Name: spatial and temporal control of murine melanoma initiation from mutant melanocyte stem cells
Uploaded: 2019-06-07T14:45:00
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Este trabajo fue apoyado por la oficina del Subsecretario de defensa para asuntos de salud, a través del programa de investigación de cáncer de Peer revisado bajo el premio W81XWH-16-1-0272. Las opiniones, interpretaciones, conclusiones y recomendaciones son las de los autores y no están necesariamente respaldadas por el Departamento de defensa. Este trabajo también fue apoyado por una subvención de semillas del programa de células madre de Cornell a A.C. White. H. Moon fue apoyada por el Cornell Center para el programa académico de genómica de vertebrados.

Todos los procedimientos en animales se realizan de acuerdo con el Comité institucional de cuidado y uso de animales de la Universidad Cornell (IACUC).
1. preparación
<ol><li>
Recoja los clips de la cola de los ratones postnatales de 12 días y digárelos en 400 μL de 0,05 N NaOH a 95 ° c durante 1 h. vórtice y añada 32 μL de Tris-HCl de 1 M, pH 7. Ratones de genotipo según protocolos de PCR proporcionados a través del laboratorio de Jackson e identifican ratones con genotip...

<ol>
	<li>Wernli, K. J., Henrikson, N. B., Morrison, C. C., Nguyen, M., Pocobelli, G., Blasi, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+for+skin+cancer+in+adults:+updated+evidence+report+and+systematic+review+for+the+US+preventive+services+task+force.">Screening for skin cancer in adults: updated evidence report and systematic review for the US preventive services task force.</a> The Journal of the American Medical Association. 316 (4), 436-447 (2016).</li><li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics,+2018.">Cancer statistics, 2018.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 68 (1), 7-30 (2018).</li><li>White, A. C., Lowry, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Refining+the+role+for+adult+stem+cells+as+cancer+cells+of+origin.">Refining the role for adult stem cells as cancer cells of origin.</a> Trends in Cell Biology. 25 (1), 11-20 (2015).</li><li>Moon, H., Donahue, L. R., White, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+cancer+cells+of+origin+in+cutaneous+tumors.">Understanding cancer cells of origin in cutaneous tumors.</a> Cancer Stem Cells. , 263-284 (2016).</li><li>Blanpain, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracing+the+cellular+origin+of+cancer.">Tracing the cellular origin of cancer.</a> Nature Cell Biology. 15 (2), 126-134 (2013).</li><li>Moon, H., Donahue, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melanocyte+stem+cell+activation+and+translocation+initiate+cutaneous+melanoma+in+response+to+UV+exposure.">Melanocyte stem cell activation and translocation initiate cutaneous melanoma in response to UV exposure.</a> Cell Stem Cell. 21 (5), 665-678 (2017).</li><li>Moon, H., White, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+path+from+melanocyte+stem+cells+to+cutaneous+melanoma+illuminated+by+UVB.">A path from melanocyte stem cells to cutaneous melanoma illuminated by UVB.</a> Molecular &#38; Cellular Oncology. 5 (2), e1409864 (2018).</li><li>Rabbani, P., Takeo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coordinated+activation+of+Wnt+in+epithelial+and+melanocyte+stem+cells+initiates+pigmented+hair+regeneration.">Coordinated activation of Wnt in epithelial and melanocyte stem cells initiates pigmented hair regeneration.</a> Cell. 145 (6), 941-955 (2011).</li><li>Chou, W. C., Takeo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+migration+of+follicular+melanocyte+stem+cells+to+the+epidermis+after+wounding+or+UVB+irradiation+is+dependent+on+Mc1r+signaling.">Direct migration of follicular melanocyte stem cells to the epidermis after wounding or UVB irradiation is dependent on Mc1r signaling.</a> Nature Medicine. 19 (7), 924-929 (2013).</li><li>Keyes, B. E., Segal, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nfatc1+orchestrates+aging+in+hair+follicle+stem+cells.">Nfatc1 orchestrates aging in hair follicle stem cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (51), (2013).</li><li>M&#252;ller-R&#246;ver, S., Handjiski, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comprehensive+guide+for+the+accurate+classification+of+murine+hair+follicles+in+distinct+hair+cycle+stages.">A comprehensive guide for the accurate classification of murine hair follicles in distinct hair cycle stages.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 117 (1), 3-15 (2001).</li><li>Kastenmayer, R. J., Fain, M. A., Perdue, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+retrospective+study+of+idiopathic+ulcerative+dermatitis+in+mice+with+a+C57BL/6+background.">A retrospective study of idiopathic ulcerative dermatitis in mice with a C57BL/6 background.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science&#8239;: JAALAS. 45 (6), 8-12 (2006).</li><li>Vultur, A., Herlyn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SnapShot:+melanoma.">SnapShot: melanoma.</a> Cancer Cell. 23 (5), (2013).</li><li>Dankort, D., Curley, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Braf(V600E)+cooperates+with+Pten+loss+to+induce+metastatic+melanoma.">Braf(V600E) cooperates with Pten loss to induce metastatic melanoma.</a> Nature Genetics. 41 (5), 544-552 (2009).</li><li>Viros, A., Sanchez-Laorden, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultraviolet+radiation+accelerates+BRAF-driven+melanomagenesis+by+targeting+TP53.">Ultraviolet radiation accelerates BRAF-driven melanomagenesis by targeting TP53.</a> Nature. 511 (7510), 478-482 (2014).</li></ol>

Las alteraciones genéticas distintivas que se encuentran frecuentemente en tumores de melanoma cutáneo han sido bien descritas13. La mutación del conductor más dominante es BRAFV600E, y un modelo de ratón genéticamente diseñado para el melanoma de BRAFV600Emediado fue generado por el grupo Bosenberg14 y depositado en el laboratorio Jackson. Con este modelo de ratón, nuestro estudio reciente demostró el requisito de la activac...

El melanoma, la forma maligna de los tumores melanocíticos, es el cáncer más agresivo en la piel con melanoma cutáneo responsable de la mayoría de las muertes por cáncer de piel1. En los Estados Unidos, el melanoma es comúnmente diagnosticado; se proyecta que es el tipo de cáncer más común de 5 a 6 entre los nuevos casos de cáncer estimados en 20182. Además, si bien las incidencias generales del cáncer han mostrado la tendencia de reducción gradual en las últimas décadas, las tasas de incidencia de melanoma cutáneo durante las últimas décadas demuestran un aumento continuo y rápido en ambos sexos2.
Para combatir el melanoma cutáneo de manera más eficiente, es importante comprender claramente los primeros acontecimientos del desarrollo del melanoma desde sus células de origen para identificar mejor los métodos preventivos clínicamente efectivos. Ahora se sabe que las células madre adultas pueden contribuir significativamente a la formación de tumores como los orígenes celulares de los cánceres en muchos tipos diferentes de órganos, incluyendo los tejidos de la piel3,4,5. Del mismo modo, las células madre adultas de melanocito (MCSC) en la piel dorsal murina pueden funcionar como células del melanoma de origen tras la activación aberrante de la Ras/Raf y las vías de Akt 6. Sin embargo, estas mutaciones oncogénicas por sí solas no son capaces de inducir eficientemente la formación de tumores de los MCSC en reposo. los tumor melanocíticos eventualmente se desarrollan cuando los MCSC se vuelven activos durante el ciclo natural del cabello. Sin embargo, en este protocolo, describiremos métodos para inducir artificialmente la activación celular de los mcscs propensos a tumores, facilitando así el control preciso de la iniciación del melanoma6,7.
A través de los métodos descritos aquí, el control espacial y temporal del inicio del melanoma cutáneo de MCSCs propensos a tumores que expresan BRAF oncogénicoV600E junto con la pérdida de la expresión PTEN se puede realizar con éxito, ya que han reportado previamente6. Este método incorpora hallazgos previos que demuestran la activación de las células del folículo piloso a través de la depilación, así como la exposición de la piel murina a UV-B puede facilitar la activación de los residentes de MCSCs en el folículo piloso y la translocación de este celular subpoblación a la epidermis interfolicular6,8,9,10. Estos sistemas modelo in vivo pueden proporcionar información valiosa sobre cómo los cambios fisiológicos y ambientales pueden alterar el estado celular de los MCSC propensos al melanoma, que a su vez pueden inducir un inicio significativo del melanoma en la piel.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Tamoxifen</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T5648-1G</td>
			<td>For systemic injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tamoxifen</td>
			<td>Cayman Chemical</td>
			<td>13258</td>
			<td>For systemic injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corn oil</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>45-C8267-2.5L-EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4OH-tamoxifen</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H7904-25MG</td>
			<td>For topical treatment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>26g 1/2&#34; needles</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td>Veterinary grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL syringe</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td>Veterinary grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pet hair trimmer</td>
			<td>Wahl</td>
			<td>09990-502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair removal cream</td>
			<td>Nair</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Available at most drug stores</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swabs</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultraviolet light bulb</td>
			<td>UVP</td>
			<td>95-0042-08</td>
			<td>model XX-15M midrange UV lamp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 proof ethanol</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td>pure ethanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoplast PE</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22900700</td>
			<td>paraffin pellets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral Buffered Formalin, 10%</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HT501128-4L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear-Rite 3</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>6901</td>
			<td>xylene substitute</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O.C.T. Compound</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>23730571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Cassette</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>89199-430</td>
			<td>for FFPE processing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryomolds</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4557</td>
			<td>25 x 20 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FFPE metal mold</td>
			<td>Leica</td>
			<td>3803082</td>
			<td>24 x 24 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td>Veterinary grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia inhalation system</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td>Veterinary grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine scissor</td>
			<td>FST</td>
			<td>14085-09</td>
			<td>Straight, sharp/sharp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine scissor</td>
			<td>FST</td>
			<td>14558-09</td>
			<td>Straight, sharp/sharp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metzenbaum</td>
			<td>FST</td>
			<td>14018-13</td>
			<td>Straight, blunt/blunt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>FST</td>
			<td>11252-00</td>
			<td>Dumont #5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>FST</td>
			<td>11018-12</td>
			<td>Micro-Adson</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tyr-CreER; LSL-BrafV600E; Pten-f/f</td>
			<td>Jackson Labs</td>
			<td>13590</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSL-tdTomato</td>
			<td>Jackson Labs</td>
			<td>007914</td>
			<td>ai14</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cre-1</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>GCATTACCGGTCGATGCAACGAGTGATGAG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cre-2</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>GAGTGAACGAACCTGGTCGAAATCAGTGCG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Braf-V600E-1</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>TGAGTATTTTTGTGGCAACTGC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Braf-V600E-2</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>CTCTGCTGGGAAAGCGGC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kras-G12D-1</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>AGCTAGCCACCATGGCTTGAGTAAGTCTGCA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kras-G12D-2</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>CCTTTACAAGCGCACGCAGACTGTAGA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pten-1</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>ACTCAAGGCAGGGATGAGC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pten-2</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>AATCTAGGGCCTCTTGTGCC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pten-3</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>GCTTGATATCGAATTCCTGCAGC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tdTomato-1</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>AAGGGAGCTGCAGTGGAGTA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tdTomato-2</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>CCGAAAATCTGTGGGAAGTC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tdTomato-3</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>GGCATTAAAGCAGCGTATCC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tdTomato-4</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>CTGTTCCTGTACGGCATGG</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

spatial and temporal control of murine melanoma initiation from mutant melanocyte stem cells

El melanoma cutáneo es bien conocido como el cáncer de piel más agresivo. Aunque los factores de riesgo y las principales alteraciones genéticas continúan documentándose con una profundidad cada vez mayor, la tasa de incidencia del melanoma cutáneo ha mostrado un aumento rápido y continuo durante las últimas décadas. Con el fin de encontrar métodos preventivos efectivos, es importante entender los primeros pasos de iniciación del melanoma en la piel. Los datos anteriores han demostrado que las células madre foliculares de melanocito (MCSC) en los tejidos de la piel adulta pueden actuar como células del melanoma de origen al expresar mutaciones oncogénicas y alteraciones genéticas. La tumorigénesis derivada de los MCSC propensos al melanoma puede inducirse cuando la MCSCs se transición de un estado inactivo al activo. Esta transición en MCSCs propenso al melanoma puede ser promovida por la modulación del estado de actividad de las células madre del folículo piloso o a través de factores ambientales extrínsecos como el ultravioleta-B (UV-B). Estos factores pueden ser manipulados artificialmente en el laboratorio por depilación química, lo que provoca la transición de las células madre del folículo piloso y MCSC de un estado inactivo a activo, y por la exposición UV-B usando una luz de sobremesa. Estos métodos proporcionan un control espacial y temporal exitoso del inicio del melanoma cutáneo en la piel dorsal murina. Por lo tanto, estos sistemas modelo in vivo serán valiosos para definir los primeros pasos del inicio del melanoma cutáneo y podrían utilizarse para probar métodos potenciales para la prevención de tumores.

El inicio del melanoma cutáneo inducido por depilación química
El procedimiento de depilación química se muestra en la figura 2. Cuando los ratones son de 7 semanas después del parto, su piel dorsal está en telógeno. Durante el telógeno, se sabe que las células madre del folículo piloso y los MCSC están en estado de reposo. La piel no debe mostrar un crecimiento signific...

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Spatial and Temporal Control of Murine Melanoma Initiation from Mutant Melanocyte Stem Cells

Control espacial y temporal de la iniciación del melanoma murino a partir de células madre de melanocitos mutantes

El siguiente procedimiento describe un método para el control espacial y temporal del inicio del tumor melanocítico en la piel dorsal murina, utilizando un modelo de ratón modificado genéticamente. Este protocolo describe el inicio de melanoma cutáneo macroscópico y microscópico.

Cutaneous melanoma is well known as the most aggressive skin cancer. Although the risk factors and major genetic alterations continue to be documented ...

El melanoma es ampliamente diagnosticado en todo el mundo, con una incidencia creciente. Estos protocolos permiten controlar cuidadosamente las primeras etapas de iniciación del melanoma, facilitando el estudio de su desarrollo. Al controlar el tiempo y la ubicación de la activación de células madre de melanocitos, tenemos la capacidad de discernir los cambios dentro de la población de células madre y su nueva iniciación de melanoma de cepa.Demostrando el procedimiento serán Dahihm Kim y Luye An, estudiantes graduados del laboratorio. Dos o tres días antes de comenzar el procedimiento, utilice una recortadora eléctrica para afeitar la piel dorsal de cada ratón anesthetizado de siete semanas de edad. El día del experimento, usa un hisopo de algodón para aplicar una fina capa de crema depilatoria sobre la piel expuesta.Una vez que la crema se haya aplicado uniformemente, use hisopos de algodón limpios para eliminar la crema, seguidos de una limpieza suave con un paño húmedo para eliminar cualquier crema residual. A continuación, devuelva cada ratón a su jaula de inicio con monitoreo hasta la recuperación completa. Para la irradiación UV-B, cubra la piel dorsal con material protector UV-B para que solo se exponga la región deseada, y cubra la cámara UV con una tapa resistente a los rayos UV.A continuación, encienda la lámpara UV-B para irradiar el ratón durante el período de tiempo experimental adecuado antes de devolver el ratón a una jaula vacía con supervisión hasta la recuperación completa. Para aislar las muestras de piel, utilice una recortadora eléctrica para eliminar cualquier vello de la zona de la piel dorsal de los ratones irradiados eutanizados, y cepille ligeramente la piel expuesta con un tejido libre de pelusas para limpiar el área. Haga una pequeña incisión con tijeras afiladas justo por encima de la base de la cola e inserte tijeras grandes y contundentes en la incisión para separar los tejidos conectivos subdérmicos.Usando tijeras afiladas, corte cuidadosamente a lo largo del borde de la región de la piel de interés para aislar la muestra de tejido y colocar el tejido de la piel extirpado en una toalla de papel limpia. Luego usa fórceps apagados para estirar la piel de modo que se adhiera a la toalla y esté tensa. Una vez que todas las muestras hayan sido cosechadas, coloque una muestra de piel y una toalla de papel en un pedazo de papel de filtro doblado inmediatamente adyacente al pliegue, teniendo cuidado de que la muestra esté lisa y no doblada o arrugada.Cierre los lados del papel de filtro con grapas y recorte el papel. A continuación, sumerja completamente las muestras en formalina tamponada 10% neutral durante tres a cinco horas a temperatura ambiente antes de lavar los tejidos con dos lavados de cinco minutos en agua desionizada. Después del segundo lavado, retire cuidadosamente cualquier material residual de los tejidos de la piel y recorte los bordes de las muestras para que no sean irregulares.A continuación, realice tres cortes sagitales en cada muestra para que el ancho de las tiras no sea superior a cinco milímetros, y haga cortes transversales para que las muestras no sean más de 20 milímetros de ancho. Coloque un molde crio que contenga una temperatura de corte óptima o un medio OCT en una orientación vertical y coloque de cuatro a cinco piezas de piel encima del OCT. Cuando todas las piezas estén en su lugar, utilice dos pares de fórceps finos para llevar el borde largo de cada pieza de piel a la parte inferior del molde crio para que las muestras sean verticales dentro del OCT y perpendiculares a la base del molde.A continuación, llene el molde con OCT adicional al segundo labio y coloque el molde sobre una superficie plana de un pedazo de hielo seco, usando fórceps para ajustar las piezas de la piel que puedan haber cambiado durante la transferencia a medida que el bloque comienza a congelarse según sea necesario. Cuando los ratones son siete semanas postnatal, su piel dorsal está en telógeno. Durante el telógeno, folículo piloso y células madre de melanocitos son conocidos por estar en un estado de reposo en reposo, y la piel no debe mostrar un crecimiento significativo del cabello después del afeitado.La depilación química, sin embargo, puede inducir la activación de las células madre del folículo piloso, induciendo un crecimiento significativo del cabello dentro de la región de interés. Como la depilación química puede inducir significativamente la activación tanto del folículo piloso como de las células madre de melanocitos, las células madre de melanocitos propensas al melanoma en un estado activo pueden formar tumores y la iniciación del melanoma microscópico se puede observar dentro de las dos semanas de la depilación química. La irradiación UV-B también puede inducir la iniciación tumoral a partir de células madre de melanocitos en reposo propensas a tumores.Es importante destacar que uv-B induce la translocación directa de las células madre de melanocitos desde su nicho de células madre foliculares a la epidermis interfolicular. Además, uv-B puede inducir la formación de melanoma cutáneo originado por células madre de melanocitos a lo largo de la epidermis interfolicular. Al igual que la piel dorsal, la iniciación del melanoma inducido por UV-B se puede observar notablemente en otras áreas de la piel, como la piel del oído.De hecho, en comparación con el control de la piel del oído, cubierto por un paño resistente a los rayos UV, la piel del oído expuesta a uv-B demuestra una pigmentación más alta debido a una mayor carga de iniciación del melanoma. Diferentes dosis de UV-B pueden tener diferentes efectos sobre la piel del ratón y la actividad de los melanocitos. Por lo tanto, es importante determinar y optimizar la dosis de irradiación antes de comenzar el experimento.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

Un modelo de ratón de la fatiga inducida por irradiación periférica

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

Investigación

Investigación sobre el cáncer

Harnessing the DNA Dye-triggered Side Population Phenotype to Detect and Purify Cancer Stem Cells from Biological Samples

Aprovechamiento del fenotipo de población lateral desencadenado por tinte de ADN para detectar y purificar células madre de cáncer a partir de muestras biológicas

Cancer is a stem cell-driven disease and eradication of these cells has become a major therapeutic goal. Deciphering vulnerabilities of Cancer Stem Cells ...

Using CRISPR/Cas9 Gene Editing to Investigate the Oncogenic Activity of Mutant Calreticulin in Cytokine Dependent Hematopoietic Cells

Utilizando CRISPR/Cas9 Gene edición para investigar la actividad oncogénica del mutante calreticulina en dependiente de citoquinas de células hematopoyéticas

Clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR) is an adaptive immunity system in prokaryotes that has been repurposed by scientists to ...

Investigation of Genetic Dependencies Using CRISPR-Cas9-based Competition Assays

Investigación de las dependencias genéticas usando análisis CRISPR Cas9 basado en competencia

Gene perturbation studies have been extensively used to investigate the role of individual genes in AML pathogenesis. For achieving complete gene ...

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

Aislamiento de células madre mesenquimales del tejido de la pulpa y cocultivo con células de cáncer para estudiar sus interacciones

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

Rapid Generation of Primary Murine Melanocyte and Fibroblast Cultures

Generación rápida de cultivos primarios de melanocitos muritonos y fibroblastos

Defects in fibroblast or melanocyte function are associated with skin diseases, including poor barrier function, defective wound healing, pigmentation ...

Flow Cytometric Analysis of Mitochondrial Reactive Oxygen Species in Murine Hematopoietic Stem and Progenitor Cells and MLL-AF9 Driven Leukemia

Análisis citométrico de flujo de especies de oxígeno reactivo mitocondrial en células hematopoyéticas de la muriña y células progenitoras y leucemia impulsada por MLL-AF9

We present a flow cytometric approach for analyzing mitochondrial ROS in various live bone marrow (BM)-derived stem and progenitor cell populations from ...

Isolation of Exosome-Enriched Extracellular Vesicles Carrying Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor from Embryonic Stem Cells

Aislamiento de vesículas extracelulares enriquecidas con exosomas que transportan factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos a partir de células madre embrionarias

Embryonic stem cells (ESCs) are pluripotent stem cells capable of self-renewal and differentiation into all types of embryonic cells. Like many other cell ...

Isolation of Stem-like Cells from 3-Dimensional Spheroid Cultures

Aislamiento de células similares a tallos de cultivos esferoides tridimensionales

Despite advances in adult stem cell research, identification and isolation of stem cells from tissue specimens remains a major challenge. While resident ...

Preparation of Mitochondria from Ovarian Cancer Tissues and Control Ovarian Tissues for Quantitative Proteomics Analysis

Preparación de Mitocondrias a partir de tejidos de cáncer de ovario y tejidos ováricos de control para el análisis proteómico cuantitativo

Ovarian cancer is a common gynecologic cancer with high mortality but unclear molecular mechanism. Most ovarian cancers are diagnosed in the advanced ...