Name: a human peripheral blood mononuclear cell (pbmc) engrafted humanized xenograft model for translational immuno-oncology (i-o) research
Uploaded: 2019-08-15T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research at JoVE.com

ونشكر أعضاء مختبراتنا على المناقشات المفيدة. وقد تم دعم هذا العمل جزئيا من قبل برنامج بحوث الابتكار والزراعة في مجال علوم الطب الحيوي والحياة التابع للجنة العلوم والتكنولوجيا لبلدية بكين بموجب اتفاق المنحرقم . Z151100003915070 (مشروع "دراسة ما قبل السريرية على رواية الأورام المناعية المضادة للورم المخدرات BGB-A317")، وكان أيضا بدعم جزئي من قبل تمويل الشركة الداخلية للبحوث ما قبل السريرية.

وكانت جميع الإجراءات التي أجريت في الدراسات التي شملت مشاركين من البشر متفقة مع المعايير الأخلاقية لـ BeiGene و/أو لجنة البحوث الوطنية ومع إعلان هلسنكي لعام 1964 وتعديلاته اللاحقة أو المعايير الأخلاقية المماثلة. وتم الحصول على موافقة مستنيرة من جميع المشاركين المشاركين المشاركين في الدراسة. ?...

<ol>
	<li>Pardoll, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+blockade+of+immune+checkpoints+in+cancer+immunotherapy.">The blockade of immune checkpoints in cancer immunotherapy.</a> Nature Reviews Cancer. 12 (4), 252-264 (2012).</li><li>Postow, M. A., Callahan, M. K., Wolchok, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+Checkpoint+Blockade+in+Cancer+Therapy.">Immune Checkpoint Blockade in Cancer Therapy.</a> Journal of Clinical Oncology. 33 (17), 1974-1982 (2015).</li><li>Li, Z., Kang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+therapeutic+targets+in+metastatic+progression:+A+focus+on+breast+cancer.">Emerging therapeutic targets in metastatic progression: A focus on breast cancer.</a> Pharmacology &amp; Therapeutics. 161, 79-96 (2016).</li><li>Li, Q. X., Feuer, G., Ouyang, X., An, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+animal+modeling+for+immuno-oncology.">Experimental animal modeling for immuno-oncology.</a> Pharmacology &amp; Therapeutics. 173, 34-46 (2017).</li><li>Fisher, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+of+4-1BB+by+monoclonal+antibody+PF-05082566+enhances+T-cell+function+and+promotes+anti-tumor+activity.">Targeting of 4-1BB by monoclonal antibody PF-05082566 enhances T-cell function and promotes anti-tumor activity.</a> Cancer Immunology, Immunotherapy. 61 (10), 1721-1733 (2012).</li><li>McCormack, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bi-specific+TCR-anti+CD3+redirected+T-cell+targeting+of+NY-ESO-1-+and+LAGE-1-positive+tumors.">Bi-specific TCR-anti CD3 redirected T-cell targeting of NY-ESO-1- and LAGE-1-positive tumors.</a> Cancer Immunology, Immunotherapy. 62 (4), 773-785 (2013).</li><li>Rongvaux, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+hemato-lymphoid+system+mice:+current+use+and+future+potential+for+medicine.">Human hemato-lymphoid system mice: current use and future potential for medicine.</a> Annual Review of Immunology. 31, 635-674 (2013).</li><li>Matsumura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+CD5++B+cells+develop+predominantly+in+the+spleen+of+NOD/SCID/gammac(null)+(NOG)+mice+transplanted+either+with+human+umbilical+cord+blood,+bone+marrow,+or+mobilized+peripheral+blood+CD34++cells.">Functional CD5+ B cells develop predominantly in the spleen of NOD/SCID/gammac(null) (NOG) mice transplanted either with human umbilical cord blood, bone marrow, or mobilized peripheral blood CD34+ cells.</a> Experimental Hematology. 31 (9), 789-797 (2003).</li><li>Zhang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+binding+of+an+anti-PD-1+antibody+to+FcgammaRIota+has+a+profound+impact+on+its+biological+functions.">The binding of an anti-PD-1 antibody to FcgammaRIota has a profound impact on its biological functions.</a> Cancer Immunology, Immunotherapy. 67 (7), 1079-1090 (2018).</li><li>Gamelli, R. L., Ershler, W. B., Hacker, M. P., Foster, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+disulfiram+on+cyclophosphamide-mediated+myeloid+toxicity.">The effect of disulfiram on cyclophosphamide-mediated myeloid toxicity.</a> Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 16 (2), 153-155 (1986).</li><li>Dunay, I. R., Fuchs, A., Sibley, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+monocytes+but+not+neutrophils+are+necessary+to+control+infection+with+Toxoplasma+gondii+in+mice.">Inflammatory monocytes but not neutrophils are necessary to control infection with Toxoplasma gondii in mice.</a> Infection and Immunity. 78 (4), 1564-1570 (2010).</li><li>Ghasemlou, N., Chiu, I. M., Julien, J. P., Woolf, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD11b+Ly6G-+myeloid+cells+mediate+mechanical+inflammatory+pain+hypersensitivity.">CD11b+Ly6G- myeloid cells mediate mechanical inflammatory pain hypersensitivity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (49), 6808-6817 (2015).</li><li>Takao, K., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+responses+in+mouse+models+greatly+mimic+human+inflammatory+diseases.">Genomic responses in mouse models greatly mimic human inflammatory diseases.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (4), 1167-1172 (2015).</li><li>Payne, K. J., Crooks, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune-cell+lineage+commitment:+translation+from+mice+to+humans.">Immune-cell lineage commitment: translation from mice to humans.</a> Immunity. 26 (6), 674-677 (2007).</li><li>Mestas, J., Hughes, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+not+men:+differences+between+mouse+and+human+immunology.">Of mice and not men: differences between mouse and human immunology.</a> Journal of Immunology. 172 (5), 2731-2738 (2004).</li><li>von Herrath, M. G., Nepom, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lost+in+translation:+barriers+to+implementing+clinical+immunotherapeutics+for+autoimmunity.">Lost in translation: barriers to implementing clinical immunotherapeutics for autoimmunity.</a> Journal of Experimental Medicine. 202 (9), 1159-1162 (2005).</li><li>Mahdi, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+glow+of+HLA+typing+in+organ+transplantation.">A glow of HLA typing in organ transplantation.</a> Clinical and Translational Medicine. 2 (1), 6 (2013).</li><li>Shultz, L. D., Brehm, M. A., Garcia-Martinez, J. V., Greiner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+for+immune+system+investigation:+progress,+promise+and+challenges.">Humanized mice for immune system investigation: progress, promise and challenges.</a> Nature Reviews Immunolog. 12 (11), 786-798 (2012).</li><li>Brehm, M. A., Shultz, L. D., Luban, J., Greiner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overcoming+current+limitations+in+humanized+mouse+research.">Overcoming current limitations in humanized mouse research.</a> Journal of Infectious Diseases. 208, 125-130 (2013).</li><li>Walsh, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+Mouse+Models+of+Clinical+Disease.">Humanized Mouse Models of Clinical Disease.</a> Annual Review of Pathology. 12, 187-215 (2017).</li><li>Shultz, L. D., Ishikawa, F., Greiner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+in+translational+biomedical+research.">Humanized mice in translational biomedical research.</a> Nature Reviews Immunolog. 7 (2), 118-130 (2007).</li><li>Brehm, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD-scid+IL2rgnull+(NSG)+mice+deficient+in+murine+MHC+Class+I+and+Class+II+expression+support+engraftment+of+functional+human+T+cells+in+the+absence+of+acute+xenogeneic+GVHD+following+injection+of+PBMC.">NOD-scid IL2rgnull (NSG) mice deficient in murine MHC Class I and Class II expression support engraftment of functional human T cells in the absence of acute xenogeneic GVHD following injection of PBMC.</a> The Journal of Immunology. 200, 57 (2018).</li><li>King, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+Hu-PBL+model+for+the+study+of+human+islet+alloreactivity+based+on+NOD-scid+mice+bearing+a+targeted+mutation+in+the+IL-2+receptor+gamma+chain+gene.">A new Hu-PBL model for the study of human islet alloreactivity based on NOD-scid mice bearing a targeted mutation in the IL-2 receptor gamma chain gene.</a> Clinical Immunology. 126 (3), 303-314 (2008).</li><li>Ito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD/SCID/gamma(c)(null)+mouse:+an+excellent+recipient+mouse+model+for+engraftment+of+human+cells.">NOD/SCID/gamma(c)(null) mouse: an excellent recipient mouse model for engraftment of human cells.</a> Blood. 100 (9), 3175-3182 (2002).</li><li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+lymphoid+and+myeloid+cell+development+in+NOD/LtSz-scid+IL2R+gamma+null+mice+engrafted+with+mobilized+human+hemopoietic+stem+cells.">Human lymphoid and myeloid cell development in NOD/LtSz-scid IL2R gamma null mice engrafted with mobilized human hemopoietic stem cells.</a> Journal of Immunology. 174 (10), 6477-6489 (2005).</li><li>Sasaki, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+preclinical+humanized+mouse+model+to+evaluate+acute+toxicity+of+an+influenza+vaccine.">Development of a preclinical humanized mouse model to evaluate acute toxicity of an influenza vaccine.</a> Oncotarget. 9 (40), 25751-25763 (2018).</li><li>Tobin, L. M., Healy, M. E., English, K., Mahon, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+mesenchymal+stem+cells+suppress+donor+CD4(+)+T+cell+proliferation+and+reduce+pathology+in+a+humanized+mouse+model+of+acute+graft-versus-host+disease.">Human mesenchymal stem cells suppress donor CD4(+) T cell proliferation and reduce pathology in a humanized mouse model of acute graft-versus-host disease.</a> Clinical and Experimental Immunology. 172 (2), 333-348 (2013).</li></ol>

وقد تقدمت معرفتنا بتطور السرطان وتطوره بشكل كبير في السنوات الأخيرة، مع التركيز على فهم شامل لكل من الخلايا السرطانية وستروما المرتبطة بها. ويمكن أن يؤدي تسخير آليات المناعة المضيفة إلى إحداث أثر أكبر على الخلايا السرطانية، مما يمثل استراتيجية علاج واعدة. وقد استخدمت على نطاق واسع نماذج ...

الأورام المناعية (I-O) هو مجال سريع التوسع لعلاج السرطان. وقد بدأ الباحثون مؤخرا لتقدير الإمكانات العلاجية لتعديل وظائف الجهاز المناعي لمهاجمة الأورام. وقد أظهرت حواجز المناعة الحصار أنشطة مشجعة في مجموعة متنوعة من أنواع السرطان، بما فيذلك سرطان الجلد، سرطان الخلايا الكلوية، الرأس والرقبة، الرئة، المثانة وسرطان البروستاتا 1،2. على عكس العلاجات المستهدفة التي تقتل الخلايا السرطانية مباشرة، تقوي علاجات I-O الجهاز المناعي في الجسم لمهاجمة الأورام3.
وحتى الآن، تم وضع العديد من النماذج الحيوانية ذات الصلة I-O. وتشمل هذه: 1) خطوط الخلايا ورم الماوس أو homograft الورم في الفئران syngeneic; 2) الأورام العفوية المستمدة من الماوس المهندسة وراثيا (GEM) أو الحث المسرطن؛ 3) GEMs chimeric مع ضرب في هدف (أهداف) المخدرات البشرية في جهاز المناعة murine وظيفية؛ و4) الفئران مع المناعة البشرية المعاد تشكيلها المزروعة مع الخلايا السرطانية البشرية أو xenografts المستمدة من المريض (PDXs). كل من هذه النماذج لها مزايا واضحة، فضلا عن القيود، والتي تم وصفها واستعراضها على نطاق واسع في أماكن أخرى4.
إعادة تشكيل المناعة البشرية في الفئران التي تعاني من نقص المناعة قد تم تقديرها بشكل متزايد كنهج ذات الصلة سريريا للبحوث I-O الترجمة. وعادة ما يتحقق ذلك إما من خلال 1) تطعيم الخلايا المناعية للبالغين (على سبيل المثال، الخلايا أحادية النووية أحادية اللانووية في الدم المحيطي (PMBC))5أو6أو 2) تطعيم الخلايا الجذعية المكونة للدم (HSC) من، على سبيل المثال، دم الحبل السري أو الجنين الكبد7,8. هذه الفئران أنسنة يمكن أن تدعم نمو الأورام البشرية، مما يسمح بتقييم العلاجات I-O في سياق كل من المناعة البشرية والسرطانات البشرية. وعلى الرغم من المزايا، فإن تطبيقات الفئران الأنسنة في أبحاث I-O عادة ما تعوقها عدة شواغل، مثل وقت تطوير النموذج الطويل والتكلفة المرتفعة إلى حد كبير.
هنا، نقوم بوصف نموذج الإنسان القائم على PBMC التي يمكن تطبيقها على نطاق واسع لدراسات I-O الترجمة. هذا النموذج هو نسبيا الوقت وفعالة من حيث التكلفة مع استنساخ عالية في دراسات الفعالية. وقد تم استخدامه في المنزل لتقييم العديد من العلاجات I-O حاليا تحت التنمية قبل السريرية والسريرية. BGB-A317 (Tislelizumab)، وهوجسم مضاد مضاد PD-1 9، يستخدم كمثال لمناقشة تطوير النموذج، والتوصيف، والتطبيقات الممكنة لتحليل فعالية مكافحة الورم.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:955px;" width="955">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">PBMC separation /cell culture</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:193px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Histopaque-1077</td>
			<td style="width:211px;">Sigma</td>
			<td style="width:193px;">10771</td>
			<td style="width:143px;">Cell isolation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">DMEM</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:193px;">10-013-CVR</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">DPBS</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:193px;">21-031-CVR</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">FBS</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:193px;">35-076-CV</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Penicillin-Streptomycin, Liquid</td>
			<td style="width:211px;">Gibco</td>
			<td style="width:193px;">15140-163</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red</td>
			<td style="width:211px;">Gibco</td>
			<td style="width:193px;">25200-114</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">Matrigel</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:193px;">356237</td>
			<td style="width:143px;">CDX inoculation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">FACS analysis</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:193px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Deoxyribonuclease I from bovine pancreas</td>
			<td style="width:211px;">Sigma</td>
			<td style="width:193px;">DN25</td>
			<td style="width:143px;">Sample preparation</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Collagenase Type I</td>
			<td style="width:211px;">Sigma</td>
			<td style="width:193px;">C0130</td>
			<td style="width:143px;">Sample preparation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-mouse/human CD11b (M1/70) antibody</td>
			<td style="width:211px;">BioLegend</td>
			<td style="width:193px;">101206</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-mouse Ly-6C (HK1.4) antibody</td>
			<td style="width:211px;">BioLegend</td>
			<td style="width:193px;">128008</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-mouse Ly-6G (1A8) antibody</td>
			<td style="width:211px;">BioLegend</td>
			<td style="width:193px;">127614</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human CD8 (OKT8) antibody</td>
			<td style="width:211px;">Sungene Biotech</td>
			<td style="width:193px;">H10082-11H</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human CD279 (MIH4) antibody</td>
			<td style="width:211px;">eBioscience</td>
			<td style="width:193px;">12-9969-42</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human CD3 (HIT3a) antibody</td>
			<td style="width:211px;">4A Biotech</td>
			<td style="width:193px;">--</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">Guava easyCyte 8HT Benchtop Flow Cytometer</td>
			<td style="width:211px;">Millipore</td>
			<td style="width:193px;">0500-4008</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">Tumor/PDX implantation /dosing / measurement</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:193px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Cyclophosphamide</td>
			<td style="width:211px;">J&#38;K</td>
			<td style="width:193px;">Cat#419656, CAS#6055-19-2</td>
			<td style="width:143px;">In vivo efficacy</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Disulfiram</td>
			<td style="width:211px;">J&#38;K</td>
			<td style="width:193px;">Cat#591123, CAS#97-77-8</td>
			<td style="width:143px;">In vivo efficacy</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Syringe</td>
			<td style="width:211px;">BD</td>
			<td style="width:193px;">300841</td>
			<td style="width:143px;">CDX inoculation</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Hypodermic needles (14G)</td>
			<td style="width:211px;">Shanghai SA Mediciall &#38; Plastic Instruments Co., Ltd.</td>
			<td style="width:193px;">0.7*32 TW SB</td>
			<td style="width:143px;">PDX inoculation</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Vernier Caliper (MarCal)</td>
			<td style="width:211px;">Mahr</td>
			<td style="width:193px;">16ER</td>
			<td style="width:143px;">Tumor measurement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">IVC individual ventilated cages</td>
			<td style="width:211px;">Lingyunboji Ltd.</td>
			<td style="width:193px;">IVC-128</td>
			<td style="width:143px;">Animal facility</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">IHC</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:193px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Leica ASP200 Vacuum tissue processor</td>
			<td style="width:211px;">Leica</td>
			<td style="width:193px;">ASP200</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Leica RM2235 Manual Rotary Microtome for Routine Sectioning</td>
			<td style="width:211px;">Leica</td>
			<td style="width:193px;">RM2235</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Leica EG1150 H Heated Paraffin Embedding Module</td>
			<td style="width:211px;">Leica</td>
			<td style="width:193px;">EG1150 H</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Ariol-Clinical IHC and FISH Scanner</td>
			<td style="width:211px;">Leica</td>
			<td style="width:193px;">Ariol</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human CD8 (EP334) antibody</td>
			<td style="width:211px;">ZSGB-Bio</td>
			<td style="width:193px;">ZA-0508</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human PD1 [NAT105] antibody</td>
			<td style="width:211px;">Abcam</td>
			<td style="width:193px;">ab52587</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human PD-L1 (E1L3N) antibody</td>
			<td style="width:211px;">Cell Signaling Technology</td>
			<td style="width:193px;">13684S</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">Polink-2 plus Polymer HRP Detection System</td>
			<td style="width:211px;">ZSGB-Bio</td>
			<td style="width:193px;">PV-9001/9002</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a human peripheral blood mononuclear cell (pbmc) engrafted humanized xenograft model for translational immuno-oncology (i-o) research

اكتشاف وتطوير العلاج المناعي الأورام (I-O) في السنوات الأخيرة يمثل معلما في علاج السرطان. ومع ذلك، لا تزال تحديات العلاج قائمة. وتشكل النماذج الحيوانية القوية والمتصلة بالأمراض موارد حيوية لمواصلة البحث والتطوير قبل السريرية من أجل معالجة مجموعة من نقاط التفتيش المناعية الإضافية. هنا، نقوم بوصف خلية أحادية نوناأحادية للدم المحيطي البشري (PBMC) - نموذج xenograft ذو الطابع الإنساني. يستخدم BGB-A317 (Tislelizumab)، وهو جسم مضاد مضاد PD-1 في مرحلة متأخرة من التحقيق، كمثال لمناقشة إنشاء منصة، وتوصيف النموذج وتقييمات فعالية المخدرات. تدعم هذه الفئران الأنسنة نمو معظم الأورام البشرية التي تم اختبارها، مما يسمح بتقييم علاجات I-O في سياق كل من المناعة البشرية والسرطانات البشرية. وبمجرد إنشائها، يكون نموذجنا فعالاً من حيث الوقت والتكلفة نسبياً، وعادة ما يسفر عن نتائج قابلة للاستنساخ إلى حد كبير. نقترح أن البروتوكول المبين في هذه المادة يمكن أن تكون بمثابة مبدأ توجيهي عام لإنشاء نماذج الماوس المعاد تشكيلها مع PBMC الإنسان والأورام للبحوث I-O.

بعد الإجراءات المعروضة هنا، تم بنجاح إنشاء نموذج xenograft أنسنة المستندة إلى PBMC. وباختصار، تم تحديد آثار الاستئصال النخاعي CP في الفئران NOD / SCID عن طريق تحليل قياس التدفق الخلوي من العدلات والسكان monocyte بعد CP وDS العلاج (الشكل 1). تم تحديد 100 ملغم/كغم من الكل CP بالإضافة إلى 125 ملغم/كغ?...

Watch this Scientific Journal Video about A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research at JoVE.com

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research

نموذج الأوناوجراف ة الدم المحيطي البشري (PBMC) غير المشروع لأبحاث الأورام المناعية المترجمة (I-O)

نحن نصف خلية الدم الطرفية البشرية أحادية النووية (PBMC) - على أساس أنسنة نموذج الماوس xenograft لبحوث الأورام المناعية الترجمة. ويمكن أن يكون هذا البروتوكول بمثابة مبدأ توجيهي عام لوضع نماذج مماثلة وتوصيفها لتقييم العلاج بالمعالجة I-O.

The discovery and development of immuno-oncology (I-O) therapy in recent years represents a milestone in the treatment of cancer. However, treatment ...

يمكن أن يكون بروتوكولنا بمثابة دليل عام لإنشاء نماذج الماوس المعاد تشكيلها مع PBMC البشرية والأورام لأبحاث الأورام المناعية. توفر هذه الإجراءات نهجًا فعالًا من حيث التكلفة وقابلة للاستنساخ للغاية لإعادة تكوين المناعة البشرية جزئيًا في الفئران الحاملة للورم البشري من خلال الخلايا تحت الجلد وخلط PBMC البشري مع xenografts السرطان. إظهار الإجراءات معي سيكون شينشين كوي، يانخوان تشانغ، هويشن باي وشيالونغ يانغ، أرسلت لنا من قسم الصيدلة.لاستنفاد الخلايا النخاعية داخل peritoneally تسليم 100mg لكل كيلوغرام من السيكلوفوسفامي وتسليم شفويا 125mg لكل كيلوغرام من disulfiram إلى ستة إلى ثمانية أسابيع الفئران الإناث NOD / SCID مرة واحدة في اليوم لمدة يومين. بعد 24 ساعة من الجرعة الثانية من السيكلوفوسفامي و ديسولفيريم، resuspend خمس مرات 10 من ستة معزولة حديثا PBMC الإنسان و 2.5 مرات 10 من خلايا خط الخلايا السرطانية البشرية الست و 200 ميكرولترات من برنامج تلفزيوني بالإضافة إلى 50٪ metrogel لكل وحقن كامل حجم تحت الجلد في الجناح الأيمن لكل تجريبي. قياس وتسجيل حجم الورم الأساسي مرتين في الأسبوع لمدة أربعة إلى ستة أسابيع.عندما تصل الأورام إلى حجم متوسط من 200 إلى 500 ملليمتر مكعبة ، استخدم مقص optomic لحصاد الورم بأكمله من كل. PBMC المانحين خطوط الخلايا السرطانية ومريض مشتق xenografts التي تؤدي إلى نمو متوسط الورم مع ارتفاع نسبيا PD-1، PD-L1 و CD8 التعبير ينبغي أن تستخدم لتحليل لاحق. للتحليل المناعي الكيميائي للأنسجة الورم المحصودة، قم بإصلاح العينات و 24 إلى 72 ساعة قبل الجفاف وتضمين الأنسجة في البارافين.الحصول على ثلاثة أقسام ميكرومتر من الأنسجة جزءا لا يتجزأ على الشرائح المغلفة polylysine و deparaffinize العينات مع ثلاثة سبع دقائق الغمر إكسيلين. بعد العلاج الثالث ، هيدرات المقاطع مع ثلاث دقائق متدرج الكحول الغمر. ثم شطف الشريحة في الماء الأيونية ثلاث مرات وإزالة أي سائل الزائدة من الشرائح.لتنفيذ استرداد antigen، ضع الشرائح في حاوية وتغطية الشرائح بمخزن مؤقت sodiocitrate 10 ملليمولار. سخني الشرائح، الحاويات، في ميكروويف لمدة ثلاث دقائق قبل وضع الشرائح في حمام مائي 95 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. بعد التبريد إلى درجة حرارة الغرفة، شطف الشرائح ثلاث مرات في المياه غير المؤينة وpirate أي السائل الزائد من الشرائح.احتضان مع 0.3٪ بيروكسيد الهيدروجين لمدة 10 دقائق لمنع نشاط البيروكسيديز الذاتية تليها عرقلة مع 3٪ BSA وBBS لمدة ساعة واحدة. في نهاية حضانة بيروكسيد الهيدروجين، تسمية الشرائح مع الأجسام المضادة الأولية المناسبة في أربع درجات مئوية بين عشية وضحاها. في صباح اليوم التالي، علاج الشرائح مع بيروكسيديز الفجل مترافق الأجسام المضادة الثانوية لمدة ساعة واحدة في درجة حرارة الغرفة قبل تطبيق الركيزة قطرة على الشرائح حتى يتم ملاحظة مستوى مناسب من تلطيخ البني عن طريق المجهر الخفيفة.بعد ذلك، وصمة عار العينات مع الهماوكسيلين. بعد دقيقة واحدة، ووقف رد فعل مع الماء المقطر تليها الغمر خمس ثوان في 0.5٪ حمض الهيدروكلوريك الكحول وخمس ثوان في 0.5٪ ماء الأمونيا. ثم يجفف العينات مع ثلاثة تصاعدي ثلاثة ايثانول دقيقة وثلاثة، خمس دقائق الزج إكسيلين.لتقييم نشاط مضاد الديوم من دواء المرشح من الفائدة، وبدء العلاج في يوم تلقيح الخلايا وفقا للبروتوكول التجريبي المخطط ورصد حجم الورم الأساسي مرتين في الأسبوع لمدة أربعة إلى ستة أسابيع. بالنسبة للتحليل الديناميكي للورم تسللت الخلايا المناعية، فرم أنسجة الورم إلى قطع صغيرة وهضم الشظايا مع الكولاجيناز من نوع واحد وDNase I و RPMI-1640 المتوسطة بالإضافة إلى 5٪ FBS لمدة 30 دقيقة في 37 درجة مئوية. في نهاية عملية الهضم، تصفية الأنسجة المهضوضة من خلال مصفاة خلية 40 ميكرومتر للحصول على تعليق خلية واحدة وجمع الخلايا عن طريق الطرد المركزي.Resuspend بيليه في مرة واحدة 10 من الخلايا السابعة لكل ملليلتر من الجليد الباردة فاكس تركيز العازلة ونقل حجم متساو من الخلايا إلى العدد المناسب من الآبار في لوحة أسفل جولة 96 جيدا. جمع الخلايا عن طريق الطرد المركزي وإعادة تعليق الكريات في 20 ميكروغرام لكل ملليلتر من IGG الإنسان لمدة 30 دقيقة لمنع أي ملزمة غير محددة. ثم وصمة عار الخلايا مع الأجسام المضادة الأولية المناسبة لمدة 30 دقيقة في أربع درجات مئوية قبل تحليلها عن طريق تدفق الخلايا وفقا للبروتوكولات القياسية.كما هو موضح، 100 ملليغرام لكل كيلوغرام سيكلوفوسفاميميد و 125 ملليغرام لكل كيلوغرام الاستئصال النميلي disulfiram يؤدي إلى استنفاد كبير من العدلات والموحدات أربعة أيام بعد العلاج. بعد PBMC البشرية وزرع الورم، يمكن التحقق من وجود الخلايا المناعية البشرية تسلل داخل البيئة الدقيقة الورم بواسطة الكيمياء المناعية. ويمكن إجراء فحص في الجسم الحي من فريق من المتبرعين PBMC لتأكيد وجود تسرب عالي نسبيا من الخلايا المناعية في البيئة الدقيقة الورم في معدل نمو الورم مقبولة.يمكن أيضًا تقييم خطوط الخلايا السرطانية البشرية في xenografts المشتقة من أنواع مختلفة من السرطان لتقييم معدل نمو الورم وتسلل الخلايا المناعية. في هذه التجربة التمثيلية، أدى علاج PBMC والفئران المطعمة المطعّمة مع الأجسام المضادة PD1 الأنسانية إلى أنشطة مضادة للورم. ديسولفيريرام يقلل من السمية urotoxicity من cyclophosphamide, قد التركيبة ممارسة آثار العدلات أطول أمدا في الفئران.قد تحتاج الجرعات الدقيقة من السيكلوفوسفامي و disulfiram إلى أن تكون محددة مسبقا. وقد أنشئت سلالات أحدث من الفئران أكثر المناعة الأسهل إعادة تشكيل الحصانة البشرية وانخفاض تأثير GvHD xenogenic وهي في انتظار مزيد من التحقيقات مع بروتوكولنا الموثق. نموذجنا مفيد لتقييم الخلايا التى إشراك العلاجات المناعية السرطانية، خاصة عند العمل على جداول زمنية قصيرة أو لاختيار العوامل قبل الانتقال إلى نموذج مناعة متعدد خطوط أكثر تعقيدا.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell (PBMC) Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology (I-O) Research

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

نموذج الفأر من التعب المستحث بواسطة الطرفية تشعيع

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma

ورم انجرافتمينت في نموذج الفأر إكسينوجرافت من عباءة البشرية الخلية اللمفاوية

B lymphocytes are key players in immune cell circulation and they mainly home to and reside in lymphoid organs. While normal B cells only proliferate when ...

Development of a Human Preclinical Model of Osteoclastogenesis from Peripheral Blood Monocytes Co-cultured with Breast Cancer Cell Lines

وضع نموذج الإكلينيكية البشرية من أوستيوكلاستوجينيسيس من الدم المحيطية وحيدات مثقف يشترك مع خطوط خلايا سرطان الثدي

The crosstalk between tumor cells and bone cells in the bone microenvironment is crucial to understanding the mechanism of bone metastasis formation. We ...

Automated Multiplex Immunofluorescence Panel for Immuno-oncology Studies on Formalin-fixed Carcinoma Tissue Specimens

لوحة الفلورة تعدد الإرسال الآلي للدراسات المناعية-علم الأورام في عينات الأنسجة الكبدية الفورمالين--ثابت

Continued developments in immuno-oncology require an increased understanding of the mechanisms of cancer immunology. The immunoprofiling analysis of ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

نماذج Xenograft المتوارثية المستمدة من المريض لسرطان الخلايا البولية البشرية ونمو ورم سرطان القولون والمستقيم وورم الانبثاث العفوي

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

Patient-derived Heterogeneous Xenograft Model of Pancreatic Cancer Using Zebrafish Larvae as Hosts for Comparative Drug Assessment

نموذج Xenograft غير متجانس ة من سرطان البنكرياس المستمدة من المريض باستخدام يرقات سمك الحمار الوحشي كمضيفين للتقييم المقارن للأدوية

Patient-derived tumor xenograft (PDX) and cell-derived tumor xenograft (CDX) are important techniques for preclinical assessment, medication guidance and ...

A Melanoma Patient-Derived Xenograft Model

نموذج Xenograft مشتق من سرطان الجلد

Accumulating evidence suggests that molecular and biological properties differ in melanoma cells grown in traditional two-dimensional tissue culture ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

إنشاء نماذج Xenograft المستمدة من سرطان المعدة وخطوط الخلايا الأولية

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Isolating Human Peripheral Blood Mononuclear Cells and CD4+ T cells from S&#233;zary Syndrome Patients for Transcriptomic Profiling

Isolating Human Peripheral Blood Mononuclear Cells and CD4+ T cells from SÃƒÆ’Ã‚Â©zary Syndrome Patients for Transcriptomic Profiling

عزل خلايا الدم الطرفية البشرية أحادية النواة والخلايا التائية CD4+ من مرضى متلازمة سيزاري للتنميط النسخي

Cutaneous T-cell lymphomas (CTCL) are derived from the transformation and uncontrolled proliferation of mature skin-homing T cells, and mycosis fungoides ...

Circulating Tumor Cell Lines: an Innovative Tool for Fundamental and Translational Research

تعميم خطوط الخلايا السرطانية: أداة مبتكرة للبحوث الأساسية والترجمة

Metastasis is a leading cause of cancer death. Despite improvements in treatment strategies, metastatic cancer has a poor prognosis. We thus face an ...