Name: a human peripheral blood mononuclear cell (pbmc) engrafted humanized xenograft model for translational immuno-oncology (i-o) research
Uploaded: 2019-08-15T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research at JoVE.com

אנו מודים לחברי המעבדות שלנו לדיונים מועילים. עבודה זו הייתה נתמכת באופן חלקי על ידי התוכנית לחדשנות ולמדעי החיים בביו-רפואית ולטיפוח המחקר של הנציבות העירונית של בייג והטכנולוגיה תחת הסכם גרנט. Z151100003915070 (פרויקט "המחקר הקדם קליני על הרומן אונקולוגיה החיסון נגד הגידול BGB-A317"), וזה היה גם נתמך באופן חלקי על ידי מימון החברה הפנימית למחקר טרום קליני.

כל ההליכים שבוצעו במחקרים הכרוכים במשתתפים אנושיים היו בהתאם לסטנדרטים האתיים של בייג'ין ו/או ועדת מחקר לאומית ועם הצהרת הלסינקי 1964 והתיקונים המאוחרים או הסטנדרטים האתיים הדומים. הסכמה מושכלת הושגה מכל המשתתפים הבודדים הכלולים במחקר. כל ההליכים שבוצעו במחקרים הכרוכים בבעלי חיים אושרו ע?...

<ol>
	<li>Pardoll, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+blockade+of+immune+checkpoints+in+cancer+immunotherapy.">The blockade of immune checkpoints in cancer immunotherapy.</a> Nature Reviews Cancer. 12 (4), 252-264 (2012).</li><li>Postow, M. A., Callahan, M. K., Wolchok, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+Checkpoint+Blockade+in+Cancer+Therapy.">Immune Checkpoint Blockade in Cancer Therapy.</a> Journal of Clinical Oncology. 33 (17), 1974-1982 (2015).</li><li>Li, Z., Kang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+therapeutic+targets+in+metastatic+progression:+A+focus+on+breast+cancer.">Emerging therapeutic targets in metastatic progression: A focus on breast cancer.</a> Pharmacology &amp; Therapeutics. 161, 79-96 (2016).</li><li>Li, Q. X., Feuer, G., Ouyang, X., An, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+animal+modeling+for+immuno-oncology.">Experimental animal modeling for immuno-oncology.</a> Pharmacology &amp; Therapeutics. 173, 34-46 (2017).</li><li>Fisher, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+of+4-1BB+by+monoclonal+antibody+PF-05082566+enhances+T-cell+function+and+promotes+anti-tumor+activity.">Targeting of 4-1BB by monoclonal antibody PF-05082566 enhances T-cell function and promotes anti-tumor activity.</a> Cancer Immunology, Immunotherapy. 61 (10), 1721-1733 (2012).</li><li>McCormack, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bi-specific+TCR-anti+CD3+redirected+T-cell+targeting+of+NY-ESO-1-+and+LAGE-1-positive+tumors.">Bi-specific TCR-anti CD3 redirected T-cell targeting of NY-ESO-1- and LAGE-1-positive tumors.</a> Cancer Immunology, Immunotherapy. 62 (4), 773-785 (2013).</li><li>Rongvaux, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+hemato-lymphoid+system+mice:+current+use+and+future+potential+for+medicine.">Human hemato-lymphoid system mice: current use and future potential for medicine.</a> Annual Review of Immunology. 31, 635-674 (2013).</li><li>Matsumura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+CD5++B+cells+develop+predominantly+in+the+spleen+of+NOD/SCID/gammac(null)+(NOG)+mice+transplanted+either+with+human+umbilical+cord+blood,+bone+marrow,+or+mobilized+peripheral+blood+CD34++cells.">Functional CD5+ B cells develop predominantly in the spleen of NOD/SCID/gammac(null) (NOG) mice transplanted either with human umbilical cord blood, bone marrow, or mobilized peripheral blood CD34+ cells.</a> Experimental Hematology. 31 (9), 789-797 (2003).</li><li>Zhang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+binding+of+an+anti-PD-1+antibody+to+FcgammaRIota+has+a+profound+impact+on+its+biological+functions.">The binding of an anti-PD-1 antibody to FcgammaRIota has a profound impact on its biological functions.</a> Cancer Immunology, Immunotherapy. 67 (7), 1079-1090 (2018).</li><li>Gamelli, R. L., Ershler, W. B., Hacker, M. P., Foster, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+disulfiram+on+cyclophosphamide-mediated+myeloid+toxicity.">The effect of disulfiram on cyclophosphamide-mediated myeloid toxicity.</a> Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 16 (2), 153-155 (1986).</li><li>Dunay, I. R., Fuchs, A., Sibley, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+monocytes+but+not+neutrophils+are+necessary+to+control+infection+with+Toxoplasma+gondii+in+mice.">Inflammatory monocytes but not neutrophils are necessary to control infection with Toxoplasma gondii in mice.</a> Infection and Immunity. 78 (4), 1564-1570 (2010).</li><li>Ghasemlou, N., Chiu, I. M., Julien, J. P., Woolf, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD11b+Ly6G-+myeloid+cells+mediate+mechanical+inflammatory+pain+hypersensitivity.">CD11b+Ly6G- myeloid cells mediate mechanical inflammatory pain hypersensitivity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (49), 6808-6817 (2015).</li><li>Takao, K., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+responses+in+mouse+models+greatly+mimic+human+inflammatory+diseases.">Genomic responses in mouse models greatly mimic human inflammatory diseases.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (4), 1167-1172 (2015).</li><li>Payne, K. J., Crooks, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune-cell+lineage+commitment:+translation+from+mice+to+humans.">Immune-cell lineage commitment: translation from mice to humans.</a> Immunity. 26 (6), 674-677 (2007).</li><li>Mestas, J., Hughes, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+not+men:+differences+between+mouse+and+human+immunology.">Of mice and not men: differences between mouse and human immunology.</a> Journal of Immunology. 172 (5), 2731-2738 (2004).</li><li>von Herrath, M. G., Nepom, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lost+in+translation:+barriers+to+implementing+clinical+immunotherapeutics+for+autoimmunity.">Lost in translation: barriers to implementing clinical immunotherapeutics for autoimmunity.</a> Journal of Experimental Medicine. 202 (9), 1159-1162 (2005).</li><li>Mahdi, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+glow+of+HLA+typing+in+organ+transplantation.">A glow of HLA typing in organ transplantation.</a> Clinical and Translational Medicine. 2 (1), 6 (2013).</li><li>Shultz, L. D., Brehm, M. A., Garcia-Martinez, J. V., Greiner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+for+immune+system+investigation:+progress,+promise+and+challenges.">Humanized mice for immune system investigation: progress, promise and challenges.</a> Nature Reviews Immunolog. 12 (11), 786-798 (2012).</li><li>Brehm, M. A., Shultz, L. D., Luban, J., Greiner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overcoming+current+limitations+in+humanized+mouse+research.">Overcoming current limitations in humanized mouse research.</a> Journal of Infectious Diseases. 208, 125-130 (2013).</li><li>Walsh, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+Mouse+Models+of+Clinical+Disease.">Humanized Mouse Models of Clinical Disease.</a> Annual Review of Pathology. 12, 187-215 (2017).</li><li>Shultz, L. D., Ishikawa, F., Greiner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+in+translational+biomedical+research.">Humanized mice in translational biomedical research.</a> Nature Reviews Immunolog. 7 (2), 118-130 (2007).</li><li>Brehm, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD-scid+IL2rgnull+(NSG)+mice+deficient+in+murine+MHC+Class+I+and+Class+II+expression+support+engraftment+of+functional+human+T+cells+in+the+absence+of+acute+xenogeneic+GVHD+following+injection+of+PBMC.">NOD-scid IL2rgnull (NSG) mice deficient in murine MHC Class I and Class II expression support engraftment of functional human T cells in the absence of acute xenogeneic GVHD following injection of PBMC.</a> The Journal of Immunology. 200, 57 (2018).</li><li>King, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+Hu-PBL+model+for+the+study+of+human+islet+alloreactivity+based+on+NOD-scid+mice+bearing+a+targeted+mutation+in+the+IL-2+receptor+gamma+chain+gene.">A new Hu-PBL model for the study of human islet alloreactivity based on NOD-scid mice bearing a targeted mutation in the IL-2 receptor gamma chain gene.</a> Clinical Immunology. 126 (3), 303-314 (2008).</li><li>Ito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD/SCID/gamma(c)(null)+mouse:+an+excellent+recipient+mouse+model+for+engraftment+of+human+cells.">NOD/SCID/gamma(c)(null) mouse: an excellent recipient mouse model for engraftment of human cells.</a> Blood. 100 (9), 3175-3182 (2002).</li><li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+lymphoid+and+myeloid+cell+development+in+NOD/LtSz-scid+IL2R+gamma+null+mice+engrafted+with+mobilized+human+hemopoietic+stem+cells.">Human lymphoid and myeloid cell development in NOD/LtSz-scid IL2R gamma null mice engrafted with mobilized human hemopoietic stem cells.</a> Journal of Immunology. 174 (10), 6477-6489 (2005).</li><li>Sasaki, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+preclinical+humanized+mouse+model+to+evaluate+acute+toxicity+of+an+influenza+vaccine.">Development of a preclinical humanized mouse model to evaluate acute toxicity of an influenza vaccine.</a> Oncotarget. 9 (40), 25751-25763 (2018).</li><li>Tobin, L. M., Healy, M. E., English, K., Mahon, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+mesenchymal+stem+cells+suppress+donor+CD4(+)+T+cell+proliferation+and+reduce+pathology+in+a+humanized+mouse+model+of+acute+graft-versus-host+disease.">Human mesenchymal stem cells suppress donor CD4(+) T cell proliferation and reduce pathology in a humanized mouse model of acute graft-versus-host disease.</a> Clinical and Experimental Immunology. 172 (2), 333-348 (2013).</li></ol>

הידע שלנו על התפתחות הסרטן וההתקדמות התקדמה באופן משמעותי בשנים האחרונות, עם דגש על הבנה מקיפה של תאי הגידול ומשתית הקשורים שלה. רתימת מנגנוני החיסון המארחים יכול לגרום להשפעה גדולה יותר נגד תאים סרטניים, המייצג אסטרטגיית טיפול מבטיח. מודלים murine עם מערכות חיסונית ללא שינוי של העכבר, כגון ?...

אימונואונקולוגיה (I-O) הוא שדה מתרחב במהירות של טיפול בסרטן. חוקרים החלו לאחרונה להעריך את הפוטנציאל התרפויטי של פונקציות מודלדירוג של המערכת החיסונית לתקוף גידולים. המערכת החיסונית מחסום בלואדס הפגינו פעילויות עידוד במגוון סוגי סרטן, כולל מלנומה, קרצינומה של תאי הכליה, ראש וצוואר, ריאות, שלפוחית השתן וסרטן הערמונית1,2. בניגוד לטיפולים ממוקדים כי ישירות להרוג תאים סרטניים, אני-O טיפולים הפוטנציאל המערכת החיסונית של הגוף לתקוף גידולים3.
עד היום, הוקמו מודלים רבים של חיות I-O. אלה כוללים: 1) עכבר הגידול קווי תאים או הומושתל הגידול בעכברים syngeneic; 2) גידולים ספונטנית נגזר מעכבר מהונדסים גנטית (פנינה) או מסרטנים-אינדוקציה; 3) כלאריק אבני חן עם דפיקה-in של היעד סמים האדם (s) במערכת החיסון מורטין פונקציונלי; ו 4) עכברים עם מחדש חסינות אנושית מושתלים עם תאים סרטניים אנושיים או המטופל נגזר xenografts תלי (PDXs). לכל אחד מדגמים אלה יש יתרונות ברורים, כמו גם מגבלות, אשר תוארו ונבדקו באופן נרחב במקומות אחרים4.
החוקה של החסינות האנושית בעכברים לקויה העריכו בצורה מוערכת כגישה קלינית למחקר של מחקר I-O של טרנסלtional. הדבר מושג בדרך כלל באמצעות אחד משני הצדדים של תאים חיסוניים מבוגרים (למשל, דם היקפי תאים ברורים (pmbc)5,6, או 2) חרט תאי גזע המטבטיים (hsc) מ, למשל, דם טבורי או עוברי כבד7,8. עכברים אלה הומניזציה יכול לתמוך בצמיחה של גידולים אנושיים, ובכך לאפשר הערכה של הטיפולים I-O בהקשר של החסינות האנושית וסרטן האדם. למרות היתרונות, יישומים של עכברים הומניזציה במחקר I-O היו בדרך כלל הפריע מספר חששות, כגון זמן פיתוח מודל ארוך ועלות גבוהה במידה ניכרת.
כאן, אנו מתארים מודל אנושי מבוסס-BMC שניתן ליישם באופן נרחב עבור מחקרי I-O טרנסלtional. מודל זה הוא יחסית זמן-וחסכוני עם השגות גבוהה במחקרי יעילות. זה כבר בשימוש ב-house עבור ההערכות של מספר I-O therapeutics כרגע תחת פיתוח טרום קליני וקליני. BGB-A317 (טילאסיאמאב), נוגדן הומניסטית anti-PD-1 נוגדנים9 , משמש כדוגמה לדון פיתוח מודל, אפיון, ויישומים אפשריים עבור ניתוח יעילות אנטי הגידול.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:955px;" width="955">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">PBMC separation /cell culture</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:193px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Histopaque-1077</td>
			<td style="width:211px;">Sigma</td>
			<td style="width:193px;">10771</td>
			<td style="width:143px;">Cell isolation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">DMEM</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:193px;">10-013-CVR</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">DPBS</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:193px;">21-031-CVR</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">FBS</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:193px;">35-076-CV</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Penicillin-Streptomycin, Liquid</td>
			<td style="width:211px;">Gibco</td>
			<td style="width:193px;">15140-163</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red</td>
			<td style="width:211px;">Gibco</td>
			<td style="width:193px;">25200-114</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">Matrigel</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:193px;">356237</td>
			<td style="width:143px;">CDX inoculation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">FACS analysis</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:193px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Deoxyribonuclease I from bovine pancreas</td>
			<td style="width:211px;">Sigma</td>
			<td style="width:193px;">DN25</td>
			<td style="width:143px;">Sample preparation</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Collagenase Type I</td>
			<td style="width:211px;">Sigma</td>
			<td style="width:193px;">C0130</td>
			<td style="width:143px;">Sample preparation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-mouse/human CD11b (M1/70) antibody</td>
			<td style="width:211px;">BioLegend</td>
			<td style="width:193px;">101206</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-mouse Ly-6C (HK1.4) antibody</td>
			<td style="width:211px;">BioLegend</td>
			<td style="width:193px;">128008</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-mouse Ly-6G (1A8) antibody</td>
			<td style="width:211px;">BioLegend</td>
			<td style="width:193px;">127614</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human CD8 (OKT8) antibody</td>
			<td style="width:211px;">Sungene Biotech</td>
			<td style="width:193px;">H10082-11H</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human CD279 (MIH4) antibody</td>
			<td style="width:211px;">eBioscience</td>
			<td style="width:193px;">12-9969-42</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human CD3 (HIT3a) antibody</td>
			<td style="width:211px;">4A Biotech</td>
			<td style="width:193px;">--</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">Guava easyCyte 8HT Benchtop Flow Cytometer</td>
			<td style="width:211px;">Millipore</td>
			<td style="width:193px;">0500-4008</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">Tumor/PDX implantation /dosing / measurement</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:193px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Cyclophosphamide</td>
			<td style="width:211px;">J&#38;K</td>
			<td style="width:193px;">Cat#419656, CAS#6055-19-2</td>
			<td style="width:143px;">In vivo efficacy</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Disulfiram</td>
			<td style="width:211px;">J&#38;K</td>
			<td style="width:193px;">Cat#591123, CAS#97-77-8</td>
			<td style="width:143px;">In vivo efficacy</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Syringe</td>
			<td style="width:211px;">BD</td>
			<td style="width:193px;">300841</td>
			<td style="width:143px;">CDX inoculation</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Hypodermic needles (14G)</td>
			<td style="width:211px;">Shanghai SA Mediciall &#38; Plastic Instruments Co., Ltd.</td>
			<td style="width:193px;">0.7*32 TW SB</td>
			<td style="width:143px;">PDX inoculation</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Vernier Caliper (MarCal)</td>
			<td style="width:211px;">Mahr</td>
			<td style="width:193px;">16ER</td>
			<td style="width:143px;">Tumor measurement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">IVC individual ventilated cages</td>
			<td style="width:211px;">Lingyunboji Ltd.</td>
			<td style="width:193px;">IVC-128</td>
			<td style="width:143px;">Animal facility</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">IHC</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:193px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Leica ASP200 Vacuum tissue processor</td>
			<td style="width:211px;">Leica</td>
			<td style="width:193px;">ASP200</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Leica RM2235 Manual Rotary Microtome for Routine Sectioning</td>
			<td style="width:211px;">Leica</td>
			<td style="width:193px;">RM2235</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Leica EG1150 H Heated Paraffin Embedding Module</td>
			<td style="width:211px;">Leica</td>
			<td style="width:193px;">EG1150 H</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Ariol-Clinical IHC and FISH Scanner</td>
			<td style="width:211px;">Leica</td>
			<td style="width:193px;">Ariol</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human CD8 (EP334) antibody</td>
			<td style="width:211px;">ZSGB-Bio</td>
			<td style="width:193px;">ZA-0508</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human PD1 [NAT105] antibody</td>
			<td style="width:211px;">Abcam</td>
			<td style="width:193px;">ab52587</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human PD-L1 (E1L3N) antibody</td>
			<td style="width:211px;">Cell Signaling Technology</td>
			<td style="width:193px;">13684S</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">Polink-2 plus Polymer HRP Detection System</td>
			<td style="width:211px;">ZSGB-Bio</td>
			<td style="width:193px;">PV-9001/9002</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a human peripheral blood mononuclear cell (pbmc) engrafted humanized xenograft model for translational immuno-oncology (i-o) research

הגילוי וההתפתחות של הטיפול האימונואונקולוגיה (I-O) בשנים האחרונות מייצג אבן דרך בטיפול בסרטן. עם זאת, אתגרי הטיפול ממשיכות להתקיים. מודלים של בעלי חיים רלוונטיים ועמידים בפני מחלות הם משאבים חיוניים להמשך המחקר והפיתוח הקדם-קליני כדי לטפל במגוון של מחסומים חיסוניים נוספים. כאן, אנו מתארים את הדם ההיקפי היקפי תא מונאנרור (PBMC)-מבוסס על מודל הומניזציה האנושית. BGB-A317 (טילאסיאמאב), נוגדן נגד PD-1 הומניסט בפיתוח קליני בשלב מאוחר, משמש כדוגמה לדון פלטפורמת הגדרת פלטפורמה, אפיון מודל והערכות יעילות הסמים. אלה עכברים הומניזציה לתמוך בצמיחה של הגידולים האנושיים ביותר נבדק, ובכך מאפשר הערכה של הטיפולים I-O בהקשר של החסינות האנושית וסרטן אנושי. ברגע שהוקמה, המודל שלנו הוא יחסית זמן וחסכוני, ובדרך כלל להניב תוצאות מאוד מתועלות. אנו מציעים כי הפרוטוקול המתואר במאמר זה יכול לשמש כמנחה כללי להקמת דגמי העכבר מחדש עם PBMC האדם וגידולים עבור מחקר I-O.

בעקבות ההליכים המוצגים כאן, מודל מבוסס PBMC מבוססי הומניזציה האדם הוקמה בהצלחה. בקצרה, ההשפעות של CP myeloablation ב בנוד/SCID עכברים נקבע על ידי הזרימה cy, לנסות ניתוח של נויטרופילים ואוכלוסיות מונוציט הטיפול בפוסט CP ו DS (איור 1). 100 מ"ג/ק"ג CP בתוספת 125 mg/ק"ג DS נקבע כמינון אופטימלי משמש מחקר...

Watch this Scientific Journal Video about A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research at JoVE.com

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research

תא היקפי של דם מונאפרור (PBMC) חרט הומניזציה מודל Xenograft עבור מחקר הטרנסג-אונקולוגיה (I-O)

אנו מתארים היקפית אנושית תא היקפי (pbmc)-מבוסס הומניזציה מודל העכבר מבע שתלת עבור מחקר translational-אונקולוגיה. פרוטוקול זה יכול לשמש כמנחה כללי להקמת ולאפיון מודלים דומים להערכת הטיפול של I-O.

The discovery and development of immuno-oncology (I-O) therapy in recent years represents a milestone in the treatment of cancer. However, treatment ...

הפרוטוקול שלנו יכול לשמש כקו מנחה כללי להקמת מודלים לעכבר משוחזרים עם PBMC אנושי וגידולים למחקר אימונו-אונקולוגי. הליכים אלה מספקים גישה חסכונית מאוד לשחזור חלקי חסינות אנושית בעכברים נושאי גידול אנושי באמצעות תת עורית ערבוב של PBMC אנושי עם xenografts סרטן. הדגמת ההליכים איתי תהיה שינקסין קוי, יאן-ג'אנג, הואיצ'ן באי ושיאולונג יאנג, שנשלחו אלינו מהמחלקה לפרמקולוגיה.עבור דלדול התא מיאלואידי intra peritoneally לספק 100 מ"ג לקילוגרם של ציקלופוספאמיד ולספק דרך הפה 125 מ"ג לקילוגרם של דיסולפירם לשישה עד שמונה שבועות NOD / SCID עכברים נקבה פעם ביום במשך יומיים. 24 שעות לאחר המנה השנייה של ציקלופוספאמיד ו disulfiram, resuspend חמש פעמים 10 מתוך שישה PBMC אנושי מבודד טרי ו 2.5 פעמים 10 של שישה תאים תא הגידול האנושי ו 200 microliters של PBS בתוספת 50% metrogel לכל בעל חיים ולהזריק את כל נפח תת עורית לתוך האגף הימני של כל חיה ניסיונית. למדוד ולתזמן את נפח הגידול העיקרי פעמיים בשבוע במשך ארבעה עד שישה שבועות.כאשר הגידולים מגיעים לנפח ממוצע של 200 עד 500 מילימטרים, השתמש במספריים אופטומיים כדי לקצור גידול שלם מכל חיה. PBMC תורמים קווי תאים סרטניים החולה נגזר xenografts שתוצאתו גידול מתון עם PD-1 גבוה יחסית, PD-L1 וביטוי CD8 יש להשתמש לניתוח הבא. לניתוח אימונוהיסטוכימי של רקמות הגידול שנקטפו, לתקן את הדגימות ואת הפורמלין 24 עד 72 שעות לפני התייבשות הטבעה של הרקמות בפרפין.השג שלושה מקטעי מיקרומטר של הרקמות המוטבעות על שקופיות מצופות פוליזין ורוקן את הדגימות עם שלוש טבילות קסילן של שבע דקות. לאחר הטיפול השלישי, לחות את החלקים עם שלוש דקות טבילות אלכוהול מדורגות. לאחר מכן לשטוף את השקופית במים deionized שלוש פעמים ולהסיר כל נוזל עודף מן המגלשות.כדי לבצע אחזור אנטיגן, למקם את השקופיות במיכל ולכסות את השקופיות עם מאגר sodiocitrate 10 מילימולרים. מחממים את המגלשות, מיכל, במיקרוגל במשך שלוש דקות לפני הצבת המגלשות באמבט מים 95 מעלות צלזיוס במשך 30 דקות. לאחר הקירור לטמפרטורת החדר, יש לשטוף את המגלשות שלוש פעמים במים שעברו דה-יון ולשאף כל נוזל עודף מהמגלשות.דגירה עם 0.3% מי חמצן במשך 10 דקות כדי לחסום פעילות פרוקסידזה אנדוגני ואחריו חסימה עם 3%BSA ו PBS במשך שעה אחת. בסוף הדגירה מי חמצן, לתייג את המגלשות עם הנוגדנים העיקריים המתאימים בארבע מעלות צלזיוס לילה. למחרת בבוקר, לטפל במגלשות עם peroxidase חזרת תרכובת נוגדן משני במשך שעה בטמפרטורת החדר לפני החלת המצע dropwise על המגלשות עד רמה מתאימה של כתמים חומים נצפתה על ידי מיקרוסקופיה אור.לאחר מכן, להכתים את הדגימות עם hematoxylin. לאחר דקה אחת, עצרו את התגובה במים מזוקקים ואחריה טביעה של חמש שניות ב-0.5% אלכוהול חומצה הידרוכלורית וחמש שניות במים אמוניה 0.5%. ואז לייבש את הדגימות עם שלוש עולה שלוש דקות אתנול ושלוש, חמש דקות טבילת קצילן.כדי להעריך את פעילות antitumor של תרופה מועמד עניין, ליזום את הטיפול ביום חיסון התא על פי פרוטוקול הניסוי המתוכנן לפקח על נפח הגידול העיקרי פעמיים בשבוע במשך ארבעה עד שישה שבועות. לניתוח דינמי של PharmaCODE של תאי החיסון שחדרו לגידול, יש לטחון את רקמות הגידול לחתיכות קטנות ולעכל את השברים עם סוג קולגנס 1 ו-DNase I ו-RPMI-1640 מדיום ועוד 5%FBS למשך 30 דקות ב-37 מעלות צלזיוס. בסוף העיכול, לסנן את הרקמה המתעכלת דרך מסננת תא 40 מיקרומטר כדי להשיג השעיה תא יחיד ולאסוף את התאים על ידי צנטריפוגה.תן שימוש חוזר את גלולה באחת פעמים 10 של התאים השביעי למיליליטר של ריכוז מאגר פקס קר קרח ולהעביר נפח שווה של תאים למספר המתאים של בארות בצלחת תחתונה עגולה 96 היטב. לאסוף את התאים על ידי צנטריפוגה מחדש את כדורי ב 20 מיקרוגרם למיליליטר של IGG אנושי במשך 30 דקות כדי לחסום כל כריכה לא ספציפית. ואז להכתים את התאים עם הנוגדנים העיקריים המתאימים במשך 30 דקות בארבע מעלות צלזיוס לפני הניתוח שלהם על ידי ציטומטריה זרימה על פי פרוטוקולים סטנדרטיים.כפי שהוכח, 100 מיליגרם לקילוגרם ציקלופוספאמיד ו 125 מיליגרם לקילוגרם disulfiram myeloablation תוצאות דלדול משמעותי של נויטרופילים מונוציטים ארבעה ימים לאחר הטיפול. לאחר PBMC אנושי והשתלת גידול, נוכחות של חדירות תאים חיסוניים אנושיים ניתן לאמת בתוך microenvironment הגידול על ידי אימונוהיסטוכימיה. הקרנה in vivo של פאנל של תורמים PBMC יכול להתבצע כדי לאשר את נוכחותו של חדירת תא חיסוני גבוה יחסית לתוך microenvironment הגידול בקצב גידול מקובל.קווי תאים סרטניים אנושיים בחולה נגזר xenografts מסוגי סרטן שונים ניתן גם להעריך כדי להעריך את קצב הגידול ואת חדירת תאים חיסוניים. בניסוי מייצג זה, טיפול PBMC ועכברים אנושיים מושתלים עם נוגדן אנטי PD1 אנושי הביא פעילויות אנטיטומור משמעותיות. דיסולפירם מקטין urotoxicity של ציקלופוספאמיד, השילוב עשוי להפעיל השפעות נויטרופניה לאורך זמן בעכברים.משטר המינון המדויק של ציקלופוספאמיד ו disulfiram ייתכן שיהיה צורך קבוע מראש. זנים חדשים יותר של עכברים immunodeficient יותר עבור התחדשות חסינות אנושית קלה יותר וירידה באפקט GvHD קסנוגני הוקמו והם ממתינים לחקירות נוספות עם הפרוטוקול המתועד שלנו. המודל שלנו שימושי להערכת T-cell העוסקים טיפולים חיסוניים סרטן, במיוחד כאשר עובדים על צירי זמן קצרים או לבחירת סוכנים לפני המעבר למודל חסינות multilineage מורכב יותר.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell (PBMC) Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology (I-O) Research

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

במודל עכבר של עייפות הנגרם על ידי הקרנה ההיקפית

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma

Engraftment גידול במודל של עכברים Xenograft של האדם מנטל לימפומה התא

B lymphocytes are key players in immune cell circulation and they mainly home to and reside in lymphoid organs. While normal B cells only proliferate when ...

Development of a Human Preclinical Model of Osteoclastogenesis from Peripheral Blood Monocytes Co-cultured with Breast Cancer Cell Lines

התפתחות מודל פרה האנושית של Osteoclastogenesis של דם היקפיים ומונוציטים תרבותי משותף עם שורות תאים של סרטן השד

The crosstalk between tumor cells and bone cells in the bone microenvironment is crucial to understanding the mechanism of bone metastasis formation. We ...

Automated Multiplex Immunofluorescence Panel for Immuno-oncology Studies on Formalin-fixed Carcinoma Tissue Specimens

לוח Immunofluorescence מולטיפלקס אוטומטיות חיסונית-אונקולוגיה במחקרים על דגימות רקמה קרצינומה פורמלין-קבוע

Continued developments in immuno-oncology require an increased understanding of the mechanisms of cancer immunology. The immunoprofiling analysis of ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

מטופל-נגזר אורתוטופית מודלים של תאים האדם Urothelial קרצינומה של סרטן המעי הגס ואת הגידול גרורות ספונטנית

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

Patient-derived Heterogeneous Xenograft Model of Pancreatic Cancer Using Zebrafish Larvae as Hosts for Comparative Drug Assessment

מטופל-נגזר הטרוגנית מודל Xenograft של סרטן הלבלב באמצעות הזחלים Zebrafish כפונדקאים עבור הערכת סמים השוואתי

Patient-derived tumor xenograft (PDX) and cell-derived tumor xenograft (CDX) are important techniques for preclinical assessment, medication guidance and ...

A Melanoma Patient-Derived Xenograft Model

מלנומה מטופלת-נגזר מודל Xenograft

Accumulating evidence suggests that molecular and biological properties differ in melanoma cells grown in traditional two-dimensional tissue culture ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

הקמת החולה סרטן קיבה-מודלים נגזרים הנגזרות וקווי התא הראשי

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Isolating Human Peripheral Blood Mononuclear Cells and CD4+ T cells from S&#233;zary Syndrome Patients for Transcriptomic Profiling

Isolating Human Peripheral Blood Mononuclear Cells and CD4+ T cells from SÃƒÆ’Ã‚Â©zary Syndrome Patients for Transcriptomic Profiling

בידוד תאים חד-גרעיניים של דם היקפי אנושי ותאי T מסוג CD4+ מחולי תסמונת סזארי לצורך פרופיל תעתיק

Cutaneous T-cell lymphomas (CTCL) are derived from the transformation and uncontrolled proliferation of mature skin-homing T cells, and mycosis fungoides ...

Circulating Tumor Cell Lines: an Innovative Tool for Fundamental and Translational Research

קווי תאים סרטניים במחזור: כלי חדשני למחקר יסודי ותרגום

Metastasis is a leading cause of cancer death. Despite improvements in treatment strategies, metastatic cancer has a poor prognosis. We thus face an ...