Name: use of atomic force microscopy to measure mechanical properties and turgor pressure of plant cells and plant tissues
Uploaded: 2019-07-15T15:00:00
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Gostaríamos de agradecer a equipe PLATIM por seu apoio técnico, bem como Arezki Boudaoud e membros da equipe biofísica no laboratório RDP para discussões úteis.

1. Measure de propriedades mecânicas da parede de pilha
Nota: O exemplo do gineceu tornando-se de Arabidopsis é apresentado.
<ol><li>Preparação das amostras biológicas
	<ol>
<li>Colete um botão de flor fechado no estágio 9 a 10 (aproximadamente 0,5 milímetros de comprimento) de acordo com a determinação publicada dos estágios para Arabidopsis4. um binocular, usando pinças finas, cuidadosamente abrir o botão para ...

<ol>
	<li>Du, F., Guan, C., Jiao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+leaf+morphogenesis.">Molecular mechanisms of leaf morphogenesis.</a> Molecular Plant. 11, 1117-1134 (2018).</li><li>Cosgrove, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+of+the+plant+cell+wall.">Growth of the plant cell wall.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 6, 850-861 (2005).</li><li>Dumais, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Can+mechanics+control+pattern+formation+in+plants?.">Can mechanics control pattern formation in plants?.</a> Current Opinion in Plant Biology. 10, 58-62 (2007).</li><li>Smyth, D. R., Bowman, J. L., Meyerowitz, E. 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D., Sim, A. J., Yin, F. C. 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A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Branched+pectic+galactan+in+phloem-sieve-element+cell+walls:+implications+for+cell+mechanics.">Branched pectic galactan in phloem-sieve-element cell walls: implications for cell mechanics.</a> Plant Physiology. 176, 1547-1558 (2018).</li><li>Farahi, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasticity,+elasticity,+and+adhesion+energy+of+plant+cell+walls:+nanometrology+of+lignin+loss+using+atomic+force+microscopy.">Plasticity, elasticity, and adhesion energy of plant cell walls: nanometrology of lignin loss using atomic force microscopy.</a> Scientific Reports. 7, 152 (2017).</li><li>Peaucelle, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pectin-induced+changes+in+cell+wall+mechanics+underlie+organ+initiation+in+Arabidopsis.">Pectin-induced changes in cell wall mechanics underlie organ initiation in Arabidopsis.</a> Current Biology. 21, 1720-1726 (2011).</li><li>Cosgrove, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diffuse+growth+of+plant+cell+walls.">Diffuse growth of plant cell walls.</a> Plant Physiology. 176, 16-27 (2018).</li><li>Sader, J. E., Larson, I., Mulvaney, P., White, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Method+for+the+calibration+of+atomic+force+microscope+cantilevers.">Method for the calibration of atomic force microscope cantilevers.</a> Review of Scientific Instruments. 66 (7), 3789-3798 (1995).</li><li>Sader, J. E., Chon, J. W. M., Mulvaney, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calibration+of+rectangular+atomic+force+microscope+cantilevers.">Calibration of rectangular atomic force microscope cantilevers.</a> Review of Scientific Instruments. 70 (10), 3967-3969 (1999).</li><li>Sikora, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+Normal+Force+Measurements+by+Means+of+Atomic+Force+Microscopy+Towards+the+Accurate+and+Easy+Spring+Constant+Determination.">Quantitative Normal Force Measurements by Means of Atomic Force Microscopy Towards the Accurate and Easy Spring Constant Determination.</a> Nanoscience and Nanometrology. 2 (1), 8-29 (2016).</li><li>Schillers, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardized+Nanomechanical+Atomic+Force+Microscopy+Procedure+(SNAP)+for+Measuring+Soft+and+Biological+Samples.">Standardized Nanomechanical Atomic Force Microscopy Procedure (SNAP) for Measuring Soft and Biological Samples.</a> Scientific Reports. 7 (1), (2017).</li></ol>

O surgimento de formas em plantas é determinado principalmente pela taxa coordenada e direção do crescimento durante o tempo e o espaço. Células vegetais são envoltos em uma parede celular rígida feita de uma matriz polissacarídico, que cola-los juntos. Em conseqüência, a expansão da pilha é controlada pelo equilíbrio entre a pressão do turgor que puxa na parede de pilha, e a rigidez da parede de pilha que resiste a esta pressão. A fim compreender os mecanismos que são subjacentes ao desenvolvimento, é i...

A microscopia da força atômica (AFM) pertence à família da microscopia da sonda da exploração (SPM), onde uma ponta com um raio de geralmente alguns nanômetros examina a superfície de uma amostra. A detecção de uma superfície não é alcançada através de métodos ópticos ou baseados em elétrons, mas através das forças de interação entre a ponta e a superfície da amostra. Assim, esta técnica não se limita à caracterização topográfica de uma superfície amostral (resolução 3D que pode descer para poucos nanômetros), mas também permite a medição de qualquer tipo de força de interação, como eletrostática, Van der Waals ou forças de contato. Além disso, a ponta pode ser usada para aplicar forças na superfície de uma amostra biológica e medir a deformação resultante, o chamado "recuo", a fim de determinar suas propriedades mecânicas (por exemplo, módulo de Young, propriedades viscoelásticas).
As propriedades mecânicas das paredes das células vegetais são essenciais para serem levadas em conta ao tentarem compreender os mecanismos subjacentes aos processos de desenvolvimento1,2,3. Certamente, estas propriedades são controladas firmemente durante o desenvolvimento, no detalhe desde que o amolecimento da parede celular é exigido para permitir que as pilhas cresçam. AFM pode ser usado para medir essas propriedades e estudar a maneira como eles mudam entre órgãos, tecidos ou estágios de desenvolvimento.
Neste artigo, nós descrevemos como nós usamos AFM para medir propriedades mecânicas da parede de pilha e a pressão do turgor. Estas duas aplicações são demonstradas em dois microscópios diferentes de AFM e são detalhadas aqui em seguida.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:700px;" width="700">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Growth medium</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td style="width:172px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">1000x vimatin stock solution</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td>used to make ACM, composition see Stanislas et al., 2017. Add to ACM after autoclaving, before pouring.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">1-N-Naphthylphthalamic acid (NPA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich/Merck</td>
			<td style="width:151px;">132-66-1</td>
			<td>add to Arabidopsis medium, 10 &#956;M. Add after autoclaving, before pouring.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">agar-agar</td>
			<td>Sigma-Aldrich/Merck</td>
			<td style="width:151px;">9002-18-0</td>
			<td>add to Arabidopsis medium, 1% w/v.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">agarose</td>
			<td style="width:155px;">Merck Millipore</td>
			<td style="width:151px;">9012-36-6</td>
			<td>used to make solid ACM, 0.8% w/v.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Arabidopsis medium</td>
			<td style="width:155px;">Duchefa Biochimie</td>
			<td style="width:151px;">DU0742.0025</td>
			<td>For in vitro arabidopsis culture, 11.82g/L.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Calcium nitrate tetrahydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich/Merck</td>
			<td style="width:151px;">13477-34-4</td>
			<td>add to Arabidopsis medium, 2mM.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">MURASHIGE &#38; SKOOG MEDIUM</td>
			<td style="width:155px;">Duchefa Biochimie</td>
			<td style="width:151px;">M0221.0025</td>
			<td>Basal salt mixture, used to make ACM, 2.2g/L.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">N6-benzyladenine (BAP)</td>
			<td>Sigma-Aldrich/Merck</td>
			<td style="width:151px;">1214-39-7</td>
			<td>used to make ACM, 555 nM. Add to ACM after autoclaving, before pouring.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">oryzalin</td>
			<td>Sigma-Aldrich/Merck</td>
			<td style="width:151px;">19044-88-3</td>
			<td>for oryzalin treatement, 10 &#956;g/mL.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">plant preservation mixture (PPM)</td>
			<td style="width:155px;">Plant Cell Technology</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td>used to make ACM, 0.1% v/v. Add to ACM after autoclaving, before pouring.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Potassium hydroxide</td>
			<td style="width:155px;">Duchefa Biochimie</td>
			<td style="width:151px;">1310-58-3</td>
			<td>used to make Arabidopsis medium and ACM, both pH 5.8.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">sucrose</td>
			<td style="width:155px;">Duchefa Biochimie</td>
			<td style="width:151px;">57-50-1</td>
			<td>used to make ACM, 1% w/v.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Tools for AFM</td>
			<td style="width:155px;"></td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">BioScope Catalyst BioAFM</td>
			<td style="width:155px;">Bruker</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td>The AFM used for turgor pressure measurement in this protocol.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Nanowizard III + CellHesion</td>
			<td style="width:155px;">JPK (Bruker)</td>
			<td style="width:151px;"></td>
			<td>The AFM used for measuring mechanical properties.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Patafix</td>
			<td style="width:155px;">UHU</td>
			<td style="width:151px;">D1620</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Reference elasitic structure</td>
			<td style="width:155px;">NanoIdea</td>
			<td style="width:151px;">2Z00026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Reprorubber-Thin Pour</td>
			<td style="width:155px;">Flexbar</td>
			<td style="width:151px;">16135</td>
			<td>biocompatible glue.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Spherical AFM tips</td>
			<td style="width:155px;">Nanoandmore</td>
			<td style="width:151px;">SD-SPHERE-NCH-S-10</td>
			<td>Tips used for measuring mechanical properties.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

use of atomic force microscopy to measure mechanical properties and turgor pressure of plant cells and plant tissues

Apresentamos aqui o uso da microscopia de força atômica para recuar os tecidos vegetais e recuperar suas propriedades mecânicas. Usando dois microscópios diferentes no modo de recuo, mostramos como medir um módulo elástico e usá-lo para avaliar as propriedades mecânicas da parede celular. Além disso, também explicamos como avaliar a pressão de turgor. As principais vantagens da microscopia de força atômica são que ele é não-invasivo, relativamente rápido (5 ~ 20 min), e que virtualmente qualquer tipo de tecido vegetal que é superficialmente plana pode ser analisado sem a necessidade de tratamento. A resolução pode ser muito boa, dependendo do tamanho da ponta e do número de medições por unidade de área. Uma limitação deste método é que dá somente o acesso direto à camada superficial da pilha.

Figura 1a e Figura 1b mostram uma captura de tela ilustrando o resultado das etapas 1.3.4 a 1.3.6 do protocolo, usado para localizar uma região de interesse onde adquirir o mapa de QI. Vale ressaltar que a região de interesse foi escolhida para não estar em uma superfície inclinada (ou seja, o mais plana possível). Na verdade, como observado por Routier et al.5, se o eixo de recuo não for perpendicul...

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Use of Atomic Force Microscopy to Measure Mechanical Properties and Turgor Pressure of Plant Cells and Plant Tissues

Aqui, nós apresentamos a microscopia de força atômica (AFM), operada como uma ferramenta do nano-e do micro-Indentation em pilhas e em tecidos. O instrumento permite a aquisição simultânea de topografia de superfície 3D da amostra e suas propriedades mecânicas, incluindo a parede celular módulo de Young, bem como a pressão de turgor.

Uso da microscopia de força atômica para medir propriedades mecânicas e pressão de turgor de células vegetais e tecidos vegetais

We present here the use of atomic force microscopy to indent plant tissues and recover its mechanical properties. Using two different microscopes in ...

As propriedades mecânicas das células vegetais são essenciais para serem levadas em conta ao tentar entender os mecanismos subjacentes ao desenvolvimento. A microscopia da força atômica pode ser usada para medir essas propriedades, e seguir a forma como elas mudam, entre órgãos, tecidos, todos os estágios de desenvolvimento. A principal vantagem dessa técnica, é que ela não é nenhuma invasiva, é relativamente rápida e não requer tratamento para que possa ser diretamente aplicada a amostras vivas.Para alguém que é novo neste procedimento, a seção cis da amostra é realmente crítica, por isso certifique-se de que você realmente tenha fixação mecânica adequada da amostra. A demonstração visual deste procedimento, é fundamental para entender melhor os meandros da fixação amostral, o controle de qualidade dos fosters e a configuração da medição. Demonstrando o procedimento estarão Simone Bovio, engenheira e Yuchen Long, pós-doutora no meu laboratório.Para começar, coloque um pedaço de fita dupla face no centro da placa de petri de cinco centímetros de diâmetro. Adicione uma amostra de genesium que foi isolada de um broto de flor à fita. Adicione rapidamente água ao prato até que a amostra esteja completamente coberta para evitar a desidratação.Em seguida, coloque a amostra em um estágio AFM e mova a cabeça para que ela esteja sobre a amostra. Depois de ter calibrado o cantilever, no software, certifique-se de que o sistema está no modo QI, e aproxime-se da amostra com uma força de ponto de ajuste de quinze nano newtons. Em seguida, defina um comprimento Z de quatro mícrons e coloque a área de varredura em oitenta por 80 mícrons ao quadrado com o número de pixels definido para quarenta por quarenta.Em seguida, vá para o painel de configurações de imagem avançada e defina o modo em velocidade constante. Além disso, o conjunto estende as velocidades de entrada para duzentos mícrons por segundo, e a taxa de amostra para 25 quilos de hertz. Uma vez definidos os parâmetros, mova a ponta para a região de interesse da amostra.Verifique se a área a ser escaneada está livre de detritos, localize uma região o mais plana possível e se engaje, então inicie a varredura e use a varredura rápida de baixa força para verificar se a amostra se move. Uma vez que uma área de interesse como foi localizada, selecione uma região que tem quarenta por quarenta e sessenta por sessenta micron ao quadrado, e aumente o número de pixels para dois pixels por mícndo. Em seguida, aumente o set point para quinhentos nano newtons, para obter um recuo de cem a duzentos nano metros.Diminua o comprimento Z para dois mícrons, e o estender insira velocidades de trato para cem mícrons por segundo, em seguida, aumente a taxa de amostra para cinquenta quilohertz, e comece a digitalizar a amostra. Quando terminar, salve a saída como uma imagem e um arquivo de dados. Abra o software de processamento de dados e carregue o arquivo de dados.Clique no use este mapa para o botão de processamento em lote, a fim de usar os mesmos parâmetros em todas as curvas do mapa, em seguida, vá para carregar o processo predefinido e selecione o ajuste hertz. Em seguida, vá para a operação da linha de base comutação, e defina subtrair para deslocamento mais inclinação, e X min entre quarenta e sessenta por cento. Na guia posição de ponta vertical, selecione em apertado suave, se preferir trabalhar em dados brutos.Para selecionar o modelo de ajuste adequado, vá até a guia de ajuste de elasticidade e selecione uma das opções com base na força de adesão esperada. Se não houver adesão ou fraca, use a curva de aproximação e prefira usar o modelo de isnader hertz. Em caso de adesão mais forte, use o modelo de Dergen Milia Dortoprov ou DMD e trabalhe em uma curva retardada.Agora, defina os parâmetros geométricos da ponta com base na forma nominal da ponta. A ponta usada neste experimento é uma ponta esférica, com o raio de 400 nano metros. Em seguida, defina a razão Poisson para 0,5 e selecione curvas de mudança.Adicione uma segunda rotina de elasticidade, clicando no ícone pela janela principal e repita as mesmas configurações do parâmetro. Por fim, especifique o recuo desejado em X min e, em seguida, mantenha e aplique a todos para iterar as etapas anteriores em todas as curvas do mapa. Salve os resultados para obter uma imagem em um arquivo ponto tsv.Para medir com rápidas mudanças de solução, monte uma amostra em uma placa de petri, segurando um pequeno pedaço de mastic adesivo. Sele rapidamente a lacuna entre o mastigal e a base amostral com cola biocompatível. Aguarde que a cola se solidifique e, em seguida, submerse a amostra em meio de cultura ápice líquido, contendo 0,1% de mistura de preservação vegetal.Depois de calibrar o sistema, abra o software de aquisição e vá primeiro para a janela do parâmetro de verificação. Lá, a mola é constante para a constante de mola fabricada do cantilever ou a determinada constante da mola. Em seguida, ajuste o raio de ponta para 400 nano metros, a razão de equilíbrio amostral para 0,5, a linha de amostra para cento e vinte e oito para garantir a aquisição rápida, a taxa de varredura para 0,2 hertz e o tamanho da varredura para um mícndo.Em seguida, vá para a janela da rampa e ajuste o tamanho da rampa para cinco mícrons, o limite de trigonometria ao máximo, e o número de amostras para quatro mil seiscentos e oito. Com todos os parâmetros definidos, aproxime-se cuidadosamente da amostra manualmente. Quando a sonda estiver relativamente perto da superfície da amostra, clique na aproximação.Após o contato, aumente gradualmente o tamanho da digitalização e modifique a taxa de digitalização, até que um equilíbrio desejado seja atingido sem danificar a amostra ou a ponta. Realoque a varredura se a região de medição não estiver como desejada. Quando estiver satisfeito, clique no botão, aponte e atire, para iniciar o ponto e atirar na janela.Especifique um diretório de salvamento e um nome de arquivo. Em seguida, clique em rampa na próxima varredura para iniciar a gravação. Quando a varredura estiver concluída, a interface de software será redirecionado para a janela de rampa.Clique na imagem digitalizada para especificar as posições para recuo. Escolha pelo menos três pontos de vista de recuo por célula perto do centro de frutas, configure-o para repetir o recuo três vezes por lado e, em seguida, clique em rampa e capture. No software de análise, abra o arquivo ponto MCA, isso mostra a posição de cada curva de força na imagem digitalizada.Em seguida, abra uma curva de força a ser analisada. Clique no botão de correção da linha de base e arraste as linhas de painel azul na curva de força, até estender a partida da linha de base de origem e estender a parada da linha de base de origem, ou em 0% e 80%, respectivamente. Em seguida, clique em executar.Clique em seguida, clique no botão do filtro do carro da caixa e clique em executar para suavizar a curva de força. Em seguida, clique no botão de recuo. Na janela de entrada, defina a curva ativa para estender, o quinto método para o modelo linearizado, o limite de ajuste de força máxima para 99%, o limite de ajuste de força min para 75% e o modelo de ajuste para rigidez.Analise as curvas de força em um lote. Para isso, clique no botão executar histórico, especifique o diretório do relatório e adicione outras curvas de força que requerem o mesmo tratamento. Quando terminar, clique em executar.Quando o valor de K estiver em lote montado, clique em histórico e vá para cinco recuos para retornar à janela de recuo. Uma vez lá, mude a força máxima para 10% e a força mínima encaixe o limite para um por cento. Em seguida, ajuste o modelo fit para Hertzian.Em seguida, abra o arquivo apropriado para exibir os diferentes canais digitalizados. Na janela do canal superior, clique no botão de seção. Isso permitirá a medição da curvatura da superfície da amostra necessária para a dedução da pressão de turgor.Em seguida, desenhe uma linha através do longo eixo de uma célula, mova os limites da linha de traço para as bordas celulares e regise o valor do raio. Finalmente siga no protocolo de texto, para calcular o módulo médio do jovem, a constante da mola, E, K, e a pressão turgor para cada célula. A imagem à esquerda é um mapa do módulo do jovem, obtido analisando todo o recuo até o ponto de partida de força definido pelo usuário enquanto a imagem à direita, mostra o resultado da análise dos primeiros cem nano metros de recuo.Aqui, os dois mapas parecem altamente semelhantes, porém, a variação da profundidade do recuo pode levar, em alguns casos, a destacar melhor as heterogeneties amostrais, o que pode ser útil para identificar a localização ou para fornecer informações sobre o comportamento das estruturas internas. Para cada ponto nesses mapas, há uma curva de força subjacente. A curva mostrada aqui, tem dois efeitos que vale a pena mencionar.Em primeiro lugar, se a parte de aproximação da curva de força terminar em quinhentos nano newtons. O movimento da ponta para baixo continua. O que significa que a força final aplicada pela ponta é maior do que o esperado.A segunda coisa a notar é a onda na curva de retração destacada pela elipse. Tal acenação pode ser um indicador de movimentação ou vibração da amostra sob a ação da ponta e mudar para um método de fixação diferente pode ser necessário. Utilizando o procedimento documentado neste artigo, todos os parâmetros-chave para uma dedução de pressão turgor, exceto para a espessura da parede celular podem ser recuperados de varreduras afm e recuos.A curva de força do recuo profundo na posição da cruz vermelha descreve o módulo da parede celular jovem e a rigidez aparente da amostra em diferentes regimes da curva. A fixação da amostra é crucial. Durante o processo de medição, preste atenção aos sinais de instabilidade da amostra.Escolha cuidadosamente uma região com superfície plana para garantir o recuo perpendicular. Após este procedimento, pode-se monitorar propriedades mecânicas ao longo do tempo e condições diferentes. Pode-se também sobrepor medidas mecânicas com imagens confocal para estudos correlativos.Essa técnica abre caminho para a articulação da biomecânica com o desenvolvimento da fisiologia e outros processos biológicos.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Geomagnetic Field (Gmf) and Plant Evolution: Investigating the Effects of Gmf Reversal on Arabidopsis thaliana Development and Gene Expression

Geomagnetic Field Gmf and Plant Evolution: Investigating the Effects of Gmf Reversal on Arabidopsis thaliana Development and Gene Expression

Geomagnética Field (Gmf) and Plant Evolution: investigação dos efeitos dos Gmf Reversão sobre<em&gt; Arabidopsis thaliana</em&gt; Desenvolvimento e Expressão Gênica

One of the most stimulating observations in plant evolution is a correlation between the occurrence of geomagnetic field (GMF) reversals (or excursions) ...

Biologia do Desenvolvimento

Epigenetic Regulation of Cardiac Differentiation of Embryonic Stem Cells and Tissues

Regulação epigenética da Cardiac diferenciação de células estaminais embrionárias e Tecidos

Specific gene transcription is a key biological process that underlies cell fate decision during embryonic development. The biological process is mediated ...

A Simple Chamber for Long-term Confocal Imaging of Root and Hypocotyl Development

Uma câmara simples para a imagem confocal a longo prazo do desenvolvimento da raiz e do hipocótilo

Several aspects of plant development, such as lateral root morphogenesis, occur on time spans of several days. To study underlying cellular and ...

Whole-mount Clearing and Staining of Arabidopsis Flower Organs and Siliques

Whole-mount Clearing and Staining of Arabidopsis Flower Organs and Siliques

Compensação de toda a montagem e coloração de Siliques e órgãos de flor de Arabidopsis

Due to its formidable tools for molecular genetic studies, Arabidopsis thaliana is one of the most prominent model species in plant biology and, ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

Análise computacional do Germline Caenorhabditis elegans , para estudar a distribuição de núcleos, as proteínas e o citoesqueleto

The Caenorhabditis elegans (C. elegans) germline is used to study several biologically important processes including stem cell development, apoptosis, and ...

Confocal Live Imaging of Shoot Apical Meristems from Different Plant Species

Confocal ao vivo de imagens de Shoot sub-apical de diferentes espécies de plantas

The shoot apical meristem (SAM) functions as a conserved stem cell reservoir and it generates almost all aboveground tissues during the postembryonic ...

Development of Targeting Induced Local Lesions IN Genomes (TILLING) Populations in Small Grain Crops by Ethyl Methanesulfonate Mutagenesis

Development of Targeting Induced Local Lesions IN Genomes TILLING Populations in Small Grain Crops by Ethyl Methanesulfonate Mutagenesis

Desenvolvimento do direcionamento de lesões locais induzidas em populações de genomas (lavoura) em pequenas culturas de grãos por metilo Methanesulfonate mutagenesis

Targeting Induced Local Lesions IN Genomes (TILLING) is a powerful reverse genetics tool that includes chemical mutagenesis and detection of sequence ...

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C (UV-C) Damage

Assessment of Oxidative Damage in the Primary Mouse Ocular Surface Cells/Stem Cells in Response to Ultraviolet-C UV-C Damage

Avaliação de danos oxidativos nas células de superfície ocular/células-tronco do rato primário em resposta ao dano ultravioleta-C (UV-C)

The ocular surface is subjected to regular wear and tear due to various environmental factors. Exposure to UV-C radiation constitutes an occupational ...

Translating Ribosome Affinity Purification (TRAP) to Investigate Arabidopsis thaliana Root Development at a Cell Type-Specific Scale

Translating Ribosome Affinity Purification TRAP to Investigate Arabidopsis thaliana Root Development at a Cell Type-Specific Scale

Traduzindo a Purificação da Afinidade ribossófica (TRAP) para investigar o desenvolvimento raiz arabidopsis thaliana em uma escala específica de tipo de célula

In this article, we give hands-on instructions to obtain translatome data from different Arabidopsis thaliana root cell types via the translating ribosome ...

Live Cell Imaging of Microtubule Cytoskeleton and Micromechanical Manipulation of the Arabidopsis Shoot Apical Meristem

Live Cell Imaging of Microtubule Cytoskeleton and Micromechanical Manipulation of the Arabidopsis Shoot Apical Meristem

Imagem celular ao vivo do citoesqueleto microtubulo e manipulação micromecânica da Arabidopsis Shoot Apical Meristem

Understanding cell and tissue level regulation of growth and morphogenesis has been at the forefront of biological research for many decades. Advances in ...