Name: robust ligature-induced model of murine periodontitis for the evaluation of oral neutrophils
Uploaded: 2020-01-21T12:00:00
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जे डब्ल्यू सी कनाडा के स्वास्थ्य अनुसंधान संस्थानों (CIHR) द्वारा समर्थित है । लेखक ट्राइपैन ब्लू धुंधला प्रदर्शन में उनकी सहायता के लिए डॉ चुनजियांग सन का शुक्रिया अदा करना चाहेंगे ।

सभी murine अध्ययन प्रासंगिक नैतिक नियमों का पालन किया और टोरंटो पशु देखभाल समिति और अनुसंधान नैतिकता बोर्ड (प्रोटोकॉल २००११९३०) के विश्वविद्यालय द्वारा अनुमोदित किया गया ।
1. लिगेचर इंस्टॉलेशन</...

पेरिन लिगेचर-पेरिओन्टिस के प्रेरित मॉडल के उपयोग से जुड़ा सबसे महत्वपूर्ण तत्व बलिदान या जानबूझकर हटाने के समय तक लिगेचर की अवधारण के आसपास केंद्रित है। स्थापित बायोफिल्म-रिटेंटिव लिगेचर 11-16 दिन की अ?...

पीरियोडोन्टल रोग (पीडी) एक ऑस्टियोलिटिक स्थिति है जो महत्वपूर्ण मेजबान रुग्णता और आर्थिक बोझ से जुड़ी है, जो प्रभावित दंत चिकित्सा1,2,3,4के लिए नरम ऊतक लगाव और ओसियस समर्थन दोनों की सूजन और हानि से प्रकट होती है। यह प्रक्रिया मेजबान के मौखिक माइक्रोबायोटा और जन्मजात प्रतिरक्षा प्रणाली के बीच बातचीत द्वारा नियंत्रित होती है। यह मधुमेह, हृदय रोग, और कैंसर5,6,7,8सहित अन्य प्रणालीगत भड़काऊ रोगों के तीव्र के साथ भी जुड़ा हुआ है । ऐतिहासिक रूप से, यह परिकल्पना की गई थी कि पीडी रोगजनकता बड़ी मात्रा में विशिष्ट बैक्टीरिया जैसे पोर्फिरोनास गिंगिवलिस9पर निर्भर है। हालांकि, हाल के सबूतों से पता चलता है कि पीडी के माइक्रोबियल घटक दंत जैव फिल्म द्वारा मध्यस्थता की जाती है। बायोफिल्म कई सूक्ष्मजीवों का एक संगठित, जटिल समुदाय है जो स्वस्थ सहजीवी और विनाशकारी डिस्बायोटिक राज्यों10,11में मौजूद हो सकता है। मौखिक बायोफिल्म सामान्य रूप से रोगजनक बैक्टीरिया के फोसी की स्थापना को रोककर मेजबान के प्रति प्रतिरोध करती है और मेजबान प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया12,13के विनियमन के माध्यम से आदर्श गिंगिवल ऊतक संरचना और कार्य को बढ़ावा देती है । मौखिक गुहा और मेजबान प्रतिरक्षा प्रणाली के भीतर कॉममेंसल जीवों के बीच समतुल्य संबंध के क्षोभ ऊतक होम्योस्टेसिस में परिवर्तन हो सकता है, जिसके परिणामस्वरूप पीडी5,10,12,13,14की हॉलमार्क नैदानिक और रेडियोग्राफिक छपने का डाइबेस्टेरियोसिस और विकास हो सकता है।
दिलचस्प बात यह है कि पीडी की दीक्षा के लिए आवश्यक मौखिक डिस्बैकेरियोसिस की स्थापना सभी व्यक्तियों में पीडी को चलाने के लिए पर्याप्त नहीं है, जो सहजीवी और डिस्बायोटिक राज्यों15के बीच माइक्रोबायोटा के संक्रमण को विकृत करने के लिए मेजबान प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की क्षमता की ओर आक्षेप है। यह उन साधनों पर एक विशेष स्पॉटलाइट रखता है जिनके माध्यम से पीडी जन्मजात प्रतिरक्षा प्रणाली के अग्रणी पात्रों में से एक को प्रभावित करता है, अर्थात् बहुरूपपरमाणु कणिका (पीएमएन), या न्यूट्रोफिल, स्थानीय और प्रणालीगत दृष्टिकोण16,17से।
मनुष्यों में, पीएमएनएस को स्वस्थ पीरियोडोन्टल संयोजी ऊतकों में ~ 2 x 106 कोशिकाओं/एच की दर से परिसंचरण से भर्ती किया जाता है, जहां वे पूर्वहावी ल्यूकोसाइट आबादी हैं। यहां, उन्हें बाद में गिंगवाल क्वीकुलर तरल पदार्थ के घटक के रूप में मौखिक गुहा में गिंगवाल सल्कस से निष्कासित कर दिया जाता है। पीडी की उपस्थिति में, न्यूट्रोफिलिया परिसंचरण और मौखिक गुहा के भीतर प्रकट होता है, जहां इन प्रभावक कोशिकाओं में एक अतिभड़काऊ फेनोटाइप होता है जो पीरियोडोंटियम17,18,19,20, 21,22के उपर्युक्त विनाश की ओर जाता है। इसलिए पीडी और अन्य प्रणालीगत भड़काऊ परिस्थितियों में पीएमएनएस की भूमिका को समझना अत्यंत महत्वपूर्ण है ।
हालांकि यह व्यापक रूप से स्वीकार किया जाता है कि पुराने रोगों पारस्परिक रूप से पीडी से जुड़े हुए हैं, अंतर्निहित तंत्र अभी तक स्पष्ट किया जाना है, इन रुग्ण और संभावित घातक प्रणालीगत स्थितियों के प्रबंधन में कठिनाइयों के लिए योगदान । कई प्रयोगात्मक पशु मॉडल, प्रत्येक अद्वितीय लाभ और नुकसान के साथ, पीडी23,24के रोगविज्ञान का अध्ययन करने के लिए उपयोग किया गया है । विशेष रूप से मूत्र मॉडल पर ध्यान केंद्रित करते हुए, विभिन्न प्रकार के प्रोटोकॉल हैं जिनके माध्यम से पीडी के अध्ययन को सुविधाजनक बनाया जाता है; हालांकि, उनके पास कई तकनीकी और शारीरिक कमियां25,26,27,28,29,30,31हैं .
सबसे पहले, मौखिक गावज माउस मॉडल को जिंगिवल सूजन और हड्डी हानि उत्पन्न करने के लिए मानव पीरियोडोन्टल रोगजनकों के कई मौखिक टीका की आवश्यकता होती है। इसके अतिरिक्त, यह आम तौर पर एंटीबायोटिक उपचार की अवधि से पहले है जो मूत्र कॉमेसल मौखिक वनस्पति25को विकृत करता है। इस मॉडल को अक्सर मौखिक गावज को सुरक्षित रूप से करने के लिए विशेष प्रशिक्षण की आवश्यकता होती है, अधिक जटिल मानव मौखिक माइक्रोबायोम से पीरियोडोन्टल रोगजनकों के केवल एक छोटे से अंश का उपयोग करता है, और अल्वेलर हड्डी हानि स्थापित करने के लिए कई महीनों की आवश्यकता होती है।
इसके विपरीत, रासायनिक रूप से प्रेरित मूत्र मॉडल त्रिमूर्तिरोबेंजीन सल्फोनिक एसिड (टीएनबी) या डीएक्सटन सल्फेट सोडियम (डीएसएस) के मौखिक वितरण का उपयोग करते हैं, जो आमतौर पर कई महीनों की अवधि में कोलाइटिस के मूत्र मॉडल स्थापित करने में उपयोग किए जाने वाले एजेंट ों को पीरियोडोन्टल बोन लॉस26को प्रेरित करने के लिए प्रेरित किया जाता है। इंट्राओरल और एक्साटोरल फोड़ा-आधारित मॉडल उपलब्ध हैं, जिनमें क्रमशः डोरसम के साथ-साथ कैल्वरियम के मिमूत्र चीरों और ऊतकों को शामिल किया गया है। पूर्व फोड़ा मॉडल में, बैक्टीरिया के कई इंजेक्शन प्रशासित किए जाते हैं, जिससे कई गिंगिवल फोड़े जाते हैं और अल्वेलर हड्डी हानि की कमी होती है, जो पीडी के अध्ययन में उनके उपयोग को सीमित करती है। बाद फोड़ा मॉडल मौखिक गुहा के बाहर साइटों पर बैक्टीरियल उग्रता, सूजन और हड्डी अवशोषण का अध्ययन करने के लिए काफी अधिक उपयुक्त हैं, जो पीरियोडोंटियम और मौखिक माइक्रोबायोम27,28,29,30, 31के मूल्यांकन को समाप्त करता है।
पीरियोपोंटिस के लिगेचर-प्रेरित मॉडल का उपयोग करके, एक लट रेशम सीवन आमतौर पर दूसरे मोलर के चारों ओर परिधि में स्थापित किया गया है। विकल्प के रूप में, सीवन सामग्री का एक रैखिक खंड32,33के बीच डाला जा सकता है। लिगेचर प्लेसमेंट का लक्ष्य बैक्टीरियल संचय को सुविधाजनक बनाना और गिंगिवल सल्सी के भीतर डिस्बायोसिस उत्पन्न करना है, जिसके परिणामस्वरूप पीरियोडोन्टल ऊतक सूजन और पीरियोडोंटियम की रचना करने वाले ऊतकों का विनाश होता है। सबसे विशेष रूप से, यह मॉडल अधिक सामान्यरूप से उपयोग किए जाने वाले मौखिक गाव मॉडल34की तुलना में काफी अधिक अल्वेलर हड्डी हानि का उत्पादन करने में सक्षम है। इसके अलावा मौखिक gavage मॉडल के उपयोग उलझी चूहों के कई उपभेदों द्वारा प्राकृतिक प्रतिरोध है (यानी, C57BL/6) alveolar हड्डी हानि विकसित करने के लिए । यह भी समस्याग्रस्त है, क्योंकि यह तनाव सबसे अधिक बार मूत्र आधारित पशु अनुसंधान३५में इस्तेमाल किया जाता है ।
मार्चेशन एट अल और आबे और हाजीशेंगलिस द्वारा वर्णित मौजूदा प्रक्रियाओं को लिगेचर33,36रखने के तकनीकी कार्य को सरल बनाने के लिए तैयार किया गया था। दुर्भाग्य से, पूर्व प्रोटोकॉल विशेष 3 डी मुद्रित उपकरणकी आवश्यकता है और समय से पहले लिगेचर हानि के लिए क्षमता के अधिकारी, जिससे पशु उपयोग में वृद्धि और अतिरिक्त ऑपरेटिंग कमरे में बिताए समय के साथ जुड़े लागत । इसके अलावा, दोनों प्रोटोकॉल एक अध्ययन के लिए उपलब्ध रोगग्रस्त अवधि के केवल छोटे क्षेत्रों को उत्पन्न करते हैं।
इस तकनीक के साथ झूठ बोलने वाले फायदे मौखिक डिस्बायोसिस और इम्यूनोलॉजी के एक साथ अध्ययन में आधारित हैं जो पीरियोडोंटियम को नियंत्रित करते हैं, विविध आनुवंशिक पृष्ठभूमि वाले कम लागत वाले जानवरों का उपयोग करते हैं, और सरल आवास और पशुपालन प्रथाओं। इस प्रकार, लक्ष्य रोगग्रस्त ऊतकों की मात्रा को अधिकतम करने के लिए होना चाहिए और पशु अनुसंधान में कमी के सिद्धांतों का अभ्यास करने के प्रयासों में, पशुओं की खपत को यथासंभव कम स्तर तक कम करना चाहिए । इसके लिए यह सुनिश्चित करने की आवश्यकता है कि सभी पशु प्रायोगिकविश्लेषणोंमें शामिल होने में सक्षम हों । हालांकि, यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि कोई फर्क नहीं पड़ता कि पीरियोडोन्टल रोग के किस पशु मॉडल का उपयोग किया जाता है, कोई भी मॉडल नहीं है जिसमें मानव पीडी पैथोफिजियोलॉजी के हर तत्व शामिल हैं।
यह नया प्रोटोकॉल अधिकांश प्रयोगशालाओं के भीतर पाए जाने वाले इंस्ट्रूमेंटेशन और सामग्रियों का उपयोग करके कई मैक्सिलरी मोलर दांतों के चारों ओर एक लिगेचर की नियुक्ति को नियोजित करता है। यह आसानी से और आत्मविश्वास से एक लिगाचर स्थापित करने के लिए पर्याप्त समय की अनुमति देता है जो समय से पहले avulse की संभावना नहीं है। अंत में, जैसा कि पीएमएनएस पीडी में पीरियोडोंटियम के विनाश का समन्वय करता है, मनुष्यों के अनुरूप मौखिक न्यूट्रोफिल को ठीक करने के लिए एक उपन्यास पद्धति भी प्रस्तुत की जाती है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anti-mouse F4/80 Antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>123131</td>
			<td>BV421, Clone BM8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse Ly6G Antibody</td>
			<td>BD</td>
			<td>560602</td>
			<td>PerCP-Cy5.5, Clone 1A8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 Male Mice</td>
			<td>Charles River</td>
			<td></td>
			<td>8 to 12 weeks old</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Centrifuge Tube</td>
			<td>FroggaBio</td>
			<td>TB15-500</td>
			<td>15 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Conical Centrifuge Tube</td>
			<td>FroggaBio</td>
			<td>TB50-500</td>
			<td>50 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS Buffer</td>
			<td>Multiple</td>
			<td></td>
			<td>1% BSA (BioShop), 2mM EDTA (Merck), 1x HBSS-/- (Gibco)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACSDiva</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td>v8.0.1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibre-Lite</td>
			<td>Dolan-Jenner</td>
			<td></td>
			<td>Model 180</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlowJo</td>
			<td>Tree Star</td>
			<td></td>
			<td>v10.0.8r1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat Therapy Pump</td>
			<td>Hallowell</td>
			<td></td>
			<td>HTP-1500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot Glass Bead Sterilizer</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>66118-10</td>
			<td>Germinator 500</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris Scissors</td>
			<td>Almedic</td>
			<td>7602-A8-684</td>
			<td>Straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Vetoquinol</td>
			<td></td>
			<td>100mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSRFortessa</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td>X-20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Serum</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M5905-5ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nylon Mesh Filter</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-363-547</td>
			<td>40 &#181;m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>28908</td>
			<td>16% (w/v), Methanol Free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered Saline</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D1408-500ML</td>
			<td>Without CaCl2 and MgCl2, 10x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic Disposable Syringes</td>
			<td>BD</td>
			<td>309659</td>
			<td>1 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat Serum</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R9759-5ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silk Suture</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>SS652</td>
			<td>C13 USP 5-0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Splinter Forceps</td>
			<td>Almedic</td>
			<td>7726-A10-700</td>
			<td>#1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Splinter Forceps</td>
			<td>Almedic</td>
			<td>7727-A10-704</td>
			<td>#5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo Dissecting Microscope</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td>28865</td>
			<td>Photo-Zusatz</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Hypodemic Needle</td>
			<td>BD</td>
			<td>305111</td>
			<td>26G X 1/2&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309659</td>
			<td>1 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Rompun</td>
			<td></td>
			<td>20mg/mL</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

robust ligature-induced model of murine periodontitis for the evaluation of oral neutrophils

मूत्र मॉडल का उपयोग करते हुए पीरियोडोन्टल रोग के रोगविज्ञान का अध्ययन करने के मुख्य फायदे जानवरों की कम लागत, आनुवंशिक रूप से संशोधित उपभेदों की सरणी, काटे गए नरम और कठोर ऊतकों पर किए जा सकने वाले विश्लेषणों की विशाल संख्या है। हालांकि, इनमें से कई प्रणालियां प्रक्रियात्मक आलोचनाओं के अधीन हैं । एक विकल्प के रूप में, स्थानीयकृत विकास और डिस्बायोटिक ओरल माइक्रोबायोम की अवधारण से प्रेरित पीरियोडोन्टल रोग के लिगेचर-प्रेरित मॉडल को नियोजित किया जा सकता है, जो तेजी से प्रेरित और अपेक्षाकृत विश्वसनीय है। दुर्भाग्य से, लिगेचर-प्रेरित मेरिन पीरियोडोंटाइटिस प्रोटोकॉल के वेरिएंट को पीरियोडोंटियम के केंद्र क्षेत्रों में अलग-थलग कर दिया जाता है और स्थापित लिगेचर के समय से पहले आक्षेप के अधीन होता है। यह बाद के विश्लेषणों के लिए उपलब्ध ऊतकों की मात्रा को कम करता है और अध्ययन के लिए आवश्यक जानवरों की संख्या को बढ़ाता है । यह प्रोटोकॉल चूहों में मौखिक न्यूट्रोफिल को ठीक करने के लिए एक वैकल्पिक दृष्टिकोण के साथ मौखिक न्यूट्रोफिल को ठीक करने के लिए बेहतर प्रतिधारण और एक उपन्यास कुल्ला तकनीक के उपयोग के साथ विस्तारित मोलर लिगेचर रखने के लिए आवश्यक सटीक जोड़तोड़ का वर्णन करता है जो उपरोक्त को कम करता है तकनीकी चुनौतियां।

एक भोली के मौखिक कुल्ला नमूनों से प्रतिनिधि प्रवाह साइटोमेट्री डेटा(चित्रा 3ए)और सूजन(चित्रा 3बी)मूत्र मौखिक गुहा माध्यमिक लिगेचर-प्रेरित पीरियोगोंटाइटिस के लिए प?...

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Robust Ligature-Induced Model of Murine Periodontitis for the Evaluation of Oral Neutrophils

यह लेख कई मैक्सिलरी मोलर्स को शामिल करते हुए क्यूरीन पीरियोडोंटाइटिस के लिगेचर-प्रेरित मॉडल की स्थापना के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करता है, जिसके परिणामस्वरूप बाद के विश्लेषण के साथ-साथ कम पशु उपयोग के लिए शामिल गिंगिवल ऊतक और हड्डी के बड़े क्षेत्र होते हैं। मानव विषयों के अनुरूप तरीके से मौखिक न्यूट्रोफिल का आकलन करने की तकनीक का भी वर्णन किया गया है।

ओरल न्यूट्रोफिल्स के मूल्यांकन के लिए मोनी पेरिन पीरियोडोंटाइटिस का मजबूत लिगेचर-प्रेरित मॉडल

The main advantages of studying the pathophysiology of periodontal disease utilizing murine models are the reduced cost of animals, array of genetically ...

यहां वर्णित प्रोटोकॉल जांचकर्ताओं को मानव प्रतिभागियों के अनुरूप तरीके से पीरियोडोन्टल रोग के लिगेचर-प्रेरित पशु मॉडल के भीतर मौखिक न्यूट्रोफिल का अध्ययन करने की विधि के साथ प्रस्तुत करता है । इस तकनीक का मुख्य लाभ बाद के विश्लेषण के लिए उपलब्ध सूजन gingival ऊतकों की बढ़ी हुई मात्रा से प्रकाश डाला गया है, जो जानवरों के उपयोग को कम कर देता है। दांतों के चारों ओर से बायोफिल्म-लेपित लिगेचर को पुनः प्राप्त करने की हमारी क्षमता स्थानीयप्रेमी रोग के प्रभावी उपचार के अनुकरण के लिए अनुमति देती है।इस मॉडल का उपयोग सूजन ग्इंगिवल ऊतकों के बढ़े हुए क्षेत्रों के कारण, पशु मॉडल में पीरियोडोन्टाइटिस के प्रणालीगत प्रभावों के अध्ययन में लागू किया जा सकता है। माइक्रोसर्जिकल उपकरणों और विच्छेदन माइक्रोस्कोप के उपयोग के साथ परिचित, साथ ही जीवित पशु विषयों को संभालने से पहले सर्जन की समुद्री मील बांधने, भारी सलाह दी जाती है। कुशल लिगेचर प्लेसमेंट प्राप्त करने के लिए आवश्यक सीखने की अवस्था की लंबाई को कम करने में इस तकनीक का दृश्य प्रदर्शन महत्वपूर्ण है।प्रक्रिया का प्रदर्शन जेफ Chadwig, मेरी प्रयोगशाला से एक स्नातक छात्र होगा । एक गर्म सर्जिकल मंच पर माउस की स्थिति से शुरू करें। यह सुनिश्चित करने के बाद कि माउस को ठीक से एनेस्थेटाइज्ड किया गया है, इलास्टिक बैंड का उपयोग करके मैक्सिला को स्थिर करें और खुली स्थिति में मंडीबल करें।एक क्षैतिज स्थिति में मैक्सिला बनाए रखने के लिए एक कपास रोल के साथ गर्दन का सहारा लें और गर्मी के नुकसान को कम करने के लिए शरीर और पूंछ को कवर करें। मौखिक गुहा पर वांछित आवर्धन और प्रकाश व्यवस्था पर सर्जिकल माइक्रोस्कोप की स्थिति। किरच का उपयोग करने के लिए एक बाँझ ५० या छोटे लट रेशम सीवन M1 और M2 maxillary मोलर्स के आसपास gingival sulcus के भीतर स्थापित करने के लिए ।डेंटिशन के पापाल साइड पर सीवन की डिस्टल टेल रखें और एम 2 और एम 3 के संपर्क के बीच समीपस्थ सेगमेंट डालें। फिर, इसे M2 की बुक्कल सतह के चारों ओर लपेटें और इसे M1 और M2 के संपर्क के बीच डालें। सुनिश्चित करें कि सीवन के दोनों सिरों को कसकर खींचा जाता है ताकि इसे ग्इंगिवल सल्कस में ड्राइव किया जा सके। समोच्च की ऊंचाई से नीचे M1 के आसपास समीपस्थ सीवन खंड लपेटें और इसे M1 और M2 के संपर्क के बीच डालें। सभी सुस्त को दूर करने के लिए सीवन की समीपस्थ पूंछ को कसकर खींचें। एक सर्जन की गाँठ के साथ सीवन के सिरों को बांधें और पूंछ को यथासंभव ट्रिम करें।एम 1 और एम 2 के बीच गिंगिवल एम्ब्राश्योर में गांठ को मैक्सिलरी डेंटिशन के पैलेटल साइड पर रखें। यह महत्वपूर्ण है कि लिगेचर को सुरक्षित करने के लिए उपयोग की जाने वाली गाँठ सुरक्षित है और स्थिति में है जहां यह जानवर को परेशान नहीं करेगा या मैस्टिकेशन में हस्तक्षेप नहीं करेगा। लिगेचर स्थापना के बाद, शल्य चिकित्सा तंत्र से माउस को हटा दें और इसे गर्मी के दीपक के नीचे एक साफ पिंजरे में रखें, जिससे पूरी तरह से बरामद होने तक इसकी निगरानी करना सुनिश्चित हो जाए।प्रत्येक पशु विषय के बीच गर्म ग्लास मनका स्टरलाइजर में सर्जिकल उपकरणों को स्टरलाइज करें। व्यक्तिगत रूप से उपयुक्त पर्यावरण संवर्धन के साथ प्रत्येक माउस घर और सात से 11 दिनों के लिए एक तापमान और आर्द्रता नियंत्रित वातावरण में फ़िल्टर पानी और मैश मानक चाउ के लिए विज्ञापन libitum का उपयोग की अनुमति देते हैं । नमूने एकत्र करने के लिए तैयार होने पर, 10 सेकंड के लिए कैल्शियम और मैग्नीशियम के बिना 100 माइक्रोलीटर की नसबंदी के साथ मौखिक गुहा को कुल्ला करने के लिए एक पिपेट का उपयोग करें।कुल्ला दो बार दोहराएं, प्रत्येक जानवर के लिए एक ही 15 मिलीलीटर शंकु बाँझ टेस्ट ट्यूब में प्रत्येक कुल्ला रखने । एक 50 मिलीलीटर शंकु नली में एक 40 माइक्रोमीटर नायलॉन जाल फिल्टर के माध्यम से प्रत्येक 15 मिलीलीटर ट्यूब की सामग्री चलाएं, और फिल्ट्रेट को एक नए 15 मिलीलीटर टेस्ट ट्यूब में स्थानांतरित करें। नमूना निर्धारण की सुविधा के लिए 16% पैराफॉर्मलडिहाइड के 33.3 माइक्रोलीटर जोड़ें।भंवर नमूनों को तुरंत और उन्हें 15 मिनट के लिए बर्फ पर इनक्यूबेट। पैराफॉर्मलडिहाइड प्रोटोकॉल में नियोजित सबसे खतरनाक अभिकर्षक है और निर्माता द्वारा सलाह दिए गए अनुशंसित व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरणों के साथ संभाला जाना चाहिए। इनक्यूबेशन के बाद, पीबीएस के साथ 15 मिलीलीटर के लिए ट्यूब भरें तो यह 1000xg पर अपकेंद्रित्र और पांच मिनट के लिए चार डिग्री सेल्सियस ।सुपरनेट को एस्पिरेट करें, चार डिग्री सेल्सियस पर एफएसीएस बफर के एक मिलीलीटर में गोली को फिर से निलंबित करें और हीमोसाइटोमीटर या स्वचालित सेल काउंटर पर कोशिकाओं की गणना करें। अपकेंद्री दोहराएं और सुपरनेट को एस्पिरेट करें। फिर, 500, 000 से 1 मिलियन कोशिकाओं प्रति 50 माइक्रोलीटर FACS बफर की अंतिम एकाग्रता के लिए FACS बफर की एक उपयुक्त मात्रा में सेल गोली को फिर से निलंबित करें और कोशिकाओं को FACS ट्यूब में स्थानांतरित करें।नमूने के 50 माइक्रोलीटर में चूहे सीरम का एक माइक्रोलीटर और एंटी-माउस इग्ग एंटीबॉडी के दो माइक्रोलीटर जोड़ें। भंवर नमूना तुरंत और 20 मिनट के लिए बर्फ पर ब्लॉक। फिर, प्रत्येक नमूने में उपयुक्त एंटीबॉडी जोड़ें।भंवर और अंधेरे में 30 मिनट के लिए बर्फ पर इनक्यूबेट। इनक्यूबेशन के बाद, नमूनों को FACS बफर, भंवर संक्षेप में, और 1000xg और चार डिग्री सेल्सियस पर पांच मिनट के लिए अपकेंद्रित्र के एक मिलीलीटर के साथ धोएं । सुपरनेट को डंप करें और धीरे-धीरे एफएस ट्यूब के उद्घाटन को ब्लॉक करें।दो बार धो दोहराएं, फिर भंडारण के लिए FACS बफर के 250 माइक्रोलीटर में नमूनों को फिर से निलंबित करें। पैराफिन फिल्म के साथ ट्यूबों को कवर करें, उन्हें एल्यूमीनियम पन्नी में लपेटें, और विश्लेषण करने के लिए तैयार होने तक उन्हें चार डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें। फ्लो साइटोमेट्री का उपयोग एक भोले माउस से मौखिक कुल्ला से बरामद न्यूट्रोफिल का विश्लेषण करने के साथ-साथ एक मौखिक कुल्ला और लिगेचर-प्रेरित पीरियोडोंटाइटिस वाले माउस से लिगामेंटर बरामद करने के लिए किया गया था।अल्वेलर हड्डी के नुकसान का आकलन करने के लिए, अल्वियोलर हड्डी के स्तर को स्वस्थ और लिटेड चूहों के लिए अल्वियोलर बोन क्रेस्ट से सीमेंटोनेमल जंक्शन तक मापा गया था। फिर, माप मतभेदों की गणना की गई। जबकि यहां समीक्षा नहीं की गई, अनुसंधान प्रश्न के आधार पर एवेरियोटोनियम और अल्वेलर हड्डी का हिस्टोपैथोलोजिक, इम्यूनोहिस्टोकेमिकल और मॉर्फोमेट्रिक मूल्यांकन भी किया जा सकता है।इस मॉडल वर्तमान में मेरी प्रयोगशाला में इस्तेमाल किया जा रहा है प्रणालीगत स्वास्थ्य और रोग पर मौखिक सहज प्रतिरक्षा प्रणाली के प्रभाव का अध्ययन ।

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

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एक समकालीन वार्मिंग/एक Murine कवक सेप्सिस मॉडल में कुशल पूंछ नस इंजेक्शन के लिए निरोधक उपकरण

In rodent models, tail vein injections are important methods for intravenous administration of experimental agents. Tail vein injections typically involve ...

Induction of Periodontitis via a Combination of Ligature and Lipopolysaccharide Injection in a Rat Model

Induction of Periodontitis via a Combination of Ligature and Lipopolysaccharide Injection in a Rat Model

एक चूहे मॉडल में लिगेचर और लिपोपॉलेसेकेराइड इंजेक्शन के संयोजन के माध्यम से पेरिओरियोडोंटाइटिस का प्रेरण

Periodontitis (PD) is a highly prevalent, chronic immune-inflammatory disease of the periodontium, that results in a loss of gingival soft tissue, ...

A Mouse Ear Model for Allergic Contact Dermatitis Evaluation

एलर्जी संपर्क जिल्द की सूजन मूल्यांकन के लिए एक माउस कान मॉडल

Skin is the human body&#39;s first line of defense and one of the most exposed organs to environmental chemicals. Allergic contact dermatitis (ACD) is a ...