Name: a human peripheral blood mononuclear cell (pbmc) engrafted humanized xenograft model for translational immuno-oncology (i-o) research
Uploaded: 2019-08-15T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research at JoVE.com

Vi tackar medlemmar i våra laboratorier för hjälpsamma diskussioner. Detta arbete stöddes delvis av biomedicinska och Life science innovation och odling forsknings program av Peking kommunala vetenskaps-och teknik kommissionen under Grant Agreement No. Z151100003915070 (projekt "preklinisk studie om en roman immun onkologi anti-tumör läkemedel BGB-A317"), och det var också delvis stöds av interna företagsfinansiering för preklinisk forskning.

Alla förfaranden som genomförs i studier som involverar mänskliga deltagare var förenliga med de etiska normerna för BeiGene och/eller den nationella forskningskommittén och med 1964 Helsingforsdeklarationen och dess senare ändringar eller jämförbara etiska normer. Informerat samtycke erhölls från alla enskilda deltagare som ingick i studien. Alla förfaranden som utfördes i djurstudier godkändes av den interna Granskningsnämnden vid BeiGene. Detta protokoll har anpassats specifikt för utvärderingen av BG...

<ol>
	<li>Pardoll, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+blockade+of+immune+checkpoints+in+cancer+immunotherapy.">The blockade of immune checkpoints in cancer immunotherapy.</a> Nature Reviews Cancer. 12 (4), 252-264 (2012).</li><li>Postow, M. A., Callahan, M. K., Wolchok, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+Checkpoint+Blockade+in+Cancer+Therapy.">Immune Checkpoint Blockade in Cancer Therapy.</a> Journal of Clinical Oncology. 33 (17), 1974-1982 (2015).</li><li>Li, Z., Kang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+therapeutic+targets+in+metastatic+progression:+A+focus+on+breast+cancer.">Emerging therapeutic targets in metastatic progression: A focus on breast cancer.</a> Pharmacology &amp; Therapeutics. 161, 79-96 (2016).</li><li>Li, Q. X., Feuer, G., Ouyang, X., An, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+animal+modeling+for+immuno-oncology.">Experimental animal modeling for immuno-oncology.</a> Pharmacology &amp; Therapeutics. 173, 34-46 (2017).</li><li>Fisher, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+of+4-1BB+by+monoclonal+antibody+PF-05082566+enhances+T-cell+function+and+promotes+anti-tumor+activity.">Targeting of 4-1BB by monoclonal antibody PF-05082566 enhances T-cell function and promotes anti-tumor activity.</a> Cancer Immunology, Immunotherapy. 61 (10), 1721-1733 (2012).</li><li>McCormack, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bi-specific+TCR-anti+CD3+redirected+T-cell+targeting+of+NY-ESO-1-+and+LAGE-1-positive+tumors.">Bi-specific TCR-anti CD3 redirected T-cell targeting of NY-ESO-1- and LAGE-1-positive tumors.</a> Cancer Immunology, Immunotherapy. 62 (4), 773-785 (2013).</li><li>Rongvaux, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+hemato-lymphoid+system+mice:+current+use+and+future+potential+for+medicine.">Human hemato-lymphoid system mice: current use and future potential for medicine.</a> Annual Review of Immunology. 31, 635-674 (2013).</li><li>Matsumura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+CD5++B+cells+develop+predominantly+in+the+spleen+of+NOD/SCID/gammac(null)+(NOG)+mice+transplanted+either+with+human+umbilical+cord+blood,+bone+marrow,+or+mobilized+peripheral+blood+CD34++cells.">Functional CD5+ B cells develop predominantly in the spleen of NOD/SCID/gammac(null) (NOG) mice transplanted either with human umbilical cord blood, bone marrow, or mobilized peripheral blood CD34+ cells.</a> Experimental Hematology. 31 (9), 789-797 (2003).</li><li>Zhang, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+binding+of+an+anti-PD-1+antibody+to+FcgammaRIota+has+a+profound+impact+on+its+biological+functions.">The binding of an anti-PD-1 antibody to FcgammaRIota has a profound impact on its biological functions.</a> Cancer Immunology, Immunotherapy. 67 (7), 1079-1090 (2018).</li><li>Gamelli, R. L., Ershler, W. B., Hacker, M. P., Foster, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+disulfiram+on+cyclophosphamide-mediated+myeloid+toxicity.">The effect of disulfiram on cyclophosphamide-mediated myeloid toxicity.</a> Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 16 (2), 153-155 (1986).</li><li>Dunay, I. R., Fuchs, A., Sibley, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammatory+monocytes+but+not+neutrophils+are+necessary+to+control+infection+with+Toxoplasma+gondii+in+mice.">Inflammatory monocytes but not neutrophils are necessary to control infection with Toxoplasma gondii in mice.</a> Infection and Immunity. 78 (4), 1564-1570 (2010).</li><li>Ghasemlou, N., Chiu, I. M., Julien, J. P., Woolf, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD11b+Ly6G-+myeloid+cells+mediate+mechanical+inflammatory+pain+hypersensitivity.">CD11b+Ly6G- myeloid cells mediate mechanical inflammatory pain hypersensitivity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (49), 6808-6817 (2015).</li><li>Takao, K., Miyakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genomic+responses+in+mouse+models+greatly+mimic+human+inflammatory+diseases.">Genomic responses in mouse models greatly mimic human inflammatory diseases.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (4), 1167-1172 (2015).</li><li>Payne, K. J., Crooks, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune-cell+lineage+commitment:+translation+from+mice+to+humans.">Immune-cell lineage commitment: translation from mice to humans.</a> Immunity. 26 (6), 674-677 (2007).</li><li>Mestas, J., Hughes, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+not+men:+differences+between+mouse+and+human+immunology.">Of mice and not men: differences between mouse and human immunology.</a> Journal of Immunology. 172 (5), 2731-2738 (2004).</li><li>von Herrath, M. G., Nepom, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lost+in+translation:+barriers+to+implementing+clinical+immunotherapeutics+for+autoimmunity.">Lost in translation: barriers to implementing clinical immunotherapeutics for autoimmunity.</a> Journal of Experimental Medicine. 202 (9), 1159-1162 (2005).</li><li>Mahdi, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+glow+of+HLA+typing+in+organ+transplantation.">A glow of HLA typing in organ transplantation.</a> Clinical and Translational Medicine. 2 (1), 6 (2013).</li><li>Shultz, L. D., Brehm, M. A., Garcia-Martinez, J. V., Greiner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+for+immune+system+investigation:+progress,+promise+and+challenges.">Humanized mice for immune system investigation: progress, promise and challenges.</a> Nature Reviews Immunolog. 12 (11), 786-798 (2012).</li><li>Brehm, M. A., Shultz, L. D., Luban, J., Greiner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overcoming+current+limitations+in+humanized+mouse+research.">Overcoming current limitations in humanized mouse research.</a> Journal of Infectious Diseases. 208, 125-130 (2013).</li><li>Walsh, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+Mouse+Models+of+Clinical+Disease.">Humanized Mouse Models of Clinical Disease.</a> Annual Review of Pathology. 12, 187-215 (2017).</li><li>Shultz, L. D., Ishikawa, F., Greiner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+in+translational+biomedical+research.">Humanized mice in translational biomedical research.</a> Nature Reviews Immunolog. 7 (2), 118-130 (2007).</li><li>Brehm, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD-scid+IL2rgnull+(NSG)+mice+deficient+in+murine+MHC+Class+I+and+Class+II+expression+support+engraftment+of+functional+human+T+cells+in+the+absence+of+acute+xenogeneic+GVHD+following+injection+of+PBMC.">NOD-scid IL2rgnull (NSG) mice deficient in murine MHC Class I and Class II expression support engraftment of functional human T cells in the absence of acute xenogeneic GVHD following injection of PBMC.</a> The Journal of Immunology. 200, 57 (2018).</li><li>King, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+Hu-PBL+model+for+the+study+of+human+islet+alloreactivity+based+on+NOD-scid+mice+bearing+a+targeted+mutation+in+the+IL-2+receptor+gamma+chain+gene.">A new Hu-PBL model for the study of human islet alloreactivity based on NOD-scid mice bearing a targeted mutation in the IL-2 receptor gamma chain gene.</a> Clinical Immunology. 126 (3), 303-314 (2008).</li><li>Ito, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NOD/SCID/gamma(c)(null)+mouse:+an+excellent+recipient+mouse+model+for+engraftment+of+human+cells.">NOD/SCID/gamma(c)(null) mouse: an excellent recipient mouse model for engraftment of human cells.</a> Blood. 100 (9), 3175-3182 (2002).</li><li>Shultz, L. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+lymphoid+and+myeloid+cell+development+in+NOD/LtSz-scid+IL2R+gamma+null+mice+engrafted+with+mobilized+human+hemopoietic+stem+cells.">Human lymphoid and myeloid cell development in NOD/LtSz-scid IL2R gamma null mice engrafted with mobilized human hemopoietic stem cells.</a> Journal of Immunology. 174 (10), 6477-6489 (2005).</li><li>Sasaki, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+preclinical+humanized+mouse+model+to+evaluate+acute+toxicity+of+an+influenza+vaccine.">Development of a preclinical humanized mouse model to evaluate acute toxicity of an influenza vaccine.</a> Oncotarget. 9 (40), 25751-25763 (2018).</li><li>Tobin, L. M., Healy, M. E., English, K., Mahon, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+mesenchymal+stem+cells+suppress+donor+CD4(+)+T+cell+proliferation+and+reduce+pathology+in+a+humanized+mouse+model+of+acute+graft-versus-host+disease.">Human mesenchymal stem cells suppress donor CD4(+) T cell proliferation and reduce pathology in a humanized mouse model of acute graft-versus-host disease.</a> Clinical and Experimental Immunology. 172 (2), 333-348 (2013).</li></ol>

Vår kunskap om cancerutveckling och progression har framskridit betydligt under de senaste åren, med fokus på en omfattande förståelse av både tumörcellerna och dess associerade stroma. Utnyttja värd immunförsvaret mekanismer kan framkalla en större inverkan mot cancerceller, som representerar en lovande behandlingsstrategi. Murina modeller med intakt mus immunsystem, såsom uterustransplantat och gem modeller, har använts i stor utsträckning för att studera Checkpoint-medierad immunitet. Effektivitets bedö...

Immuno-onkologi (I-O) är ett snabbt växande område för cancerbehandling. Forskare har nyligen börjat uppskatta den terapeutiska potentialen av modulerande funktioner i immunförsvaret att attackera tumörer. Immun kontrollpunkt blockader har visat uppmuntrande aktiviteter i en mängd olika cancertyper, inklusive melanom, njurcellscancer, huvud och nacke, lungor, urinblåsa och prostatacancer1,2. I motsats till riktade terapier som direkt dödar cancerceller, I-O terapier potentiera kroppens immunförsvar att attackera tumörer3.
Hittills har många relevanta I-O djurmodeller fastställts. Dessa inkluderar: 1) mus tumör cellinjer eller tumör homograft i uterustransplantat möss; 2) spontana tumörer som härrör från genetiskt modifierade mus (GEM) eller carcinogen-induktion; 3) chimär pärlor med Knock-in av humanläkemedel mål (s) i en funktionell murin immunförsvar; och 4) möss med rekonstituerad mänsklig immunitet som transplanterats med humana cancerceller eller xenograft (pdxs). Var och en av dessa modeller har uppenbara fördelar samt begränsningar, som har beskrivits och granskats utförligt någon annanstans4.
Rekonstituering av mänsklig immunitet hos möss med nedsatt immunförsvar har blivit mycket uppskattad som en kliniskt relevant metod för translationell I-O-forskning. Detta uppnås vanligen genom antingen 1) engrafering av vuxna immunceller (t. ex. perifera mononukleära blodceller (pmbc))5,6, eller 2) engrafering av hematopoietiska stamceller (HSC) från, till exempel, navelsträngsblod eller foster lever7,8. Dessa humaniserade möss kan stödja tillväxten av mänskliga tumörer, vilket möjliggör bedömning av i-O terapier i samband med både mänsklig immunitet och mänskliga cancerformer. Trots fördelarna, tillämpningar av humaniserade möss i i-O forskning var oftast hindras av flera farhågor, såsom lång modell utvecklingstid och betydligt höga kostnader.
Här beskriver vi en human PBMC-baserad modell som kan tillämpas I stor utsträckning för translationella I-O-studier. Denna modell är jämförelsevis tid-och kostnadseffektiv med hög reproducerbarhet i effektstudier. Det har använts i egen verksamhet för utvärderingar av flera I-O-Therapeutics för närvarande under preklinisk och klinisk utveckling. BGB-A317 (Tislelizumab), ett prövande humaniserat anti-PD-1 antikropp9 , används som exempel för att diskutera modellutveckling, karakterisering, och möjliga tillämpningar för anti-tumör effektanalyser.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:955px;" width="955">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">PBMC separation /cell culture</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:193px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Histopaque-1077</td>
			<td style="width:211px;">Sigma</td>
			<td style="width:193px;">10771</td>
			<td style="width:143px;">Cell isolation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">DMEM</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:193px;">10-013-CVR</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">DPBS</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:193px;">21-031-CVR</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">FBS</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:193px;">35-076-CV</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Penicillin-Streptomycin, Liquid</td>
			<td style="width:211px;">Gibco</td>
			<td style="width:193px;">15140-163</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red</td>
			<td style="width:211px;">Gibco</td>
			<td style="width:193px;">25200-114</td>
			<td style="width:143px;">Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">Matrigel</td>
			<td style="width:211px;">Corning</td>
			<td style="width:193px;">356237</td>
			<td style="width:143px;">CDX inoculation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">FACS analysis</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:193px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Deoxyribonuclease I from bovine pancreas</td>
			<td style="width:211px;">Sigma</td>
			<td style="width:193px;">DN25</td>
			<td style="width:143px;">Sample preparation</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Collagenase Type I</td>
			<td style="width:211px;">Sigma</td>
			<td style="width:193px;">C0130</td>
			<td style="width:143px;">Sample preparation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-mouse/human CD11b (M1/70) antibody</td>
			<td style="width:211px;">BioLegend</td>
			<td style="width:193px;">101206</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-mouse Ly-6C (HK1.4) antibody</td>
			<td style="width:211px;">BioLegend</td>
			<td style="width:193px;">128008</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-mouse Ly-6G (1A8) antibody</td>
			<td style="width:211px;">BioLegend</td>
			<td style="width:193px;">127614</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human CD8 (OKT8) antibody</td>
			<td style="width:211px;">Sungene Biotech</td>
			<td style="width:193px;">H10082-11H</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human CD279 (MIH4) antibody</td>
			<td style="width:211px;">eBioscience</td>
			<td style="width:193px;">12-9969-42</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human CD3 (HIT3a) antibody</td>
			<td style="width:211px;">4A Biotech</td>
			<td style="width:193px;">--</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">Guava easyCyte 8HT Benchtop Flow Cytometer</td>
			<td style="width:211px;">Millipore</td>
			<td style="width:193px;">0500-4008</td>
			<td style="width:143px;">FACS</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">Tumor/PDX implantation /dosing / measurement</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:193px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Cyclophosphamide</td>
			<td style="width:211px;">J&#38;K</td>
			<td style="width:193px;">Cat#419656, CAS#6055-19-2</td>
			<td style="width:143px;">In vivo efficacy</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Disulfiram</td>
			<td style="width:211px;">J&#38;K</td>
			<td style="width:193px;">Cat#591123, CAS#97-77-8</td>
			<td style="width:143px;">In vivo efficacy</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Syringe</td>
			<td style="width:211px;">BD</td>
			<td style="width:193px;">300841</td>
			<td style="width:143px;">CDX inoculation</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Hypodermic needles (14G)</td>
			<td style="width:211px;">Shanghai SA Mediciall &#38; Plastic Instruments Co., Ltd.</td>
			<td style="width:193px;">0.7*32 TW SB</td>
			<td style="width:143px;">PDX inoculation</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Vernier Caliper (MarCal)</td>
			<td style="width:211px;">Mahr</td>
			<td style="width:193px;">16ER</td>
			<td style="width:143px;">Tumor measurement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">IVC individual ventilated cages</td>
			<td style="width:211px;">Lingyunboji Ltd.</td>
			<td style="width:193px;">IVC-128</td>
			<td style="width:143px;">Animal facility</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">IHC</td>
			<td style="width:211px;"></td>
			<td style="width:193px;"></td>
			<td style="width:143px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Leica ASP200 Vacuum tissue processor</td>
			<td style="width:211px;">Leica</td>
			<td style="width:193px;">ASP200</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:408px;">Leica RM2235 Manual Rotary Microtome for Routine Sectioning</td>
			<td style="width:211px;">Leica</td>
			<td style="width:193px;">RM2235</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Leica EG1150 H Heated Paraffin Embedding Module</td>
			<td style="width:211px;">Leica</td>
			<td style="width:193px;">EG1150 H</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Ariol-Clinical IHC and FISH Scanner</td>
			<td style="width:211px;">Leica</td>
			<td style="width:193px;">Ariol</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human CD8 (EP334) antibody</td>
			<td style="width:211px;">ZSGB-Bio</td>
			<td style="width:193px;">ZA-0508</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human PD1 [NAT105] antibody</td>
			<td style="width:211px;">Abcam</td>
			<td style="width:193px;">ab52587</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:408px;">Anti-human PD-L1 (E1L3N) antibody</td>
			<td style="width:211px;">Cell Signaling Technology</td>
			<td style="width:193px;">13684S</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:408px;">Polink-2 plus Polymer HRP Detection System</td>
			<td style="width:211px;">ZSGB-Bio</td>
			<td style="width:193px;">PV-9001/9002</td>
			<td style="width:143px;">IHC</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a human peripheral blood mononuclear cell (pbmc) engrafted humanized xenograft model for translational immuno-oncology (i-o) research

Upptäckten och utvecklingen av Immuno-onkologi (I-O) terapi under de senaste åren är en milstolpe i behandlingen av cancer. Behandlings utmaningarna kvarstår dock. Robusta och sjukdomsrelevanta djurmodeller är livsviktiga resurser för fortsatt preklinisk forskning och utveckling för att ta itu med en rad ytterligare immun kontroller. Här beskriver vi ett humant perifert blod mononukleära celler (PBMC)-baserade humaniserad xenograft modell. BGB-A317 (Tislelizumab), ett prövande humaniserat anti-PD-1 antikropp i sena stadiet klinisk utveckling, används som ett exempel för att diskutera plattform set-up, modell karakterisering och läkemedels effekt utvärderingar. Dessa humaniserade möss stödja tillväxten av de flesta mänskliga tumörer testas, vilket möjliggör bedömning av i-O terapier i samband med både mänsklig immunitet och mänskliga cancerformer. När etablerad, vår modell är jämförelsevis tid-och kostnadseffektiva, och vanligtvis ger mycket reproducerbara resultat. Vi föreslår att det protokoll som beskrivs i denna artikel kan fungera som en allmän riktlinje för upprättande av musmodeller som rekonstitueras med mänskliga PBMC och tumörer för I-O-forskning.

Efter de förfaranden som presenteras här, en PBMC-baserade humaniserad xenograft modell har etablerats framgångsrikt. I korthet, CP myeloablation effekter i nod/scid Möss bestämdes genom flödescytometri analys av neutrofila och monocyt populationer efter CP och DS behandling (figur 1). 100 mg/kg CP Plus 125 mg/kg DS bestämdes som den optimala dosen och användes i senare studier eftersom regimen resulterar i maximal utarmning av neutrofiler och monocyter utan att orsaka svår toxicite...

Watch this Scientific Journal Video about A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research at JoVE.com

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research

En human perifert blod mononukleär cell (PBMC) inympad humaniserad xenograft modell för translationell Immuno-onkologi (I-O) forskning

Vi beskriver en human perifert blod mononukleär cell (PBMC)-baserad humaniserad xenograft musmodell för translationell Immuno-onkologi forskning. Detta protokoll kan fungera som en allmän riktlinje för att fastställa och karakterisera liknande modeller för I-O-behandlingsbedömning.

The discovery and development of immuno-oncology (I-O) therapy in recent years represents a milestone in the treatment of cancer. However, treatment ...

Vårt protokoll kan fungera som en allmän riktlinje för att upprätta musmodeller rekonstituerade med mänskliga PBMC och tumörer för immuno-onkologi forskning. Dessa förfaranden ger en kostnadseffektiv och mycket reproducerbara tillvägagångssätt för delvis rekonstituering mänsklig immunitet i mänskliga tumörbärande möss genom subkutan och blandning av mänskliga PBMC med cancer xenografts. Demonstrera förfarandena med mig kommer att Xinxin Cui, Yanjuan Zhang, Huichen Bai och Xiaolong Yang, skickade oss från farmakologi avdelningen.För myeloisk cell utarmning intra peritoneally leverera 100mg per kilo cyclophosphamide och peroralt leverera 125mg per kilo disulfiram till sex till åtta veckor gamla NOD/SCID hona möss en gång om dagen i två dagar. 24 timmar efter den andra dosen av cyclophosphamide och disulfiram, resuspend fem gånger 10 av de sex nyligen isolerade mänskliga PBMC och 2,5 gånger 10 av de sex mänskliga tumör cell linje celler och 200 mikroliter pbs plus 50%metrogel per djur och injicera hela volymen subkutant i den högra flanken av varje experimentellt djur. Mät och registrera den primära tumörvolymen två gånger i veckan i fyra till sex veckor.När tumörerna når en genomsnittlig volym på 200 till 500 millimeter kubik, använd optomic scissors att skörda hela tumör från varje djur. PBMC givare tumör cellinjer och patienten härleds xenografts som resulterar i en måttlig tumör tillväxt med relativt hög PD-1, PD-L1 och CD8 uttryck bör användas för efterföljande analys. För immunohistokemisk analys av de skördade tumörvävnaderna, fixa proverna och formalin 24 till 72 timmar före uttorkning och inbäddning av vävnaderna i paraffin.Få tre mikrometersektioner av de inbäddade vävnaderna på polylysinbelagda objektglas och avparaffinera proverna med tre sju minuters xylensänkning. Efter den tredje behandlingen, hydrate sektionerna med tre minuters graderade alkohol nedsänkningar. Skölj sedan glidglaset i avjoniserat vatten tre gånger och avlägsna eventuell överflödig vätska från objektglasen.För att utföra antigenhämtning placerar du objektglasen i en behållare och täcker in objektglasen med 10 millimolar sodiocitratbuffert. Värm diabilderna, behållaren, i en mikrovågsugn i tre minuter innan du placerar bilderna i ett 95 grader Celsius vattenbad i 30 minuter. Efter kylning till rumstemperatur, skölj diabilderna tre gånger i avjoniserat vatten och aspirera eventuell överflödig vätska från rutschkanorna.Inkubera med 0,3%väteperoxid i 10 minuter för att blockera endogen peroxidasaktivitet följt av blockering med 3%BSA och PBS i en timme. I slutet av väteperoxidinkubationen märks objektglasen med lämpliga primära antikroppar vid fyra grader Celsius över natten. Nästa morgon, behandla diabilder med pepparrot peroxidas konjugerad sekundär antikropp i en timme i rumstemperatur innan du applicerar substratet dropwise på objektglasen tills en lämplig nivå av brun färgning observeras av ljusmikroskopi.Därefter fläcka proverna med hematoxylin. Efter en minut, stoppa reaktionen med destillerat vatten följt av en fem sekunders nedsänkning i 0,5%saltsyra alkohol och fem sekunder i 0,5%ammoniak vatten. Torka sedan proverna med tre stigande tre minuters etanol och tre, fem minuters xylen nedsänkning.För att bedöma antitumöraktiviteten hos ett kandidatläkemedel av intresse, initiera behandlingen på dagen för cellinympningen enligt det planerade experimentella protokollet och övervaka den primära tumörvolymen två gånger i veckan i fyra till sex veckor. För PharmaCODE dynamisk analys av tumören infiltrerade immunceller, färs tumören vävnader i små bitar och smälta de fragment med kollagenas typ ett och DNase jag och RPMI-1640 medium plus 5%FBS i 30 minuter vid 37 grader Celsius. I slutet av matsmältningen, filtrera den smälta vävnaden genom en 40 mikrometer cell sil för att få en enda cell suspension och samla cellerna genom centrifugeringen.Resuspend pelleten vid en en gånger 10 av de sjunde cellerna per milliliter av iskall fax buffert koncentration och överföra en lika volym av celler till lämpligt antal brunnar i en 96-väl rund bottenplatta. Samla cellerna genom centrifugering och resuspend pellets i 20 mikrogram per milliliter av mänskliga IGG i 30 minuter för att blockera alla ospecifika bindning. Färga sedan cellerna med lämpliga primära antikroppar i 30 minuter vid fyra grader Celsius innan deras analys genom flödescytometri enligt standardprotokoll.Som visat, 100 milligram per kilo cyclophosphamide och 125 milligram per kilo disulfiram myeloablation resulterar i en betydande utarmning av neutrophils och monocyter fyra dagar efter behandling. Efter mänskliga PBMC och tumör transplantation, förekomsten av mänskliga immun cellen infiltrates kan verifieras inom tumören mikromiljö av immunohistokemi. En in vivo screening av en panel av PBMC givare kan utföras för att bekräfta förekomsten av en relativt hög immun cell infiltration i tumören mikromiljö i en godtagbar tumör tillväxthastighet.Mänskliga cancer cellinjer i patienten härledda xenografts av olika cancertyper kan också utvärderas för att bedöma tumörtillväxthastigheten och immuncell infiltration. I detta representativa experiment resulterade behandling av PBMC och ympade humaniserade möss med humaniserad anti-PD1-antikropp i betydande antitumöraktiviteter. Disulfiram minskar urotoxicitet av cyklofosfamid, kombinationen kan utöva längre varaktiga neutropeni effekter hos möss.Den exakta dosregimen av cyklofosfamid och disulfiram kan behöva vara förutbestämd. Nyare stammar av mer immunodeficient möss för enklare mänsklig immunitet reconstitution och minskade xenogenic GvHD effekt har fastställts och väntar på ytterligare undersökningar med vår dokumenterade protokollet. Vår modell är användbar för att utvärdera T-cells engagerande cancer immunterapier, särskilt när man arbetar på korta tidslinjer eller för att välja agenter innan du flyttar till en mer komplex multilineage immunitet modell.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell (PBMC) Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology (I-O) Research

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

En musmodell av trötthet inducerad av perifera bestrålning

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma

Tumör Engraftment i en Xenograft musmodell av mänskliga mantelcellslymfom

B lymphocytes are key players in immune cell circulation and they mainly home to and reside in lymphoid organs. While normal B cells only proliferate when ...

Development of a Human Preclinical Model of Osteoclastogenesis from Peripheral Blood Monocytes Co-cultured with Breast Cancer Cell Lines

Utveckling av en mänsklig preklinisk modell av Osteoclastogenesis från perifert blod monocyter Co odlade med Breast Cancer cellinjer

The crosstalk between tumor cells and bone cells in the bone microenvironment is crucial to understanding the mechanism of bone metastasis formation. We ...

Automated Multiplex Immunofluorescence Panel for Immuno-oncology Studies on Formalin-fixed Carcinoma Tissue Specimens

Automatiserad Multiplex immunofluorescens Panel för immunonkologiska studier på Formalin-fasta Carcinoma vävnadsprover

Continued developments in immuno-oncology require an increased understanding of the mechanisms of cancer immunology. The immunoprofiling analysis of ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

Patient-härledda ortotopiska xenograft-modeller för Human Urotelial cellkarcinom och kolorektal cancer tumörtillväxt och spontan metastaser

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

Patient-derived Heterogeneous Xenograft Model of Pancreatic Cancer Using Zebrafish Larvae as Hosts for Comparative Drug Assessment

Patient-derived heterogena xenograft modell av pankreascancer med Zebrafish larver som värdar för jämförande drog bedömning

Patient-derived tumor xenograft (PDX) and cell-derived tumor xenograft (CDX) are important techniques for preclinical assessment, medication guidance and ...

A Melanoma Patient-Derived Xenograft Model

En melanom patient-derived xenograft modell

Accumulating evidence suggests that molecular and biological properties differ in melanoma cells grown in traditional two-dimensional tissue culture ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Inrättande av patienter med Ventrikelhärledd xenograft-modell och primära cellinjer

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Isolating Human Peripheral Blood Mononuclear Cells and CD4+ T cells from S&#233;zary Syndrome Patients for Transcriptomic Profiling

Isolating Human Peripheral Blood Mononuclear Cells and CD4+ T cells from SÃƒÆ’Ã‚Â©zary Syndrome Patients for Transcriptomic Profiling

Isolering av humana mononukleära celler i perifert blod och CD4+ T-celler från patienter med Sézarys syndrom för transkriptomisk profilering

Cutaneous T-cell lymphomas (CTCL) are derived from the transformation and uncontrolled proliferation of mature skin-homing T cells, and mycosis fungoides ...

Circulating Tumor Cell Lines: an Innovative Tool for Fundamental and Translational Research

Cirkulerande tumör cellinjer: ett innovativt verktyg för grundläggande och translationell forskning

Metastasis is a leading cause of cancer death. Despite improvements in treatment strategies, metastatic cancer has a poor prognosis. We thus face an ...