutânea do melanoma de mcscs tumor-propenso expressando BRAFV600E oncogênico junto com a perda de expressão de PTEN pode com sucesso ser executado, porque nós relataram anteriormente6. Este método incorpora os resultados precedentes que demonstram a ativação da pilha de haste do folículo de cabelo com a depilação assim como como a exposição da pele murino a UV-B pode facilitar a ativação do residente de mcscs ao folículo de cabelo e ao translocação deste celular subpopulação à epiderme interfolicular6,8,9,10. Estes sistemas in vivo do modelo podem fornecer a informação valiosa a respeito de como as mudanças fisiológicas e ambientais podem alterar o status celular de MCSCs melanoma-prone, que por sua vez podem induzir a iniciação significativa do melanoma na pele.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Tamoxifen</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T5648-1G</td>
			<td>For systemic injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tamoxifen</td>
			<td>Cayman Chemical</td>
			<td>13258</td>
			<td>For systemic injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corn oil</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>45-C8267-2.5L-EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4OH-tamoxifen</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H7904-25MG</td>
			<td>For topical treatment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>26g 1/2&#34; needles</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td>Veterinary grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL syringe</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td>Veterinary grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pet hair trimmer</td>
			<td>Wahl</td>
			<td>09990-502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair removal cream</td>
			<td>Nair</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Available at most drug stores</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swabs</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultraviolet light bulb</td>
			<td>UVP</td>
			<td>95-0042-08</td>
			<td>model XX-15M midrange UV lamp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 proof ethanol</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td>pure ethanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoplast PE</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22900700</td>
			<td>paraffin pellets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral Buffered Formalin, 10%</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HT501128-4L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear-Rite 3</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>6901</td>
			<td>xylene substitute</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O.C.T. Compound</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>23730571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Cassette</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>89199-430</td>
			<td>for FFPE processing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryomolds</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4557</td>
			<td>25 x 20 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FFPE metal mold</td>
			<td>Leica</td>
			<td>3803082</td>
			<td>24 x 24 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td>Veterinary grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia inhalation system</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td>Veterinary grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine scissor</td>
			<td>FST</td>
			<td>14085-09</td>
			<td>Straight, sharp/sharp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine scissor</td>
			<td>FST</td>
			<td>14558-09</td>
			<td>Straight, sharp/sharp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metzenbaum</td>
			<td>FST</td>
			<td>14018-13</td>
			<td>Straight, blunt/blunt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>FST</td>
			<td>11252-00</td>
			<td>Dumont #5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>FST</td>
			<td>11018-12</td>
			<td>Micro-Adson</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tyr-CreER; LSL-BrafV600E; Pten-f/f</td>
			<td>Jackson Labs</td>
			<td>13590</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSL-tdTomato</td>
			<td>Jackson Labs</td>
			<td>007914</td>
			<td>ai14</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cre-1</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>GCATTACCGGTCGATGCAACGAGTGATGAG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cre-2</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>GAGTGAACGAACCTGGTCGAAATCAGTGCG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Braf-V600E-1</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>TGAGTATTTTTGTGGCAACTGC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Braf-V600E-2</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>CTCTGCTGGGAAAGCGGC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kras-G12D-1</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>AGCTAGCCACCATGGCTTGAGTAAGTCTGCA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kras-G12D-2</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>CCTTTACAAGCGCACGCAGACTGTAGA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pten-1</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>ACTCAAGGCAGGGATGAGC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pten-2</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>AATCTAGGGCCTCTTGTGCC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pten-3</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>GCTTGATATCGAATTCCTGCAGC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tdTomato-1</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>AAGGGAGCTGCAGTGGAGTA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tdTomato-2</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>CCGAAAATCTGTGGGAAGTC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tdTomato-3</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>GGCATTAAAGCAGCGTATCC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tdTomato-4</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>CTGTTCCTGTACGGCATGG</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

spatial and temporal control of murine melanoma initiation from mutant melanocyte stem cells

O melanoma cutâneo é bem conhecido como o câncer de pele mais agressivo. Embora os factores de risco e as alterações genéticas principais continuem a ser documentados com profundidade crescente, a taxa de incidência do melanoma Cutaneous mostrou um aumento rápido e contínuo durante décadas recentes. A fim encontrar métodos preventivos eficazes, é importante compreender as etapas adiantadas da iniciação da melanoma na pele. Os dados precedentes demonstraram que as pilhas de haste foliculares do melanócito (mcscs) nos tecidos adultos da pele podem actuar como pilhas da melanoma da origem ao expressar mutações oncogênico e alterações genéticas. O tumorigenesis que levanta-se de MCSCs melanoma-prone pode ser induzido quando MCSCs transição de um quiescente ao estado ativo. Essa transição em MCSCs propenso a melanoma pode ser promovida pela modulação do estado de atividade das células-tronco do folículo piloso ou por meio de fatores ambientais extríncicos, como ultravioleta-B (UV-B). Estes fatores podem ser manipulados artificialmente no laboratório pela depilação química, que causa a transição de pilhas de haste do folículo de cabelo e de mcscs de um quiescente ao estado ativo, e pela exposição de UV-B usando uma luz do de bancada. Estes métodos fornecem o controle espacial e temporal bem sucedido da iniciação Cutaneous da melanoma na pele dorsal murino. Conseqüentemente, estes sistemas in vivo do modelo serão valiosos para definir as etapas adiantadas da iniciação cutaneous do melanoma e poderiam ser usados para testar métodos potenciais para a prevenção do tumor.

Iniciação cutânea por melanoma induzida por depilação química
O procedimento de depilação química é representado na Figura 2. Quando os camundongos são 7 semanas pós-natal, sua pele dorsal está em telógeno. Durante o telogen, as pilhas de haste do folículo de cabelo e os MCSCs são sabidos para estar em um estado quiescente, descansando. A pele não deve mostrar nenhu...

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Spatial and Temporal Control of Murine Melanoma Initiation from Mutant Melanocyte Stem Cells

Controle espacial e temporal da iniciação de melanoma murino de células-tronco de melanócitos mutantes

O procedimento a seguir descreve um método para o controle espacial e temporal da iniciação do tumor melanocítico na pele dorsal murina, utilizando um modelo de camundongo geneticamente projetado. Este protocolo descreve macroscópica assim como a iniciação Cutaneous microscópica da melanoma.

Cutaneous melanoma is well known as the most aggressive skin cancer. Although the risk factors and major genetic alterations continue to be documented ...

O melanoma é amplamente diagnosticado em todo o mundo, com incidência crescente. Esses protocolos permitem que os estágios iniciais do início do melanoma sejam cuidadosamente controlados, facilitando o estudo de seu desenvolvimento. Controlando a hora e a localização da ativação de células-tronco de melanócitos, temos a capacidade de discernir as mudanças dentro da população de células-tronco e sua nova iniciação de melanoma de cepa.Demonstrando o procedimento serão Dahihm Kim e Luye An, estudantes de pós-graduação do laboratório. Dois a três dias antes de iniciar o procedimento, use um aparador elétrico para raspar a pele dorsal de cada rato anestoetizado de sete semanas de idade. No dia do experimento, use um cotonete para aplicar uma fina camada de creme depilatório à pele exposta.Uma vez aplicado o creme uniformemente, use cotonetes de algodão limpos para remover o creme, seguido de limpeza suave com um pano úmido para remover qualquer creme residual. Em seguida, devolva cada rato para sua gaiola doméstica com monitoramento até a recuperação completa. Para irradiação UV-B, cubra a pele dorsal com material protetor UV-B para que apenas a região desejada seja exposta, e cubra a câmara UV com uma tampa resistente a UV.Em seguida, ligue a lâmpada UV-B para irradiar o mouse para o período experimental adequado antes de devolver o mouse a uma gaiola vazia com monitoramento até a recuperação completa. Para isolar as amostras de pele, use um aparador elétrico para remover qualquer cabelo da área dorsal da pele dos camundongos irradiados eutanizados, e escove levemente a pele exposta com um tecido livre de fiapos para limpar a área. Faça uma pequena incisão com uma tesoura afiada logo acima da base da cauda e insira uma tesoura grande e sem cortes na incisão para separar os tecidos conjuntivos subdérmicos.Usando uma tesoura afiada, corte cuidadosamente ao longo da borda da região da pele de interesse para isolar a amostra de tecido e colocar o tecido da pele excisado em uma toalha de papel limpa. Em seguida, use fórceps maçante para esticar a pele para que ela adere à toalha e fique esticada. Quando todas as amostras tiverem sido colhidas, coloque uma amostra de pele e papel toalha em um pedaço de papel filtro dobrado imediatamente adjacente ao vinco, tomando cuidado para que a amostra seja lisa e não dobrada ou amassada.Feche as laterais do papel do filtro com grampos e corte o papel. Em seguida, submergir totalmente as amostras em formalina tamponada 10% neutra por três a cinco horas à temperatura ambiente antes de lavar os tecidos com duas lavagens de cinco minutos em água desionizada. Após a segunda lavagem, remova cuidadosamente qualquer material residual dos tecidos da pele e corte as bordas das amostras para que elas não sejam irregulares.Em seguida, faça três cortes sagiais em cada amostra para que a largura das tiras não seja superior a cinco milímetros, e faça cortes transversais para que as amostras não sejam mais do que 20 milímetros de largura. Posicione um molde criogeno contendo temperatura de corte ideal ou meio OCT em uma orientação retrato, e coloque quatro a cinco pedaços de pele em cima do OCT. Quando todas as peças estiverem no lugar, use dois pares de fórceps finos para trazer a longa borda de cada pedaço de pele para o fundo do molde criogeno para que as amostras sejam verticais dentro do OCT e perpendiculares à base do molde.Em seguida, encha o molde com OCT adicional para o segundo lábio e coloque o molde em uma superfície plana de um pedaço de gelo seco, usando fórceps para ajustar quaisquer pedaços de pele que possam ter mudado durante a transferência à medida que o bloco começa a congelar conforme necessário. Quando os ratos são sete semanas pós-natal, sua pele dorsal está em telogen. Durante o telogen, as células-tronco do folículo piloso e melanócito são conhecidas por estarem em estado de repouso quiescente, e a pele não deve apresentar crescimento capilar significativo após a barba.A depilação química, no entanto, pode induzir a ativação de células-tronco do folículo piloso, induzindo um crescimento capilar significativo na região de interesse. Como a depilação química pode induzir significativamente a ativação de células-tronco folículos capilares e melanócitos, células-tronco propensas a melanoma em um estado ativo podem formar tumores e a iniciação de melanoma microscópico pode ser observada dentro de duas semanas após a depilação química. A irradiação UV-B também pode induzir a iniciação tumoral a partir de células-tronco quiescentes e propensas a tumores.É importante ressaltar que o UV-B induz a translocação direta de células-tronco de melanócitos de seu nicho de células-tronco foliculares para a epiderme inter folicular. Além disso, o UV-B pode induzir a formação de melanoma cutâneo originário de células-tronco de melanócitos ao longo da epiderme interfollicular. Semelhante à pele dorsal, a iniciação de melanoma induzido por UV-B pode ser notavelmente observada em outras áreas da pele, como a pele do ouvido.De fato, em comparação com a pele do ouvido de controle, coberta por pano resistente a UV, a pele do ouvido exposta ao UV-B demonstra uma pigmentação maior devido a uma maior carga de iniciação de melanoma. Diferentes doses de UV-B podem ter efeitos diferentes na pele do rato e na atividade de melanócitos. Portanto, é importante determinar e otimizar a dose de irradiação antes de iniciar seu experimento.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

Um mouse modelo de fadiga induzida por irradiação periférica

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

Pesquisa do câncer

Harnessing the DNA Dye-triggered Side Population Phenotype to Detect and Purify Cancer Stem Cells from Biological Samples

Aprovação do DNA Dye-desencadeada fenótipo de população lateral para detectar e purificar células-tronco de câncer de amostras biológicas

Cancer is a stem cell-driven disease and eradication of these cells has become a major therapeutic goal. Deciphering vulnerabilities of Cancer Stem Cells ...

Using CRISPR/Cas9 Gene Editing to Investigate the Oncogenic Activity of Mutant Calreticulin in Cytokine Dependent Hematopoietic Cells

Usando CRISPR/Cas9 Gene edição para investigar a atividade oncogênica do mutante Calreticulin em células hematopoiéticas dependentes de Cytokine

Clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR) is an adaptive immunity system in prokaryotes that has been repurposed by scientists to ...

Investigation of Genetic Dependencies Using CRISPR-Cas9-based Competition Assays

Investigação de dependências genéticas utilizando ensaios de competição baseados em CRISPR-Cas9

Gene perturbation studies have been extensively used to investigate the role of individual genes in AML pathogenesis. For achieving complete gene ...

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

Isolamento de células-tronco mesenquimais de tecido pulpar e co-cultura com células cancerosas para estudar suas interações

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

Rapid Generation of Primary Murine Melanocyte and Fibroblast Cultures

Geração rápida de culturas de melanócitos e fibroblastos de Murina primária

Defects in fibroblast or melanocyte function are associated with skin diseases, including poor barrier function, defective wound healing, pigmentation ...

Flow Cytometric Analysis of Mitochondrial Reactive Oxygen Species in Murine Hematopoietic Stem and Progenitor Cells and MLL-AF9 Driven Leukemia

Análise Citométrica de fluxo de espécies reativas de oxigênio mitocondrial em células tronco e progenitoras hematopoiéticas Murinas e leucemia acionada por MLL-AF9

We present a flow cytometric approach for analyzing mitochondrial ROS in various live bone marrow (BM)-derived stem and progenitor cell populations from ...

Isolation of Exosome-Enriched Extracellular Vesicles Carrying Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor from Embryonic Stem Cells

Isolamento de vesículas extracelulares exosome enriquecidas carregando fator estimulante da colônia granulocito-macrófago de células-tronco embrionárias

Embryonic stem cells (ESCs) are pluripotent stem cells capable of self-renewal and differentiation into all types of embryonic cells. Like many other cell ...

Isolation of Stem-like Cells from 3-Dimensional Spheroid Cultures

Isolamento de células-tronco a partir de culturas esferóides tridimensionais

Despite advances in adult stem cell research, identification and isolation of stem cells from tissue specimens remains a major challenge. While resident ...

Preparation of Mitochondria from Ovarian Cancer Tissues and Control Ovarian Tissues for Quantitative Proteomics Analysis

Preparação das mitocôndrias dos tecidos do câncer de ovário e controle dos tecidos ovarianos para análise quantitativa proteômica

Ovarian cancer is a common gynecologic cancer with high mortality but unclear molecular mechanism. Most ovarian cancers are diagnosed in the advanced ...