Name: a human peripheral blood mononuclear cell (pbmc) engrafted humanized xenograft model for translational immuno-oncology (i-o) research
Uploaded: 2019-08-15T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research at JoVE.com

Vi takker medlemmer av våre laboratorier for nyttige diskusjoner. Dette arbeidet ble delvis støttet av biomedisinsk og Life Science innovasjon og dyrking Research program i Beijing Municipal Science and Technology Commission under Grant Agreement no. Z151100003915070 (prosjekt "prekliniske studie på en roman immune onkologi anti-tumor stoffet BGB-A317"), og det ble også delvis støttet av interne selskapet finansiering for prekliniske forskning.

Alle prosedyrer utført i studier som involverte menneskelige deltakere var i samsvar med de etiske standardene til BeiGene og/eller nasjonal forskningskomité og med 1964 Helsingfors-erklæring og senere endringer eller sammenlignbare etiske standarder. Informert samtykke ble innhentet fra alle individuelle deltakere inkludert i studien. Alle prosedyrer utført i studier som involverer dyr ble godkjent av den interne gjennomgangen styret på BeiGene. Denne protokollen er spesielt justert for evalueringen av BGB-A317 (Ti...

<ol>
	<li>Pardoll, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+blockade+of+immune+checkpoints+in+cancer+immunotherapy.">The blockade of immune checkpoints in cancer immunotherapy.</a> Nature Reviews Cancer. 12 (4), 252-264 (2012).</li><li>Postow, M. A., Callahan, M. K., Wolchok, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+Checkpoint+Blockade+in+Cancer+Therapy.">Immune Checkpoint Blockade in Cancer Therapy.</a> Journal of Clinical Oncology. 33 (17), 1974-1982 (2015).</li><li>Li, Z., Kang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+therapeutic+targets+in+metastatic+progression:+A+focus+on+breast+cancer.">Emerging therapeutic targets in metastatic progression: A focus on breast cancer.</a> Pharmacology &amp; Therapeutics. 161, 79-96 (2016).</li><li>Li, Q. X., Feuer, G., Ouyang, X., An, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+animal+modeling+for+immuno-oncology.">Experimental animal modeling for immuno-oncology.</a> Pharmacology &amp; Therapeutics. 173, 34-46 (2017).</li><li>Fisher, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+of+4-1BB+by+monoclonal+antibody+PF-05082566+enhances+T-cell+function+and+promotes+anti-tumor+activity.">Targeting of 4-1BB by monoclonal antibody PF-05082566 enhances T-cell function and promotes anti-tumor activity.</a> Cancer Immunology, Immunotherapy. 61 (10), 1721-1733 (2012).</li><li>McCormack, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bi-specific+TCR-anti+CD3+redirected+T-cell+targeting+of+NY-ESO-1-+and+LAGE-1-positive+tumors.">Bi-specific TCR-anti CD3 redirected T-cell targeting of NY-ESO-1- and LAGE-1-positive tumors.</a> Cancer Immunology, Immunotherapy. 62 (4), 773-785 (2013).</li><li>Rongvaux, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+hemato-lymphoid+system+mice:+current+use+and+future+potential+for+medicine.">Human hemato-lymphoid system mice: current use and future potential for medicine.</a> Annual Review of Immunology. 31, 635-674 (2013).</li><li>Matsumura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+CD5++B+cells+develop+predominantly+in+the+spleen+of+NOD/SCID/gammac(null)+(NOG)+mice+transplanted+either+with+human+umbilical+cord+blood,+bone+marrow,+or+mobilized+peripheral+blood+CD34++cells.">Functional CD5+ B cells develop predominantly in the spleen of NOD/SCID/gammac(null) (NOG) mice transplanted either with human umbilical cord blood, bone marrow, or mobilized peripheral blood CD34+ cells.</a> Experimental Hematology. 31 (9), 789-797 (2003).</li><li>Zhang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+binding+of+an+anti-PD-1+antibody+to+FcgammaRIota+has+a+profound+impact+on+its+biological+functions.">The binding of an anti-PD-1 antibody to FcgammaRIota has a profound impact on its biological functions.</a> Cancer Immunology, Immunotherapy. 67 (7), 1079-1090 (2018).</li><li>Gamelli, R. L., Ershler, W. B., Hacker, M. P., Foster, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+disulfiram+on+cyclophosphamide-mediated+myeloid+toxicity.">The effect of disulfiram on cyclophosphamide-mediated myeloid toxicity.</a> Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 16 (2), 153-155 (1986).</li><li>Dunay, I. R., Fuchs, A., Sibley, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+monocytes+but+not+neutrophils+are+necessary+to+control+infection+with+Toxoplasma+gondii+in+mice.">Inflammatory monocytes but not neutrophils are necessary to control infection with Toxoplasma gondii in mice.</a> Infection and Immunity. 78 (4), 1564-1570 (2010).</li><li>Ghasemlou, N., Chiu, I. M., Julien, J. P., Woolf, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD11b+Ly6G-+myeloid+cells+mediate+mechanical+inflammatory+pain+hypersensitivity.">CD11b+Ly6G- myeloid cells mediate mechanical inflammatory pain hypersensitivity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (49), 6808-6817 (2015).</li><li>Takao, K., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+responses+in+mouse+models+greatly+mimic+human+inflammatory+diseases.">Genomic responses in mouse models greatly mimic human inflammatory diseases.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (4), 1167-1172 (2015).</li><li>Payne, K. J., Crooks, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune-cell+lineage+commitment:+translation+from+mice+to+humans.">Immune-cell lineage commitment: translation from mice to humans.</a> Immunity. 26 (6), 674-677 (2007).</li><li>Mestas, J., Hughes, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+not+men:+differences+between+mouse+and+human+immunology.">Of mice and not men: differences between mouse and human immunology.</a> Journal of Immunology. 172 (5), 2731-2738 (2004).</li><li>von Herrath, M. G., Nepom, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lost+in+translation:+barriers+to+implementing+clinical+immunotherapeutics+for+autoimmunity.">Lost in translation: barriers to implementing clinical immunotherapeutics for autoimmunity.</a> Journal of Experimental Medicine. 202 (9), 1159-1162 (2005).</li><li>Mahdi, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+glow+of+HLA+typing+in+organ+transplantation.">A glow of HLA typing in organ transplantation.</a> Clinical and Translational Medicine. 2 (1), 6 (2013).</li><li>Shultz, L. D., Brehm, M. A., Garcia-Martinez, J. V., Greiner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+for+immune+system+investigation:+progress,+promise+and+challenges.">Humanized mice for immune system investigation: progress, promise and challenges.</a> Nature Reviews Immunolog. 12 (11), 786-798 (2012).</li><li>Brehm, M. A., Shultz, L. D., Luban, J., Greiner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overcoming+current+limitations+in+humanized+mouse+research.">Overcoming current limitations in humanized mouse research.</a> Journal of Infectious Diseases. 208, 125-130 (2013).</li><li>Walsh, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+Mouse+Models+of+Clinical+Disease.">Humanized Mouse Models of Clinical Disease.</a> Annual Review of Pathology. 12, 187-215 (2017).</li><li>Shultz, L. D., Ishikawa, F., Greiner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+in+translational+biomedical+research.">Humanized mice in translational biomedical research.</a> Nature Reviews Immunolog. 7 (2), 118-130 (2007).</li><li>Brehm, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD-scid+IL2rgnull+(NSG)+mice+deficient+in+murine+MHC+Class+I+and+Class+II+expression+support+engraftment+of+functional+human+T+cells+in+the+absence+of+acute+xenogeneic+GVHD+following+injection+of+PBMC.">NOD-scid IL2rgnull (NSG) mice deficient in murine MHC Class I and Class II expression support engraftment of functional human T cells in the absence of acute xenogeneic GVHD following injection of PBMC.</a> The Journal of Immunology. 200, 57 (2018).</li><li>King, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+Hu-PBL+model+for+the+study+of+human+islet+alloreactivity+based+on+NOD-scid+mice+bearing+a+targeted+mutation+in+the+IL-2+receptor+gamma+chain+gene.">A new Hu-PBL model for the study of human islet alloreactivity based on NOD-scid mice bearing a targeted mutation in the IL-2 receptor gamma chain gene.</a> Clinical Immunology. 126 (3), 303-314 (2008).</li><li>Ito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD/SCID/gamma(c)(null)+mouse:+an+excellent+recipient+mouse+model+for+engraftment+of+human+cells.">NOD/SCID/gamma(c)(null) mouse: an excellent recipient mouse model for engraftment of human cells.</a> Blood. 100 (9), 3175-3182 (2002).</li><li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+lymphoid+and+myeloid+cell+development+in+NOD/LtSz-scid+IL2R+gamma+null+mice+engrafted+with+mobilized+human+hemopoietic+stem+cells.">Human lymphoid and myeloid cell development in NOD/LtSz-scid IL2R gamma null mice engrafted with mobilized human hemopoietic stem cells.</a> Journal of Immunology. 174 (10), 6477-6489 (2005).</li><li>Sasaki, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+preclinical+humanized+mouse+model+to+evaluate+acute+toxicity+of+an+influenza+vaccine.">Development of a preclinical humanized mouse model to evaluate acute toxicity of an influenza vaccine.</a> Oncotarget. 9 (40), 25751-25763 (2018).</li><li>Tobin, L. M., Healy, M. E., English, K., Mahon, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+mesenchymal+stem+cells+suppress+donor+CD4(+)+T+cell+proliferation+and+reduce+pathology+in+a+humanized+mouse+model+of+acute+graft-versus-host+disease.">Human mesenchymal stem cells suppress donor CD4(+) T cell proliferation and reduce pathology in a humanized mouse model of acute graft-versus-host disease.</a> Clinical and Experimental Immunology. 172 (2), 333-348 (2013).</li></ol>

Vår kunnskap om kreftutvikling og progresjon har avansert betydelig de siste årene, med fokus på en helhetlig forståelse av både tumorceller og tilhørende stroma. Utnytte verten immun mekanismer kan indusere en større innvirkning mot kreftceller, som representerer en lovende behandling strategi. Murine modeller med intakt mus uimottakelig systemer, for eksempel syngeneic og GEM-modeller, har vært mye brukt til å studere Checkpoint-mediert immunitet. Effekt vurderinger ved hjelp av disse modellene avhenger i stor...

Immuno-onkologi (I-O) er et raskt voksende felt av kreft behandling. Forskere har nylig begynt å sette pris på det terapeutiske potensialet av modulerende funksjoner i immunsystemet til å angripe svulster. Immune Checkpoint blokader har vist oppmuntrende aktiviteter i en rekke krefttyper, inkludert melanom, renal celle kreft, hode og nakke, lunge, blære og prostata kreft1,2. I motsetning til målrettede terapier som direkte drepe kreftceller, I-O terapier forsterke kroppens immunsystem til å angripe svulster3.
Hittil har mange relevante I-O dyremodeller er etablert. Disse inkluderer: 1) mus tumor cellelinjer eller tumor homograft i syngeneic mus; 2) spontane svulster avledet fra genetisk konstruert mus (GEM) eller kreftfremkallende-induksjon; 3) chimeric edelstener med knock-in av menneskelige narkotika mål (r) i et funksjonelt murine immunsystem; og 4) mus med rekonstituert humant immunitet transplantert med humane kreftceller eller pasient-avledet xenotransplantater (PDXs). Hver av disse modellene har åpenbare fordeler så vel som begrensninger, som har blitt beskrevet og gjennomgått mye annetsteds4.
Rekonstituering av menneskelig immunitet hos immunodeficient mus har blitt growingly verdsatt som en klinisk relevant tilnærming for translational I-O forskning. Dette oppnås vanligvis gjennom enten 1) engraftment av voksne immunceller (f. eks perifere blod mononukleære celler (PMBC))5,6, eller 2) engraftment av blodkreft stamceller (HSC) fra, for eksempel navlestreng blod eller fosterets leveren7,8. Disse humanisert mus kunne støtte veksten av menneskelige svulster, og dermed tillater vurdering av i-O terapier i sammenheng med både menneskelig immunitet og menneskelig kreft. Til tross for fordelene, var anvendelser av humanisert mus i i-O-forskning vanligvis hindret av flere bekymringer, slik som lang modell utvikling tid og betydelig høye kostnader.
Her beskriver vi en menneskelig PBMC-basert modell som kan bli mye brukt for translational I-O studier. Denne modellen er forholdsvis tids-og kostnadseffektiv med høy reproduserbarhet i effekt studier. Det har vært brukt i huset for evalueringer av flere I-O legemiddel selskap for tiden under prekliniske og klinisk utvikling. BGB-A317 (Tislelizumab), en Investigational humanisert anti-PD-1 antistoff9 , er brukt som eksempel for å diskutere modell utvikling, karakterisering, og mulige anvendelser for anti-tumor effekt analyser.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:955px;" width="955">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">PBMC separation /cell culture</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:193px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Histopaque-1077</td>
			<td style="width:211px;">Sigma</td>
			<td style="width:193px;">10771</td>
			<td style="width:143px;">Cell isolation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">DMEM</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:193px;">10-013-CVR</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">DPBS</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:193px;">21-031-CVR</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">FBS</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:193px;">35-076-CV</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Penicillin-Streptomycin, Liquid</td>
			<td style="width:211px;">Gibco</td>
			<td style="width:193px;">15140-163</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red</td>
			<td style="width:211px;">Gibco</td>
			<td style="width:193px;">25200-114</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">Matrigel</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:193px;">356237</td>
			<td style="width:143px;">CDX inoculation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">FACS analysis</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:193px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Deoxyribonuclease I from bovine pancreas</td>
			<td style="width:211px;">Sigma</td>
			<td style="width:193px;">DN25</td>
			<td style="width:143px;">Sample preparation</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Collagenase Type I</td>
			<td style="width:211px;">Sigma</td>
			<td style="width:193px;">C0130</td>
			<td style="width:143px;">Sample preparation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-mouse/human CD11b (M1/70) antibody</td>
			<td style="width:211px;">BioLegend</td>
			<td style="width:193px;">101206</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-mouse Ly-6C (HK1.4) antibody</td>
			<td style="width:211px;">BioLegend</td>
			<td style="width:193px;">128008</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-mouse Ly-6G (1A8) antibody</td>
			<td style="width:211px;">BioLegend</td>
			<td style="width:193px;">127614</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human CD8 (OKT8) antibody</td>
			<td style="width:211px;">Sungene Biotech</td>
			<td style="width:193px;">H10082-11H</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human CD279 (MIH4) antibody</td>
			<td style="width:211px;">eBioscience</td>
			<td style="width:193px;">12-9969-42</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human CD3 (HIT3a) antibody</td>
			<td style="width:211px;">4A Biotech</td>
			<td style="width:193px;">--</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">Guava easyCyte 8HT Benchtop Flow Cytometer</td>
			<td style="width:211px;">Millipore</td>
			<td style="width:193px;">0500-4008</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">Tumor/PDX implantation /dosing / measurement</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:193px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Cyclophosphamide</td>
			<td style="width:211px;">J&#38;K</td>
			<td style="width:193px;">Cat#419656, CAS#6055-19-2</td>
			<td style="width:143px;">In vivo efficacy</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Disulfiram</td>
			<td style="width:211px;">J&#38;K</td>
			<td style="width:193px;">Cat#591123, CAS#97-77-8</td>
			<td style="width:143px;">In vivo efficacy</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Syringe</td>
			<td style="width:211px;">BD</td>
			<td style="width:193px;">300841</td>
			<td style="width:143px;">CDX inoculation</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Hypodermic needles (14G)</td>
			<td style="width:211px;">Shanghai SA Mediciall &#38; Plastic Instruments Co., Ltd.</td>
			<td style="width:193px;">0.7*32 TW SB</td>
			<td style="width:143px;">PDX inoculation</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Vernier Caliper (MarCal)</td>
			<td style="width:211px;">Mahr</td>
			<td style="width:193px;">16ER</td>
			<td style="width:143px;">Tumor measurement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">IVC individual ventilated cages</td>
			<td style="width:211px;">Lingyunboji Ltd.</td>
			<td style="width:193px;">IVC-128</td>
			<td style="width:143px;">Animal facility</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">IHC</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:193px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Leica ASP200 Vacuum tissue processor</td>
			<td style="width:211px;">Leica</td>
			<td style="width:193px;">ASP200</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Leica RM2235 Manual Rotary Microtome for Routine Sectioning</td>
			<td style="width:211px;">Leica</td>
			<td style="width:193px;">RM2235</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Leica EG1150 H Heated Paraffin Embedding Module</td>
			<td style="width:211px;">Leica</td>
			<td style="width:193px;">EG1150 H</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Ariol-Clinical IHC and FISH Scanner</td>
			<td style="width:211px;">Leica</td>
			<td style="width:193px;">Ariol</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human CD8 (EP334) antibody</td>
			<td style="width:211px;">ZSGB-Bio</td>
			<td style="width:193px;">ZA-0508</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human PD1 [NAT105] antibody</td>
			<td style="width:211px;">Abcam</td>
			<td style="width:193px;">ab52587</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human PD-L1 (E1L3N) antibody</td>
			<td style="width:211px;">Cell Signaling Technology</td>
			<td style="width:193px;">13684S</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">Polink-2 plus Polymer HRP Detection System</td>
			<td style="width:211px;">ZSGB-Bio</td>
			<td style="width:193px;">PV-9001/9002</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a human peripheral blood mononuclear cell (pbmc) engrafted humanized xenograft model for translational immuno-oncology (i-o) research

Oppdagelsen og utviklingen av Immuno-onkologi (i-O) terapi de siste årene representerer en milepæl i behandling av kreft. Imidlertid vedvarer behandling utfordringer. Robuste og sykdoms relevante dyremodeller er viktige ressurser for fortsatt prekliniske forskning og utvikling for å møte en rekke andre immun kontrollpunkter. Her beskriver vi et humant perifert blod mononukleære celle (PBMC)-basert humanisert xenograft modell. BGB-A317 (Tislelizumab), en Investigational humanisert anti-PD-1 antistoff i sen-stadium klinisk utvikling, er brukt som et eksempel for å diskutere plattform oppsett, modell karakterisering og narkotika effekt evalueringer. Disse humanisert mus støtter veksten av de fleste menneskelige svulster testet, og dermed tillater vurdering av i-O terapier i sammenheng med både menneskelig immunitet og menneskelig kreft. Når etablert, er vår modell forholdsvis tid-og kostnadseffektiv, og vanligvis gir svært reproduserbar resultater. Vi foreslår at protokollen skissert i denne artikkelen kan tjene som en generell retningslinje for å etablere musemodeller tilberedt med menneskelige PBMC og svulster for I-O forskning.

Etter prosedyrene som presenteres her, ble en PBMC-basert humanisert xenograft modell etablert. Kort sagt, CP myeloablation effekter i NOD/SCID mus ble bestemt av Flow flowcytometri analyse av nøytrofile og monocytt populasjoner post CP og DS behandling (figur 1). 100 mg/kg CP pluss 125 mg/kg DS ble bestemt som den optimale dosen og brukt i senere studier som diett resulterer i maksimal tømming av nøytrofile og monocytter uten å forårsake alvorlig toksisitet for mus. Deretter ble mennes...

Watch this Scientific Journal Video about A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research at JoVE.com

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research

Et humant perifert blod mononukleære Cell (PBMC) Engrafted Humanisert Xenograft modell for translational Immuno-onkologi (I-O) forskning

Vi beskriver en menneskelig perifere blod mononukleære celle (PBMC)-basert humanisert xenograft mus modell for translational Immuno-onkologi forskning. Denne protokollen kan tjene som en generell retningslinje for etablering og karakteriserer av lignende modeller for I-O terapi vurdering.

The discovery and development of immuno-oncology (I-O) therapy in recent years represents a milestone in the treatment of cancer. However, treatment ...

Vår protokoll kan tjene som en generell retningslinje for å etablere musemodeller rekonstituert med menneskelig PBMC og svulster for immuno-onkologi forskning. Disse prosedyrene gir en kostnadseffektiv og svært reproduserbar tilnærming for delvis rekonstituering av menneskelig immunitet hos menneskelige tumorbærende mus gjennom subkutan og blanding av menneskelig PBMC med kreft xenografts. Demonstrere prosedyrene med meg vil være Xinxin Cui, Yanjuan Zhang, Huichen Bai og Xiaolong Yang, sendte oss fra farmakologi avdelingen.For myeloid celle uttømming intra peritoneally levere 100mg per kilo cyklofosfamid og muntlig levere 125mg per kilo disulfiram til seks til åtte uker gamle NOD / SCID kvinnelige mus en gang om dagen i to dager. 24 timer etter den andre dosen av cyklofosfamid og disulfiram, resuspend fem ganger 10 av de seks nyisolerte menneskelige PBMC og 2,5 ganger 10 av de seks menneskelige tumorcellelinjecellene og 200 mikroliter PBS pluss 50% metrogel per dyr og injisere hele volumet subkutant i høyre flanke av hvert eksperimentelle dyr. Mål og registrer det primære tumorvolumet to ganger i uken i fire til seks uker.Når svulstene når et gjennomsnittlig volum på 200 til 500 millimeter cubed, bruk optomisk saks for å høste hele svulsten fra hvert dyr. PBMC donorer tumorcellelinjer og pasientavledede xenografter som resulterer i en moderat tumorvekst med relativt høy PD-1, PD-L1 og CD8-uttrykk bør brukes til senere analyse. For immunohistokjemisk analyse av høstet tumorvev, fikse prøvene og formalin 24 til 72 timer før dehydrering og innebygging av vevet i parafin.Få tre mikrometer deler av det innebygde vevet på polylysinbelagte lysbilder og deparaffinisere prøvene med tre syv minutters xylen nedsenking. Etter den tredje behandlingen hydrerer seksjonene med tre minutters graderte alkoholnedsenkinger. Skyll deretter lysbildet i avionisert vann tre ganger og fjern overflødig væske fra lysbildene.Hvis du vil utføre antigenhenting, plasserer du lysbildene i en beholder og dekker lysbildene med 10 millimolar sodiocitratebuffer. Varm lysbildene, beholderen, i en mikrobølgeovn i tre minutter før du plasserer lysbildene i et 95 grader Celsius vannbad i 30 minutter. Etter kjøling til romtemperatur, skyll lysbildene tre ganger i avionisert vann og aspirer overflødig væske fra lysbildene.Inkuber med 0,3 % hydrogenperoksid i 10 minutter for å blokkere endogene peroksidaseaktivitet etterfulgt av blokkering med 3 %BSA og PBS i én time. På slutten av hydrogenperoksid inkubasjon, merke lysbildene med de aktuelle primære antistoffer på fire grader Celsius over natten. Neste morgen, behandle lysbildene med pepperrot peroksidase konjugert sekundært antistoff i en time ved romtemperatur før du påfører substratet dropwise på lysbildene til et passende nivå av brun farging observeres av lys mikroskopi.Deretter flekker prøvene med hematoksylin. Etter ett minutt, stopp reaksjonen med destillert vann etterfulgt av en fem sekunders nedsenking i 0,5% saltsyrealkohol og fem sekunder i 0,5% ammoniakkvann. Deretter dehydrerer prøvene med tre stigende tre minutters etanol og tre, fem minutters xylen nedsenking.For å vurdere antitumoraktiviteten til et kandidatstoff av interesse, initier behandlingen på celleinokulasjonens dag i henhold til den planlagte eksperimentelle protokollen og overvåk det primære tumorvolumet to ganger i uken i fire til seks uker. For PharmaCODE dynamisk analyse av svulsten infiltrert immunceller, hakke svulsten vev i små biter og fordøye fragmenter med kollagennase type en og DNase I og RPMI-1640 medium pluss 5% FBS i 30 minutter ved 37 grader Celsius. På slutten av fordøyelsen filtrerer du det fordøyde vevet gjennom en 40 mikrometercellesil for å oppnå en enkeltcellesuspensjon og samle cellene ved sentrifugering.Resuspend pellet på en gang 10 av de syvende cellene per milliliter iskald faks buffer konsentrasjon og overføre et likt volum av celler til riktig antall brønner i en 96-brønn rund bunnplate. Samle cellene ved sentrifugering og gjenbruk pellets i 20 mikrogram per milliliter av menneskelig IGG i 30 minutter for å blokkere eventuelle uspesifikke bindinger. Deretter flekker cellene med de riktige primære antistoffene i 30 minutter ved fire grader Celsius før deres analyse ved strømningscytometri i henhold til standardprotokoller.Som vist, 100 milligram per kilo cyklofosfamid og 125 milligram per kilo disulfiram myeloablation resulterer i en betydelig uttømming av nøytrofiler og monocytter fire dager etter behandling. Etter menneskelig PBMC og tumortransplantasjon kan tilstedeværelsen av humane immuncelleinfiltrater verifiseres i tumormikromiljøet ved immunohistokjemi. En in vivo screening av et panel av PBMC donorer kan utføres for å bekrefte tilstedeværelsen av en relativt høy immuncelleinfiltrasjon i tumormikromiljøet i en akseptabel tumorvekstrate.Humane kreftcellelinjer hos pasienter avledet xenografts av ulike krefttyper kan også evalueres for å vurdere tumorvekst og immuncelleinfiltrasjon. I dette representative eksperimentet resulterte behandling av PBMC og transplanterte humaniserte mus med humanisert anti-PD1 antistoff i betydelige antitumoraktiviteter. Disulfiram reduserer urotoksisiteten av cyklofosfamid, kombinasjonen kan utøve lengre varige nøytropenieffekter hos mus.Det nøyaktige doseringsregimet med cyklofosfamid og disulfiram må kanskje forhåndsbestemmes. Nyere stammer av mer immunsviktable mus for enklere rekonstituering av menneskelig immunitet og redusert xenogen GvHD-effekt er etablert og venter på videre undersøkelser med vår dokumenterte protokoll. Vår modell er nyttig for å evaluere T-celle engasjerende kreft immunterapi, spesielt når du arbeider på korte tidslinjer eller for å velge agenter før du flytter til en mer kompleks multilineage immunitet modell.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell (PBMC) Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology (I-O) Research

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

En musemodell av Fatigue indusert av Peripheral Bestråling

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma

Svulst Engraftment i en Xenograft musemodell av menneskelig mantelen celle lymfomer

B lymphocytes are key players in immune cell circulation and they mainly home to and reside in lymphoid organs. While normal B cells only proliferate when ...

Development of a Human Preclinical Model of Osteoclastogenesis from Peripheral Blood Monocytes Co-cultured with Breast Cancer Cell Lines

Utviklingen av en menneskelig prekliniske modell av Osteoclastogenesis fra perifert blod monocytter co kultivert med bryst kreftcelle linjer

The crosstalk between tumor cells and bone cells in the bone microenvironment is crucial to understanding the mechanism of bone metastasis formation. We ...

Automated Multiplex Immunofluorescence Panel for Immuno-oncology Studies on Formalin-fixed Carcinoma Tissue Specimens

Automatisert Multiplex Immunofluorescence Panel Immuno-onkologi studier på Formalin-fast Carcinoma vevsprøver

Continued developments in immuno-oncology require an increased understanding of the mechanisms of cancer immunology. The immunoprofiling analysis of ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

Pasient-avledet Orthotopic Xenograft modeller for Human Urotelialt Cell kreft og tykktarmskreft tumor vekst og spontan metastasering

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

Patient-derived Heterogeneous Xenograft Model of Pancreatic Cancer Using Zebrafish Larvae as Hosts for Comparative Drug Assessment

Pasient-avledet heterogen Xenograft modell av bukspyttkjertelen Cancer bruke sebrafisk larver som verter for sammenlignende Drug Assessment

Patient-derived tumor xenograft (PDX) and cell-derived tumor xenograft (CDX) are important techniques for preclinical assessment, medication guidance and ...

A Melanoma Patient-Derived Xenograft Model

En melanom pasient-avledet Xenograft modell

Accumulating evidence suggests that molecular and biological properties differ in melanoma cells grown in traditional two-dimensional tissue culture ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Etablering av magekreft pasient-avledet Xenograft modeller og primær celle Lines

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Isolating Human Peripheral Blood Mononuclear Cells and CD4+ T cells from S&#233;zary Syndrome Patients for Transcriptomic Profiling

Isolating Human Peripheral Blood Mononuclear Cells and CD4+ T cells from SÃƒÆ’Ã‚Â©zary Syndrome Patients for Transcriptomic Profiling

Isolere mononukleære celler i humant perifert blod og CD4+ T-celler fra Sézary Syndrome-pasienter for transkripsjonsomic profilering

Cutaneous T-cell lymphomas (CTCL) are derived from the transformation and uncontrolled proliferation of mature skin-homing T cells, and mycosis fungoides ...

Circulating Tumor Cell Lines: an Innovative Tool for Fundamental and Translational Research

Sirkulerende tumorcellelinjer: et innovativt verktøy for grunnleggende og translasjonell forskning

Metastasis is a leading cause of cancer death. Despite improvements in treatment strategies, metastatic cancer has a poor prognosis. We thus face an ...