Name: a human peripheral blood mononuclear cell (pbmc) engrafted humanized xenograft model for translational immuno-oncology (i-o) research
Uploaded: 2019-08-15T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research at JoVE.com

Wir danken den Mitgliedern unserer Labore für die hilfreichen Diskussionen. Diese Arbeit wurde teilweise durch das Biomedical and Life Science Innovation and Cultivation Research Program der Beijing Municipal Science and Technology Commission im Rahmen des Grant Agreement No unterstützt. Z151100003915070 (Projekt "Präklinische Studie über ein neuartiges immunonkologisches Antitumormedikament BGB-A317" und wurde teilweise durch unternehmensinterne Mittel für die präklinische Forschung unterstützt.

Alle Verfahren, die in Studien mit menschlichen Teilnehmern durchgeführt wurden, entsprachen den ethischen Standards von BeiGene und/oder dem nationalen Forschungsausschuß sowie der Erklärung von Helsinki von 1964 und ihren späteren Änderungen oder vergleichbaren ethischen Standards. Von allen einzelnen Teilnehmern, die an der Studie teilnahmen, wurde die informierte Zustimmung eingeholt. Alle Verfahren, die in Studien mit Tieren durchgeführt wurden, wurden vom Internal Review Board bei BeiGene genehmigt. Dieses Pr...

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D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+lymphoid+and+myeloid+cell+development+in+NOD/LtSz-scid+IL2R+gamma+null+mice+engrafted+with+mobilized+human+hemopoietic+stem+cells.">Human lymphoid and myeloid cell development in NOD/LtSz-scid IL2R gamma null mice engrafted with mobilized human hemopoietic stem cells.</a> Journal of Immunology. 174 (10), 6477-6489 (2005).</li><li>Sasaki, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+preclinical+humanized+mouse+model+to+evaluate+acute+toxicity+of+an+influenza+vaccine.">Development of a preclinical humanized mouse model to evaluate acute toxicity of an influenza vaccine.</a> Oncotarget. 9 (40), 25751-25763 (2018).</li><li>Tobin, L. M., Healy, M. E., English, K., Mahon, B. 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Unser Wissen über Krebsentwicklung und -progression hat sich in den letzten Jahren deutlich weiterentwickelt, wobei der Schwerpunkt auf einem umfassenden Verständnis sowohl der Tumorzellen als auch der damit verbundenen Stroma liegt. Die Nutzung der Wirtsimmunmechanismen könnte eine größere Wirkung gegen Krebszellen hervorrufen, was eine vielversprechende Behandlungsstrategie darstellt. Murine Modelle mit intakten Maus-Immunsystem, wie syngene und GEM-Modelle, wurden weit verbreitet verwendet, um Checkpoint-vermitte...

Die Immunonkologie (I-O) ist ein schnell wachsendes Feld der Krebsbehandlung. Forscher haben vor kurzem begonnen, das therapeutische Potenzial der modulationsfähigen Funktionen des Immunsystems zu schätzen, um Tumore anzugreifen. Immun-Checkpoint-Blockaden haben ermutigende Aktivitäten bei einer Vielzahl von Krebsarten gezeigt, einschließlich Melanom, Nierenzellkarzinom, Kopf und Hals, Lunge, Blase und Prostatakrebs1,2. Im Gegensatz zu gezielten Therapien, die Krebszellen direkt abtöten, potenzieren I-O-Therapien das Immunsystem des Körpers, um Tumore anzugreifen3.
Bis heute wurden zahlreiche relevante I-O-Tiermodelle etabliert. Dazu gehören: 1) Maustumorzelllinien oder Tumorhomograft bei syngenischen Mäusen; 2) spontane Tumoren, die aus gentechnisch veränderter Maus (GEM) oder karzinogener Induktion stammen; 3) chimäre GEMs mit dem Knock-in von humanen Drogenzielen in einem funktionellen murinen Immunsystem; und 4) Mäuse mit rekonstituierter menschlicher Immunität, transplantiert mit menschlichen Krebszellen oder vom Patienten abgeleiteten Xenografts (PDXs). Jedes dieser Modelle hat offensichtliche Vorteile sowie Einschränkungen, die an anderer Stelle ausführlich beschrieben und überprüft wurden4.
Die Rekonstitution der menschlichen Immunität bei immundefizienten Mäusen wurde zunehmend als klinisch relevanter Ansatz für translationale I-O-Forschung geschätzt. Dies wird in der Regel entweder durch 1) Transplantation von adulten Immunzellen (z. B. periphere mononukleäre Blutzellen (PMBC))5,6oder 2) Transplantation hämatopoetischer Stammzellen (HSC) aus z. B. Nabelschnurblut oder fetalem Leber7,8. Diese humanisierten Mäuse könnten das Wachstum menschlicher Tumoren unterstützen und so die Beurteilung von I-O-Therapien im Kontext sowohl der menschlichen Immunität als auch menschlicher Krebsarten ermöglichen. Trotz der Vorteile wurden Anwendungen von humanisierten Mäusen in der I-O-Forschung in der Regel durch mehrere Bedenken behindert, wie lange Modellentwicklungszeit und erheblich hohe Kosten.
Hier beschreiben wir ein menschliches PBMC-basiertes Modell, das für translationale I-O-Studien weit verbreitet sein könnte. Dieses Modell ist vergleichsweise zeit- und kostengünstig mit hoher Reproduzierbarkeit in Wirksamkeitsstudien. Es wurde intern für die Evaluierung mehrerer I-O-Therapeutika verwendet, die sich derzeit in der präklinischen und klinischen Entwicklung befinden. BGB-A317 (Tislelizumab), ein humanisierter Anti-PD-1-Antikörper9 , wird als Beispiel verwendet, um Modellentwicklung, Charakterisierung und mögliche Anwendungen für Anti-Tumor-Wirksamkeitsanalysen zu diskutieren.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:955px;" width="955">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">PBMC separation /cell culture</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:193px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Histopaque-1077</td>
			<td style="width:211px;">Sigma</td>
			<td style="width:193px;">10771</td>
			<td style="width:143px;">Cell isolation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">DMEM</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:193px;">10-013-CVR</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">DPBS</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:193px;">21-031-CVR</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">FBS</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:193px;">35-076-CV</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Penicillin-Streptomycin, Liquid</td>
			<td style="width:211px;">Gibco</td>
			<td style="width:193px;">15140-163</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red</td>
			<td style="width:211px;">Gibco</td>
			<td style="width:193px;">25200-114</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">Matrigel</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:193px;">356237</td>
			<td style="width:143px;">CDX inoculation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">FACS analysis</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:193px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Deoxyribonuclease I from bovine pancreas</td>
			<td style="width:211px;">Sigma</td>
			<td style="width:193px;">DN25</td>
			<td style="width:143px;">Sample preparation</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Collagenase Type I</td>
			<td style="width:211px;">Sigma</td>
			<td style="width:193px;">C0130</td>
			<td style="width:143px;">Sample preparation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-mouse/human CD11b (M1/70) antibody</td>
			<td style="width:211px;">BioLegend</td>
			<td style="width:193px;">101206</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-mouse Ly-6C (HK1.4) antibody</td>
			<td style="width:211px;">BioLegend</td>
			<td style="width:193px;">128008</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-mouse Ly-6G (1A8) antibody</td>
			<td style="width:211px;">BioLegend</td>
			<td style="width:193px;">127614</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human CD8 (OKT8) antibody</td>
			<td style="width:211px;">Sungene Biotech</td>
			<td style="width:193px;">H10082-11H</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human CD279 (MIH4) antibody</td>
			<td style="width:211px;">eBioscience</td>
			<td style="width:193px;">12-9969-42</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human CD3 (HIT3a) antibody</td>
			<td style="width:211px;">4A Biotech</td>
			<td style="width:193px;">--</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">Guava easyCyte 8HT Benchtop Flow Cytometer</td>
			<td style="width:211px;">Millipore</td>
			<td style="width:193px;">0500-4008</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">Tumor/PDX implantation /dosing / measurement</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:193px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Cyclophosphamide</td>
			<td style="width:211px;">J&#38;K</td>
			<td style="width:193px;">Cat#419656, CAS#6055-19-2</td>
			<td style="width:143px;">In vivo efficacy</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Disulfiram</td>
			<td style="width:211px;">J&#38;K</td>
			<td style="width:193px;">Cat#591123, CAS#97-77-8</td>
			<td style="width:143px;">In vivo efficacy</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Syringe</td>
			<td style="width:211px;">BD</td>
			<td style="width:193px;">300841</td>
			<td style="width:143px;">CDX inoculation</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Hypodermic needles (14G)</td>
			<td style="width:211px;">Shanghai SA Mediciall &#38; Plastic Instruments Co., Ltd.</td>
			<td style="width:193px;">0.7*32 TW SB</td>
			<td style="width:143px;">PDX inoculation</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Vernier Caliper (MarCal)</td>
			<td style="width:211px;">Mahr</td>
			<td style="width:193px;">16ER</td>
			<td style="width:143px;">Tumor measurement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">IVC individual ventilated cages</td>
			<td style="width:211px;">Lingyunboji Ltd.</td>
			<td style="width:193px;">IVC-128</td>
			<td style="width:143px;">Animal facility</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">IHC</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:193px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Leica ASP200 Vacuum tissue processor</td>
			<td style="width:211px;">Leica</td>
			<td style="width:193px;">ASP200</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Leica RM2235 Manual Rotary Microtome for Routine Sectioning</td>
			<td style="width:211px;">Leica</td>
			<td style="width:193px;">RM2235</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Leica EG1150 H Heated Paraffin Embedding Module</td>
			<td style="width:211px;">Leica</td>
			<td style="width:193px;">EG1150 H</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Ariol-Clinical IHC and FISH Scanner</td>
			<td style="width:211px;">Leica</td>
			<td style="width:193px;">Ariol</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human CD8 (EP334) antibody</td>
			<td style="width:211px;">ZSGB-Bio</td>
			<td style="width:193px;">ZA-0508</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human PD1 [NAT105] antibody</td>
			<td style="width:211px;">Abcam</td>
			<td style="width:193px;">ab52587</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human PD-L1 (E1L3N) antibody</td>
			<td style="width:211px;">Cell Signaling Technology</td>
			<td style="width:193px;">13684S</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">Polink-2 plus Polymer HRP Detection System</td>
			<td style="width:211px;">ZSGB-Bio</td>
			<td style="width:193px;">PV-9001/9002</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a human peripheral blood mononuclear cell (pbmc) engrafted humanized xenograft model for translational immuno-oncology (i-o) research

Die Entdeckung und Entwicklung der Immunonkologie (I-O) in den letzten Jahren stellt einen Meilenstein in der Krebsbehandlung dar. Die Behandlungsherausforderungen bestehen jedoch nach wie vor. Robuste und krankheitsrelevante Tiermodelle sind wichtige Ressourcen für die weitere präklinische Forschung und Entwicklung, um eine Reihe zusätzlicher Immun-Checkpoints anzugehen. Hier beschreiben wir eine menschliche periphere mononukleäre Blutzelle (PBMC) – basierend auf humanisiertem Xenograft-Modell. BGB-A317 (Tislelizumab), ein humanisierter Anti-PD-1-Antikörper in der späten klinischen Entwicklung, wird als Beispiel verwendet, um Plattform-Setup, Modellcharakterisierung und Bewertungen der Arzneimittelwirksamkeit zu diskutieren. Diese humanisierten Mäuse unterstützen das Wachstum der meisten getesteten menschlichen Tumoren und ermöglichen so die Beurteilung von I-O-Therapien im Kontext sowohl der menschlichen Immunität als auch menschlicher Krebsarten. Einmal etabliert, ist unser Modell vergleichsweise zeit- und kostengünstig und liefert in der Regel sehr reproduzierbare Ergebnisse. Wir schlagen vor, dass das in diesem Artikel beschriebene Protokoll als allgemeine Richtlinie für die Erstellung von Mausmodellen dienen könnte, die mit humanem PBMC und Tumoren für die I-O-Forschung rekonstituiert wurden.

Nach den hier vorgestellten Verfahren wurde erfolgreich ein PBMC-basiertes humanisiertes Xenograft-Modell etabliert. Kurz gesagt, die CP-Myeloablationseffekte bei NOD/SCID-Mäusen wurden durch die Durchflusszytometrieanalyse von Neutrophilen- und Monozytenpopulationen nach der CP- und DS-Behandlung bestimmt (Abbildung 1). 100 mg/kg CP plus 125 mg/kg DS wurde als optimale Dosis bestimmt und in späteren Studien verwendet, da das Regime zu einer maximalen Erschöpfung von Neutrophilen und Mono...

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A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell (PBMC) Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology (I-O) Research

Wir beschreiben eine menschliche periphere Mononuklezelle (PBMC) – basierendes humanisiertes Xenograft-Mausmodell für translationale Immunonkologieforschung. Dieses Protokoll könnte als allgemeine Leitlinie für die Erstellung und Charakterisierung ähnlicher Modelle für die Bewertung von I-O-Therapien dienen.

The discovery and development of immuno-oncology (I-O) therapy in recent years represents a milestone in the treatment of cancer. However, treatment ...

Unser Protokoll kann als allgemeine Richtlinie für die Erstellung von Mausmodellen dienen, die mit humanem PBMC und Tumoren für die Immunonkologieforschung rekonstituiert wurden. Diese Verfahren bieten einen kostengünstigen und hochreproduzierbaren Ansatz zur teilweisen Wiederherstellung der menschlichen Immunität bei tumortragenden Mäusen durch subkutane und Vermischung von humanem PBMC mit Krebs-Xenografts. Mit mir werden Xinxin Cui, Yanjuan Zhang, Huichen Bai und Xiaolong Yang die Verfahren demonstrieren, die uns von der Pharmakologie-Abteilung geschickt haben.Für myeloische Zellerschöpfung intra peritoneally liefern 100mg pro Kilogramm Cyclophosphamid und oral liefern 125mg pro Kilogramm Disulfiram zu sechs bis acht Wochen alten NOD / SCID weiblichen Mäusen einmal täglich für zwei Tage. 24 Stunden nach der zweiten Dosis von Cyclophosphamid und Disulfiram fünfmal 10 der sechs frisch isolierten menschlichen PBMC und 2,5 mal 10 der sechs menschlichen Tumorzelllinienzellen und 200 Mikroliter PBS plus 50% Metrogel pro Tier resuspendieren und das gesamte Volumen subkutan in die rechte Flanke jedes Versuchstiers injizieren. Messen und erfassen Sie das primäre Tumorvolumen zwei Mal pro Woche für vier bis sechs Wochen.Wenn die Tumoren ein durchschnittliches Volumen von 200 bis 500 Millimetergewürfelt erreichen, verwenden Sie optomimischschere, um ganzen Tumor von jedem Tier zu ernten. PBMC-Spender Tumorzelllinien und patientenabgeleitete Xenografts, die zu einem moderaten Tumorwachstum mit relativ hoher PD-1-, PD-L1- und CD8-Expression führen, sollten für die nachfolgende Analyse verwendet werden. Für die immunhistochemische Analyse des geernteten Tumorgewebes, fixieren Sie die Proben und Formalin 24 bis 72 Stunden vor der Dehydrierung und Einbettung des Gewebes in Paraffin.Erhalten Sie drei Mikrometerabschnitte des eingebetteten Gewebes auf polylysinbeschichteten Dias und deparaffinisieren Sie die Proben mit drei siebenminütigen Xylol-Tauchionen. Nach der dritten Behandlung hydratisieren Sie die Abschnitte mit drei minütigen abgestuften Alkoholeintauchen. Dann spülen Sie die Rutsche in entionisiertem Wasser dreimal und entfernen Sie überschüssige Flüssigkeit aus den Rutschen.Um den Antigenabruf durchzuführen, legen Sie die Dias in einen Behälter und decken Sie die Dias mit einem 10 Millimolar-Sodiocitratpuffer ab. Erhitzen Sie die Rutschen, Behälter, in einer Mikrowelle für drei Minuten, bevor Sie die Dias in einem 95 Grad Celsius Wasserbad für 30 Minuten. Nach dem Abkühlen auf Raumtemperatur spülen Sie die Dias dreimal in entionisiertem Wasser ab und saugen überschüssige Flüssigkeit aus den Dias ab.Mit 0,3% Wasserstoffperoxid für 10 Minuten inkubieren, um die endogene Peroxidaseaktivität zu blockieren, gefolgt von einer Blockierung mit 3%BSA und PBS für eine Stunde. Am Ende der Wasserstoffperoxid-Inkubation die Dias über Nacht mit den entsprechenden Primärantikörpern bei vier Grad Celsius beschriften. Am nächsten Morgen behandeln Sie die Dias mit Meerrettichperoxidase konjugierten Sekundärantikörper für eine Stunde bei Raumtemperatur, bevor Sie das Substrat tropfenweise auf die Dias auftragen, bis ein angemessenes Maß an brauner Färbung durch Lichtmikroskopie beobachtet wird.Als nächstes färben Sie die Proben mit Hämatoxylin. Nach einer Minute, stoppen Sie die Reaktion mit destilliertem Wasser gefolgt von einem fünf Sekunden Untertauchen in 0,5%Salzsäure-Alkohol und fünf Sekunden in 0,5% Ammoniakwasser. Dann dehydrieren Sie die Proben mit drei aufsteigenden drei Minuten Ethanol und drei, fünf Minuten Xylol-Tauchsion.Um die Antitumoraktivität eines Kandidatenmedikaments von Interesse zu bewerten, initiieren Sie die Behandlung am Tag der Zellimpfung gemäß dem geplanten experimentellen Protokoll und überwachen Sie das primäre Tumorvolumen zweimal pro Woche für vier bis sechs Wochen. Für die dynamische PharmaCODE-Analyse des Tumors infiltrierte Immunzellen, zerkleinern Sie das Tumorgewebe in kleine Stücke und verdauen Sie die Fragmente mit Kollagenase Typ eins und DNase I und RPMI-1640 medium plus 5%FBS für 30 Minuten bei 37 Grad Celsius. Filtern Sie am Ende der Verdauung das verdaute Gewebe durch ein 40-Mikrometer-Zellsieb, um eine Einzelzellsuspension zu erhalten und die Zellen durch Zentrifugation zu sammeln.Setzen Sie das Pellet bei einem Mal 10 der siebten Zellen pro Milliliter eiskalter Faxpufferkonzentration aus und übertragen Sie ein gleiches Zellvolumen auf die entsprechende Anzahl von Brunnen in einer 96-well runden Bodenplatte. Sammeln Sie die Zellen durch Zentrifugation und setzen Sie die Pellets in 20 Mikrogramm pro Milliliter menschlicher IGG für 30 Minuten, um jede unspezifische Bindung zu blockieren. Dann färben Sie die Zellen mit den entsprechenden primärantikörpern für 30 Minuten bei vier Grad Celsius vor ihrer Analyse durch Durchflusszytometrie nach Standardprotokollen.Wie gezeigt, 100 Milligramm pro Kilogramm Cyclophosphamid und 125 Milligramm pro Kilogramm Disulfiram Myeloablation führt zu einer signifikanten Erschöpfung der Neutrophilen und Monozyten vier Tage nach der Behandlung. Nach der menschlichen PBMC- und Tumortransplantation kann das Vorhandensein von infiltrierten menschlichen Immunzellen innerhalb der Tumormikroumgebung durch Immunhistochemie überprüft werden. Ein In-vivo-Screening eines Panels von PBMC-Spendern kann durchgeführt werden, um das Vorhandensein einer relativ hohen Immunzellinfiltration in die Tumormikroumgebung in einer akzeptablen Tumorwachstumsrate zu bestätigen.Menschliche Krebszelllinien bei Patienten abgeleitetxenografts verschiedener Krebsarten können auch bewertet werden, um die Tumorwachstumsrate und Dieinfiltration von Immunzellen zu bewerten. In diesem repräsentativen Experiment führte die Behandlung der PBMC und veredelte humanisierte Mäuse mit humanisiertem Anti-PD1-Antikörper zu signifikanten Antitumoraktivitäten. Disulfiram verringert die Urotoxizität von Cyclophosphamid, die Kombination kann länger anhaltende Neutropenie-Effekte bei Mäusen ausüben.Die genaue Dosis von Cyclophosphamid und Disulfiram muss möglicherweise vorbestimmt werden. Neuere Stämme von immundefizienten Mäusen zur leichteren Rekonstitution der menschlichen Immunität und verminderter xenogener GvHD-Wirkung wurden festgestellt und warten weitere Untersuchungen mit unserem dokumentierten Protokoll an. Unser Modell ist nützlich für die Bewertung von T-Zell-ansprechenden Krebsimmuntherapien, insbesondere bei der Arbeit an kurzen Zeitplänen oder bei der Auswahl von Wirkstoffen, bevor sie zu einem komplexeren Multilineage-Immunitätsmodell übergehen.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

Ein Maus-Modell der Fatigue, induziert durch Peripheral Bestrahlung

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

Forschung

Krebsforschung

Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma

Tumor Engraftment in einem Xenograft-Maus-Modell der menschlichen Mantel-Zell-Lymphom

B lymphocytes are key players in immune cell circulation and they mainly home to and reside in lymphoid organs. While normal B cells only proliferate when ...

Development of a Human Preclinical Model of Osteoclastogenesis from Peripheral Blood Monocytes Co-cultured with Breast Cancer Cell Lines

Entwicklung eines menschlichen präklinischen Modell der Osteoclastogenesis aus peripherem Blut Monozyten Co mit Brustkrebszelllinien kultiviert

The crosstalk between tumor cells and bone cells in the bone microenvironment is crucial to understanding the mechanism of bone metastasis formation. We ...

Automated Multiplex Immunofluorescence Panel for Immuno-oncology Studies on Formalin-fixed Carcinoma Tissue Specimens

Automatisierte Multiplex Immunfluoreszenz Panel für Immuno-Onkologie-Studien auf Formalin fixiert Karzinom Gewebeproben

Continued developments in immuno-oncology require an increased understanding of the mechanisms of cancer immunology. The immunoprofiling analysis of ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

Patientenabgeleitete orthotopische Xenograft-Modelle für humanes Urotheliale Zellkarzinom und Kolorektalkrebs-Tumorwachstum und spontane Metastasierung

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

Patient-derived Heterogeneous Xenograft Model of Pancreatic Cancer Using Zebrafish Larvae as Hosts for Comparative Drug Assessment

Patientenabgeleitetes heterogenes Xenograft-Modell von Bauchspeicheldrüsenkrebs mit Zebrafischlarven als Wirte für vergleichende Arzneimittelbewertung

Patient-derived tumor xenograft (PDX) and cell-derived tumor xenograft (CDX) are important techniques for preclinical assessment, medication guidance and ...

A Melanoma Patient-Derived Xenograft Model

Ein melanompatientenabgeleitetes Xenograft-Modell

Accumulating evidence suggests that molecular and biological properties differ in melanoma cells grown in traditional two-dimensional tissue culture ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Etablierung von vom Magenkrebs abgeleiteten Xenograft-Modellen und Primärzelllinien

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Isolating Human Peripheral Blood Mononuclear Cells and CD4+ T cells from S&#233;zary Syndrome Patients for Transcriptomic Profiling

Isolating Human Peripheral Blood Mononuclear Cells and CD4+ T cells from SÃƒÆ’Ã‚Â©zary Syndrome Patients for Transcriptomic Profiling

Isolierung menschlicher mononukleärer Blutzellen und CD4+ T-Zellen von Patienten mit Sézary-Syndrom für transkriptomisches Profiling

Cutaneous T-cell lymphomas (CTCL) are derived from the transformation and uncontrolled proliferation of mature skin-homing T cells, and mycosis fungoides ...

Circulating Tumor Cell Lines: an Innovative Tool for Fundamental and Translational Research

Zirkulierende Tumorzelllinien: ein innovatives Werkzeug für die Grundlagen- und Translationsforschung

Metastasis is a leading cause of cancer death. Despite improvements in treatment strategies, metastatic cancer has a poor prognosis. We thus face an ...