Name: spatial and temporal control of murine melanoma initiation from mutant melanocyte stem cells
Uploaded: 2019-06-07T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Spatial and Temporal Control of Murine Melanoma Initiation from Mutant Melanocyte Stem Cells at JoVE.com

Detta arbete stöddes av kansliet för biträdande sekreterare i försvaret för hälso frågor, genom peer recenserade cancer Research program under tilldelning W81XWH-16-1-0272. Åsikter, tolkningar, satser och rekommendationer är de av författarna och är inte nödvändigt vis godkänts av försvarsdepartementet. Detta arbete stöddes också av ett frö bidrag från Cornell Stem cell program till A.C. White. H. Moon stöddes av Cornell Center for vertebrate genomik Scholar program.

Alla djur förfaranden utförs i enlighet med Cornell University institutionell djur vård och användning kommitté (IACUC).
1. förberedelser
<ol><li>
Samla svans klipp från 12 dagar postnatal möss och smälta in 400 μL av 0,05 N NaOH vid 95 ° c för 1 h. Vortex och tillsätt 32 μL 1 M Tris-HCl, pH 7. Genotyp möss enligt PCR-protokoll som tillhandahålls genom Jackson Laboratory och identifiera möss med genotyp av intresse6. - Tyr-CreER -hemiz...

<ol>
	<li>Wernli, K. J., Henrikson, N. B., Morrison, C. C., Nguyen, M., Pocobelli, G., Blasi, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+for+skin+cancer+in+adults:+updated+evidence+report+and+systematic+review+for+the+US+preventive+services+task+force.">Screening for skin cancer in adults: updated evidence report and systematic review for the US preventive services task force.</a> The Journal of the American Medical Association. 316 (4), 436-447 (2016).</li><li>Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics,+2018.">Cancer statistics, 2018.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 68 (1), 7-30 (2018).</li><li>White, A. C., Lowry, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Refining+the+role+for+adult+stem+cells+as+cancer+cells+of+origin.">Refining the role for adult stem cells as cancer cells of origin.</a> Trends in Cell Biology. 25 (1), 11-20 (2015).</li><li>Moon, H., Donahue, L. R., White, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+cancer+cells+of+origin+in+cutaneous+tumors.">Understanding cancer cells of origin in cutaneous tumors.</a> Cancer Stem Cells. , 263-284 (2016).</li><li>Blanpain, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracing+the+cellular+origin+of+cancer.">Tracing the cellular origin of cancer.</a> Nature Cell Biology. 15 (2), 126-134 (2013).</li><li>Moon, H., Donahue, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Melanocyte+stem+cell+activation+and+translocation+initiate+cutaneous+melanoma+in+response+to+UV+exposure.">Melanocyte stem cell activation and translocation initiate cutaneous melanoma in response to UV exposure.</a> Cell Stem Cell. 21 (5), 665-678 (2017).</li><li>Moon, H., White, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+path+from+melanocyte+stem+cells+to+cutaneous+melanoma+illuminated+by+UVB.">A path from melanocyte stem cells to cutaneous melanoma illuminated by UVB.</a> Molecular &#38; Cellular Oncology. 5 (2), e1409864 (2018).</li><li>Rabbani, P., Takeo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coordinated+activation+of+Wnt+in+epithelial+and+melanocyte+stem+cells+initiates+pigmented+hair+regeneration.">Coordinated activation of Wnt in epithelial and melanocyte stem cells initiates pigmented hair regeneration.</a> Cell. 145 (6), 941-955 (2011).</li><li>Chou, W. C., Takeo, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+migration+of+follicular+melanocyte+stem+cells+to+the+epidermis+after+wounding+or+UVB+irradiation+is+dependent+on+Mc1r+signaling.">Direct migration of follicular melanocyte stem cells to the epidermis after wounding or UVB irradiation is dependent on Mc1r signaling.</a> Nature Medicine. 19 (7), 924-929 (2013).</li><li>Keyes, B. E., Segal, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nfatc1+orchestrates+aging+in+hair+follicle+stem+cells.">Nfatc1 orchestrates aging in hair follicle stem cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (51), (2013).</li><li>M&#252;ller-R&#246;ver, S., Handjiski, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comprehensive+guide+for+the+accurate+classification+of+murine+hair+follicles+in+distinct+hair+cycle+stages.">A comprehensive guide for the accurate classification of murine hair follicles in distinct hair cycle stages.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 117 (1), 3-15 (2001).</li><li>Kastenmayer, R. J., Fain, M. A., Perdue, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+retrospective+study+of+idiopathic+ulcerative+dermatitis+in+mice+with+a+C57BL/6+background.">A retrospective study of idiopathic ulcerative dermatitis in mice with a C57BL/6 background.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science&#8239;: JAALAS. 45 (6), 8-12 (2006).</li><li>Vultur, A., Herlyn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SnapShot:+melanoma.">SnapShot: melanoma.</a> Cancer Cell. 23 (5), (2013).</li><li>Dankort, D., Curley, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Braf(V600E)+cooperates+with+Pten+loss+to+induce+metastatic+melanoma.">Braf(V600E) cooperates with Pten loss to induce metastatic melanoma.</a> Nature Genetics. 41 (5), 544-552 (2009).</li><li>Viros, A., Sanchez-Laorden, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultraviolet+radiation+accelerates+BRAF-driven+melanomagenesis+by+targeting+TP53.">Ultraviolet radiation accelerates BRAF-driven melanomagenesis by targeting TP53.</a> Nature. 511 (7510), 478-482 (2014).</li></ol>

Hallmark genetiska förändringar som ofta finns i kutan melanom tumörer har väl beskrivits13. Den mest dominerande föraren mutation är BRAFV600E, och en genetiskt modifierade mus modell för BRAFV600E-Medierat melanom genererades av Bosenberg grupp14 och deponeras i Jackson Laboratory. Med hjälp av denna mus modell, visade vår senaste studie kravet på cellulär aktivering av tumör-benägen MCSCs för betydande initiering av <...

Melanom, den elakartade formen av melanocytiska tumörer, är den mest aggressiva cancer i huden med kutan melanom som ansvarar för majoriteten av hud cancer dödsfall1. I USA, melanom är allmänt diagnostiseras; Det beräknas vara den 5: e till 6: e vanligaste cancer typ bland de uppskattade nya cancer fall i 20182. Dessutom, medan den totala cancer incidensen har visat trenden med gradvis minskning under de senaste decennierna, kutan melanom incidens under de senaste decennierna visar en kontinuerlig och snabb ökning av båda könen2.
För att bekämpa kutana melanom mer effektivt, är det viktigt att tydligt förstå de tidiga händelserna av melanom utveckling från sina ursprungs celler för att bättre identifiera kliniskt effektiva förebyggande metoder. Det är nu känt att vuxna stamceller kan avsevärt bidra till tumör bildning som cellulära ursprunget av cancer i många olika typer av organ inklusive hud vävnader3,4,5. På samma sätt kan vuxna melanocytstamceller (MCSCs) i den murina dorsala huden fungerar som melanom celler av ursprung vid avvikande aktivering av ras/RAF och akt vägar6. Emellertid, dessa onkogena mutationer ensam inte kan effektivt inducera tumör bildning från quiescent MCSCs. Melanocytiska tumörer utvecklas så småningom när MCSCs blir aktiv under naturliga hår cykling. Men i detta protokoll kommer vi att beskriva metoder för att artificiellt inducera cellulär aktivering av tumör-benägen mcscs, vilket underlättar exakt kontroll av melanom initiering6,7.
Genom de metoder som beskrivs här, rumsliga och temporala kontroll av kutan melanom initiering från tumör-benägen MCSCs uttrycker onkogena BRAFV600E tillsammans med förlust av PTEN uttryck kan framgångs rikt utföras, som vi tidigare har rapporterat6. Denna metod innehåller tidigare fynd som visar hår follikeln stamcells aktivering genom avhårning samt hur exponering av murina hud till UV-B kan under lätta aktiveringen av mcscs bosatt i hår säcken och flyttning av denna cellulära subpopulation till interfollicular epidermis6,8,9,10. Dessa in vivo modell system kan ge värdefull information om hur fysiologiska och miljömässiga förändringar kan förändra cellulär status av melanom-benägna MCSCs, vilket i sin tur kan inducera betydande initiering av melanom i huden.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Tamoxifen</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T5648-1G</td>
			<td>For systemic injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tamoxifen</td>
			<td>Cayman Chemical</td>
			<td>13258</td>
			<td>For systemic injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corn oil</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>45-C8267-2.5L-EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4OH-tamoxifen</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H7904-25MG</td>
			<td>For topical treatment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>26g 1/2&#34; needles</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td>Veterinary grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL syringe</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td>Veterinary grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pet hair trimmer</td>
			<td>Wahl</td>
			<td>09990-502</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hair removal cream</td>
			<td>Nair</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Available at most drug stores</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton swabs</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultraviolet light bulb</td>
			<td>UVP</td>
			<td>95-0042-08</td>
			<td>model XX-15M midrange UV lamp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>200 proof ethanol</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td>pure ethanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histoplast PE</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22900700</td>
			<td>paraffin pellets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral Buffered Formalin, 10%</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HT501128-4L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear-Rite 3</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>6901</td>
			<td>xylene substitute</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>O.C.T. Compound</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>23730571</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Cassette</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>89199-430</td>
			<td>for FFPE processing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryomolds</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>4557</td>
			<td>25 x 20 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FFPE metal mold</td>
			<td>Leica</td>
			<td>3803082</td>
			<td>24 x 24 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td>Veterinary grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia inhalation system</td>
			<td>various</td>
			<td></td>
			<td>Veterinary grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine scissor</td>
			<td>FST</td>
			<td>14085-09</td>
			<td>Straight, sharp/sharp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine scissor</td>
			<td>FST</td>
			<td>14558-09</td>
			<td>Straight, sharp/sharp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Metzenbaum</td>
			<td>FST</td>
			<td>14018-13</td>
			<td>Straight, blunt/blunt</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>FST</td>
			<td>11252-00</td>
			<td>Dumont #5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forcep</td>
			<td>FST</td>
			<td>11018-12</td>
			<td>Micro-Adson</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tyr-CreER; LSL-BrafV600E; Pten-f/f</td>
			<td>Jackson Labs</td>
			<td>13590</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSL-tdTomato</td>
			<td>Jackson Labs</td>
			<td>007914</td>
			<td>ai14</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cre-1</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>GCATTACCGGTCGATGCAACGAGTGATGAG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cre-2</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>GAGTGAACGAACCTGGTCGAAATCAGTGCG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Braf-V600E-1</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>TGAGTATTTTTGTGGCAACTGC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Braf-V600E-2</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>CTCTGCTGGGAAAGCGGC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kras-G12D-1</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>AGCTAGCCACCATGGCTTGAGTAAGTCTGCA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kras-G12D-2</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>CCTTTACAAGCGCACGCAGACTGTAGA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pten-1</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>ACTCAAGGCAGGGATGAGC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pten-2</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>AATCTAGGGCCTCTTGTGCC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pten-3</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>GCTTGATATCGAATTCCTGCAGC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tdTomato-1</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>AAGGGAGCTGCAGTGGAGTA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tdTomato-2</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>CCGAAAATCTGTGGGAAGTC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tdTomato-3</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>GGCATTAAAGCAGCGTATCC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tdTomato-4</td>
			<td></td>
			<td>n/a</td>
			<td>CTGTTCCTGTACGGCATGG</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

spatial and temporal control of murine melanoma initiation from mutant melanocyte stem cells

Kutan melanom är välkänd som den mest aggressiva hud cancer. Även om riskfaktorer och stora genetiska förändringar fortsätter att dokumenteras med ökande djup, incidensen av kutan melanom har visat en snabb och kontinuerlig ökning under de senaste decennierna. För att hitta effektiva förebyggande metoder, är det viktigt att förstå de tidiga stegen av melanom initiering i huden. Tidigare data har visat att follikulära melanocytstamceller (MCSCs) i de vuxna hud vävnaderna kan fungera som melanom celler av ursprung när de uttrycker onkogena mutationer och genetiska förändringar. Tumorigenesis till följd av melanom-benägna MCSCs kan induceras när MCSCs över gång från en quiescent till aktivt tillstånd. Denna över gång i melanom-benägen mcscs kan främjas genom modulering av antingen hår säckar stamceller verksamhet stat eller genom yttre miljö faktorer såsom ultraviolett-b (UV-b). Dessa faktorer kan artificiellt manipuleras i laboratoriet genom kemisk depilation, som orsakar över gång av hår säckar stamceller och MCSCs från en quiescent till aktivt tillstånd, och genom UV-B exponering med hjälp av en bänk ljus. Dessa metoder ger framgångs rik rumslig och temporal kontroll av kutan melanom initiering i murina dorsala huden. Därför, dessa in vivo modell system kommer att vara värdefullt att definiera de tidiga stegen av kutan melanom initiering och kan användas för att testa möjliga metoder för tumör prevention.

Kutan melanom initiering inducerad av kemisk avhårning
Förfarandet för kemisk avhårning avbildas i figur 2. När möss är 7-veckors postnatal, deras rygg hud är i telogen. Under telogen, hår säckar stamceller och MCSCs är kända för att vara i en quiescent, vilande tillstånd. Huden ska inte uppvisa någon signifikant hårväxt efter rakning. Å andra sidan kan kemisk avh?...

Watch this Scientific Journal Video about Spatial and Temporal Control of Murine Melanoma Initiation from Mutant Melanocyte Stem Cells at JoVE.com

Spatial and Temporal Control of Murine Melanoma Initiation from Mutant Melanocyte Stem Cells

Rumslig och temporal kontroll av murina melanom initiering från Mutant melanocyte stamceller

Följande procedur beskriver en metod för rumslig och temporal kontroll av melanocytisk tumör initiering i murina dorsala hud, med hjälp av en genetiskt modifierade mus modell. Detta protokoll beskriver makroskopisk och mikroskopisk kutan melanom initiering.

Cutaneous melanoma is well known as the most aggressive skin cancer. Although the risk factors and major genetic alterations continue to be documented ...

Melanom är allmänt diagnostiseras över hela världen, med ökande incidens. Dessa protokoll gör det möjligt att noggrant kontrollera de tidiga stadierna av melanominitiering, vilket underlättar studiet av dess utveckling. Genom att kontrollera tid och plats för melanocyte stamcellsaktivering har vi förmågan att urskilja förändringarna inom stamcellspopulationen och dess nya stam melanom initiering.Demonstrera förfarandet kommer att Dahihm Kim och Luye An, doktorander från laboratoriet. Två till tre dagar innan förfarandet påbörjas, använd en elektrisk trimmer för att raka rygghuden från varje sövd sju veckor gammal mus. På dagen för experimentet, använd en bomullspinne för att applicera ett tunt lager av depilatory kräm på den exponerade huden.När krämen har tillämpats jämnt, använd rena bomullspinner för att ta bort krämen, följt av skonsam avtorkning med en fuktig trasa för att avlägsna eventuell kvarvarande kräm. Sedan returnera varje mus till sitt hem bur med övervakning tills full återhämtning. För UV-B-bestrålning, täck dorsala huden med UV-B-skyddande material så att endast den önskade regionen kommer att exponeras, och täcka UV-kammaren med en UV-resistent lock.Slå sedan på UV-B-lampan för att bestråla musen under lämplig experimentell tidsperiod innan du returnerar musen till en tom bur med övervakning tills full återhämtning. För att isolera hudproverna, använd en elektrisk trimmer för att avlägsna eventuellt hår från rygghudsområdet på de avlivade bestrålade mössen, och borsta lätt den exponerade huden med en luddfri vävnad för att rensa området. Gör ett litet snitt med vass sax strax ovanför basen av svansen och sätt in stora, trubbiga saxar i snittet för att separera de subdermala bindvävnaderna.Med hjälp av vass sax, försiktigt skära längs kanten av huden regionen av intresse för att isolera vävnadsprovet och placera strukits hudvävnad på en ren pappershandduk. Använd sedan tråkiga tänjningar för att sträcka ut huden så att den fäster vid handduken och är spänd. När alla prover har skördats, placera ett hudprov och pappershandduk underlag i en bit vikta filterpapper omedelbart intill globlinjen, var noga med att provet är slät och inte vikas eller skrynkliga.Stäng sidorna av filtrerpapperet med häftklamrar, och trimma papperet. Sedan helt dränka proverna i 10%neutral buffrad formalin i tre till fem timmar i rumstemperatur innan du tvättar vävnaderna med två fem minuters tvättar i avjoniserat vatten. Efter den andra tvätten, försiktigt ta bort eventuella kvarvarande material från hudens vävnader, och trimma kanterna på proverna så att de inte är taggiga.Därefter gör du tre sagittal nedskärningar i varje prov så att bredden på remsorna är högst fem millimeter, och gör tvärgående snitt så att proverna inte är mer än 20 millimeter bred. Placera en kryoform som innehåller optimal skärtemperatur eller OCT-medium i en stående orientering, och placera fyra till fem bitar av huden ovanpå OKT. När alla bitar är på plats, använd två par fina tlympor för att få långsidan av varje bit hud till botten av kryo mögel så att proverna är vertikala inom OKT och vinkelrätt mot basen av formen.Fyll sedan formen med ytterligare OCT till andra läppen och placera formen på en plan yta av en bit torris, med hjälp av tövövingar för att justera eventuella hudbitar som kan ha skiftat under överföringen som blocket börjar frysa vid behov. När möss är sju veckor postnatal, är deras rygghud i telogen. Under telogen, hårsäcken och melanocyte stamceller är kända för att vara i en quiescent vilande tillstånd, och huden bör visa någon betydande hårväxt efter rakning.Kemisk utfästelse, dock, kan framkalla hårsäck stamcellsaktivering, inducera betydande hårväxt inom regionen av intresse. Som kemisk avhårning kan avsevärt inducera aktivering av både hårsäcken och melanocyter stamceller, melanom-benägen melanocyte stamceller i ett aktivt tillstånd kan bilda tumörer och mikroskopiska melanom initiering kan observeras inom två veckor efter kemisk depilation. UV-B bestrålning kan också inducera tumör initiering från quiescent, tumör-benägen melanocyte stamceller.Viktigt, UV-B inducerar direkt flyttning av melanocyter stamceller från deras follikulära stamceller nisch till inter-follikulära epidermis. Vidare kan UV-B inducera melanocyte stamcells-ursprung testning melanom bildas i hela interfollicular epidermis. Liknar dorsala huden, UV-B-inducerad melanom initiering kan särskilt observeras i andra hudområden, såsom örat hud.I själva verket, jämfört med kontroll örat hud, som omfattas av UV-resistent trasa, öra hud utsätts för UV-B visar en högre pigmentering på grund av en högre börda av melanom initiering. Olika doser av UV-B kan ha olika effekter på mus hud och melanocyte aktivitet. Därför är det viktigt att bestämma och optimera bestrålningsdosen innan du startar ditt experiment.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

En musmodell av trötthet inducerad av perifera bestrålning

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

Harnessing the DNA Dye-triggered Side Population Phenotype to Detect and Purify Cancer Stem Cells from Biological Samples

Användning av DNA-färgutlösad sidob populationsfenotyp för att detektera och rena cancer stamceller från biologiska prov

Cancer is a stem cell-driven disease and eradication of these cells has become a major therapeutic goal. Deciphering vulnerabilities of Cancer Stem Cells ...

Using CRISPR/Cas9 Gene Editing to Investigate the Oncogenic Activity of Mutant Calreticulin in Cytokine Dependent Hematopoietic Cells

Med hjälp av CRISPR/Cas9 gen redigering för att undersöka onkogena aktiviteten av muterade Calreticulin i cytokin beroende av hematopoetiska celler

Clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR) is an adaptive immunity system in prokaryotes that has been repurposed by scientists to ...

Investigation of Genetic Dependencies Using CRISPR-Cas9-based Competition Assays

Utredning av genetiska beroenden med CRISPR-Cas9-baserade konkurrens analyser

Gene perturbation studies have been extensively used to investigate the role of individual genes in AML pathogenesis. For achieving complete gene ...

Mesenchymal Stem Cell Isolation from Pulp Tissue and Co-Culture with Cancer Cells to Study Their Interactions

Mesenkymala stamceller isolering från massa vävnad och samtidig kultur med cancerceller för att studera deras interaktioner

Cancer as a multistep process and complicated disease is not only regulated by individual cell proliferation and growth but also controlled by tumor ...

Rapid Generation of Primary Murine Melanocyte and Fibroblast Cultures

Snabb generering av primär murina melanocyte och fibroblast kulturer

Defects in fibroblast or melanocyte function are associated with skin diseases, including poor barrier function, defective wound healing, pigmentation ...

Flow Cytometric Analysis of Mitochondrial Reactive Oxygen Species in Murine Hematopoietic Stem and Progenitor Cells and MLL-AF9 Driven Leukemia

Flödescytometrisk analys av mitokondriella reaktiva syreradikaler i murina hematopoietiska Stem och progenitorceller och MLL-AF9 driven leukemi

We present a flow cytometric approach for analyzing mitochondrial ROS in various live bone marrow (BM)-derived stem and progenitor cell populations from ...

Isolation of Exosome-Enriched Extracellular Vesicles Carrying Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor from Embryonic Stem Cells

Isolering av exosomberikade extracellulära vesiklar som bär granulocyt-makrofagkolonistimulerande faktor från embryonala stamceller

Embryonic stem cells (ESCs) are pluripotent stem cells capable of self-renewal and differentiation into all types of embryonic cells. Like many other cell ...

Isolation of Stem-like Cells from 3-Dimensional Spheroid Cultures

Isolering av Stem-liknande celler från 3-dimensionella sfäroid kulturer

Despite advances in adult stem cell research, identification and isolation of stem cells from tissue specimens remains a major challenge. While resident ...

Preparation of Mitochondria from Ovarian Cancer Tissues and Control Ovarian Tissues for Quantitative Proteomics Analysis

Beredning av Mitokona från äggstocks cancer vävnader och kontrollera äggstocksvävnad för kvantitativ proteomik analys

Ovarian cancer is a common gynecologic cancer with high mortality but unclear molecular mechanism. Most ovarian cancers are diagnosed in the advanced ...