Name: a human peripheral blood mononuclear cell (pbmc) engrafted humanized xenograft model for translational immuno-oncology (i-o) research
Uploaded: 2019-08-15T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research at JoVE.com

Vi takker medlemmerne af vores laboratorier for nyttige diskussioner. Dette arbejde blev delvist støttet af biomedicin og Life Science innovation og dyrkning forsknings program af Beijing Municipal Science and Technology Commission under tilskudsaftale nr. Z151100003915070 (projekt "præklinisk undersøgelse af et nyt immun onkologiske anti-tumor-lægemiddel BGB-A317"), og det blev også delvist understøttet af intern virksomhedsfinansiering til præklinisk forskning.

Alle de procedurer, der blev gennemført i undersøgelser med deltagelse af mennesker, var i overensstemmelse med de etiske standarder for BeiGene og/eller det nationale forskningsudvalg og med 1964 Helsingfors-erklæringen og dens senere ændringer eller tilsvarende etiske standarder. Der blev indhentet informeret samtykke fra alle individuelle deltagere i undersøgelsen. Alle de procedurer, der blev udført i dyreforsøg, blev godkendt af det interne revisionsudvalg i BeiGene. Denne protokol er blevet specifikt justere...

<ol>
	<li>Pardoll, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+blockade+of+immune+checkpoints+in+cancer+immunotherapy.">The blockade of immune checkpoints in cancer immunotherapy.</a> Nature Reviews Cancer. 12 (4), 252-264 (2012).</li><li>Postow, M. A., Callahan, M. K., Wolchok, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+Checkpoint+Blockade+in+Cancer+Therapy.">Immune Checkpoint Blockade in Cancer Therapy.</a> Journal of Clinical Oncology. 33 (17), 1974-1982 (2015).</li><li>Li, Z., Kang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+therapeutic+targets+in+metastatic+progression:+A+focus+on+breast+cancer.">Emerging therapeutic targets in metastatic progression: A focus on breast cancer.</a> Pharmacology &amp; Therapeutics. 161, 79-96 (2016).</li><li>Li, Q. X., Feuer, G., Ouyang, X., An, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+animal+modeling+for+immuno-oncology.">Experimental animal modeling for immuno-oncology.</a> Pharmacology &amp; Therapeutics. 173, 34-46 (2017).</li><li>Fisher, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+of+4-1BB+by+monoclonal+antibody+PF-05082566+enhances+T-cell+function+and+promotes+anti-tumor+activity.">Targeting of 4-1BB by monoclonal antibody PF-05082566 enhances T-cell function and promotes anti-tumor activity.</a> Cancer Immunology, Immunotherapy. 61 (10), 1721-1733 (2012).</li><li>McCormack, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bi-specific+TCR-anti+CD3+redirected+T-cell+targeting+of+NY-ESO-1-+and+LAGE-1-positive+tumors.">Bi-specific TCR-anti CD3 redirected T-cell targeting of NY-ESO-1- and LAGE-1-positive tumors.</a> Cancer Immunology, Immunotherapy. 62 (4), 773-785 (2013).</li><li>Rongvaux, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+hemato-lymphoid+system+mice:+current+use+and+future+potential+for+medicine.">Human hemato-lymphoid system mice: current use and future potential for medicine.</a> Annual Review of Immunology. 31, 635-674 (2013).</li><li>Matsumura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+CD5++B+cells+develop+predominantly+in+the+spleen+of+NOD/SCID/gammac(null)+(NOG)+mice+transplanted+either+with+human+umbilical+cord+blood,+bone+marrow,+or+mobilized+peripheral+blood+CD34++cells.">Functional CD5+ B cells develop predominantly in the spleen of NOD/SCID/gammac(null) (NOG) mice transplanted either with human umbilical cord blood, bone marrow, or mobilized peripheral blood CD34+ cells.</a> Experimental Hematology. 31 (9), 789-797 (2003).</li><li>Zhang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+binding+of+an+anti-PD-1+antibody+to+FcgammaRIota+has+a+profound+impact+on+its+biological+functions.">The binding of an anti-PD-1 antibody to FcgammaRIota has a profound impact on its biological functions.</a> Cancer Immunology, Immunotherapy. 67 (7), 1079-1090 (2018).</li><li>Gamelli, R. L., Ershler, W. B., Hacker, M. P., Foster, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+disulfiram+on+cyclophosphamide-mediated+myeloid+toxicity.">The effect of disulfiram on cyclophosphamide-mediated myeloid toxicity.</a> Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 16 (2), 153-155 (1986).</li><li>Dunay, I. R., Fuchs, A., Sibley, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+monocytes+but+not+neutrophils+are+necessary+to+control+infection+with+Toxoplasma+gondii+in+mice.">Inflammatory monocytes but not neutrophils are necessary to control infection with Toxoplasma gondii in mice.</a> Infection and Immunity. 78 (4), 1564-1570 (2010).</li><li>Ghasemlou, N., Chiu, I. M., Julien, J. P., Woolf, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD11b+Ly6G-+myeloid+cells+mediate+mechanical+inflammatory+pain+hypersensitivity.">CD11b+Ly6G- myeloid cells mediate mechanical inflammatory pain hypersensitivity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (49), 6808-6817 (2015).</li><li>Takao, K., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+responses+in+mouse+models+greatly+mimic+human+inflammatory+diseases.">Genomic responses in mouse models greatly mimic human inflammatory diseases.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (4), 1167-1172 (2015).</li><li>Payne, K. J., Crooks, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune-cell+lineage+commitment:+translation+from+mice+to+humans.">Immune-cell lineage commitment: translation from mice to humans.</a> Immunity. 26 (6), 674-677 (2007).</li><li>Mestas, J., Hughes, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+not+men:+differences+between+mouse+and+human+immunology.">Of mice and not men: differences between mouse and human immunology.</a> Journal of Immunology. 172 (5), 2731-2738 (2004).</li><li>von Herrath, M. G., Nepom, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lost+in+translation:+barriers+to+implementing+clinical+immunotherapeutics+for+autoimmunity.">Lost in translation: barriers to implementing clinical immunotherapeutics for autoimmunity.</a> Journal of Experimental Medicine. 202 (9), 1159-1162 (2005).</li><li>Mahdi, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+glow+of+HLA+typing+in+organ+transplantation.">A glow of HLA typing in organ transplantation.</a> Clinical and Translational Medicine. 2 (1), 6 (2013).</li><li>Shultz, L. D., Brehm, M. A., Garcia-Martinez, J. V., Greiner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+for+immune+system+investigation:+progress,+promise+and+challenges.">Humanized mice for immune system investigation: progress, promise and challenges.</a> Nature Reviews Immunolog. 12 (11), 786-798 (2012).</li><li>Brehm, M. A., Shultz, L. D., Luban, J., Greiner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overcoming+current+limitations+in+humanized+mouse+research.">Overcoming current limitations in humanized mouse research.</a> Journal of Infectious Diseases. 208, 125-130 (2013).</li><li>Walsh, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+Mouse+Models+of+Clinical+Disease.">Humanized Mouse Models of Clinical Disease.</a> Annual Review of Pathology. 12, 187-215 (2017).</li><li>Shultz, L. D., Ishikawa, F., Greiner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+in+translational+biomedical+research.">Humanized mice in translational biomedical research.</a> Nature Reviews Immunolog. 7 (2), 118-130 (2007).</li><li>Brehm, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD-scid+IL2rgnull+(NSG)+mice+deficient+in+murine+MHC+Class+I+and+Class+II+expression+support+engraftment+of+functional+human+T+cells+in+the+absence+of+acute+xenogeneic+GVHD+following+injection+of+PBMC.">NOD-scid IL2rgnull (NSG) mice deficient in murine MHC Class I and Class II expression support engraftment of functional human T cells in the absence of acute xenogeneic GVHD following injection of PBMC.</a> The Journal of Immunology. 200, 57 (2018).</li><li>King, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+Hu-PBL+model+for+the+study+of+human+islet+alloreactivity+based+on+NOD-scid+mice+bearing+a+targeted+mutation+in+the+IL-2+receptor+gamma+chain+gene.">A new Hu-PBL model for the study of human islet alloreactivity based on NOD-scid mice bearing a targeted mutation in the IL-2 receptor gamma chain gene.</a> Clinical Immunology. 126 (3), 303-314 (2008).</li><li>Ito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD/SCID/gamma(c)(null)+mouse:+an+excellent+recipient+mouse+model+for+engraftment+of+human+cells.">NOD/SCID/gamma(c)(null) mouse: an excellent recipient mouse model for engraftment of human cells.</a> Blood. 100 (9), 3175-3182 (2002).</li><li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+lymphoid+and+myeloid+cell+development+in+NOD/LtSz-scid+IL2R+gamma+null+mice+engrafted+with+mobilized+human+hemopoietic+stem+cells.">Human lymphoid and myeloid cell development in NOD/LtSz-scid IL2R gamma null mice engrafted with mobilized human hemopoietic stem cells.</a> Journal of Immunology. 174 (10), 6477-6489 (2005).</li><li>Sasaki, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+preclinical+humanized+mouse+model+to+evaluate+acute+toxicity+of+an+influenza+vaccine.">Development of a preclinical humanized mouse model to evaluate acute toxicity of an influenza vaccine.</a> Oncotarget. 9 (40), 25751-25763 (2018).</li><li>Tobin, L. M., Healy, M. E., English, K., Mahon, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+mesenchymal+stem+cells+suppress+donor+CD4(+)+T+cell+proliferation+and+reduce+pathology+in+a+humanized+mouse+model+of+acute+graft-versus-host+disease.">Human mesenchymal stem cells suppress donor CD4(+) T cell proliferation and reduce pathology in a humanized mouse model of acute graft-versus-host disease.</a> Clinical and Experimental Immunology. 172 (2), 333-348 (2013).</li></ol>

Vores viden om kræft udvikling og progression har udviklet sig markant i de seneste år, med fokus på en omfattende forståelse af både tumorcellerne og dets associerede stroma. Udnyttelse af vært immun mekanismer kan fremkalde en større virkning mod kræftceller, der repræsenterer en lovende behandlingsstrategi. Murine modeller med intakt mus immun systemer, såsom og og Gem modeller, har været almindeligt anvendt til at studere check point-medieret immunitet. Virkningsvurderinger ved hjælp af disse modeller afh...

Immuno-onkologi (I-O) er et hastigt ekspanderende felt af kræftbehandling. Forskere har for nylig begyndt at sætte pris på det terapeutiske potentiale af moduerende funktioner i immunsystemet til at angribe tumorer. Blokader af immun kontrolpunkt har vist opmuntrende aktiviteter i en række forskellige kræfttyper, herunder melanom, renal celle karcinom, hoved og hals, lunge, blære og prostatakræft1,2. I modsætning til målrettede terapier, der direkte dræber kræftceller, potenerer I-O-terapier kroppens immunsystem til at angribe tumorer3.
Til dato er der etableret talrige relevante I-O-dyremodeller. Disse omfatter: 1) muse tumorcellelinjer eller tumor Homograft i syngeneiske mus; 2) spontane tumorer afledt af genetisk manipuleret mus (perle) eller carcinogen-induktion; 3) chimeriske perler med Knock-in af human Drug Target (s) i en funktionel murine immunsystem; og 4) mus med rekonstitueret menneskelig immunitet transplanteret med humane kræftceller eller patient afledte xenografter (pdxs). Hver af disse modeller har indlysende fordele samt begrænsninger, som er blevet beskrevet og revideret udførligt andetsteds4.
Rekonstitution af menneskelig immunitet i immundefekt mus er blevet så meget mere værdsat som en klinisk relevant tilgang til translationel I-O-forskning. Dette opnås normalt gennem enten 1) engraftment af voksne immunceller (f. eks. perifert blod mononukleære celler (pmbc))5,6eller 2) engraftment af hæmatopoietiske stamceller (HSC) fra, for eksempel, navlestrengen blod eller føtal lever7,8. Disse humaniserede mus kunne støtte væksten af humane tumorer, hvilket gør det muligt at vurdere i-O-terapier i forbindelse med både menneskelig immunitet og menneskelige kræftformer. På trods af fordelene, blev anvendelser af humaniserede mus i i-O forskning normalt hæmmet af flere bekymringer, såsom lang modeludvikling tid og betydeligt høje omkostninger.
Her beskriver vi en human PBMC-baseret model, der kunne anvendes bredt til translationelle I-O-studier. Denne model er forholdsvis tids-og omkostningseffektiv med høj reproducerbarhed i effektundersøgelser. Det har været brugt in-House til evalueringer af flere I-O Therapeutics i øjeblikket under prækliniske og kliniske udvikling. BGB-A317 (Tislelizumab), et testpræparat humaniseret anti-PD-1 antistof9 , bruges som eksempel til at diskutere modeludvikling, karakterisering, og mulige anvendelser for anti-tumor effektanalyser.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:955px;" width="955">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">PBMC separation /cell culture</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:193px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Histopaque-1077</td>
			<td style="width:211px;">Sigma</td>
			<td style="width:193px;">10771</td>
			<td style="width:143px;">Cell isolation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">DMEM</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:193px;">10-013-CVR</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">DPBS</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:193px;">21-031-CVR</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">FBS</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:193px;">35-076-CV</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Penicillin-Streptomycin, Liquid</td>
			<td style="width:211px;">Gibco</td>
			<td style="width:193px;">15140-163</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red</td>
			<td style="width:211px;">Gibco</td>
			<td style="width:193px;">25200-114</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">Matrigel</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:193px;">356237</td>
			<td style="width:143px;">CDX inoculation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">FACS analysis</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:193px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Deoxyribonuclease I from bovine pancreas</td>
			<td style="width:211px;">Sigma</td>
			<td style="width:193px;">DN25</td>
			<td style="width:143px;">Sample preparation</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Collagenase Type I</td>
			<td style="width:211px;">Sigma</td>
			<td style="width:193px;">C0130</td>
			<td style="width:143px;">Sample preparation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-mouse/human CD11b (M1/70) antibody</td>
			<td style="width:211px;">BioLegend</td>
			<td style="width:193px;">101206</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-mouse Ly-6C (HK1.4) antibody</td>
			<td style="width:211px;">BioLegend</td>
			<td style="width:193px;">128008</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-mouse Ly-6G (1A8) antibody</td>
			<td style="width:211px;">BioLegend</td>
			<td style="width:193px;">127614</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human CD8 (OKT8) antibody</td>
			<td style="width:211px;">Sungene Biotech</td>
			<td style="width:193px;">H10082-11H</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human CD279 (MIH4) antibody</td>
			<td style="width:211px;">eBioscience</td>
			<td style="width:193px;">12-9969-42</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human CD3 (HIT3a) antibody</td>
			<td style="width:211px;">4A Biotech</td>
			<td style="width:193px;">--</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">Guava easyCyte 8HT Benchtop Flow Cytometer</td>
			<td style="width:211px;">Millipore</td>
			<td style="width:193px;">0500-4008</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">Tumor/PDX implantation /dosing / measurement</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:193px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Cyclophosphamide</td>
			<td style="width:211px;">J&#38;K</td>
			<td style="width:193px;">Cat#419656, CAS#6055-19-2</td>
			<td style="width:143px;">In vivo efficacy</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Disulfiram</td>
			<td style="width:211px;">J&#38;K</td>
			<td style="width:193px;">Cat#591123, CAS#97-77-8</td>
			<td style="width:143px;">In vivo efficacy</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Syringe</td>
			<td style="width:211px;">BD</td>
			<td style="width:193px;">300841</td>
			<td style="width:143px;">CDX inoculation</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Hypodermic needles (14G)</td>
			<td style="width:211px;">Shanghai SA Mediciall &#38; Plastic Instruments Co., Ltd.</td>
			<td style="width:193px;">0.7*32 TW SB</td>
			<td style="width:143px;">PDX inoculation</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Vernier Caliper (MarCal)</td>
			<td style="width:211px;">Mahr</td>
			<td style="width:193px;">16ER</td>
			<td style="width:143px;">Tumor measurement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">IVC individual ventilated cages</td>
			<td style="width:211px;">Lingyunboji Ltd.</td>
			<td style="width:193px;">IVC-128</td>
			<td style="width:143px;">Animal facility</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">IHC</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:193px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Leica ASP200 Vacuum tissue processor</td>
			<td style="width:211px;">Leica</td>
			<td style="width:193px;">ASP200</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Leica RM2235 Manual Rotary Microtome for Routine Sectioning</td>
			<td style="width:211px;">Leica</td>
			<td style="width:193px;">RM2235</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Leica EG1150 H Heated Paraffin Embedding Module</td>
			<td style="width:211px;">Leica</td>
			<td style="width:193px;">EG1150 H</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Ariol-Clinical IHC and FISH Scanner</td>
			<td style="width:211px;">Leica</td>
			<td style="width:193px;">Ariol</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human CD8 (EP334) antibody</td>
			<td style="width:211px;">ZSGB-Bio</td>
			<td style="width:193px;">ZA-0508</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human PD1 [NAT105] antibody</td>
			<td style="width:211px;">Abcam</td>
			<td style="width:193px;">ab52587</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human PD-L1 (E1L3N) antibody</td>
			<td style="width:211px;">Cell Signaling Technology</td>
			<td style="width:193px;">13684S</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">Polink-2 plus Polymer HRP Detection System</td>
			<td style="width:211px;">ZSGB-Bio</td>
			<td style="width:193px;">PV-9001/9002</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a human peripheral blood mononuclear cell (pbmc) engrafted humanized xenograft model for translational immuno-oncology (i-o) research

Opdagelsen og udviklingen af immuno-onkologi (i-O) terapi i de seneste år udgør en milepæl i behandlingen af kræft. Men, behandling udfordringer fortsætter. Robuste og sygdoms relevante dyremodeller er vitale ressourcer til fortsat præklinisk forskning og udvikling med henblik på at imødegå en række yderligere immun kontrolpunkter. Her beskriver vi et humant perifert blod mononukleære celle (PBMC)-baseret humaniseret xenograft model. BGB-A317 (Tislelizumab), et forsøgs humant anti-PD-1-antistof i den sene kliniske udvikling, bruges som et eksempel til at diskutere platforms opsætning, model karakterisering og vurderinger af lægemiddel effektivitet. Disse humaniserede mus støtter væksten af de fleste humane tumorer testet, hvilket gør det muligt at vurdere i-O-terapier i forbindelse med både menneskelig immunitet og menneskelige kræftformer. Når etableret, vores model er forholdsvis tid-og omkostningseffektiv, og normalt give meget reproducerbare resultater. Vi foreslår, at den protokol, der er skitseret i denne artikel kunne tjene som en generel retningslinje for etablering af musemodeller rekonstitueret med human PBMC og tumorer for I-O forskning.

Efter de procedurer, der blev præsenteret her, blev en PBMC-baseret humaniseret xenograft-model med succes etableret. Kort fortalt blev CP-myeloablation i NOD/SCID-mus bestemt ved flow cytometri-analyse af neutrofile-og monocytpopulationer efter CP-og DS-behandling (figur 1). 100 mg/kg CP plus 125 mg/kg DS blev bestemt som den optimale dosis og anvendes i senere undersøgelser, da regimet resulterer i maksimal nedbrydning af neutrofiler og monocytter uden at forårsage svær toksicitet for ...

Watch this Scientific Journal Video about A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research at JoVE.com

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research

Et humant perifert blod mononukleære celle (PBMC) Enpodet humaniseret xenograft model for translational immuno-onkologi (I-O) forskning

Vi beskriver et humant perifert blod mononukleære celle (PBMC)-baseret humaniseret xenograft musemodel for Translationel immuno-onkologiske forskning. Denne protokol kan tjene som en generel retningslinje for fastlæggelse og karakterisering af lignende modeller for I-O-terapi vurdering.

The discovery and development of immuno-oncology (I-O) therapy in recent years represents a milestone in the treatment of cancer. However, treatment ...

Vores protokol kan tjene som en generel retningslinje for oprettelse af musemodeller rekonstitueret med menneskelige PBMC og tumorer for immun-onkologi forskning. Disse procedurer giver en omkostningseffektiv og meget reproducerbar tilgang til delvis rekonstituerende menneskelig immunitet i menneskelige tumor-bærende mus gennem subkutan og blanding af menneskelige PBMC med kræft xenografts. Demonstrere procedurerne med mig vil være Xinxin Cui, Yanjuan Zhang, Huichen Bai og Xiaolong Yang, sendte os fra Farmakologi Afdeling.For myeloid celle udtynding intra peritoneally levere 100mg pr kg cyclophosphamid og mundtligt levere 125mg pr kg disulfiram til seks til otte uger gamle NOD / SCID kvindelige mus en gang om dagen i to dage. 24 timer efter den anden dosis cyclophosphamid og disulfiram, resuspendret fem gange 10 af de seks frisk isolerede menneskelige PBMC og 2,5 gange 10 af de seks menneskelige tumor celle linjeceller og 200 mikroliter pbs plus 50% metrogel per dyr og injicere hele volumen subkutant ind i højre flanke af hvert eksperimentelt dyr. Mål og registrere den primære tumor volumen to gange om ugen i fire til seks uger.Når tumorer nå et gennemsnitligt volumen på 200 til 500 millimeter kubik, bruge optomiske saks til at høste hele tumor fra hvert dyr. PBMC donorer tumor cellelinjer og patient afledte xenografts, der resulterer i en moderat tumorvækst med relativt høj PD-1, PD-L1 og CD8 udtryk bør anvendes til efterfølgende analyse. For immunhisemisk analyse af de høstede tumorvæv, fastsætte prøverne og formalin 24 til 72 timer før dehydrering og indlejring af væv i paraffin.Opnå tre mikrometersektioner af det indlejrede væv på polylysinbelagte objektglas og deparaffinize prøverne med tre syv minutters xylen nedsænkning. Efter den tredje behandling, fugte sektionerne med tre minutter gradueret alkohol nedsænkning. Skyl derefter diaset i deioniseret vand tre gange og fjern overskydende væske fra objektglassene.For at udføre antigenhentning skal du placere objektglassene i en beholder og dække objektglassene med en sodiocitratbuffer på 10 millimolar sodiocitrat. Varm dias, beholder, i en mikrobølgeovn i tre minutter, før du placerer dias i en 95 grader Celsius vandbad i 30 minutter. Efter afkøling til stuetemperatur skylles objektglassene tre gange i deioniseret vand og indsugning af overskydende væske fra objektglassene.Inkuberes med 0,3 % hydrogenperoxid i 10 minutter for at blokere endogen peroxidaseaktivitet efterfulgt af blokering med 3%BSA og PBS i en time. Ved afslutningen af hydrogenperoxid inkubationen, mærke dias med de relevante primære antistoffer ved fire grader Celsius natten over. Den næste morgen, behandle dias med peberrod peroxidase konjugeret sekundært antistof i en time ved stuetemperatur, før du anvender substrat dropwise på dias, indtil et passende niveau af brun farvning er observeret ved lys mikroskopi.Dernæst plette prøverne med hæmaxylin. Efter et minut stoppes reaktionen med destilleret vand efterfulgt af en fem sekunders nedsænkning i 0,5 % saltsyrealkohol og fem sekunder i 0,5 % ammoniakvand. Derefter dehydrere prøverne med tre stigende tre minutter ethanol og tre, fem minutter xylen nedsænkning.At vurdere antitumor aktivitet af en kandidat stof af interesse, indlede behandlingen på dagen for cellen vaccination i henhold til den planlagte eksperimentelle protokol og overvåge den primære tumor volumen to gange om ugen i fire til seks uger. For PharmaCODE dynamisk analyse af tumoren infiltreret immunceller, hakke tumorvæv i små stykker og fordøje fragmenter med kollagen type et og DNase I og RPMI-1640 medium plus 5% FBS i 30 minutter ved 37 grader Celsius. Ved afslutningen af fordøjelsen filtreres det fordøjede væv gennem en 40 mikrometercelles si for at opnå en enkelt cellesuspension og indsamle cellerne ved centrifugering.Opsplit pellet på en gange 10 af de syvende celler pr. milliliter iskold fax buffer koncentration og overføre et tilsvarende volumen af celler til et passende antal brønde i en 96-godt rund bundplade. Cellerne opsamls ved centrifugering og opstimering af pellets i 20 mikrogram pr. milliliter human igg i 30 minutter for at blokere enhver uspecifik binding. Derefter plette cellerne med de relevante primære antistoffer i 30 minutter ved fire grader Celsius før deres analyse af flow cytometri i henhold til standardprotokoller.Som påvist, 100 mg / kg cyclophosphamide og 125 milligram per kg disulfiram myeloablation resulterer i en betydelig udtynding af neutrofiler og monocytter fire dage efter behandling. Efter human PBMC og tumortransplantation, tilstedeværelsen af menneskelige immuncelle infiltrater kan verificeres i tumor mikromiljø ved immunohistochemistry. En in vivo screening af et panel af PBMC donorer kan udføres for at bekræfte tilstedeværelsen af en relativt høj immuncelleinfiltration i tumormikromiljø i en acceptabel tumor vækstrate.Human cancer cellelinjer i patient afledt xenografts af forskellige kræfttyper kan også evalueres for at vurdere tumorvækst og immuncelleinfiltration. I dette repræsentative eksperiment resulterede behandling af PBMC og podede humaniserede mus med humaniseret anti-PD1 antistof i signifikante antitumoraktiviteter. Disulfiram nedsætter urotoksicitet af cyclophosphamid, kombinationen kan udøve længerevarende neutropeni effekter hos mus.Det kan være nødvendigt at forudbestille det nøjagtige dosisregime for cyclophosphamid og disulfiram. Nyere stammer af mere immundefekte mus for lettere menneskelig immunitet rekonstitution og nedsat xenogen GvHD effekt er blevet etableret, og afventer yderligere undersøgelser med vores dokumenterede protokol. Vores model er nyttig til evaluering af T-celle engagerende kræft immun behandlinger, især når du arbejder på korte tidslinjer eller for at vælge agenter, før du flytter til en mere kompleks multilineage immunitet model.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell (PBMC) Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology (I-O) Research

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

En mus Model af træthed induceret af perifere Bestråling

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma

Tumor Engraftment i en Xenograft musemodel af menneskelige Mantle celle lymfom

B lymphocytes are key players in immune cell circulation and they mainly home to and reside in lymphoid organs. While normal B cells only proliferate when ...

Development of a Human Preclinical Model of Osteoclastogenesis from Peripheral Blood Monocytes Co-cultured with Breast Cancer Cell Lines

Udvikling af en menneskelig prækliniske Model af Osteoclastogenesis fra perifert blod monocytter Co kulturperler med bryst kræft cellelinjer

The crosstalk between tumor cells and bone cells in the bone microenvironment is crucial to understanding the mechanism of bone metastasis formation. We ...

Automated Multiplex Immunofluorescence Panel for Immuno-oncology Studies on Formalin-fixed Carcinoma Tissue Specimens

Automatiseret Multiplex immunofluorescens Panel for Immuno-onkologi undersøgelser af Formalin-fast karcinom væv prøver

Continued developments in immuno-oncology require an increased understanding of the mechanisms of cancer immunology. The immunoprofiling analysis of ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

Patient afledte Ortotopiske xenograft-modeller til humant Urothelialt celle karcinom og kolorektal cancer tumor vækst og spontan metastase

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

Patient-derived Heterogeneous Xenograft Model of Pancreatic Cancer Using Zebrafish Larvae as Hosts for Comparative Drug Assessment

Patient-afledt heterogene xenograft model af kræft i bugspytkirtlen ved hjælp af Zebrafish larver som værter for sammenlignende Lægemiddelvurdering

Patient-derived tumor xenograft (PDX) and cell-derived tumor xenograft (CDX) are important techniques for preclinical assessment, medication guidance and ...

A Melanoma Patient-Derived Xenograft Model

En melanom patient afledt xenograft-model

Accumulating evidence suggests that molecular and biological properties differ in melanoma cells grown in traditional two-dimensional tissue culture ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Etablering af gastrisk Cancer patient afledte xenograft-modeller og primære cellelinjer

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Isolating Human Peripheral Blood Mononuclear Cells and CD4+ T cells from S&#233;zary Syndrome Patients for Transcriptomic Profiling

Isolating Human Peripheral Blood Mononuclear Cells and CD4+ T cells from SÃƒÆ’Ã‚Â©zary Syndrome Patients for Transcriptomic Profiling

Isolering af humane perifere blodmononukleære celler og CD4 + T-celler fra Sézary syndrom patienter til transkriptomisk profilering

Cutaneous T-cell lymphomas (CTCL) are derived from the transformation and uncontrolled proliferation of mature skin-homing T cells, and mycosis fungoides ...

Circulating Tumor Cell Lines: an Innovative Tool for Fundamental and Translational Research

Cirkulerende tumorcellelinjer: et innovativt værktøj til grundlæggende og translationel forskning

Metastasis is a leading cause of cancer death. Despite improvements in treatment strategies, metastatic cancer has a poor prognosis. We thus face an ...