Name: a human peripheral blood mononuclear cell (pbmc) engrafted humanized xenograft model for translational immuno-oncology (i-o) research
Uploaded: 2019-08-15T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research at JoVE.com

हम सहायक विचार विमर्श के लिए हमारी प्रयोगशालाओं के सदस्यों को धन्यवाद देते हैं। यह काम आंशिक रूप से अनुदान समझौते के तहत बीजिंग नगर विज्ञान और प्रौद्योगिकी आयोग के जैव चिकित्सा और जीवन विज्ञान नवाचार और खेती अनुसंधान कार्यक्रम द्वारा समर्थित किया गया था No. $ 151100003915070 (परियोजना "एक उपन्यास प्रतिरक्षा ऑन्कोलॉजी विरोधी ट्यूमर दवा BGB-A317 पर पूर्व नैदानिक अध्ययन"), और यह भी आंशिक रूप से पूर्व नैदानिक अनुसंधान के लिए आंतरिक कंपनी के वित्तपोषण द्वारा समर्थित किया गया था।

मानव प्रतिभागियों को शामिल अध्ययन में प्रदर्शन सभी प्रक्रियाओं BeiGene और / या राष्ट्रीय अनुसंधान समिति के नैतिक मानकों के अनुसार और 1964 हेलसिंकी घोषणा और उसके बाद संशोधन या तुलनीय नैतिक मानकों के साथ थे. अध...

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	<li>Pardoll, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+blockade+of+immune+checkpoints+in+cancer+immunotherapy.">The blockade of immune checkpoints in cancer immunotherapy.</a> Nature Reviews Cancer. 12 (4), 252-264 (2012).</li><li>Postow, M. A., Callahan, M. K., Wolchok, J. 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D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+lymphoid+and+myeloid+cell+development+in+NOD/LtSz-scid+IL2R+gamma+null+mice+engrafted+with+mobilized+human+hemopoietic+stem+cells.">Human lymphoid and myeloid cell development in NOD/LtSz-scid IL2R gamma null mice engrafted with mobilized human hemopoietic stem cells.</a> Journal of Immunology. 174 (10), 6477-6489 (2005).</li><li>Sasaki, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+preclinical+humanized+mouse+model+to+evaluate+acute+toxicity+of+an+influenza+vaccine.">Development of a preclinical humanized mouse model to evaluate acute toxicity of an influenza vaccine.</a> Oncotarget. 9 (40), 25751-25763 (2018).</li><li>Tobin, L. M., Healy, M. E., English, K., Mahon, B. 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कैंसर के विकास और प्रगति के बारे में हमारा ज्ञान हाल के वर्षों में काफी उन्नत हुआ है, ट्यूमर कोशिकाओं और इसके संबद्ध स्ट्रोमा दोनों की व्यापक समझ पर ध्यान केंद्रित करने के साथ। मेजबान प्रतिरक्षा तंत्र...

इम्यूनो-ऑन्कोलॉजी (आई-ओ) कैंसर के उपचार का एक तेजी से विस्तार क्षेत्र है। शोधकर्ताओं ने हाल ही में ट्यूमर पर हमला करने के लिए प्रतिरक्षा प्रणाली के कार्यों modulating की चिकित्सीय क्षमता की सराहना करने के लिए शुरू कर दिया है. प्रतिरक्षा जांच चौकी नाकाबंदी मेलेनोमा, गुर्दे सेल कार्सिनोमा, सिर और गर्दन, फेफड़े, मूत्राशय और प्रोस्टेट कैंसर1,2सहित कैंसर प्रकार की एक किस्म में उत्साहजनक गतिविधियों का प्रदर्शन किया है। लक्षित उपचार है कि सीधे कैंसर की कोशिकाओं को मारने के विपरीत, मैं-ओ चिकित्सा ट्यूमर पर हमला करने के लिए शरीर की प्रतिरक्षा प्रणाली को शक्ति3.
तारीख करने के लिए, कई प्रासंगिक आई-ओ पशु मॉडल स्थापित किया गया है. इन में शामिल हैं: 1) माउस ट्यूमर सेल लाइनों या syngeneic चूहों में ट्यूमर homograft; 2) आनुवंशिक रूप से इंजीनियर माउस (जीईएम) या कैंसरजन-प्रेरण से व्युत्पन्न सहज ट्यूमर; 3) एक कार्यात्मक murine प्रतिरक्षा प्रणाली में मानव दवा लक्ष्य (ओं) के दस्तक के साथ झंकार जीईएम; और 4) पुनर्गठित मानव प्रतिरक्षा के साथ चूहों मानव कैंसर कोशिकाओं या रोगी व्युत्पन्न xenografts (PDXs) के साथ प्रतिरोपित. इन मॉडलों में से प्रत्येक स्पष्ट लाभ के रूप में के रूप में अच्छी तरह से सीमाओं, जो वर्णित किया गया है और कहीं और बड़े पैमाने पर समीक्षाकी है 4.
इम्यूनोन्यूफिएंट चूहों में मानव प्रतिरक्षा का पुनर्गठन अनुवाद आई-ओ अनुसंधान के लिए एक नैदानिक रूप से प्रासंगिक दृष्टिकोण के रूप में बढ़ रहा है। यह आमतौर पर या तो के माध्यम से हासिल की है 1) वयस्क प्रतिरक्षा कोशिकाओं के engraftment (जैसे, परिधीय रक्त मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं (PMBC))5,6,या 2) hematopoietic स्टेम कोशिकाओं के engraftment (HSC) से, उदाहरण के लिए, गर्भनाल रक्त या भ्रूण जिगर7,8. इन मानवीय चूहों मानव ट्यूमर के विकास का समर्थन कर सकता है, इस प्रकार दोनों मानव प्रतिरक्षा और मानव कैंसर के संदर्भ में आई-ओ चिकित्सा के आकलन की अनुमति. फायदे के बावजूद, आई-ओ अनुसंधान में humanized चूहों के आवेदन आम तौर पर इस तरह के लंबे मॉडल विकास समय और काफी उच्च लागत के रूप में कई चिंताओं, द्वारा बाधित थे.
यहाँ, हम एक मानव PBMC आधारित मॉडल है कि व्यापक रूप से अनुवाद आई-ओ अध्ययन के लिए लागू किया जा सकता है का वर्णन. इस मॉडल अपेक्षाकृत समय है और प्रभावकारिता अध्ययन में उच्च reproducibility के साथ लागत प्रभावी है. यह वर्तमान में पूर्व नैदानिक और नैदानिक विकास के तहत कई आई-ओ चिकित्सकीय के मूल्यांकन के लिए घर में इस्तेमाल किया गया है। BGB-A317 (Tislelizumab), एक जांच मानवीय विरोधी पीडी-1 एंटीबॉडी9, मॉडल विकास पर चर्चा करने के लिए उदाहरण के रूप में प्रयोग किया जाता है, विशेषता, और विरोधी ट्यूमर प्रभावकारिता विश्लेषण के लिए संभव अनुप्रयोगों.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:955px;" width="955">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">PBMC separation /cell culture</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:193px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Histopaque-1077</td>
			<td style="width:211px;">Sigma</td>
			<td style="width:193px;">10771</td>
			<td style="width:143px;">Cell isolation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">DMEM</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:193px;">10-013-CVR</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">DPBS</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:193px;">21-031-CVR</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">FBS</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:193px;">35-076-CV</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Penicillin-Streptomycin, Liquid</td>
			<td style="width:211px;">Gibco</td>
			<td style="width:193px;">15140-163</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red</td>
			<td style="width:211px;">Gibco</td>
			<td style="width:193px;">25200-114</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">Matrigel</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:193px;">356237</td>
			<td style="width:143px;">CDX inoculation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">FACS analysis</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:193px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Deoxyribonuclease I from bovine pancreas</td>
			<td style="width:211px;">Sigma</td>
			<td style="width:193px;">DN25</td>
			<td style="width:143px;">Sample preparation</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Collagenase Type I</td>
			<td style="width:211px;">Sigma</td>
			<td style="width:193px;">C0130</td>
			<td style="width:143px;">Sample preparation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-mouse/human CD11b (M1/70) antibody</td>
			<td style="width:211px;">BioLegend</td>
			<td style="width:193px;">101206</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-mouse Ly-6C (HK1.4) antibody</td>
			<td style="width:211px;">BioLegend</td>
			<td style="width:193px;">128008</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-mouse Ly-6G (1A8) antibody</td>
			<td style="width:211px;">BioLegend</td>
			<td style="width:193px;">127614</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human CD8 (OKT8) antibody</td>
			<td style="width:211px;">Sungene Biotech</td>
			<td style="width:193px;">H10082-11H</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human CD279 (MIH4) antibody</td>
			<td style="width:211px;">eBioscience</td>
			<td style="width:193px;">12-9969-42</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human CD3 (HIT3a) antibody</td>
			<td style="width:211px;">4A Biotech</td>
			<td style="width:193px;">--</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">Guava easyCyte 8HT Benchtop Flow Cytometer</td>
			<td style="width:211px;">Millipore</td>
			<td style="width:193px;">0500-4008</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">Tumor/PDX implantation /dosing / measurement</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:193px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Cyclophosphamide</td>
			<td style="width:211px;">J&#38;K</td>
			<td style="width:193px;">Cat#419656, CAS#6055-19-2</td>
			<td style="width:143px;">In vivo efficacy</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Disulfiram</td>
			<td style="width:211px;">J&#38;K</td>
			<td style="width:193px;">Cat#591123, CAS#97-77-8</td>
			<td style="width:143px;">In vivo efficacy</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Syringe</td>
			<td style="width:211px;">BD</td>
			<td style="width:193px;">300841</td>
			<td style="width:143px;">CDX inoculation</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Hypodermic needles (14G)</td>
			<td style="width:211px;">Shanghai SA Mediciall &#38; Plastic Instruments Co., Ltd.</td>
			<td style="width:193px;">0.7*32 TW SB</td>
			<td style="width:143px;">PDX inoculation</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Vernier Caliper (MarCal)</td>
			<td style="width:211px;">Mahr</td>
			<td style="width:193px;">16ER</td>
			<td style="width:143px;">Tumor measurement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">IVC individual ventilated cages</td>
			<td style="width:211px;">Lingyunboji Ltd.</td>
			<td style="width:193px;">IVC-128</td>
			<td style="width:143px;">Animal facility</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">IHC</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:193px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Leica ASP200 Vacuum tissue processor</td>
			<td style="width:211px;">Leica</td>
			<td style="width:193px;">ASP200</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Leica RM2235 Manual Rotary Microtome for Routine Sectioning</td>
			<td style="width:211px;">Leica</td>
			<td style="width:193px;">RM2235</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Leica EG1150 H Heated Paraffin Embedding Module</td>
			<td style="width:211px;">Leica</td>
			<td style="width:193px;">EG1150 H</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Ariol-Clinical IHC and FISH Scanner</td>
			<td style="width:211px;">Leica</td>
			<td style="width:193px;">Ariol</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human CD8 (EP334) antibody</td>
			<td style="width:211px;">ZSGB-Bio</td>
			<td style="width:193px;">ZA-0508</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human PD1 [NAT105] antibody</td>
			<td style="width:211px;">Abcam</td>
			<td style="width:193px;">ab52587</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human PD-L1 (E1L3N) antibody</td>
			<td style="width:211px;">Cell Signaling Technology</td>
			<td style="width:193px;">13684S</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">Polink-2 plus Polymer HRP Detection System</td>
			<td style="width:211px;">ZSGB-Bio</td>
			<td style="width:193px;">PV-9001/9002</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a human peripheral blood mononuclear cell (pbmc) engrafted humanized xenograft model for translational immuno-oncology (i-o) research

हाल के वर्षों में इम्यूनो-ऑन्कोलॉजी (आई-ओ) थेरेपी की खोज और विकास कैंसर के उपचार में एक मील का पत्थर का प्रतिनिधित्व करता है। हालांकि, उपचार की चुनौतियां बनी हुई हैं। मजबूत और रोग से संबंधित पशु मॉडल अतिरिक्त प्रतिरक्षा चौकियों की एक श्रृंखला को संबोधित करने के क्रम में जारी पूर्व नैदानिक अनुसंधान और विकास के लिए महत्वपूर्ण संसाधन हैं। यहाँ, हम एक मानव परिधीय रक्त मोनोन्यूक्लियर सेल (पीबीएमसी) का वर्णन - आधारित मानवीय exograft मॉडल. BGB-A317 (Tislelizumab), एक investigational मानवीय विरोधी पीडी-1 देर से चरण नैदानिक विकास में एंटीबॉडी, मंच सेट अप, मॉडल विशेषता और दवा प्रभावकारिता मूल्यांकन पर चर्चा करने के लिए एक उदाहरण के रूप में प्रयोग किया जाता है. इन मानवीय चूहों परीक्षण सबसे मानव ट्यूमर के विकास का समर्थन, इस प्रकार दोनों मानव प्रतिरक्षा और मानव कैंसर के संदर्भ में आई-ओ चिकित्सा के आकलन की अनुमति. एक बार स्थापित, हमारे मॉडल अपेक्षाकृत समय और लागत प्रभावी है, और आम तौर पर अत्यधिक reprod्य परिणाम उपज. हमारा सुझाव है कि इस लेख में उल्लिखित प्रोटोकॉल मानव PBMC और आई-ओ अनुसंधान के लिए ट्यूमर के साथ पुनर्गठित माउस मॉडल स्थापित करने के लिए एक सामान्य दिशानिर्देश के रूप में सेवा कर सकता है.

यहाँ प्रस्तुत प्रक्रियाओं के बाद, एक PBMC आधारित humanized xenograft मॉडल सफलतापूर्वक स्थापित किया गया था. संक्षेप में, NOD/SCID चूहों में CP myeloablation प्रभाव न्यूट्रोफिल और मोनोसाइट आबादी के प्रवाह साइटोमेट्री विश्लेषण द्वा?...

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A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research

एक मानव परिधीय रक्त मोनोन्यूक्लियर सेल (पीबीएमसी) अनुवाद इम्यूनो-ऑन्कोलॉजी (आई-ओ) अनुसंधान के लिए मानवीकृत Xenograft मॉडल Engraft

हम एक मानव परिधीय रक्त मोनोन्यूक्लियर सेल (पीबीएमसी) का वर्णन करते हैं - अनुवादीय इम्यूनो-ऑन्कोलॉजी अनुसंधान के लिए मानवीकृत एक्सोग्रैफ्ट माउस मॉडल पर आधारित है। इस प्रोटोकॉल की स्थापना और आई-ओ चिकित्सा मूल्यांकन के लिए इसी तरह के मॉडल की विशेषता के लिए एक सामान्य दिशानिर्देश के रूप में सेवा कर सकता है.

The discovery and development of immuno-oncology (I-O) therapy in recent years represents a milestone in the treatment of cancer. However, treatment ...

हमारा प्रोटोकॉल मानव पीएमसी और इम्यूनो-ऑन्कोलॉजी अनुसंधान के लिए ट्यूमर के साथ पुनर्गठित माउस मॉडल स्थापित करने के लिए एक सामान्य दिशानिर्देश के रूप में काम कर सकता है। ये प्रक्रियाएं मानव ट्यूमर-असर चूहों में मानव प्रतिरक्षा को आंशिक रूप से पुनर्कौशल और कैंसर ज़ेनोग्राफ के साथ मानव पीएमसी के मिश्रण के माध्यम से आंशिक रूप से पुनर्गठित करने के लिए एक लागत प्रभावी और अत्यधिक प्रजनन योग्य दृष्टिकोण प्रदान करती हैं। मेरे साथ प्रक्रियाओं का प्रदर्शन Xinxin कुई, Yanjuan झांग, Huichen बाई और Xiaolong यांग होगा, हमें फार्माकोलॉजी विभाग से भेजा है ।माइलॉयड सेल की कमी के लिए इंट्रा पेरिटोनेली साइक्लोफोस्फामाइड के प्रति किलोग्राम 100 मिलीग्राम वितरित करते हैं और मौखिक रूप से दो दिनों के लिए दिन में एक बार छह से आठ सप्ताह पुराने एनओडी/एससीआईडी मादा चूहों को 125 मिलीग्राम प्रति किलोग्राम डिफ्यूरियम वितरित करते हैं । साइक्लोफोस्फामाइड और डिसल्फिराम की दूसरी खुराक के 24 घंटे बाद, छह हौसले से अलग मानव पीबीएमसी के पांच गुना 10 और छह मानव ट्यूमर सेल लाइन कोशिकाओं के २.५ गुना 10 और पीबीएस के २०० माइक्रोलीटर प्लस ५०% मेट्रोजेल प्रति पशु और प्रत्येक प्रायोगिक जानवर के दाईं पार्श्व में पूरे मात्रा को संक्षेप में इंजेक्ट करें । उपाय और चार से छह सप्ताह के लिए एक सप्ताह में दो बार प्राथमिक ट्यूमर की मात्रा रिकॉर्ड ।जब ट्यूमर 200 से 500 मिलीमीटर क्यूब की औसत मात्रा तक पहुंचते हैं, तो प्रत्येक जानवर से पूरे ट्यूमर को काटने के लिए ऑप्टोमिक कैंची का उपयोग करें। पीबीएमसी दाताओं ट्यूमर सेल लाइनों और रोगी व्युत्पन्न xenografts कि अपेक्षाकृत उच्च पीडी-1, पीडी-L1 और CD8 अभिव्यक्ति के साथ एक मध्यम ट्यूमर वृद्धि में परिणाम बाद में विश्लेषण के लिए इस्तेमाल किया जाना चाहिए । काटे गए ट्यूमर ऊतकों के इम्यूनोहिस्टोकेमिकल विश्लेषण के लिए, नमूनों को ठीक करें और डिहाइड्रेशन से 24 से 72 घंटे पहले और पैराफिन में ऊतकों के एम्बेडिंग से पहले फॉर्मेलिन करें।पॉलीसाइन लेपित स्लाइड पर एम्बेडेड ऊतकों के तीन माइक्रोमीटर वर्ग प्राप्त करें और तीन सात मिनट के जाइलीन विसर्जन के साथ नमूनों को डिपैराफिनाइज करें। तीसरे उपचार के बाद, तीन मिनट वर्गीकृत शराब विसर्जन के साथ वर्गों को हाइड्रेट करें। इसके बाद तीन बार डिओनाइज्ड वॉटर में स्लाइड को खंगाल लें और स्लाइड्स से किसी भी अतिरिक्त लिक्विड को निकाल लें।एंटीजन रिट्रीवल करने के लिए, स्लाइड्स को एक कंटेनर में रखें और स्लाइड्स को 10 मिलीमोलर सोडियोसिएटर बफर के साथ कवर करें । स्लाइड्स को गर्म करें, कंटेनर, 30 मिनट के लिए ९५ डिग्री सेल्सियस पानी स्नान में स्लाइड रखने से पहले तीन मिनट के लिए एक माइक्रोवेव में । कमरे के तापमान को ठंडा करने के बाद, स्लाइड्स को तीन बार डिवोनाइज्ड पानी में कुल्ला करें और स्लाइड्स से किसी भी अतिरिक्त तरल को एस्पिरेट करें ।अंतर्जात पेरोक्सिडेस गतिविधि को अवरुद्ध करने के लिए 10 मिनट के लिए 0.3% हाइड्रोजन पेरोक्साइड के साथ इनक्यूबेट और इसके बाद एक घंटे के लिए 3% बीएसए और पीबीएस के साथ अवरुद्ध किया गया। हाइड्रोजन पेरोक्साइड इनक्यूबेशन के अंत में, रात भर चार डिग्री सेल्सियस पर उपयुक्त प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ स्लाइड लेबल। अगली सुबह, स्लाइड्स पर सब्सट्रेट ड्रॉपवाइज लगाने से पहले कमरे के तापमान पर एक घंटे के लिए सहिजन पेरोक्सिडेस के साथ स्लाइड्स का इलाज करें जब तक कि ब्राउन स्टेनिंग का उचित स्तर प्रकाश माइक्रोस्कोपी द्वारा मनाया जाता है।इसके बाद, हेमैटोक्सीलिन के साथ नमूनों को दाग दें। एक मिनट के बाद, आसुत पानी के साथ प्रतिक्रिया बंद करो ०.५% हाइड्रोक्लोरिक एसिड शराब में पांच सेकंड पनडुब्बी और ०.५% अमोनिया पानी में पांच सेकंड के बाद । फिर तीन आरोही तीन मिनट इथेनॉल और तीन, पांच मिनट जाइलीन विसर्जन के साथ नमूनों को निर्जलित करें।ब्याज की एक उम्मीदवार दवा की एंटीट्यूमर गतिविधि का आकलन करने के लिए, नियोजित प्रायोगिक प्रोटोकॉल के अनुसार सेल टीका के दिन उपचार शुरू करें और चार से छह सप्ताह के लिए सप्ताह में दो बार प्राथमिक ट्यूमर की मात्रा की निगरानी करें। ट्यूमर के फार्माकोड गतिशील विश्लेषण के लिए प्रतिरक्षा कोशिकाओं में घुसपैठ, छोटे टुकड़ों में ट्यूमर ऊतकों कीमा और कोलेजन प्रकार एक और DNase मैं और RPMI-1640 मध्यम प्लस 5% FBS के साथ टुकड़ों को पचाने के लिए 30 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर । पाचन के अंत में, एक एकल कोशिका निलंबन प्राप्त करने और अपकेंद्रित्र द्वारा कोशिकाओं को इकट्ठा करने के लिए 40 माइक्रोमीटर सेल छलनी के माध्यम से पचाने वाले ऊतकों को फ़िल्टर करें।बर्फ ठंड फैक्स बफर एकाग्रता के मिलीलीटर प्रति सातवीं कोशिकाओं के एक बार 10 पर गोली को फिर से खर्च करें और कोशिकाओं की एक समान मात्रा को 96-अच्छी तरह से गोल बॉटम प्लेट में कुओं की उचित संख्या में स्थानांतरित करें। अपकेंद्रित्र द्वारा कोशिकाओं को इकट्ठा करें और किसी भी गैर-विशिष्ट बाध्यकारी को अवरुद्ध करने के लिए 30 मिनट के लिए मानव IGG के 20 माइक्रोग्राम प्रति मिलीलीटर में छर्रों को फिर से खर्च करें। फिर मानक प्रोटोकॉल के अनुसार प्रवाह साइटोमेट्री द्वारा अपने विश्लेषण से पहले चार डिग्री सेल्सियस पर 30 मिनट के लिए उपयुक्त प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ कोशिकाओं को दाग ।जैसा कि प्रदर्शन किया गया, 100 मिलीग्राम प्रति किलोग्राम साइक्लोफोस्फामाइड और 125 मिलीग्राम प्रति किलोग्राम डिलफिरम माइलोब्लेशन के परिणामस्वरूप उपचार के चार दिन बाद न्यूट्रोफिल और मोनोसाइट्स की काफी कमी होती है। मानव पीबीएमसी और ट्यूमर प्रत्यारोपण के बाद, मानव प्रतिरक्षा कोशिका घुसपैठ की उपस्थिति इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री द्वारा ट्यूमर माइक्रोएनवायरनमेंट के भीतर सत्यापित किया जा सकता है। पीएमसी दाताओं के एक पैनल की वीवो स्क्रीनिंग में एक स्वीकार्य ट्यूमर विकास दर में ट्यूमर माइक्रोएनवायरमेंट में अपेक्षाकृत उच्च प्रतिरक्षा सेल घुसपैठ की उपस्थिति की पुष्टि करने के लिए किया जा सकता है।ट्यूमर की वृद्धि दर और प्रतिरक्षा कोशिका घुसपैठ का आकलन करने के लिए विभिन्न कैंसर प्रकारों के रोगी व्युत्पन्न xenografts में मानव कैंसर सेल लाइनों का भी मूल्यांकन किया जा सकता है। इस प्रतिनिधि प्रयोग में, पीबीएमसी के उपचार और मानवीकृत एंटी-पीडी 1 एंटीबॉडी के साथ मानवीकृत चूहों के परिणामस्वरूप महत्वपूर्ण एंटीट्यूमर गतिविधियां हुईं। डिफिराम साइक्लोफोस्फामाइड की यूरोटॉक्सिसिटी को कम करता है, संयोजन चूहों में लंबे समय तक चलने वाले न्यूट्रोपेनिया प्रभाव डालती है।साइक्लोफोस्फामाइड और डिसल्फिराम की सटीक खुराक आहार को पूर्व निर्धारित करने की आवश्यकता हो सकती है। आसान मानव प्रतिरक्षा पुनर्गठन और कम ज़ेनोजेनिक जीवीएचडी प्रभाव के लिए अधिक इम्यूनोडिडेंट चूहों के नए उपभेदों की स्थापना की गई है और हमारे प्रलेखित प्रोटोकॉल के साथ आगे की जांच लंबित है। हमारा मॉडल टी-सेल आकर्षक कैंसर प्रतिरक्षा चिकित्सा का मूल्यांकन करने के लिए उपयोगी है, खासकर जब कम समयसीमा पर काम कर रहे हैं या अधिक जटिल मल्टीलाइनेज प्रतिरक्षा मॉडल पर जाने से पहले एजेंटों का चयन करते हैं।

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell (PBMC) Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology (I-O) Research

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

थकान के एक माउस मॉडल परिधीय विकिरण से प्रेरित

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma

ह्यूमन मेंटल सेल लिंफोमा के एक Xenograft माउस मॉडल में ट्यूमर Engraftment

B lymphocytes are key players in immune cell circulation and they mainly home to and reside in lymphoid organs. While normal B cells only proliferate when ...

Development of a Human Preclinical Model of Osteoclastogenesis from Peripheral Blood Monocytes Co-cultured with Breast Cancer Cell Lines

परिधीय रक्त Monocytes सह से Osteoclastogenesis के एक मानव नैदानिक मॉडल का विकास स्तन कैंसर सेल लाइनों के साथ-कल्चरल

The crosstalk between tumor cells and bone cells in the bone microenvironment is crucial to understanding the mechanism of bone metastasis formation. We ...

Automated Multiplex Immunofluorescence Panel for Immuno-oncology Studies on Formalin-fixed Carcinoma Tissue Specimens

स्वचालित मल्टीप्लेक्स इम्यूनोफ्लोरेसेंस इंयूनो के लिए पैनल-Formalin पर ऑन्कोलॉजी अध्ययन-फिक्स्ड कार्सिनोमा ऊतक नमूनों

Continued developments in immuno-oncology require an increased understanding of the mechanisms of cancer immunology. The immunoprofiling analysis of ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

रोगी व्युत्पन्न ओर्थोटोपिक Xenograft मॉडल मानव यूरोथेलियल सेल कार्सिनोमा और कोलोरेक्टल कैंसर ट्यूमर विकास और सहज मेटास्टेसिस के लिए

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

Patient-derived Heterogeneous Xenograft Model of Pancreatic Cancer Using Zebrafish Larvae as Hosts for Comparative Drug Assessment

रोगी व्युत्पन्न विषम लैंगिक Xenograft मॉडल अग्नाशय के कैंसर के तुलनात्मक दवा आकलन के लिए मेजबान के रूप में ज़ेब्राफ़िश लार्वा का उपयोग

Patient-derived tumor xenograft (PDX) and cell-derived tumor xenograft (CDX) are important techniques for preclinical assessment, medication guidance and ...

A Melanoma Patient-Derived Xenograft Model

एक मेलेनोमा रोगी व्युत्पन्न Xenograft मॉडल

Accumulating evidence suggests that molecular and biological properties differ in melanoma cells grown in traditional two-dimensional tissue culture ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

गैस्ट्रिक कैंसर रोगी व्युत्पन्न Xenograft मॉडल और प्राथमिक सेल लाइनों की स्थापना

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Isolating Human Peripheral Blood Mononuclear Cells and CD4+ T cells from S&#233;zary Syndrome Patients for Transcriptomic Profiling

Isolating Human Peripheral Blood Mononuclear Cells and CD4+ T cells from SÃƒÆ’Ã‚Â©zary Syndrome Patients for Transcriptomic Profiling

मानव परिधीय रक्त मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं और CD4 + T कोशिकाओं को सेज़ारी सिंड्रोम रोगियों से ट्रांसक्रिप्टोमिक प्रोफाइलिंग के लिए अलग करना

Cutaneous T-cell lymphomas (CTCL) are derived from the transformation and uncontrolled proliferation of mature skin-homing T cells, and mycosis fungoides ...

Circulating Tumor Cell Lines: an Innovative Tool for Fundamental and Translational Research

परिसंचारी ट्यूमर सेल लाइनें: मौलिक और अनुवाद अनुसंधान के लिए एक अभिनव उपकरण

Metastasis is a leading cause of cancer death. Despite improvements in treatment strategies, metastatic cancer has a poor prognosis. We thus face an ...